Transferencia de mRNA Transferencia de mRNA desde la célula de Schawnn desde la célula de Schawnn

al axónal axón

Profesor a cargo: Felipe Court G. (fcourt@bio.puc.cl)Profesor a cargo: Felipe Court G. (fcourt@bio.puc.cl)Alumno: Hugo Peñailillo A. (hopenail@uc.cl)Alumno: Hugo Peñailillo A. (hopenail@uc.cl)Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias Biológicas Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias Biológicas

Seminario de Investigación Bio296

IntroducciónIntroducción El axón es comúnmente considerado como una región completamente El axón es comúnmente considerado como una región completamente

dependiente del núcleo en procesos de síntesis proteica. Últimamente se dependiente del núcleo en procesos de síntesis proteica. Últimamente se ha demostrado que axones en crecimiento presentan ribosomas y que ha demostrado que axones en crecimiento presentan ribosomas y que ocurre síntesis proteica en ellos. ocurre síntesis proteica en ellos. ( Alvarez & Giuditta et. al)( Alvarez & Giuditta et. al)

Evidencia preliminar hace sugerir que transcriptos que codifican para Evidencia preliminar hace sugerir que transcriptos que codifican para proteínas específicas del axón son transferidos junto a ribosomas desde la proteínas específicas del axón son transferidos junto a ribosomas desde la célula de Schwann bajo ciertas condiciones fisiológicas. célula de Schwann bajo ciertas condiciones fisiológicas. (Court. et. al)(Court. et. al)

(Court. et. al)(Court. et. al)

La transferencia de ribosomas desde la célula de Schwann al axón hace ver

a esta porción celular como una región dinámica, donde la síntesis local de proteínas es necesaria para el mantenimiento, crecimiento y regulación de su fenotipo, lo cual introduce una nueva dimensión para el entendimiento del sistema nervioso, donde el axón depende de la célula glial. (Court & Alvarez, 2005)

((Court & Alvarez, 2005Court & Alvarez, 2005))

ObjetivosObjetivos Este seminario tiene como propósito describir el rol de la célula de Schwann Este seminario tiene como propósito describir el rol de la célula de Schwann

(SC) en los procesos de expresión y posterior transferencia de RNA (SC) en los procesos de expresión y posterior transferencia de RNA mensajeros que codifican para proteínas sintetizadas en el axón.mensajeros que codifican para proteínas sintetizadas en el axón.

Describir la transferencia de mensajeros, los cuales traducen a proteinas Describir la transferencia de mensajeros, los cuales traducen a proteinas específicas de la neurona desde la célula de Schwann Estos mensajeros específicas de la neurona desde la célula de Schwann Estos mensajeros participarían en la síntesis local de proteínas por medio de ribosomas co-participarían en la síntesis local de proteínas por medio de ribosomas co-transferidos junto a estos mensajeros. transferidos junto a estos mensajeros.

Para demostrar esto se estimuló la transferencia de ribosomas y mRNA por medio de estímulos mecánicos en nervio ciático (daño axonal) en ratones C57/BL6J y ratones mutantes Wlds (C57/Ola).

Materiales y métodos

• Se utilizaron ratones (20-25 g) wild type (C57/BL6J) y ratones mutantes Wlds (C57/Ola), en estos últimos, axones denucleados no degeneran por varias semanas, permitiendo el análisis de la transferencia independiente del soma neuronal.

• Se utilizó FISH (fluorescent in situ hybridization) para determinar la localización de los transcriptos según la condición experimental.

(C57/BL6J)

Materiales y métodos

crush

7 -14 dias WLDs

Extracción del nervioDistal

Proximal

Tratamiento histológico

FISH

Confocal

Antisense-DIG

Resultados

NF mRNA NF-L Overlay Control SF

Wlds crush 7d distal

NF mRNA NF-L Overlay Control +

crushsoma

Wlds crush 7d distal Medula

Resultados

Wlds 7d +3

NF mRNA NF-L NF mRNA NF-L

Wlds 7d +6

NF mRNA NF-L

Wlds 7d -5 Wlds 7d CN

NF mRNA NF-L

ResultadosWlds crush distal 7d mRNA NF-H Wlds crush distal 7d mRNA NF-L

Wlds crush distal 7d mRNA VIM Wlds crush distal 7d mRNA NF-L sense

DiscusiónDiscusiónDeterminadas condiciones fisiologicas ,como el daño axonal , se relaciona con la presencia de mRNA en la porcion del Axon de la neurona . La separacion fisica de la porcion axonal con el soma neuronal podria sugerir el traspaso deMensajeros desde la célula de Schawnn al axon.

Esto se complementa con lo observado en los resultados. Daño axonal estaria activando la expresion de mensajeros En la célula de Schawnn los cuales codifican para proteinas especificas del axon.

Es necesario modificar el protocolo experimental de la FISH , debido al efecto que tiene la permeabilizacion sobre laModificacion de la composicion en la mielina.

En este sistema no es posible implementar un protocolo experimental de extraccion de axoplasma (Fainzilber)(no se como ponerlo)

Es necesaria la aplicación de otra técnica como RT-PCR que permita corroborar los datos obtenidos en este trabajo.

Conclusión

•Álvarez, J. ,Giuditta & Koenig E. (2000). Protein synthesis ina axons and terminals : significance for maintenance ,plasticity and regulation of Phenotype . With a critique of slow transport theory . Progr. Neurobiol, 62 (1-62).

• F.A. Court , J. Alvarez and J. van Minnen: Ribosome transfer from Schwann cells in sciatic nerves.

• F. A. Court and J. Alvarez: Local regulation of the axonal phenotype , a case of merotrophism . Biol. Research 38: 365.374; 2005

Bibliografía