terapia genica transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por...
TRANSCRIPT
![Page 1: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/1.jpg)
TERAPIA GENICA
Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen.
• EX-VIVO vs IN- VIVO
• CÉLULAS SOMATICAS vs CÉLULAS MADRE/ PRECURSORAS (STEM CELLS)
![Page 2: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/2.jpg)
USO DE RETROVIRUS EN TERAPIA GENICA
![Page 3: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/3.jpg)
![Page 4: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/4.jpg)
Vector Viral Recombinante que contiene el gen terapeútico
Infección in vitro de células
Selección de las células corregidas
Ex-vivoIn vivo
Consideraciones:
- Riesgo de efectos secundarios
- Eficiencia de la transferencia de genes
- Expresión contínua del gen terapeútico
![Page 5: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/5.jpg)
CONSIDERACIONES EN LA TERAPIA GENICA
- Conocer y entender la causa de la enfermedad
- Conocer la estructura y función del gen a introducir
- Eficiencia de la transferencia del gen en células blanco
- Control de la expresión del gen
- Prevención y control de la respuesta inmune
- Riesgo de efectos secundarios (ej: uso de vectores virales)
- Ensayos en animales
- Ensayos clínicos
![Page 6: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/6.jpg)
ESTRATEGIAS DE TERAPIA GENICA
• Reemplazo del gen
• Incremento de la expresión del gen (Gene augmentation therapy, GAT), por ej.: fibrocis cistica.
• Corrección del gen
• Eliminación dirigida de celulas blanco específicas (ej. uso combinado de virus + prodrogas)
• Inhibición de la expresión de un gen (gen ablation)- ej: antisense, ribozimas, RNA de interferencia
.
![Page 7: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/7.jpg)
Inhibición de la expresión
• Ribozymes ( Ribozimas)– pueden cortar el mRNA específico
• Antisense oligos (oligonucleótidos antisentido)– inhiben la traducción del mRNA
• siRNA (small interference RNA)− RNA pequeño de interferencia dirigido a un mRNA
específico induciendo el corte del mRNA en fragmentos pequeños (de aprox. 23 pb)
![Page 8: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/8.jpg)
5’- - c g g a g u c a c u u c g - - 3’ mRNA 3’ G C C U C A U G A A G C 5’
AIAGCGGCG
GCCGC
UC
C
G U
AGU
AG
U
Ribozima
Mecanismo de corte por ribozima
![Page 9: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/9.jpg)
Targeted Killing -Genetic Pro-drug Activation Therapy
Targeted Killing -Genetic Pro-drug Activation Therapy
viral vector
thymidine kinasegene
tumour cell
ganciclovir phosphate
ganciclovir
tk
(Tóxico sólo si ha sido fosforilado)
![Page 10: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/10.jpg)
Transferencia del GenTransferencia del Gen
In vivo: el vector se trasfiere directamente al paciente (inyectable, respirado)
Ex vivo: se modifica las celulas del paciente en el laboratorio antes de re-introducirlas (ej. hepatocitos, fibroblasto, celulas hematopoyeticas, etc.)
![Page 11: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/11.jpg)
METODOS DE TRANSFERENCIA DEL DNA EXOGENO A CELULAS EUCARIOTES
I. Metodos fisicos: - transfección - microinjección- bombardeo de partículas de DNA recubiertas con
tungsteno, oro (“gene gun”)- electroporación
II. Metodos no virales: liposomas, transferencia mediada por receptores.
III. Metodos virales: virus de DNA, virus de RNA.
![Page 12: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/12.jpg)
METODOS DE TRANSFERENCIA
I. Metodos físicos
No limitado por el numero de genes o tamaño de fragmento. Poco eficiente.
- Inyección de DNA desnudo
- Electroporación
- Gene gun
![Page 13: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/13.jpg)
Gene Gun (pistola de genes)
![Page 14: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/14.jpg)
EFECTO DE LA ELECTROPORACION EN MEMBRANA
![Page 15: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/15.jpg)
II. Metodos no virales
- liposomas- transferencia mediada por ligandos o receptores
específicos
Desventajas:- Expresión transiente- Baja eficiencia de transferencia de genes
![Page 16: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/16.jpg)
III. Metodos Virales
- Mayor eficiencia de transducción
- Mayor riesgo
• Retrovirus : ej.:- Moloney murine leukaemia virus (Mo-MuLV), HIV
• Adenovirus
• Herpes Simplex (HSV)
• Virus Adeno-asociados (AAV)
• Lentivirus
![Page 17: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/17.jpg)
Retrovirus
- Alta eficiencia
-Requiere que la célula esté en división
- Hasta 8 kb
- Integración al genoma del hospedero
- Alto riesgo
![Page 18: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/20.jpg)
Adenovirus: Alta eficiencia de transducción
•Hasta 8 kb
•Infecta celulas diferenciadas y tambien en replicación
•Desventajas: - Expresión transiente (gen no integrado al genoma) - Las proteinas virales pueden ser expresadas - Problemas por la respuesta inmune
Herpes Simplex: fragmentos largos
- expresión por mayor tiempo
- sistema nervioso central
- poco eficiente
![Page 21: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/21.jpg)
Adenovirus
Se puede direccionar al virus hacia un tejido o tipo de célula en particular, acoplando ligandos para receptores específicos.
![Page 22: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/23.jpg)
CELULA DE EMPAQUETAMIENTO
(para la producción de particulas virales recombinantes)
![Page 24: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/24.jpg)
CELULA DE EMPAQUETAMIENTO
(liberación de particulas virales recombinantes, infectivas pero no replicativas)
![Page 25: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/25.jpg)
CONSIDERACIONES EN LA TERAPIA GENICA
- Conocer y entender la causa de la enfermedad
- Conocer la estructura y función del gen a introducir
- Eficiencia de la transferencia del gen en células blanco
- Control de la expresión del gen
- Prevención y control de la respuesta inmune
- Riesgo de efectos secundarios (ej: uso de vectores virales)
- Ensayos en animales
- Ensayos clínicos
![Page 26: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/26.jpg)
CLONACION
TERAPEUTICA
![Page 27: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/28.jpg)
Defecto en la actividad de la Adenosina
Deaminasa (ADA)
Primer Protocolo de Terapia Génica (1990)
Sindrome de Inmunodeficiencia Combinada Severa (SCID)
![Page 29: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/29.jpg)
Protocolos de Terapia Génica en Cancer.
![Page 30: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/31.jpg)
RNA de interferencia en la terapia para Cancer
![Page 32: TERAPIA GENICA Transferencia de material genético para tratar/corregir una enfermedad causada por la ausencia, o mal funcionamiento de un gen. EX-VIVO](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022051517/5665b4821a28abb57c92180f/html5/thumbnails/32.jpg)
• Cancer Gene Therapy - From the publishers of Nature. • Current Gene Therapy - From Bentham Science Publishers. • Gene Therapy - From the publishers of Nature. • Human Gene Therapy - Journal published by Mary Anne Liebert,
Inc. • The Journal of Gene Medicine - Official journal of the European
Society of Gene Therapy (ESGT), Japan Society of Gene Therapy (JSGT), and the Australasian Gene Therapy Society (AGTS).
• Molecular Therapy - A monthly journal published by the American Society of Gene Therapy (ASGT).
• Other Publications
Gene Therapy Journals(Scientific, peer-reviewed publications targeted to clinicians and researchers.)