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ii
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
TESIS II:
Características farmacognósticas de las hojas y capacidad antioxidante
del extracto acuoso del Piper aduncum (Matico) a diferentes
concentraciones
PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE
BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA
AUTORA:
JAICO CRUZ, Maricarmen Jackelyn
ASESOR:
Dr. VENEGAS CASANOVA, Edmundo Arturo
TRUJILLO – PERÚ
2020
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Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú.Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
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DEDICATORIA
A Dios Jehová por haberme dado la vida, y
la fuerza en los momentos difíciles para
llegar a concluir este trabajo de
investigación, por darme sabiduría e
inteligencia, por la oportunidad de aportar
lo aprendido durante nuestra formación
profesional y seguir avanzando.
Con mucho amor a mis padres Benito y María,
que me dieron la vida y han dado todo el esfuerzo
para que día a día sea mejor persona, inculcando
en mí valores y apoyándome durante toda mi vida
en momentos de tristeza y felicidad.
A mis hermanos Marly, Cristhian y Fabián
por su amor, apoyo y paciencia en este largo
camino de mi vida.
Y a mi hija Brenda que es mi gran motivo para ser
una mejor persona cada día.
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AGRADECIMIENTO
A la Facultad de Farmacia y Bioquímica
de la Universidad Nacional de Trujillo, a
los profesores por su exigencia y elevado
nivel académico brindado a lo largo de la
carrera.
Muy en especial a mi asesor Edmundo Venegas
Casanova por su ayuda desinteresada en la
ejecución de esta investigación.
A mi familia por apoyarme siempre.
Porque sin su sacrificio y esfuerzos no
hubiera tenido la oportunidad de estudiar,
de formarme como profesional, por sus
buenos deseos, sus sabios consejos,
porque inculcaron en mí valores, que me
han ayudado a lograr nuestras metas
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PRESENTACIÓN
Señores Miembros Del Jurado Dictaminador:
De conformidad con las disposiciones legales y vigentes del reglamento de grados y títulos
de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a
vuestro elevado criterio el presente informe de tesis II titulado:
“Características farmacognósticas de las hojas y capacidad antioxidante del extracto acuoso
del Piper aduncum a diferentes concentraciones.”
Espero vuestra aprobación y dejo a su criterio la calificación del presente informe.
Trujillo, Setiembre del 2020.
JAICO CRUZ, Maricarmen Jackelyn
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JURADO DICTAMINADOR
Mg. Yuri F. Curo Vallejos
Presidente
Dr. Edmundo A. Venegas Casanova
Asesor
Dr. Segundo G. Ruiz Reyes
Miembro
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RESUMEN
El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo determinar las características
farmacognósticas y capacidad antioxidante del extracto acuoso del P. aduncum en diferentes
concentraciones. Lo cual tuvo como resultado: materias extrañas 7,8%; humedad residual
8,92%; cenizas totales 11,62%; cenizas solubles en agua 5,14%; cenizas insolubles en ácido
clorhídrico 3,4%; sustancias solubles con 70°GL 27,23%; sustancias solubles con agua
21.62% y sólidos totales 6.3mg/mL. Para el tamizaje fitoquímico se realizó usando reactivos
de coloración y precipitación encontrando en el extracto acuoso como metabolitos
secundarios alcaloides, fenoles, flavonoides, azúcares reductores, saponinas, taninos. Para la
evaluación de la capacidad antioxidante se realizó por el método del 2, 2-Difenil-i-
Picrilhidrazilo (DPPH•) en diferentes concentraciones obteniéndose que a 1% fue 16,95±0,94
mg de Trolox/g de muestra seca, 3% fue 28,41±0,30 mg de Trolox/g de muestra seca y 5%
fue 31,67±0,60 mg de Trolox/g de muestra seca. A la cual llegamos a la conclusión que el P.
aduncum presenta características farmacognósticas y que en el extracto acuoso al 5%
presenta mayor capacidad antioxidante.
Palabras clave: Piper aduncum, marcha fitoquímico, capacidad antioxidante
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ABSTRACT
The present research work aimed to determine the pharmacognostic characteristics and
antioxidant capacity of the aqueous extract of P. aduncum in different concentrations. Which
resulted in: foreign matter 7.8%; residual humidity 8.92%; total ash 11.62%; water soluble
ash 5.14%; ash insoluble in hydrochloric acid 3.4%; soluble substances with 70 ° GL 27.23%;
substances soluble with water 21.62% and total solids 6.3mg / mL. For the phytochemical
screening, it was carried out using staining and precipitation reagents, finding alkaloids,
phenols, flavonoids, reducing sugars, saponins, tannins as secondary metabolites. For the
evaluation of the antioxidant capacity, the 2, 2-Diphenyl-i-Picrylhydrazyl (DPPH •) method
was carried out in different concentrations, obtaining that at 1% it was 16.95 ± 0.94 mg of
Trolox / g of dry sample, 3% was 28.41 ± 0.30 mg of Trolox / g of dry sample and 5% was
31.67 ± 0.60 mg of Trolox / g of dry sample. To which we reached the conclusion that P.
aduncum has pharmacognostic characteristics and that in the 5% aqueous extract it has a
higher antioxidant capacity.
Keywords: Piper aduncum, phytochemical gait, antioxidant capacity
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ÍNDICE
Pág.
Dedicatoria…..…………...………..…………...………..…………...……..………………..i
Agradecimiento…..…………...………..…………...………..…………...……..…………..ii
PRESENTACIÓN…..…………...………..…………...………..…………...……..………iii
JURADO DICTAMINADOR…..…………...………..…………...………..……….……...iv
RESUMEN…..…………...………..…………...………..……………..…………...……….v
ABSTRACT…..…………...………..…………..…………...………..…………...………..vi
I. INTRODUCCIÓN…..…………...………..………...………..…………...….....................1
II. MATERIAL Y MÉTODO…..………...………..…………...………..……………….....5
III. RESULTADOS……………………….………..…………...…………....…………....15
IV. DISCUSIÓN………………………………..…………...……………....…………….19
V. CONCLUSIÓN…………………………………….………...………....…………….23
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS …………………………..……...……………24
ANEXOS
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I. INTRODUCCIÓN
A lo largo de toda la evolución, el ser humano ha empleado plantas medicinales y
preparaciones a base de ellas, adquiriendo conocimientos terapéuticos de las plantas
mediante la observación, lo cual poco a poco fue transmitiendo y perfeccionándose durante
diferentes generaciones haciéndose parte del legado de cada cultura, denominándose
medicina tradicional1.
La medicina tradicional es un elemento cultural con profundas raíces en todas las
civilizaciones. Según la Organización Mundial de la Salud, entre 66 y 85% de la población
del planeta recurre a las plantas medicinales para curar, aliviar y prevenir diversos dolores y
enfermedades2.
En la actualidad, el auge y diagnóstico de nuevas enfermedades, el limitado acceso a
medicamentos, contribuye al retorno del uso de plantas medicinales y de productos
fitoterapéuticos. El Perú por sus condiciones climáticas ha permitido el desarrollo de una
flora megadiversa; hoy día las aplicaciones terapéuticas, nutritivas y ornamentales se aplican
en la medicina tradicional cobrando importancia ecológica y respeto con el medio ambiente
que nos brinda1.
Así que existen muchas especies de plantas que poseen gran valor medicinal, entre las plantas
medicinales que tiene el hombre en la naturaleza se encuentra el Piper aduncum o matico
que pertenece a la familia Piperaceae. Las Piperaceaes son hierbas terrestres o epífitas; o
arbustos, raramente bejucos o árboles pequeños. Hermafroditas, monoicos, polígamos o
dioicos. Tallos con nudos abultados y flores en espigas flexibles. Las hojas contienen células
secretoras, visibles como puntos glandulares, ricas en aceites esenciales. Flores diminutas,
bracteadas, el ovario unicelular posee un único óvulo que al desarrollarse da un fruto en baya.
Fruto pequeño, indehiscente; las semillas contienen abundante endospermo y perispermo3.
Su distribución es pantropical y subtropical, con mayor concentración y centros de diversidad
en el norte de América del Sur, América Central, y en el Viejo Mundo Malasia. Se compone
de unos 10 géneros y unas 2.000 especies, incluidas fundamentalmente en los géneros
Peperomia y Piper. En Cuba, están presentes 4 géneros, en los que se incluyen los
mencionados3.
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Piper aduncum es una planta nativa del Perú que también crece en los valles interandinos de
Bolivia, Chile, Ecuador, Colombia, México y en el Asia. Es un arbusto perenne de hasta 5 m
de alto, que crece en forma silvestre o domesticada en la costa sierra y selva del Perú, hasta
los 3000 msnm. En la medicina tradicional peruana, a esta planta se le conoce como "matico",
"hierba del soldado" o "cordoncillo"4.
Sus ramas de color verde amarillento ligeramente en zigzag con pelos finos y con
articulaciones (nudos) anilladas, recrecidas, las hojas estrechas elípticas, de punta larga y de
color verde amarillento, asimétricas en la base, algo ásperas encima, con venas largas
laterales, ligeramente curvas, y aromáticas o con olor a especias trituradas, las flores y los
frutos diminutos, apiñados en un eje semejante a cordones, curvos y laterales de 34 pulgadas
largo y 1/8 pulgadas de diámetro, el sabor y olor a pimienta de las hojas, fruto y semilla3.
Los análisis fitoquímicos realizados en esta especie vegetal han informado que sus hojas
contienen aceites esenciales, ácido artánico, resinas, sustancias amargas (maticina), taninos,
alcaloides, saponinas y flavonoides triterpenoides y, debido a estos componentes posee
diversas propiedades que pueden favorecer la respuesta adaptativa en los signos vitales ante
los cambios agudos de altura5.
Los antioxidantes son captadores de radicales libres y por ello retrasan o inhiben la etapa de
iniciación del proceso de oxidación, lo que disminuye la consecuente formación de productos
de descomposición volátiles (por ejemplo, aldehídos y cetonas). El potencial antioxidante de
los compuestos fenólicos dependerá del número y disposición de los grupos hidroxilo en las
moléculas de interés6.
Los compuestos fenólicos constituyen una de las principales clases de metabolitos
secundarios de las plantas, donde desempeñan diversas funciones fisiológicas. Entre otras,
intervienen en el crecimiento y reproducción de las plantas y en procesos defensivos frente a
patógenos6.
La capacidad antioxidante de un producto alimenticio está determinada por interacciones
entre diferentes compuestos con diferentes mecanismos de acción. Esta se evaluó in vitro y
puede usarse como un indicador indirecto de la actividad in vivo. La mayoría de los métodos
para determinar capacidad antioxidante consisten en acelerar la oxidación en un sistema
biológico. Por esto mismo, la determinación de la capacidad antioxidante de extractos
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complejos se lleva a cabo usualmente por diferentes métodos complementarios, que evalúen
diversos mecanismos de acción. Los métodos más aplicados son ácido 2,2´-azinobis (3-
etilbenzotiazolin)-6-sulfónico (ABTS•) y 2, 2-Difenil-i-Picrilhidrazilo (DPPH•), debido a que
ambos presentan una excelente estabilidad en ciertas condiciones, aunque también muestran
diferencias7. Entre las que cabe mencionar, mientras el DPPH• es un radical libre que puede
obtenerse directamente sin una preparación previa, el ABTS• tiene que ser generado tras una
reacción que puede ser química (dióxido de manganeso, persulfato potasio, ABAP),
enzimática (peroxidase, mioglobulina), o también electroquímica. Con el ABTS• se puede
medir la actividad de compuestos de naturaleza hidrofílica y lipofílica, el DPPH• solo puede
disolverse en medio orgánico, el DMPD solo en medio acuoso. El radical ABTS• tiene
además la ventaja de que su aspecto presenta máximos de absorbancia a 414, 654, 754 y
815nm en medio alcohólico; el DPPH• presenta un pico de absorbancias a 515nm, y el DMPD
a 505nm8.
Un extracto es una sustancia obtenida por extracción de una parte de una materia prima, a
menudo usando un solvente como etanol o agua. Sus caracteres de un extracto bien
preparadas deben tener un color gris o café; nunca deben ser negros. En general, los extractos
son siempre" solubles en el vehículo que ha servido para prepararlos. Los extractos
alcohólicos de hojas tienen la propiedad de comunicar al éter una coloración verde intensa,
lo que no hacen los acuosos correspondientes. En cuanto a las reacciones químicas, varían
con el extracto considerado. Algunos darán las reacciones de los alcaloides; otros la de los
glucósidos, etc9.
Hay reportes que indican las características farmacognósticas y la capacidad antioxidante del
Piper aduncum. En el año 2015 se publicó la tesis “Determinaciones Fisicoquímicas de las
Hojas secas de Piper aduncum (Matico) procedente de la Provincia de San Marcos –
Cajamarca 2013”, se encontró que las hojas de Piper aduncum presenta 11,35% ± 0,54 de
cenizas totales, 6,24% ± 1,54 de cenizas solubles en agua y 4,95 % ± 0,04 de cenizas
insolubles en ácido clorhídrico10. En otra tesis publicada en el año 2009 con el título
“Elaboración y control de calidad del gel Antimicótico de Manzanilla, Matico y Marco para
Neo – Fármaco, se llegó a la conclusión que la planta de Piper aduncum presenta una
humedad de 9,80%, cenizas totales de 8,98%, cenizas solubles en agua de 2,92% cenizas
insolubles en ácido clorhídrico de 1,17% y un porcentaje de sustancias solubles de 5,92%11.
Y en el año 2019 se publica la tesis “Actividad antioxidante y determinación de fenoles de
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extractos de matico (Piper sp.) en diferentes altitudes del distrito de Levanto, Amazonas”,
que tuvo como objetivo determinar la actividad antioxidante y fenoles de extractos de máticos
(acuoso, etanólico y metanólico) en diferentes altitudes del distrito de Levanto, Amazonas12.
En la actualidad existe un interés creciente en la medicina alternativa para la cura de
numerosos padecimientos y enfermedades que afectan a los seres humanos, por lo que las
investigaciones que tengan como objetivo el cultivo, estudio y procesamiento de plantas
medicinales con fines terapéuticos se consideran estratégicas e importantes. Son pocas las
investigaciones en el uso y manejo de las plantas medicinales, y, por tanto, he aquí, la
importancia de analizar sus características farmacognósticas y su capacidad antioxidante,
puesto que de ser así podrían establecer sistemas en donde esta planta pueda ser cultivada
por los pobladores, para una mejora en su utilidad, reconocer sus propiedades medicinales,
aprovechar sus propiedades nutricionales y mejorar en el desarrollo económico del país13,14.
Por lo expuesto anteriormente, se planteó el siguiente problema:
¿Cuáles son las características farmacognósticas y capacidad antioxidante del extracto
acuoso del P. aduncum?
Los objetivos fueron:
General:
Determinar las características farmacognósticas y capacidad antioxidante del extracto
acuoso del P. aduncum a diferentes concentraciones.
Específicos:
Identificar los metabolitos secundarios por la marcha fitoquímico preliminar del extracto
acuoso de las hojas P. aduncum.
Determinar la capacidad antioxidante por el método DPPH• del extracto acuoso de las hojas
P. aduncum.
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II. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1. Material:
2.1.1. Material Biológico:
- Se utilizó 5 Kg de P. aduncum procedente del Jardín Botánico “Bertha Rosa Elena
de los Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo.
2.1.2. Material de Laboratorio:
Material de vidrio:
De uso común en el laboratorio
Material Químico:
- Ácido Clorhídrico 10% Merck
- Nitrato de plata
- Reactivos de coloración y precipitación
- Agua destilada
- Alcohol etílico 96º Gay Lussac (GL). Merck
- 2, 2-Difenil-i-Picrilhidrazilo (DPPH•)
Otros.
- Algodón
- Papel aluminio
- Papel filtro libre de cenizas
- Papel kraft
- Papel Whatman
- Parafilm
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2.2. Método:
2.2.1. Estudio farmacognósticas de las hojas Piper aduncum15:
1. Recolección de la especie vegetal:
La recolección de la especie vegetal se realizó por el método convencional o clásico
de herborización, seleccionando el material de campo y verificando que esté en
buenas condiciones.
2. Identificación taxonómica:
Se recolectó la especie vegetal P. aduncum, la cual se llevó al Herbarium
Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación
taxonómica.
3. Selección de la droga vegetal:
De la droga vegetal se seleccionó las hojas con el objetivo de realizar una separación
de las partes para evitar la mezcla entre sí, y así también se eliminarán residuos
orgánicos e inorgánicos.
4. Secado y molienda de la droga vegetal
La droga vegetal seleccionada de P. aduncum fue secada a temperatura ambiente
bajo sombra, luego se colocó en bolsas de papel Kraft y se llevó a la estufa a 40 °C
durante 48 horas.
La droga desecada se pulverizó y tamizó (hasta tamaño de partícula 2,0 mm) luego se
almacenó adecuadamente en frascos ámbar en un lugar sin humedad y sin luz directa.
Determinación de los parámetros de calidad de la especie vegetal
a) Características macromorfológicas de las hojas15:
Se describió las características macroscópicas (vista) que presentan las hojas; tales
como: forma, peso, dimensiones (largo y ancho), condición (fresca, completa).
b) Características fisicoquímicas de las hojas de Piper aduncum:
- Determinación de materias extrañas de la droga vegetal15:
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Se pesó 5 g de hojas en un vaso precipitado previamente tarado, se retirará
manualmente las sustancias extrañas (orgánicas e inorgánicas). Se pesó el material
separado y se determinó su porcentaje en base al peso de la muestra ensayo.
El porcentaje de materia extraña se calculó mediante la siguiente formula:
𝑀𝑒 =𝑚
𝑀𝑥 100(%)
Donde:
Me: Materias extrañas
M: masa inicial de la muestra (g)
m: Masa de materia extraña (g)
100: Factor matemático
- Determinación de la humedad residual por gravimetría15
Se pesó 5g de la droga triturada en una cápsula de porcelana previamente tarada,
posteriormente se llevó la muestra a estufa a 105°C de temperatura durante 3 horas;
pasado el tiempo, la cápsula se colocó en el desecador (con silicagel) y se dejó
enfriar durante 30 minutos. Se realizó los cálculos por diferencia de pesos. Este
procedimiento se realizó por triplicado
%𝐻𝑟 =(𝑃2 − 𝑃1)
(𝑃2 − 𝑃0)𝑥 100
Donde:
%Hr: Porcentaje de humedad residual
P0: Peso de la cápsula vacía (g)
P1: Peso de la capsula + muestra seca (g)
P2: Peso de la cápsula + muestra (g)
100: Factor matemático
- Determinación de cenizas totales por gravimetría15
Se pesó 5 g de droga vegetal triturada, en un crisol de porcelana previamente
tarado, se carbonizó en cocina y luego se incinera en horno mufla a 700°C durante
2 horas, pasado el tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar
enfriar durante 30 minutos. Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este
procedimiento se realizó por triplicado.
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𝐶𝑙 =(𝑃2−𝑃1)
(𝑃2−𝑃0)𝑥 100 𝐶𝑡 =
𝐶𝑙 𝑥 100
100−𝐻
Donde:
Ct: Cenizas totales
Cl: Cenizas totales en base hidratada
P0: Peso del crisol vacío (g)
P1: Peso del crisol vacío + muestra (g)
P2: Peso del crisol vacío + ceniza(g)
H: % de humedad
- Determinación de cenizas solubles en agua15:
En el crisol previamente tarado con las cenizas totales obtenidas, se añadió 10ml
de agua destilada. El crisol se tapó y se hervió suavemente a la llama de una cocina
durante 5 min. La solución se filtró a través de papel filtro libre de cenizas. El
papel filtro con el residuo fue transferido al crisol inicial, se carbonizó en una
cocina y luego se incineró en un horno mufla a 700º C durante 2 horas, pasado el
tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30
minutos. Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se
realizó por triplicado.
𝐶𝑙 =(𝑃2−𝑃1)
(𝑃3−𝑃0)𝑥 100 𝐶𝑆𝑎 =
𝐶𝑙 𝑥 100
100−𝐻
Donde:
CSa: Cenizas solubles en agua
Cl: Cenizas solubles en agua en base hidratada
P0: Peso del crisol vacío (g)
P1: Peso del crisol vacío + cenizas insolubles en agua (g)
P2: Peso del crisol vacío + ceniza totales (g)
P3: Peso de crisol con la muestra de ensayo (g)
H: % de humedad
- Determinación de cenizas insolubles en ácido clorhídrico por gravimetría15:
En el crisol previamente tarado con las cenizas totales obtenidas, se añadió 10 ml
de ácido clorhídrico al 10%. El crisol se tapó y se hirvió suavemente a la llama de
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una cocina durante 5 min. La solución se filtró a través de papel filtro libre de
cenizas, se lavó el residuo con agua destilada caliente hasta eliminar la acidez. El
papel filtro con el residuo fue transferido al crisol inicial, se carbonizó en una
cocina y luego se incineró en un horno mufla a 700º C durante 2 horas, pasado el
tiempo se colocó en el desecador (silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos.
Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizará
por triplicado.
𝐶𝑙 =(𝑃2−𝑃0)
(𝑃1−𝑃0)𝑥 100 𝐶𝑙𝑎 =
𝐶𝑙 𝑥 100
100−𝐻
Donde:
Cla: Cenizas insolubles en ácido
Cl: Cenizas insolubles en ácido en base hidratada
P0: Peso del crisol vacío (g)
P1: Peso del crisol vacío + muestra (g)
P2: Peso del crisol vacío + ceniza (g)
H: % de humedad
- Determinación de sustancias solubles totales15:
Se realizó la extracción de las sustancias solubles en etanol de 70°GL y agua. Se
pesaron 5g de la droga vegetal es un Erlenmeyer de 250 mL; se agregó 100 mL de
etanol de 70°Gl y agua respectivamente, se tapó y se agitó durante un tiempo de
6h con agitador magnético, se dejó en reposos 24h. Posteriormente se agitó por 30
min, finalmente se filtró sobre papel Whatman N°1 con ayuda de bomba al vacío
se obtuvo extractos traslucidos. Seguidamente se midió una alícuota de 20 mL del
extracto, se transfirió a una cápsula de porcelana previamente tarada, se concentró
hasta obtener extracto blando, luego se llevó a estufa a 105°C de temperatura
durante 3h. Pasado el tiempo se colocó en desecador, donde se dejó enfriar a
temperatura ambiente por 30 min, registrándose el peso, volviéndose a repetir el
procedimiento anterior por 1h, finalmente se pesó hasta alcanzar masa constante y
con dos pesadas sucesivas donde la variación de peso no fue mayor de 0,5 mg. Se
realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizó por
triplicado.
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𝑆𝑆 =𝑅 𝑥 500𝑥 100
𝑀(100 − 𝐻)
Donde:
SS: Sustancias solubles
R: Residuo de la muestra
M: Masa de la muestra (g)
H: Humedad de la muestra
500: Factor matemático
2.2.2. Obtención de extractos
a) Método de reflujo16:
Se pesó 20 g de droga vegetal y se colocó en un matraz Erlenmeyer de 500mL, se
añadió 200 mL. de agua destilada y se llevó a reflujar durante 1h a temperatura de
ebullición. Luego se procedió a filtrar con papel filtro y se obtuvo el extracto acuoso.
b) Determinación de la concentración del extracto (sólidos totales)16:
Del extracto obtenido, se tomó una alícuota de 1mL y se colocó sobre una cápsula
previamente tarada, luego fue llevado a estufa a 40° C durante 24 horas. Pasado el
tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30
minutos. Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se
realizó por triplicado. Se determinó la concentración en mg/mL.
c) Tamizaje Fitoquímico de las hojas de Piper aduncum15:
Se siguió el método descrito por Miranda & Cuellar donde cada muestra es
sometida a la acción extractiva de solventes de polaridad creciente hexano, etanol y
agua, modificando el pH del medio con el fin de obtener los metabolitos secundarios
de acuerdo a su solubilidad.
- Ensayo de Mayer (determinación de alcaloides):
Se midió 1 mL, se agregó 2 gotas de ácido clorhídrico concentrado, se calentó y
se dejó enfriar, se agregó III gotas del reactivo de Mayer. El ensayo se considera
positivo cuando precipita en un color blanco a crema.
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- Ensayo de Wagner (determinación de alcaloides):
Se midió 1 mL, se agregó 2 gotas de ácido clorhídrico concentrado, se calentó y
se dejó enfriar, se agregó III gotas del reactivo de Wagner. El ensayo es positivo
cuando hay presencia de opalescencia, turbidez definida o precipitada.
- Ensayo del cloruro férrico (determinación de compuestos fenólicos y/o
taninos)
Se tomó 1 ml del extracto fluido y se le añadió acetato de sodio para neutralizar
y luego se agregó III gotas de una solución de cloruro férrico al 5%. El ensayo es
considerado positivo de la siguiente forma: coloración rojo-vino (compuestos
fenólicos), coloración verde intensa (taninos del tipo pirocatecólicos), coloración
azul (taninos tipo pirogalotánicos).
- Ensayo de Shinoda (determinación de flavonoides)
Se diluyó 0.5 mL de extracto fluido con 0.5 mL de ácido clorhídrico concentrado
y granallas de magnesio metálico, se esperó 5 minutos se añadió 1mL de alcohol
amílico para que ocurra la reacción. El ensayo es considerado positivo cuando se
colorea amarilla, naranja, rojizo.
- Ensayo de Dragendorff (determinación de alcaloides)
Se tomó 1 mL del extracto fluido, y se le agregó 2 gotas de ácido clorhídrico al
1 %, luego se colocó III gotas del reactivo de Dragendorff. El ensayo es positivo
cuando precipitó en un color rojo ladrillo refractario o rojo marrón.
- Ensayo de Ninhidrina (determinación de aminoácidos libres o de aminas)
Se tomó 1 mL del extracto fluido, se agregó 2 ml de solución al 2% de ninhidrina;
la mezcla se calentó de 5 a 10 minutos en baño maría. Este ensayo es considerado
positivo cuando cambió a un color azul violáceo.
- Ensayo de Fehling (determinación de azúcares reductores)
En un tubo de ensayo se colocó V gotas del reactivo Fehling A (sulfato cúprico),
sobre ella se dejó caer gota a gota el reactivo de Fehling B (contiene tartrato de
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sodio y potasio en solución alcalina) hasta aparecer un precipitado, luego se
agregó II gotas más para que ese precipitado desaparezca dando una coloración
azulada. El reactivo de Fehling preparado fue mezclado con 1 mL de extracto
fluido. El ensayo es positivo si existe la presencia de un precipitado rojo.
- Ensayo de espuma (determinación de saponinas del tipo esteroidal como
triterpénica)
Se agitó el 10mL del extracto fluido fuertemente durante 10 minutos. El ensayo
es considerado positivo apareció espuma en la superficie del líquido de más de 2
mm de altura y persiste por más de 2 minutos.
- Ensayo de gelatina (determinación de taninos)
Se tomó 1 mL del extracto fluido, y se adicionaron III gotas de gelatina. El ensayo
es considerado positivo si precipita a un color amarillo claro o ligeramente
marrón.
- Ensayo de Baljet: (determinación de lactonas)
Se tomó 1 mL del extracto y se le añadió 1 mL del reactivo. El ensayo es
considerado positivo al observar un color verde-azul o rojizo, el cual nos indica
la presencia de Lactonas sesquiterpénicas.
- Ensayo de Liebermann-Burchard (Determinación de lípidos):
Se midió X gotas del extracto en una cápsula, llevó a sequedad y se agregó X
gotas de Anhídrido acético, XX gotas de Ácido Acético y I gota de ácido
sulfúrico concentrado.
La reacción es positiva si aparece coloración azul, verde o naranja.
2.2.3. Ensayo de actividad antioxidante17:
Determinación de actividad antioxidante por el método DPPH:
Fundamento:
El Fundamento del método desarrollado por Brand-Willams et al, DPPH•
adaptado, consiste en que este radical tiene un electrón desapareado y es de color
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azul-violeta, decolorándose hacia amarillo pálido por reacción con una sustancia
antioxidante; la absorbancia es medida espectrofotométricamente a 517 nm. La
diferencia de absorbancias, permite obtener el porcentaje de captación de radicales
libres.
Procedimiento:
Determinación de la capacidad antioxidante del extracto de P. aduncum
Se seguirá el método descrito por Brand Williams et al. con algunas modificaciones,
utilizando como radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH•).
a) Preparación de la solución etanólica del extracto acuoso de las hojas P.
aduncum.
- Se pesaron 4.2 mg de los cristales equivalente a 1%, 6.7mg de cristales
equivalente a 3% y 7.9mg de cristales equivalente a 5%, luego se aforó a 100
ml con etanol de 96° GL. De esta solución se tomaron volúmenes de 1; 2; 3;
4; 5; 6; 7; 8; 9 y 10 mL y aforar a 10 mL con etanol de 96°GL.
b) Preparación del Reactivo: Solución 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH•).
- Se preparó una solución de DPPH• con etanol de 96° GL a una concentración
de DPPH• 0,1 mM (39,43 mg/L)
c) Preparación de la curva de calibración de la solución DPPH•17.
- Se preparó una solución madre de DPPH• 0,1mM. De esta solución se
transvasaron volúmenes de 1; 2; 4; 6; 8; 10; 12 mL a fiolas de 10 mL que
fueron aforadas con etanol de 96° GL, para obtener así, los estándares de
concentración 0,01; 0.02; 0.04; 0.06; 0,08 y 0.1; 1.2 mM a partir de la
solución de DPPH• 0,1mM, luego se llevó a leer en el espectrofotómetro
PERKINELMER a 517nm.
- Primero se determinó la longitud de onda máxima y seguido las lecturas a la
longitud de onda obtenida, utilizándose etanol 96° GL como blanco.
Posteriormente se graficó las concentraciones vs absorbancias y se obtuvo la
recta de calibración.
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d) Determinación de captura del radical DPPH•.
- Los resultados se expresaron como valores TEAC (trolox equivalent
antioxidant capacity) mediante la construcción de una curva patrón usando
como antioxidante TROLOX®.
Análisis estadístico.
Los datos fueron procesados en el programa de Microsoft Excel ® 2016 Caracterizados
mediante parámetros estadísticos descriptivos: Media Aritmética ( X ) y Desviación
Estándar (σ), ANOVA, así como a un ensayo Tukey con un nivel de significancia de
95%.17
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III. RESULTADOS:
TABLA 1: Características macromorfológicas de las hojas de P. aduncum:
CARACTERÍSTICAS OBSERVADO
FORMA Oblicuos
TEXTURA Áspera por el envés
COLOR Verde amarillento
DIMENSIONES 19,7cm de largo
8,1cm de ancho
PESO 2,3g
CONDICIÓN Fresca
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TABLA 2: Parámetros fisicoquímicos de las hojas de P. aduncum:
PRUEBAS RESULTADOS (%)
MATERIAS EXTRAÑAS 7,8
HUMEDAD RESIDUAL 8,92
CENIZAS TOTALES 11,62
CENIZAS SOLUBLES EN AGUA 5,14
CENIZAS INSOLUBLES EN ÁCIDO
CLORHÍDRICO
3,4
SUSTANCIAS SOLUBLES EN ETANOL
70°GL:
27,23
SUSTANCIAS SOLUBLES EN AGUA 21,62
TABLA 3: Determinación de la concentración del extracto acuoso de las hojas P.
aduncum (Sólidos totales):
PRUEBA RESULTADO (mg/mL)
SÓLIDOS TOTALES 6,3
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TABLA 4: Tamizaje fitoquímico del extracto acuoso de las hojas P. aduncum:
ENSAYO INTENSIDAD RESULTADO
MAYER ++ Alcaloides
WAGNER ++ Alcaloides
CLORURO FÉRRICO ++ Fenólicos
SHINODA ++ Flavonoides
DRAGENDORFF + Alcaloides
NINHIDRINA - Aminoácidos
FEHLING +++ Azucares Reductores
ESPUMA ++ Saponinas
GELATINA ++ Taninos
BALJET -Lactonas
(coumarinas)
LIEBERMANN -
BURCHARD- Lípidos (esteroides)
(-) = Ausencia (+) = Poca cantidad
(++) = Regular cantidad (+++) = Bastante cantidad
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TABLA 5: Evaluación de la capacidad antioxidante en hojas de P. aduncum expresado en
mg de Trolox eq/g de muestra seca.
EXTRACTO (%) X̄ σ σ/x̄
1 16,95 0,94 5,58
3 28,41 0,30 1,06
5 31,67 0,60 1,91
X̄: Promedio
σ: Desviación estándar
σ/x̄: Desviación estándar relativa
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IV. DISCUSIÓN
En la TABLA 1 se muestra las características macromorfológicas de las hojas de la especie
P. aduncum en la cual se observó que su forma es oblicua, con una textura áspera por el
envés, de color verde amarillento, con un peso promedio de 2,3g, estas características se
corroboran con lo descrito por Mostacero J. y et al. Esta descripción macromorfológicas del
material vegetal es imprescindible para lograr estandarizar la droga; y reconocer
fehacientemente la especie vegetal que se trabajó3.
En la TABLA 2 se muestra los parámetros fisicoquímicos donde se obtuvo en materias
extrañas 7,8%; lo cual es importante este análisis porque nos ayuda a retirar desechos
orgánicos de posibles insectos o aves, así como también del polvo y tierra para así obtener
una mejor muestra biológica y poder trabajar con ella como muestra en un estudio científico
de Vidaurre M. y et al14. Respecto a la humedad es un método de secado que se basa en la
pérdida de peso de la muestra por evaporación del agua, en este caso se obtuvo 8,92%
encontrándose en los límites establecidos por la Farmacopea (8 - 14%); que nos indica una
disminución del agua en este vegetal ya que se sabe que si hay un exceso de agua en una
droga este puede provocar ciertos crecimiento microbiano, la presencia de hongos o insectos
y el deterioro del vegetal, y si fuera en el caso contrario de un exceso de desecación, éste
puede provocar a que se inactive algunas enzimas y compuestos que llegarían afectar los
principios activos18.
Las cenizas totales permiten determinar la cantidad de sustancias inorgánicas presentes en
las drogas vegetales, como sales, arena, metales pesados, etc., en este caso se obtuvo 11,62%
si comparamos con la farmacopea (8-11%) observamos que está un poco elevado de los
límites permitidos a que puede ser que se dejó más del tiempo indicado en la mufla y esto
provocó a que haya una mayor pérdida de cloruros alcalinos o volátiles a altas temperaturas18.
Para la determinación de cenizas solubles en agua, éste está asociado a la determinación de
cenizas totales; y con respecto a las cenizas insolubles en ácido clorhídrico nos indica la
calidad del vegetal, el porcentaje obtenido de cenizas hidrosolubles fue 5,14% que este se
encuentra en el límite permitido por la Farmacopea que es máximo de 7%, que nos quiere
decir que si hay una concentración de iones calcio, magnesio, hierro, potasio, etc. a que estos
son solubles en agua. Y el porcentaje obtenido de las cenizas insolubles en ácido clorhídrico
fue de 3,4% que también se encuentra en el límite permitido por la Farmacopea hasta máximo
de 5% que nos muestra presencia sílica, especialmente de arena y tierra silícea19.
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El análisis de sustancias solubles en agua y alcohol sirve para dirigir el posterior análisis
fitoquímico, puesto que, se observa que en las sustancias solubles en alcohol (70°GL) es de
27,23% a comparación del agua que es de 21,62% esto indica que, al encontrar un porcentaje
mayor en las sustancias solubles en alcohol, indicará una mayor presencia de metabolitos de
polaridad intermedia20.
Con lo mencionado anteriormente se puede corroborar con otros trabajos realizados sobre las
características farmacognósticas con esta especie. Abreu et al. (2012) demuestra la
importancia que tiene en abordar con la taxonomía. Proaño J. (2013) obtuvo como resultado
en humedad 9,85%, cenizas totales 8,95%; cenizas solubles en agua 2,93% y cenizas
insolubles en ácido clorhídrico 2,36%. Y por el ultimo López P. (2018) realizó un estudio de
las características fisicoquímicas encontrándose una similitud a los resultados obtenidos en
este trabajo de investigación3, 20,21.
En la TABLA 3 se muestra la determinación de los Sólidos Totales en el extracto acuoso de
las hojas P. aduncum obteniendo 6,3 mg/mL esto hace referencia a los residuos que quedan
en la muestra después de su evaporación y su consecutivo secado en la estufa a temperatura
definida. Al no encontrar algunas informaciones sobre los sólidos totales de las hojas de P.
aduncum, los resultados obtenidos en esta tabla quedan como referencia para otros
trabajos22.
En la TABLA 4 se muestra los metabolitos secundarios presente en el tamizaje fitoquímico
del extracto acuoso de las hojas P. aduncum en el cual se encontró alcaloides, fenólicos,
flavonoides, azúcares reductores, saponinas, taninos que indica que estos tienen más
polaridad con este extracto a diferencia del ensayo del Blajet, Ninhidrina y Liebermann-
Burchard que no hubo presencia de las lactonas, aminoácidos y ni esteroides respectivamente
ya que este tiene más afinidad en un extracto alcohólico y/o cloroformo.
La presencia de los alcaloides se pudo evidenciar cualitativamente (según su intensidad de la
coloración), son solubles en agua, contienen al menos un átomo de nitrógeno en la molécula,
y exhiben actividad biológica y posee un nitrógeno heterocíclico procedente del metabolismo
de aminoácidos, por eso que, en las reacciones de Mayer, Wagner y Dragendorff dieron
positivos23,24.
La reacción del tricloruro férrico, es un tipo de reacción acido – base de Lewis, teniendo
como donador de electrones a los hidroxilos del catecol del tanino, existiendo la formación
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de cargas parciales para la posterior eliminación de átomos de hidrógenos y cloruro hasta
llegar a la formación de un complejo de color verde oscuro25.
La reacción de Shinoda (magnesio en ácido clorhídrico) permite distinguir algunos tipos de
flavonoides. En esta reacción, el magnesio metálico es oxido por el HCl concentrado, dando
como productor al hidrógeno molecular, que es eliminado en forma de gas y el cloruro de
magnesio, que es el que forma complejo con los flavonoides dando coloraciones
características y en este caso dio como resultado una coloración que va desde el rojo al
crimson24.
La ninhidrina empleada para esta determinación, es un reactivo que sometido a la acción de
α-aminoácidos y/o aminas primarias, sufre un proceso de desaminación oxidativa, facilitado
por el calor, seguida de la formación de una base de Schiff, altamente deslocalizada y muy
coloreada (azul – violeta) 24.
El ensayo para azúcares reductores resultó positivo, esto se debe a que dichos azúcares se
caracterizan por ser de naturaleza altamente polar, debido al marcado número de grupos
funcionales hidroxilo (OH-) que poseen. En el ensayo se utilizó reactivos diferentes, el
llamado Fehling A, que es una solución acuosa de sulfato de cobre (II) y el Fehling B, que
contiene hidróxido de sodio y tartrato de sodio y potasio; la función de este último es formar
un quelato con el Cu2+ y evitar que este ion sea precipitado por los iones hidróxido24.
Las saponinas fueron identificadas mediante el ensayo de espuma, por ser un grupo de
glicósidos que se disuelven en agua y disminuyen la tensión superficial de ésta, al agitar la
solución se formó una espuma relativamente estable, por ser tensioactivo, evidenciándose
que la reacción fue positiva27.
El ensayo para taninos con el ensayo Gelatina resultó positivo en el extracto acuoso dando
una coloración azulada negruzco indicando que son taninos hidrolizables y precipitan con la
solución de la gelatina26.
Para determinar la capacidad antioxidante se hicieron extractos secos en diferentes
concentraciones 1%, 3% y 5% para así poder utilizar el método DPPH•, este método consiste
en cuando se pone en contacto con una sustancia que dona un átomo de Hidrogeno
(antioxidante) se produce la forma reducida DPPH-H o DPPH-R en el que da una pérdida de
color amarillo pálido. El radical DPPH• es ampliamente usado y esto se debe a que se
obtienen los resultados en un tiempo corto27.
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Como se muestra en la TABLA 5 se obtuvo que al 1% fue de 16,95±0,94 mg de Trolox/ g de
extracto seco, en el 3% fue de 28,41 ±0,30 mg de Trolox/g de extracto seco y al 5% fue de
31,67±0,60 mg de Trolox/ g de extracto seco; los valores de TEAC muestran diferencias
estadísticamente significativas entre las diferentes concentraciones (ANEXO 9). Esto nos
indica que en la concentración a 5% presentó la mayor capacidad antioxidante encontrando
aquí mayor números de compuestos fenólicos y flavonoides, ya que se sabe que los
flavonoides están ampliamente distribuidos en el género Piper, dentro los principales tipos
que se aislaron se encuentran las flavonas, flavanonas, chalconas y dihidrochalconas, de
variada actividad biológica como antibacteriana y antifúngica, destacándose también su
actividad antioxidante debido a la presencia de grupos hidroxilo de tipo fenólico en la
mayoría de sus estructuras químicas27,28. Estudios con el mismo género reportaron la
potencial capacidad antioxidante de los extractos de P. piedecuestanum TREL. & YUNCK y
P. Subpedale TREL. & YUNCK por diferentes metodologías ABTS•‐, DPPH•, FRAP y
ORAC (Mesa A et al.). Al igual en otro estudio demuestra una reducción de 50% la
concentración inicial del DPPH• del extracto etanólico de las hojas de P. aduncum. (Rengifo
R. et al.)29,30.
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V. CONCLUSIONES:
Después del análisis de los resultados se llegó a las conclusiones que:
- Se logró identificar las características fisicoquímicas de las hojas de P. aduncum.
- Se identificó los metabolitos secundarios en el extracto acuoso de las hojas de P.
aduncum siendo estas: alcaloides, fenoles, flavonoides y azúcares reductores.
- La capacidad antioxidante del extracto de las hojas de P. aduncum expresado en mg
de Trolox Eq /g de muestra seca fue de 31,67 ± 0,60 mg de Trolox en el extracto al
5%.
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ANEXOS
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ANEXO 1: Recolección de la especie vegetal
Fig. 1: Planta Piper aduncum L. en el laboratorio de Botánica y Farmacognosia de la Universidad Nacional deTrujillo.
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ANEXO 2: Identificación taxonómica dada por el Herbarium Truxillense:
Fig. 2: Constancia de la determinación taxonómica de la especie vegetal Piper aduncum L. en el HerbariumTruxillense de la Universidad Nacional de Trujillo.
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ANEXO 3: Cálculos para promedio del largo y ancho de las hojas de P. aduncum L.
LARGO (cm) ANCHO (cm)
1° 19,7 1° 8,1
2° 18,1 2° 7,6
3° 21,3 3° 8,6
X̄ 19,7 X̄ 8,1
σ 1,6 σ 0,5
ANEXO 4: Cálculos para promedio del peso (g) de las hojas de P. aduncum L.
1° 2,39
2° 2,04
3° 2,47
X̄ 2,3
σ 0,229
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ANEXO 5: Determinación de pérdida de peso por desecación.
Fig. 7: Las hojas de Piper aduncum L. en la estufa del laboratorio de Botánica yFarmacognosia de la Universidad Nacional de Trujillo.
Fig. 5: Hojas secas de Piper aduncum L. en el laboratorio de Botánica y Farmacognosia de la UniversidadNacional de Trujillo
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ANEXO 6: Características fisicoquímicas de las hojas de Piper aduncum L.
MUESTRASMATERIASEXTRAÑAS
HUMEDAD RESIDUAL CENIZAS TOTALESCENIZAS SOLUBLES EN
AGUACENIZAS INSOLUBLES EN
HCl
SUSTANCIAS SOLUBLES EN:
70°GL H2O
1° 6,98 9,36 12,63 3,42 3,66 27,68 22,25
2° 8,52 8,56 10,93 6,43 3,23 27,12 20,77
3° 7,98 8,84 11,31 5,58 3,4 26,88 21,84
X̄ 7,83 8,92 11,62 5,14 3,43 27,23 21,62
σ 0,78 0,41 0,89 1,55 0,22 0,41 0,76
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ANEXO 7: Obtención de extracto.
Fig. 8: Método de reflujo de las hojas de Piper aduncum L. en el laboratorio de Botánica y Farmacognosia de
la Universidad Nacional de Trujillo.
Fig. 9: Solidos totales del extracto acuoso de las hojas de Piper aduncum L. en el laboratorio de Botánica y
Farmacognosia de la Universidad Nacional de Trujillo.
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ANEXO 8: Determinación de la actividad antioxidante por el método DPPH.
Decocto (%) Solidos totales (mg/mL) ABS X̄
1 4,2 0,590 0,593 0,605 0,596
3 6,7 0,354 0,362 0,357 0,358
5 7,9 0,228 0,239 0,247 0,238
Cuadro 2: Lecturas de absorbancia (ABS) del extracto acuoso de las hojas de Piper aduncum endiferentes concentraciones.
Cuadro 3: Estándares de concentración del extracto acuoso de las hojas de Piper aduncum endiferentes concentraciones.
CC ABS (trolox) X̄
0,1 0,950 0,936 0,919 0,935
0,2 0,844 0,859 0,871 0,858
0,4 0,710 0,761 0,73 0,734
0,6 0,564 0,611 0,551 0,588
0,8 0,504 0,428 0,448 0,460
1,0 0,352 0,327 0,310 0,330
1,2 0,183 0,189 0,169 0,180
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Fig. 10: Curva de calibración entre las Concentraciones vs Promedios de las absorbancias.
EXTRACTO
(%)
ABS mM Trolox en la ecuación mg Trolox/mL mg Trolox/g de extracto seco
n1 n2 n3 E1 E2 E3 t1 t2 t3 1 2 3 X̄ σ σ/x̄
1 0,59 0,593 0,605 0,296 0,290 0,266 0,074 0,073 0,067 17,662 17,305 15,877 16,95 0,94 5,58
3 0,354 0,362 0,357 0,768 0,752 0,762 0,192 0,188 0,191 28,684 28,087 28,460 28,41 0,30 1,06
5 0,228 0,239 0,247 1,020 0,998 0,982 0,255 0,250 0,246 32,301 31,605 31,099 31,67 0,60 1,91
Cuadro 4: Promedio (mg Trolox/g de extracto seco), Desviación estándar (σ) y desviación estándar relativa (σ/x̄) de lasabsorbancias de las diferentes concentraciones del extracto acuoso de las hojas de Piper aduncum.
y = -0.6779x + 0.9999R² = 0.9996
0.0000.1000.2000.3000.4000.5000.6000.7000.8000.9001.000
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
Pro
med
io d
e la
s ab
sorb
anci
as
Concentraciones
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ANEXO 9: Análisis estadísticos.
Origen de lasvariaciones
Suma decuadrados
Grados delibertad
Promedio de loscuadrados
F Probabilidad Valor crítico para F
Entre grupos 358,6710253 2 179,3355 399,0267 4,155E-07 5,14325285
Dentro de losgrupos
2,696594484 6 0,449432
Total 361,3676198 8
Cuadro 5: Ensayo de Análisis de Varianza (ANOVA)
Tukey HSD results
treatments Tukey HSD Tukey HSD Tukey HSD
pair Q statistic p-value inference
A vs B 29,613 0,0010053 ** p<0.01
A vs C 38,0311 0,0010053 ** p<0.01
B vs C 8,4181 0,0024223 ** p<0.01
Cuadro 6: Ensayo de Tukey
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DECLARACIÓN JURADA
Los AUTORES suscritos en el presente documento DECLARAMOS BAJO JURAMENTO que somos
los responsables legales de la calidad y originalidad del contenido del Proyecto de Investigación Científica,
así como, del Informe de la Investigación Científica realizado.
TITULO:
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN CIENTIFICA INFORME FINAL DE INVESTIGACION CIENTIFICA
PROY DE TRABAJO DE INVESTIGACION TRABAJO DE INVESTIGACIÓN(PREGRADO) ( )(PREGRADO)PROYECTO DE TESIS PREGRADO ( ) TESIS PREGRADO ( X )PROYECTO DE TESIS MAESTRIA ( ) TESIS MAESTRÍAPROYECTO DE TESIS DOCTORADO ( ) TESIS DOCTORADO ( )
Equipo Investigador Integrado por:
APELLIDOS Y NOMBRES FACULTAD DEP. ACADÉMICO
CATEGORIA
DOCENTE
ASESOR
CÓDIGO Docenteasesor
Numero Matricula
del estudiante
Autor
Coautor
asesor
1VENEGAS CASANOVA,
Edmundo ArturoFARMACIA YBIOQUIMICA
FARMACOTECNIA NOMBRADO 5843 ASESOR
2 JAICO CRUZ, Maricarmen
JackelynFARMACIA YBIOQUIMICA
1511103014 AUTOR
FIRMA DNI
FIRMA DNI
FIRMA DNI
FIRMA DNI
1Este formato debe ser llenado, firmado, adjuntado al final del documento del PIC, del Informe de
Tesis, Trabajo de Investigación respectivamente
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C. No autorizo su publicación
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CARTA DE AUTORIZACIÓN DE PUBLICACIÓN DE TRABAJO DE
INVESTIGACIÓN EN REPOSITORIO DIGITAL RENATI-SUNEDU
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Los autores suscritos del INFORME FINAL DE INVESTIGACIÓN CIENTIFICA
Titulado:
AUTORIZAMOS SU PUBLICACIÓN EN EL REPOSITORIO DIGITAL INSTITUCIONAL,
REPOSITORIO RENATI-SUNEDU, ALICIA-CONCYTEC, CON EL SIGUIENTE TIPO DE
ACCESO:X
VENEGAS CASANOVA,
Edmundo Arturo
JAICO CRUZ, Maricarmen
Jackelyn
Farmacia y
Bioquímica
Farmacia y
Bioquímica
Nombrado 5843
15111030
Asesor
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