the role of dsc1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in mcb gene transcription at the mitotic g1-s...

9

Click here to load reader

Upload: stewart-white

Post on 10-Jul-2016

215 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

�������� ������

������� ���� � ������ ���� � ����� ���������������� �� ��������

��� ���� �� �� �� ������� ����� �� ���� � ��� ���� � �� ������ ������������� �� ��� ������ ��� ������� �� !����� ����

��� �� � ����� ���� �������� �� ���� ���� � �������� !��!� " # $�� ����� ����!%�&'��(% ����

�������� �! ���� �(��) * ������ �� ��(!������� !�� +� , ( %� �� , %!� (� �� -�&� � �!�(�� ,+��� ! �(�� �! ��!��� ! ���� �� ���!% $�� ��� ����)�!�� ( (���� , ��.�!� � !���� !�/ ���� ��(!�����&�� ! �� +� �� �!(.��� �! ���� *�� ���� �����0 ��������� (� � !������� �� �1�����/ �! � !��(��) �1����� ! , ���� ��0 � ��0 ������ �!� !������� 1����� ! , 2�3&�%��(�� %!�) ��%&%���!% ��(� ��� � �������� �( �$� ��(!� �%��(&� �� �� ����� �! � !�� ���!% 2�3 ��(!������� !/4�!(���) * 1($�! �� �(���! , 2�3&�%��(����(!������� ! �! ���� *�� �� -� ��� � �� 1�!��/��������!%��) * +!� ��(� �� ��� � $��(�� ! �(���2�3 ��(!������� ! ��� �%� �� �� ��� ����) *��(����� �&,� (,�� !��� %! ��(� (�� ! �( ! �$(� 1&����� ! �(���!�/ �� �$����(�� !� , ��� ��� (&�� !� , � �!����(!��!% 2�3&�%��(�� ��(!������� !(� ��������/

������� 4���� ! �(�� � ����� � �� � ��

"�����������

�� ��� ���� �� �� �� ��� *���� ���� �!��% *�!��� ������(� (!� �� ��/ 2(!� ��.�!� , �$� ,� !�� � �( �! �����(�� ��(� �%��(� ���� �� ���)���� (� �!��(�����(� � �(�� !) �� ��! 5�!(� (��� ���)����+� �� � ����� �%�(�(�� ! (!� ��(!������� !/ �! (!�$�� , �(��) ��(!������� ! �(� �! , �!� � ��(� (!�$� ��(!� � � �! � !�� ���!% ��� ���� �� %���/ �!1($�� , ���� �� �� �%��(�� ! , 1����� ! , �� -�

�����!�) ���� (!� ����) �! �� �����!% �(�������������� �������� � (�� ��(!������� ! ,���� � ���� ������ �! �� (����(�� ! , �� �������) *��� ����� ��(!������� ! �� *� �� ���� � *!6� �!�� ! (!� *!�� �77�8/

��� ����&�%��(�� ��(!������� ! �(� �! *�������� �! �� +��� ! �(��) ������������������ ����/ � %� �� , %!�) �!�����!% �����0) ����0) ����0

(!� �����0) (� ��(!��!��� 1����� (� �� �%�!!�!% , �&��(� (!� ���� �� ����� (� �9����) ���� ��&����� � �!�������) , � :#� ��!�����; ��� %!�!� � �� ����� ���� (� ��� !��� ��� �����(� (!� (-� �����! 6<��� � (�/ �77=; 4�!(!�>&�(�(��( � (�/�77=; � !! ��� (!� 3(�� �77�; � ,$(!! (!� 3(���77�8/

�� $ ����(� � $� !!�� ��(� � & ���!(� ��� ������(!������� ! �! +��� ! �(�� �( �! ���� ��; ���� $���� ( ��(!������� ! � $��1 ��!��!% � � $$ !)��(�� :#� �9�!�� �! �� �� $ ��� , �� , �� �&��(� %!�/ �� ��(!������� ! ,(�� � �(� �! !($�:��� 6:#� ��!����� � !�� �8 (!� � !�(�!� �� �� �&���� , �� �����0) ���0) ���0) ��0(!� ��0 %!�6 *!�� � (�/ �77�; �(��%���� (!� 3(�� �77=; 2�&�($ � � (�/ �77�; ��%��($( � (�/ �77�; ?�� � (�/�77�; #(5(���$( � (�/ �77@8/

:��� ��!�� � � &�(��� 2�3 �9�!�� 6�� � ������� � 1; � �!���!�(���) �� �9�!� ��-�-� �� ���($ (� �� �� %!��� ! �9�!� , �� �������� !!>�$) �� �8/ ���� �9�!�� (� ���!� �! ���� $ ��� , �����0) �����0) ����0 (!� ����0) (�� ,*���� (� $(1�$(��� 1����� (� �� -�&� � �!�(������!% �� $�� ��� ��� ����/ 4�����$ �) �� �(� �!�$ !���(�� ��(� �� �(�� 2�3� � !,� ��� ����&�%��(�� ��(!������� ! � ( ��� � % �� %! �! (�� ��� ��(�$��) ��� !%�� �$����(��!% 2�3� �! �%�&�(��!% -�&� ��(!������� ! �! +��� ! �(�� 6 *!�� � (�/�77�8/

:��� (!� 2�3� � !�� � �� 1����� ! , ( %� �� ,%!� �9���� , � !��� �!� �&��(�/ ���� �$���� ��(�� !�� � , (��� ��� , ���� ��(!������� ! (��(�(��� �� ����,�$� ��(!� , � ��� ���� �� %���/ �� ���!�) ��� �� �����

���� -!� 6����8 ��� �@�A�@7:B� ��/���C�����7�������"

� $$�!��(�� �� �/ �����(�1

�/ D��� � 4/ <�(��9 � �/ � ���� � � �/�/ 2��!�!� 6�8:� ��� ! , 3� ��$����� (!� 2 ����(� 3� � %�)�!������ , 3� � %��(� (!� �, ���!��)E!� ����� , -�(�% *) -�(�% *)-�� "FF) E<�&$(��� �/�/2��!�!�G�� /%�(/(�/�5

Page 2: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

�!����(!��!% , � *:��� (!�2�3� * �5 � %��� � � !�� � ��� ����&�%��(�� ��(!������� ! �! +��� ! �(��/�� �� ��� � ��(� ������ ��(�� ( �!��(� � � �! �����%��(�� !) �(���� ��(�� �� �� (�� ����� �9���� , � ������� �� %��� 6#��� (!� 3����� �7"�8) ��� (�� ��(�� (�� �� �����A $��(�� !� �( �� , �!� .��� !2�3&��!�!� %! 1����� ! 64�!(!�>&�(�(��(� (�/ �77=; <��� � (�/ �77=; � ,$(!! (!� 3(�� �77�;2��!�!� � (�/ �77@; 3(�$ � (�/ �77C8/ ��� $��(�� !���%%�� ��(� ������ $(� �( � �� � ���� (!� !%(�� � �� �! � !�� ���!% ��� ����&�%��(�� %!�/ B�����!� 1���$!�� �( ��%%��� ��(� �� �(��!�� � ������ �! :���) ���� (!� ����) (�� �( � �� �!��� ����&�%��(�� ��(!������� !) *��� ���� (��� (��!%(!� ���� ������!% ��(!������� ! 63(�$ � (�/ �77C;D����(�� � (�/ �7778/

D � �%�� � �! ���%(� �� � � , :��� �! � !&�� ���!% 2�3&�%��(�� %! ��(!������� ! �� ������!%�� .�� , �1�����!% (�� �� � $� !!�� ,�� � $��1 ! ��� ���� ��(!������� !/ 4�����$ �) *1($�!� �� .�� , 1�!��!% �� -� ��(� !��� ��� 1����� ! , %!� (� �� -�&� � �!�(��/�� �$����(�� !� , ��� ������ , � $��(!��$� ,-�&� ��(!������� ! �! +��� ! �(�� (� ��������/

��������� ��� ������

2��( (!� %!�(� ���!�9��

-!�(� $ ����(� �� ����� *� ��, �$� (� ������� ���($�� 5 � (�/ 6�7"78) *��� �� $��( ��� , � �� �� �(%(�� ! , �! ��� *� (� ������� �� 2 �! � (�/ 6�77�8/ �� ��(!&�(�� %!���� �� ����� , -��> � (�/ 6�7C�8 (!� < ��� � (�/6�7CC8 *� , �� *�/ �� , �� *�!% ���(�!� *� ��� �! ���� ������"#� �A 6-- �8) �A ���� ��� � ��$� ����%�� 6-- �7=8) �A �����$$ � ��$� 6-- �7�8 (!� �A ��� � 6-- HC8/ 4 � (�� ����� � %��(�1���$!��) ���� *� %� *! �! $�!�$(� $���$ 6�22; 2 �! � (�/ �77�8) *��� ��(5�!%) (� �@ �� � =� ��/ �$��(���&�!���� $��(!�� *� �!���(�� (� �� �������� �$��(��� , =H ���! ��� � �����(� ���� $��(!� ��! ���/

��!��� !��(�� ! , ���� �� ����� �(� �$��(��� ���,�� �! ������ ��� $��(!�� *(� (��� � �� %� *�!% ���� �! �22 � $��&1� !!��(� %� *�� (� �@ ��) �, � ���,��!% � =H �� , � � �/ ����*� ��! ���,�� �(�5 � �@ �� � !�� �� $�� ��� ��� ���� �!��!��� !�/ �($��� *� ����9�!��� �$ � (� �%��(� ��$�!�� (�� � �� , � �#� 1��(��� !) (!� � $(��� ���(�� !�!���� �� $��� �� ��� 1($�!(�� !/

� ���(�� !� , ��!��� ! ���� �� ���!% +��� ! �(�� ���� *����(�� �� �� , ( 3�5$(! �����(� � � � � 6��(! � (!�2������ ! �7C78/ ��� !�$��� �� $�������� , ��9��� ������ *����$�!� ,� $ �($��� +1� �! ( �/�I , �$(�������/�I � &���$ ��� ��� � ���� !/ 4 �� *�!% � !��(�� !) ���� *� � �!������ !��(��� *��� ( � ���� � �!��/ 4� * ��� $��� (!(�����)���!% ( J� ���!�&(��� (�� ��� � ��� 64���8 *(� ��, �$� (��� � ���� ������� 62��!�!� � (�/ �77@8) ���!% �� 4����(!����$ (!� �� ���� �� (!(����� �� %�($ 63�� ! :��5�!� !8; (!���)��� ���� *� (!(���� (� (�� ��$ � �!�/ 4 � !��� %!&��(�& (�� ! 1���$!��) ���� *� %� *! � �� $��&1� !!��(� ��(� , %� *�� (� =� ��) *(��� ��� ��$� �! !��� %!&,� �22) (!�%� *! �! ���� �($ $���$ , � �@ �/ ���� *� ��! �&,� *���!��� %! �� �� (����� ! , @ % #���� �

A�/� �1���� %!� ���!% �� ����� �� � 62(�!����

�77=8 ����!% ( ��!��� ! �� ��� ����) ���� *� %� *! �! �22*��� @ �% ���($�! ��A� 6&���0 �� $ �� KK .LL8 � �� $��&1&

� !!��(� ��(% , %� *��/ ���� *� *(��� ��� ��$� �! ���(&$�! ,� �22 (!� ��! %� *! , � �H � �! �22 *��� �����($�! 6&���0 �� $ �� KK !LL8) (� �� �($ �$��(���/ #1��(�) ���� *� ��!��� !��� �� ����� �(� �$��(��� ���,��) (�������� (� /

%�' ��&��� ���

�� ��(�$��� ��������0 (!� ��������0 *� $(� �� ($&���,��!% �� �! �(��!% ,�($� , ��0 (!� ��0 ,� $ �:#��� ���) ���!% ��% !��� ���� *���� %( (! ��� �������� ! ���(� �� ��- (!� ( (���� ��� =� � �� �� � � � ! , � (�� %!/���� (�� *� �� %!� � � �!���� �! ,�($ *��� �� &���0

�� $ �� �! �� ����� ���� , ��(�$��� 62(�!���� �77=8/ �� ��% !��� ���� ��� *� (� , �� *��)�0� 6�8 @�&�-�������--�����-���-��-�������-��-�&=� (!� 6�8 @�&--���--����������������-���������-����&=�) )�0� 6�8 @�&�-�������-������-��-������������-���-���&=� (!� 6�8 @�&--���--����������-�-���-�����������-�&=�/

��� ($���+� :#�� *� � !+�$� �� �9�!��!%/ �������� �����0 (!� ������ �������� � !������� �( �!������� �� � ���� 62��!�!� � (�/ �77@8/

%�' �&� )�' ��&� �����&�

�! ��� � �(� �#� *(� ���(�� (� ������� �� 2��!�!� � (�/6�77@8 (!� # ����! �� � (!(����� *(� �(���� �� ���!% ( -!&���! $$��(! 6#�#) �, ���!� �� �����) 3 �� !) 2(��/8), �� *�!% �� $(!�,(�����L� ��%%��� �� � � �/ :#� �� ��*� �(���� *��� M�&=��N ����) ���!% �� �(!� $ �1(!��� ����(����!% �� ���� , 4�!��% (!� ' �%����! 6�7"=8/ # ����!�� �� *� ��������� *��� �� , �� *�!% :#� �� �� $(��� ���) ���!% �� � ���� !��!% ��% !��� ����������0� 6�8 @�&-�������-���--���&=� (!� 6�8 @�&������-��-������-�-&=�) ���0� 6�8 @�&���-���������-&����&=� (!� 6�8 @�&������ --���--��&=�) �����0� 6�8 @�&--��-�����������-��-&=� (!� 6�8 @�&�����-��-����-������&=�) ����0� 6�8 @�&������-��������-����&=� (!� 6�8 @�&-�� �-���-���--������&=�) ����0� 6�8 @�&�����������������-��&=� (!� 6�8 @�&-��--�����&���-���-���-&=�) �����0� 6�8 @�&--����-��-����-����---��-��&=� (!� 6�8 @�&���-���-����-��-�&��� �������&=�) ��0� 6�8 @�&-�����-���-��-����&���-��-�&=� (!� 6�8 @�&������������-���������-����&=�) ��0� 6�8 @�&������-��-������������-���-���&=� (!� 6�8 @�&������-�-���-����������&�-�&=�) ���� ! ���� 6�8 @�&-���--�--�������--�-&=�(!� 6�8 @�&��-�����-����--�����&=�/

#������

B �1����� ! , �����0 (!� �������� �( ! .�� ! 2�3 %! ��(!������� ! ��� �%� �� �� ��� ����

�� � �� 1���$!�� �( �$ !���(�� ��(� 2�3%!� (� � !�� ��� �� ( ��(!������� ! ,(�� � � $��1)!($� :���) *���� � !�(�!� �� %! �� ����� , �������0) ���0) ���0) ��0 (!� ��0 6 *!�� � (�/�77�; �(��%���� (!� 3(�� �77=; 2��($ � � (�/ �77�;��%��($( � (�/ �77�; ?�� � (�/ �77�; #(5(���$( � (�/�77@8/ D � �%�� � (����� �� �%��(� �� � � ,������ �! :��� �� (!(����!% �� .�� , �1&�����!% �����0 ! 2�3 %!� ��� �%� �� �� ���

�@�

Page 3: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

����/ �����0) ��(�� �!�� �� � !�� � , �� � *�,��&���0 �� $ �� 6������ �����0; 2(�!���� �77=8)*(� �1����� 6(� � $�(�� *��� *��� ��� �($��KK*�LL) �! �(�� �(!8 �! ���� *���� �(� �! ��!��� !���, � �� ��� ! ���!% ���� ���/ ��(!������ �� +�� , 2�3%!� *� 1($�!� �� # ����! �� � (!(�����/ �* �(5� , �����0 (!� �����0 ��(!������� ! *� (��(�&!� 64�%/ ��8) �� ��� ��$���!% �� � �! �! �����!��% �!% ��� ���� �� ��� ! *�� ! %! �� �1&����� 6(� �� *! �! 4�%/ �8/

�! �� 1���$!�� �� *! �! 4�%/ �) �* ��.�!���� ���� $��(!��) ���� ��� (!� �����$$) *� ��� � ��!��� !�� ���� , � �� ��� ! �� ����� �(� �$��(���

���,��/ �* ��!��� ! �� �(5� , 2�3 %! ��(!&������� �(! � �! �! � �� 1���$!�� ��� $�!�, � �� $��� �!� , ���(�� ! *����) �! �(����� ��& ���!% ����) � ���� !�� � �� -�&� � �!�(��/ �!���� �&�� ����!% �����0) �� �* �(5� , �����0

���� (� �� �($ �!�� (� 6�"� $�!) ���� $�!8/ ����)� �� �� ��$�!% (!� ���(�� ! , $(1�$�$ 1����� ! , 2�3 %!� (��(� �!(.��� �� �1����� ! ,�����0/

B! $��(!� , �����0) ��������) �(� �! �������! ��(�� (!� �(� �� ��� ��,�� �!, �$(�� ! (� ��:��� ,�!��� !/ �������� � !�(�!� ( ! !�!� $��(&�� ! ��(� ������ �! �� (��!� , H� ($�! (���� ,� $�� �&��$�!�� 6��$ !� � (�/ �77�8/ ���� �(���2�3 %!� � � 1����� ��� �%� �� �� ��� ����62��!�!� � (�/ �77@8/ �!�����!%��) �����&��� ������!��(��� *��� ���� (!� ����; (!� �� �&�%��(��1����� ! ��! ��� �� ��!�!� ! ��0 6D����(��� (�/ �7778/ ���� ��%%��� ��(� ���� �%� ! , ������) � ( ! � $ ���� ��(� ��!�� � ��) � !������� � ���&���� �%��(�� ! , �� � $��1/ � 1($�! ���� � �&�������� * ������ �� .�� , �1�����!% ������������!% �� $�� ��� ��� ����/ �� *��� �����0) ����(!������ �� +� , 2�3 %!� (��(�� �(�%�� �!&(.���) � $�(�� *��� �� *��� ��� 6� $�(� 4�%/ �3*��� 4�%/ �8) ��%%���!% ��(� �1����� ! , ����$��(!� , �$ , �����0 �(� ����� .�� ! ���&������(!������� !/

�� � � !������� �1����� ! , ���� �����0 6�8 � �������� 6�8 � � ! � (.�� 2�3&�%��(�� %! 1����� ! ����!% ����� ����/ �����������0 (!� �������������� *� ��(�(�����(!�, �$� �!� ���� ��� (!� ��!��� ! �� ������� , ������(�!� *� �� ���� �� ����� �(� �$��(��� ���,��/ ���� *��!���(��� %� *! �! �� ���!� , ���($�! 6&���0 KK .LL8 (!� ��!��(!�,��� � $���$ *��� �� ���($�! 6&���0 KK !LL8 , � �H �)�, � ��!��� !��(�� !/ �� �%� , ��!��� !� �! (��1���$!� �� �!���(�� �� �� ���(�� ! �!�1 6* ���8/# ����! �� � (!(����� *(� ��, �$� ! � �(� �#� �($���)���(�� (� �@&$�! �!�� (��) , �� *�!% ��(� ,� $ �� �������� �$��(���; (!� �� $$��(! *(� ��������� � !����� �� *��������0) �����0) ����0) �����0 (!� ����0 �� ��/ (! ��� !�(�!� � !�� � �#� ,� $ (��!��� ! �� *���&��� ���� ! � �1�����!% �����0/ ��� ) �� �(�� , �����0�����0 ��(!�&������ �� �� *!

�@=

Page 4: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

B �1����� ! , ��0 (!� ��0 �������! � !������� ��(!������� ! , 2�3 %!���� �%� �� �� ��� ����

�( �!% ��(������ ��(� �1����� ! , �����0 (!��������� �(� ! .�� ! ��� ���� ��(!������� !) *� �%�� � (����� *���� ��� � $� !!�� , :����( �%��(� �� � �� �! �� � $��1/ 3 �� ��0 (!���0 *� ��(�� �!�� �� � !�� � , �� &���0

�� $ �� 6������ ��0) ������ ��08) (!� ��%!� *� �1����� 64�%/ =�) 3; � $�(� &���0

�� $ �� KK .LL) �22 *��� ���($�! KK0���LL �(!(!� *���&��� KK*�LL �(!8 �! ���� ��!��� !��� , � ��& ��� !) ���!% �� ���� ��� $��(!�/ �! � �� �(��) *�!2�3 %! ��(!������ � �� *� ���$�!� ��# ����! �� � (!(�����) �� *(� , �!� ��(� ��� ! � !%� J����(�� ����!% �� ��� ����) ��� �!��(�*� ���!� ��� �%� �� 64�%/ =�) 38/ ���� ��%��(�&� ��(!������� ! *(� ����+� � 2�3 %!�) ��!� ��&�� ! ����) ( ! !&2�3 %! ��(!������ ����+�(�������!% �&��(� 62(���$ � (!� O(!(%��( �7"@;

2(���$ � � (�/ �7"C8) *(� �!(.��� �� �1&�����!% ��0 � ��0/

�! ��� � ����) 2�3 %!� (� 1�������� �%� �� �� ��� ����

�* ��> � !�� �� ��(� ����!% �� +��� ! �(�� �������) ! (� -�&2 (!� �� ��� (� -�&�; �! � �� �(��)���� $��� (��(�! ( ������(� $(�� �, � ��� �� �� �!� �� !1� ��� ���� ��(% 6#��� �7C@8/ E!�� ���$�$%� *�� � !���� !�) !�� �� -�&2 ��> � !�� � ��(��)��!� +��� ! �(�� ���� (� �(�%� (,�� ��� �� ��� ! ��(!�� -�&� ��> �9���$!�/ ���� ������ �! ���� �(���!%��� �%� -� �� 9���5��) �(���!% ���� ���&���� �!�� (�� � ( �$(�� ,�(��� ! 6P��I8 , �� � �(� �� ��� ! ��$/D *� �!����� � �!����(!� �� .�� , 1�!��!%-� ! 2�3&�%��(�� ��(!������� !) (� ��� %!� (�����+�(��� ��(!������ (� ���� ��$ �! �� ��� ����/ � � ����) * 1�� ��� �� ��� � $��(!� 6#��� �7C@8/��� � ���� (� � �! �$(��� �! ��>) �� * ������� �� , � �� -� ��> � !�� �) *��� �� � !�9�!���(� ��� 1�!� ���� -� ��� � � %� * � �� ������(���> �9���� � �� �� ��� �%� �� ��� ����/

���� � !�(�!�!% �� ��� � $��(�� ! *� %� *! � �� $��&1� !!��(� ��(� , %� *�� (� =@ ��) �, � (��!��� ! �� � ���(�� ! *(� ��>&����� �� �����(�� !/�($��� *� �(5! , � �#� 1��(��� !) ��� � �!��!%(!� 4��� (!(�����/ # ����! �� � (!(����� , 2�3%!� � (�� �� ��������!% ����� ��(� ��� %!� *�! � !%� ��(!������ ����+�(��� (� �� -�&� � �!�(��

�� �! � ��(!������� , 2�3&�%��(�� %!� ����!% ��!��� &! �� ��� ����� �(5 (� �� -�&� � �!�(��/ �! ��(�(�1���$!��) ���� ��� 6�8 (!� �����$$ ���� 6�8 *� ��!��� !���, � ��� �� ��� !) �� ����� �(� �$��(��� ���,��/ �� �%� ,��!��� !� �! (�� 1���$!� �� �!���(�� �� �� ���(�� ! �!�1/# ����! �� � (!(����� *(� ��, �$� ! � �(� �#� �($���)���(�� (� �@&$�! �!�� (��) , �� *�!% ��(� ,� $ �� �������� �$��(���; (!� �� �� � *(� ��������� � !����� �� *��������0) �����0 (!� ����0 �� ��/ �� �(�� , �����0�����0

��(!������� �� �� *!

�@�

Page 5: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

���) �!��(�) *� ���!� ��� �%� �� �� ��� ����64�%/ �8/ � $ �����(� ���&���� ��(!������� ! *(� �����(��(�!�) ��� $��� ����� *�! � $�(�� *��� (! �$(� ��� ���� 6, � 1($�� 4�%/ �8/ ���� ����� ������� ��(!������� ! *(� ! � �� � � � ��!��� !� �!��� ����) (� ��� !�$�� (!� 4��� (!(����� �$ !&���(�� ��!��� ! �� �� ��� !/ 4�����$ �) ���� !��� ��(!������ (��!�(!� (��� ! �$(���/

��(!������� ! , 2�3 %!� �! ���� �&!���!%�� ��� ���� (,�� !��� %! ��(� (�� !

D !1� � �%�� � 1($�! ! , �* � ����� 1��(&!(�� !� 6� :������� !8 , � 2�3 %! 1����� ! �!��� � ����/ ����+�(���) * ���� *���� 1�!��!%-� �� (! (���!(�� $�� � (�� ������ �! � !������� 2�3 %! 1������ !/ ���� *� !��� %!&��(� �) � !�� -�) (!� *� ��! �&,� @ % #���� �

A� ) � !���� ��� ����/ �,�� ���� (! (����) �� +��� ���� �(� (��(�� �� � !% -� ��� �) ��(�� !��� %!&��(� � ����

(� �� �$(�� (!� �( � %� * �, � ��� �(! !���� +��� �&��(�/ D�! �����0 ��(!������� ! *(� (!(&���� �� # ����! �� � (!(����� �! ���� (,�� ������(�$!�) ( �����!�� ��(!������ �(5 *(� �����!�)� �!���!� *��� �� +��� �&��(� 64�%/ @8/ � �� !� �(5 , �����0 1����� ! *(� ! �� (� ���� !��� ( �� !���!��� ! �� �� ��� !/

����������

�! ���� �(��) * �( ������� ( ���� , 1���$!����(� (!(��� �� 1����� ! �(���! (!� � !�� � , (%� �� , %!� ����+�(��� ��(!������ (� �� -�&�� �!�(�� �! +��� ! �(��/ �� ��(!������� ! ,(�� �� $��1) :���) *���� � $����� ( !�$�� , � ��&������) �!�����!% ������) ���� (!� ����) $��(������ 2�3 %! 1����� !/ �! ( !�$�� , �(��) ,�!�&�� !� �( �! (������ � 2�3 %! �� �����/ 4 �1($��) �����0 !� �� ��� !��� ��� �����(�64�!(!�>&�(�(��( � (�/ �77=8 (!� �����0 !� �� (

�� " � !������� �1���&�� ! , ���� ��0 6�8 ���0 6�8) �(��� 2�3&�%�&�(�� %! 1����� ! ��� �%�& �� �� ��� ����/ ��������0

(!� ��������0 *� ��(&�(��� ��(!�, �$� �!� ���� ��� (!� ��!��� ! �� ������� ,��� ���(�!� *� �� ���� ������� �(� �$��(��� ���,��/���� *� �!���(��� %� *! �! �����!� , ���($�! 6&���0

KK .LL8 (!� ��! ��(!�,���� $���$ *��� �� ���($�!6&���0 KK !LL8 , � �H �) �, ���!��� !��(�� !/ �� �%� ,��!��� !� �! (�� 1���$!� ���!���(�� �� �� ���(�� ! �!&�1/ # ����! �� � (!(����� *(���, �$� ! � �(� �#� �($&���) ���(�� (� �@&$�! �!��& (��) , �� *�!% ��(� ,� $�������� �$��(���; (!� ��$$��(! *(� ���������� !����� �� *��� ��0)��0) �����0) �����0) ����0)���� ! ���� (!� ����0

�� ��/ (! +,�� � !�(�!��#� ,� $ (��!��� ! �� ����)*�� �� &���0 �� $ �� *(�������/ (! �� � !�(�!�� !�� � �#� ,� $ (��!��� &! �� *���&��� ���� ! �� !�(�!�!% ����� �� ��/ ���(�� � , �����0�����0 (!����� ! ��������0 (� �� *!

�@@

Page 6: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

� $� !!� , �� � $��1 *���� �� %!��� �� ��%�! , �����(�� ! 6<��� � (�/ �77=8/ �! � �� �(��) �� %!�� ���� �� �9���� ������� , � �����(��!% :#�) (!� �����, � �� ���� (� ( $(1�$�$ � � *�! �9����)�// (� �� �%�!!�!% , :#� ��!�����/ � !�$�� ,1���$!�� ��%%�� ��(� 2�3 %! 1����� ! �� ! ��(� ��$���!% , � �&��(� 6���! (!� #��� �77C; 4�%/ �8/���, �) �� $(� � �(� !� ��(� 2�3 %!� (���(!������ (� �� -�&� � �!�(�� �! ��� � ,(�����(���� � ! $�; �� �� $ � Q��!� , � �����(� �� ���� �,2�3 %! �� ����� (� $(� !�� *�! �9����/

�� ��(!������� !(� (��� (��!% � � , ������ �!:��� �� �$ !���(�� �� �� ������ ! �! ��(!������� �� , � �(� 2�3 %!� �! �����A $��(!�� 64�&!(!�>&�(�(��( � (�/ �77=; <��� � (�/ �77=; � ,$(!!(!� 3(�� �77�8/ D �� � (! ��� *(� � (!(��� ��(��� (��!% � � , ������ �! :���) �� 1($�!�!% ��.�� , �1�����!% �����0 ! ���&���� ��(!�����&�� !/ B �1����� ! , �����0 6 � ( $��(!�) ��������8�(� ! .�� ! 2�3 %! ��(!������� !) (�%��!% ��(� ���� ! � �� %� �� � � , ������ ��(� � !�� �� 2�3 %!

1����� !/ ����) �� �� ��5�� ��(� ��� � $� !!�� ,�� :��� � $��1 � !,� ���&���� (��� (�� !/

�* � ����� �(!���(�� , � ���� � � (� ���� (!�����/ D �� * ��(� �1����� ! , ���� ��0

� ��0 ������ �! � �� , ���&���� �%��(�� ��(!&������� ! , 2�3 %!� 64�%/ =8/ ���� ��� (�� !��%%��� ��(� � �� , ��� %!� � ���� �$� ��(!��%��(� �� � �� �! � !�� ���!% 2�3 %! 1����� !����!% $�� ���/ �! �� �(� , ����) ���� �� ! � ���&�����!%) (� �� � �� 1���$!�� �( �$ !���(��KK(��� (�� !LL ,�!��� !� , � ���� � ������� 6#(5(���$(� (�/ �77@8/ �� �(� (�� �! ��%%��� ��(� ���� (������ �%� ������� � !�(���!% ���� 6#(5(���$( � (�/�77@; ����$ (!� B5(�($( �77H; �(�(�( � (�/ �77"8/�!��) ����!% �� ��� $ � $(� � �� , ���0 �&����� �! � !������� �� ��%� 1����� ! , 2�3 %!���� �%� �� �� $�� ��� ��� ���� 63(�$ � (�/ �77C8) (��! ��� ��$��(� � �1����� ! , ��0/ �! � ���(��) �� ��(�� ��� (�� !� $(� � 1��(�!� �,���� � !,�� (! �$� ��(!� � ���� ,�!��� ! � :���� �1����� ! , �� � �������) � �$ (�

�� " 6� !��/8

�@H

Page 7: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

, ��� ��!��!% �(��!�) ������!% �! �&�%��(�� ! ,�(�%� %! 1����� !/

�! �� �(� , ��0) �� ��� (�� ! ��(� �1&����� ! , ���� %! ����!% $�� ��� �(� ( ��(� ��! ����� ��������!%) (� �� � �� * �5 �(� ��%%��� ( $� ���&����+� � � , � ���� %!) �// ��� $ � $(� ���� ! ,��0 �(� ! �� .�� ! $�� ��� %� *�� �� �����6��%��($( � (�/ �77�8 / �� ������ ���!�� �� ��%%����(� ���� $(� �! ,(�� �( �$� ��(!� �%��(� �� � ������!% $�� ���/ �� *��� � �!�����!% � � *���� $ ���(��� (!(���� � (� $�� ��� �� ����� , � ���� %!/

�� -� ��� � , �� +��� ! �(�� ��� ���� �� 1&��$�� �� ��) �!�� ���$�$ %� *�� � !���� !�/ ���� ���� ����� , ( ������� ��> � !�� � ��(� ��(�� (� ������$) ��!� ��� �� ��� ! ������ �! ���� ��!% �(�%� ��(!!���(�� 6#��� �7C@8/ D 1�� ��� ( +��� ! ��� ����$��(!�) ��� �) � (!(��� �� .�� , 1�!��!% ��-� ��� � ! 2�3 %! 1����� !/ ��������!%��) *, �!� ��(� ���� ������ �! 2�3 %!� ��!% 1�������� �%� �� �� ��� ���� 64�%/ �8/ � $ �����(� ������� ��(!������� ! �� ����� ���!� �! ��� � ����) ��� ����.�!� ��*! �� �(5 (!� �� �%� � �� , �����0

��(!������ (� ��(��� ,(� ��� ��(! �! ( ! �$(� ��� ����)(� �� *! �! 4�%/ �/ ��� (� �* � ����� 1��(!(�� !�, � ���� ������

�/ 2�3 %! 1����� ! �� $��(!�����(��� �������� � -�; (!� 1�!��!% ���� ��� � ������ �! ( �� (���(5 , ��(!������� !/ ��$��(���) �� 1�(!�� ! , -��! ��� � ���� ������ �! ��(!������� ! ��� �%� ���� ��� ����/

�/ �� ��0 %! �� ���� �� ( !%(�� �%��(� � ,:���) � ��(� $��(�� !� �! ��0 �������) � �!��&�����) ����� �! :��� ��!% � !������� �� (��� (��)�(���!% 2�3 %!� � � 1����� ��� �%� �� ����� ����/

� ��� �� +��� � ��������� * ��� ( ��.�!� �� &� � � � 1�(!� �� -� ��� � , �� ��� ����) �� �&,��!% ���� (,�� !��� %! ��(� (�� !/ ���� !���!% ��+��� ��� ���� (,�� ���� ��(�$!� $��� %� * �, � ���(��(�! �� ������(� ��> �9���� �� �� -� ��> � !�� �)*��� �� � !�9�!� ��(� -� �� 1�!��/ D�! �����0

��(!������� ! *(� 1($�!� �! ���� ����) ( �(5 ,$�#� *(� ! ��) ��$��(� � ��(� �! �! ���� �� ���!%�!�� ! �$(� � !���� !� 64�%/ @8/ ���� ����� �$���� ��(���$��� 1�(!��!% -� �� �!��Q��!� � (�� �!� , � ���!���(� ��(!������� ! �� +� �! ��� � ����) ��%%���!%�!��(� ��(� ��0 $(� �( ( $ � ����� � � �!�%��(��!% :��� (!� 2�3 %! ��(!������� !/

:��� ��!��!% (��� ���) (� $(���� �� %�&��(��(&�� ! ������) �(� �! 1($�!� �! ��!��� ! �� ��� ����� 6��$ !� � (�/ �77=8 (!� �� *! � (�� ����!%�� ��� ����/ �! � !��(��) �! *���&��� ����) �� ���! (��(!� 6��$ !� � (�/ �77=; �� �!�������� ��� (�� !�8/ ��� � !��(���� �� ������ � !+�$ ����%%��� ! ��(� ��� �� *(5 � ���(�� ! ��*! :�����!��!% (!� 2�3 %! ��(!������� ! *�! ���!% %���(��(�� ! � (��(� � $��1 ��!��!% � :#� 6 *!��� (�/ �77�; 3(�$ � (�/ �77C; D����(�� � (�/ �7778/���(�� ( $ � ����� � %��(� $�� � � (��(� :�����!��!%) ���� (� �! � , ����!��!% � ��� $ � $�������(�� !) *��� �� � ��� (! $(���/

�%(����� , �� 1��(!(�� ! , � �� .�� ,��� � ���� ! 2�3 %! �%��(�� !) �� �(�( ���� ���� � !�!�� ! ��(� 1����� ! , ��� %!� �� ! ���$���!% , � �� !�� , �&��(�) (� ��� �� ! � ��&�(�� ! ��*! 2�3 ��(!������ (��!�(!� (!� �� ��(�� , �&��(�/ �!��) * � 1(���� �� �� ��� �!��� � ����� ��(�� :#� ��!����� *��� (��� 2�3

�� # 2�3&�%��(�� %! 1����� ! ����!% ( ��� � ��� ����/��!��� ! �� ������ , ��� � ���� 6��>&����� �� �����(�� ! (�=@ ��8/ # ����! �� � (!(����� *(� ��, �$� ! �#� �($������(�� (� ��&$�! �!�� (��; (!� �� $$��(! *(� ���������� !����� �� *��� �����0) �����0) ���� ! ��� (!� ����0 �� ��/�� �%� , ��!��� !� �� �!���(�� � �� �� �� ���!�(% , �����! -� 6���$�!� �� J * ��� $��� (!(�����8 (!� �� �� �!��(��! ��� !�$��/ (! �� � !�(�!� � !�� � �#� ,� $ (��!��� &! ���� �� ���!% *���&��� ����/ �� �(�� � , �����0�����0 (!����� ! ��������0 (� �� *!

�@C

Page 8: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

%! 1����� !/ ���� �� �� �� ��5�� �� �* �� ����(� ��(�(��/

��$��������%���� �� * �5 *(� ���� ��� �� �� � �(� � ����)��D��� $ ����� (!� �� 3� ���! � %� (!� 3� � %��(� ���!����(��� � �!���/ D ��(!5 �!! -�(�($ , � ���!��(� ���� ��/

#���������

3(�$ 3) D�(��! �) #��� � 6�77C8 � !�� � , �&��(� ��� �����(!������� ! �! �� +��� ! �(�� $�� ��� ����/ �23B ��H��HCHA�H""

�(��%���� 2) 3(�� : 6�77=8 ���� ,�!��� !� �! �(��!����� *�������� �! ( ��(!������� ! � $��1 ��(� (��� (�� ��� ��������� (!� �!������ ��.�!��(�� !/ ��� C��H�CAH�7

� !! ��� �) 3(�� : 6�77�8 �!��(��� ! ��*! �� ��%� (!� ��%�3&��� �����!� �! �� +��� ! �(�� ��� ����/ 2 � ��� 3� ����CH"ACCH

��(! � �) 2������ ! �2 6�7C78 ������ ! , ������(�� !��! ����! �!� �� �(�� ! �! ��!��� ! �� ������� , ������������������� ���/ � -! 2��� �� � ����="@A=""

4�!��% ��) ' �%����! 3 6�7"=8 � ���!�9� , � �(�� �(���!%:#� �������� ! !� !���(� ,�(%$!�� � ��%� ����+�(��� ���/ �!(� 3� ��$ ��HA�=

4�!(!�>&�(�(��( 2�) 2��!�!� ��) �(���� �) - �� ! �3)4(!�� �� 6�77=8 �� ��� ���� %!� �����+ (!� � ���+ ,�� +��� ! �(�� ������������������ ��� !� � �� �(�%(!� �$(�� ����!��� , ��� !��� ��� �����(�/ 2 � -! -!��="����A�@�

-��> �) ��� � �) �� �� E) ���! # 6�7C�8 ������������������� ���/ �!� <�!% �� 6�8 �(!�� 5 , %!����) � �/��!�$) #* O �5) �� =7@A��H

� ,$(!! �R) 3(�� : 6�77�8 ���� �� (! ��!��(� �(�%� , ������������ ��(!������� ! ,(�� �� �9���$!� , � :#� ����&�(�� ! (!� �!������ ! , $�� ���/ �23B � �=���@A�=�

� �!�� ! �) *!�� # 6�77�8 ��� ���� � !�� � , :#���!����� �! �����!% �(��/ #����� ����� �� ������=A����

<��� ��) 2(���! -�) 4 �����% �) ����! ��) ���� �) #��� �6�77=8 �� +��� ! �(�� �����+ %! �� ���� � ���� � ��(�� ����� (!� $�� ���/ ��� C��=C�A="�

< ��� �) � ���!%� �) 2�!> �) ���(��� �) �����(�1 � 6�7CC8/-!��� $(���!% �! ������������������ ��� �� $�� ��� (!�$� ��� (!(����� (!� �!���� �(�� ���>(�� !/ -!���� "C��=A�C�

*!�� #4) 2��!�!� ��) � �!� ! �) 4(!�� ��) � �!�� !� 6�77�8 � !�� � , :#� ��!����� %!� �! +��� ! �(�� ���� ���&���� %! �����0/ #(��� =@@���7A�@=

2(���$ � �) O(!(%��( 2 6�7"@8 ���� ! %! �%(!�>(�� ! ,+��� ! �(��� ( � $$ ! �����($ �9�!�/ �23B � ��=@=�A=@="

�� & 2�3&�%��(�� %!1����� ! �! ���� �&!���!%�� ��� ���� (,�� !��� %!��(� (�� !/ D���&��� ���� *���(� � , !��� %! , � �@ ��, � ��!% �&,� *��� #����/# ����! �� � (!(����� *(���, �$� ! �#� �($������(�� (� =�&$�! �!�� (��;(!� �� $$��(! *(� �����&���� � !����� �� *��� �����0

(!� ����0 �� ��/ �� �%� , ��!��� !� �� �!���(�� � ���� �� ���!�(% , ���� �! -�6���$�!� �� J * ��� $���(!(�����8 (!� �� �� �!��(� �!��� !�$��/ � �!���(�� �����$(�� ��$ , �&��(�) (��� $��&� �!� �!��(�� ��*!-� (!� -� ����/ �� �(�� ,�����0�����0 ��(!������� ���� *!

�@"

Page 9: The role of DSC1 components cdc10+, rep1+ and rep2+ in MCB gene transcription at the mitotic G1-S boundary in fission yeast

2(���$ � �) O(!(%��( 2) #��� � 6�7"C8 ���� ! ��(!������� !�! ��� ���� $��(!�� , +��� ! �(��/ �23B � H���7=A��7C

2(�!���� < 6�77=8 ���($�!&�������� 1����� ! �� �� ���(!� ���� , � +��� ! �(��/ -! ��=���CA�=�

2��!�!� ��) <��� ��) ��(! � �) 4(!�� �� 6�77@8 � ���� (!�!%(�� � �� , � ����� �! ��� ���� %! 1����� !/ #���������� �� �=��CH�A�CH"

2��($ � 2) �(!(5( <) B5(�($( � 6�77�8 ���+) ( !* $$�� , �� �����+��-.� ,($���) � !�� �� �� K��(��L , $�� ��� (!�$� ��� ����� �! +��� ! �(��/ �23B � �=��"C=A�""�

2 �! �) <�(� �) #��� � 6�77�8 2 ����(� %!��� (!(����� ,�� +��� ! �(�� ������������������ ���/ 2�� �� �!>�$ ��7��C7@A"�=

#(5(���$( #) �(!(5( <) ����$ �) B5(�($( � 6�77@8 4���� !�(�� ��� �� ( ���(�� ��(!������� !(� (��� (� � ����!�� , � ����� ���� K��(��L ,�!��� ! , ���&�����/ �23B � ����C7�A�"��

#��� � 6�7C@8 -!��� � !�� � , ��� ��> (� ��� �� ��� ! �! �(��/#(��� �@H�@�CA@@�

#��� �) 3����� O 6�7"�8 -! �9���� �! -� , � � $$��$!� � ��� ���� (!� �! -� , � � !�� � , $�� ��� �! +��� ! �(��/#(��� �7��@@"A@H�

��$ !� �) ���$��� �) ��$(!�� ' 6�77�8 2��(�� !� �! �� �������(�� %! , ������������������ ��� �$����(� �� �%� ! ,� $ � %� ��*! ����� (!� �-./ (� �$� ��(!� , � �"@�����,�!��� !/ 2 � -! -!� �=����7A�@H

��$ !� �) 2(�5� �) ��$(!�� ' 6�77=8 �� (��� ��� , �! ���:��&�&��5 ,(�� � �� ��� ���� �%��(�� (!� ��!�!� ! ��(��� ��� , �=�����/ �23B � ����=�@A�==�

�($�� 5 �) 4����� �4) 2(!�(��� � 6�7"78 2 ����(� �� !�!%� (�(� �(� �� $(!�(�/ � �� ����!% �(�� � (� �(� ��) � ������!% �(�� �) #/O/

���! 3) #��� � 6�77C8 4���� ! �(�� ��� $ ! �� �5� �&��(��� �!������!% �� -� �����! 3&�=����� 5�!(�/ �23B ��H�@=�A@��

����$ �) B5(�($( � 6�77H8 : $(�!� ���$�!�!% �� ,�!��� !(������!��� ! , �� +��� ! �(�� ��� ���� KK��(��LL $ ����� ���(!� ���/ 2 � 3� � ��� C��7HCA�7CH

��%��($( �) �(!(5( <) B5(>(5� <) # S�$( �) B5(�($( � 6�77�8� >�!� +!%� �� ��! � !�� �� �� !�� , ��$� ��� :#���!����� , +��� ! �(�� �! ( 2��&�!��!�!� �(��(�/�23B � �=��""�A�""C

�(�(�( �) �(!(5( <) O�(�( O) B5(�($( � 6�77"8 4�!��� !(�� $(�!� , ��) ( ��(!������� !(� (��� (� � ����!�� , � ���&�����) � !�� ���!% �� ��� ���� KK��(��LL/ 2 � 3� � ��� 7��@CCA�@""

D����(�� �) ��(�� �) :(*� ! <) � !� # 6�7778 ��� ����&�%&��(�� ��(!������� ! �! +��� ! �(��� �����&�� �� ��! �!��&(��� !� ����!% �� ��� ���� (!� � $(�!� �9���� , � �%��(����(!������� !/ 2 � 3� � ��� ���=C�@A=C�@

?�� O) �(5�( �) #(�$��� <) � !� # 6�77�8 ���+) *����!� �� ( !* :#�&��!��!% �(��!� , �"@�����) �� �9����, � $� ��� �! �� +��� ! �(�� ������������������ ���/-!� : "�""@A"7"

�@7