Laboratoire de Virologie Pôle de Biologie-Pathologie-Physiologie

Hôpital C. Nicolle

CHU Rouen

Laboratoire associé au Centre National de Référence du VIH

TROD et autotests de dépistage

de l‘infection à VIH, VHB (AgHBs) & VHC

COREVIH 26-03-2019

Véronique Lemée Laboratoire de Virologie, CHU de Rouen

Le TROD (Test Rapide d’Orientation Diagnostique)

Trod facile

• Équipement limité

• Simple et rapide

• Réalisable par n’importe qui (mais formé!)

• Réalisable probablement n’importe où

L’autotest = le TROD à domicile

Fenêtre sérologique (ELISA

négatif)

ADN proviral

Signes cliniques

11 16 21 26 29 Temps en jours Contage

Concentrations des marqueurs

Antigène p24 ELISA

Anticorps détectés en ELISA

Anticorps détectés par WB

ARN plasmatique « CV » (cop/ml)

Seuil détection des marqueurs

Combinés ELISA

TROD Ac (3ème G)

Dynamique des marqueurs viraux au cours de la PI VIH sans traitement : où sont les TROD ?

TROD « combo »

Trod : limites

• Dans le choix : multiple fabricants et fournisseurs

Trod : limites

• Dans le choix : multiple fabricants et fournisseurs

• Dans l’interprétation : ‐ lecture subjective Prazuck, PLoS One 2016

‐ bande faible ‐ résultats « indéterminés », tests invalides Prazuck, PLoS One 2016

• Dans certaines situations viro-cliniques : - diversité virale VIH Aghokeng, PLoS One 2009

- primo-infection/infection récente Laperche, JID, 2012

- « guérison » pour le VHC - sous traitement (PreP??) Pavie, PLoS One 2009

- réactivités non spécifiques ou croisées Gautheret-Dejean, J Med Virol, 2015

• Utilisation extensive des TROD hors laboratoires • Promotion des autotests

• OMS : Guidelines on HIV self-testing and partner notification

(12/2016)

Déplacement ++ du dépistage vers “non-experts”

- besoin d’évaluer les performances tests disponibles en France et à l’international (multiplication de l’offre globale et internet ++)

- besoin d’informer les usagers

Trod : utilisateurs

Modalités d’évaluations TROD/autotest

• majorité évaluations sur sérum ou plasma

• utilisation TROD/autotests hors laboratoire : sang total/salive

• essais praticabilité sur sang total :

• essais performances sur sang total : très rares pas ≠ situations viro-cliniques

• offre du marché (distribution classique) ++

• offre internet ++ non réglementaire (France) : qualité ??

nécessité de surveiller les performances sur sang total et des produits de différents marchés

Evaluation de 9 TROD/autotests

Name Manufacturer /

Supplier CE

approved RDT / HT Detection

Differenciation HIV-1 / HIV-2

Matrix Volume Technology¤ Early

reading time Final

reading time

EXACTO PRO TEST HIV

Biosynex N RDT/HT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum

or plasma 5 µL IC 10 min 20 min

EZ- TRUST HIV 1 & 2 Rapid Screen Test

CS Innovation Ltd / Web

N HT Ab N Capillary whole blood, serum or

plasma 1 drop IC 10 min 10 min

Genie Fast HIV1/2 Bio-Rad Y RDT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum

or plasma 80 µL IC 10 min 30 min

HIV TOP Biosynex Y RDT Ab Y Capillary or veinous whole blood, serum

or plasma 50 µL IC 10 min 20 min

INSTI bioLytical / Nephrotek

Y RDT/HT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum

or plasma 50 µL IF immediatly NA

STAT-VIEW HIV 1/2 Chembio

Diagnostic systems / AAZ

Y RDT/HT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum

or plasma 2,5 µL IC 15 min 20 min

VIKIA HIV 1/2 bioMérieux Y RDT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum

or plasma 75 µL IC 30 min 30 min

BioTechMed HIV1/2 Rapid-4

BioTechMed / Web

N HT Ag/Ab Y Capillary whole

blood 1 drop IC 15 min 20 min

HIV Combo Alere Y RDT Ag/Ab N Capillary or veinous whole blood, serum

or plasma 50 µL IC 20 min 40 min

¤ : IC= Immunochromatography; IF= Immunofiltration

Echantillons (n=500)

200 négatifs

100 VIH-1/M naïfs ARV

125 VIH-1/M positifs

25 VIH-1/O ou VIH-2

50 primo infections VIH-1/M

CeGGID

Collections CNR

Sang total reconstitué (validation protocole) CGR O nég. ; hématocrite 45%

Sang total frais et

reconstitué

VIH-2 (A-I)

VIH-1/M

VIH-1/N

VIH-1/O

VIH-1/P

Diversité panel A

B

C

D

F

G

H

J

CRF01_AE

CRF02_AG

CRF06_cpx

CRF09_cpx

CRF11_cpx

CRF18_cpx

CRF31_BC

CRF37_cpx

CRF43_02G

CRF45_cpx

CRF60_BC

Complex recombinant

HIV-1/O

HIV-2

N=250 hors primo-infections

B

CRF02

VIH-1/O VIH-2

Spécificité = les échantillons VIH négatifs doivent être négatifs !

Negative samples

EXACTO PRO TEST

HIV

EZ-TRUST HIV 1 & 2

RST

Genie Fast HIV1/2

HIVTOP INSTI STAT-VIEW

HIV 1/2 VIKIA HIV

1/2

BioTechMed HIV1/2

Rapid-4 a HIV Combo

Ag Ac

N=200 3 0 0 2 0 0 1 0 1 0

Specificity 98,50% 100% 100% 99% 100% 100% 99,50% 100% 99,50% 100%

a : N=30 samples

Spécificité <100% EXACTO PRO TEST HIV HIVTOP VIKIA HIV 1/2 HIV Combo (partie Ag)

Spécificité web 100% !

Sensibilité 100% (situations viro-clinique/diversité des virus)

Positive samples N=225

EXACTO PRO TEST

HIV

EZ-TRUST HIV 1 & 2

RST

Genie Fast HIV1/2

HIVTOP INSTI STAT-VIEW

HIV 1/2 VIKIA HIV

1/2

BioTechMed HIV1/2

Rapid-4 a HIV Combo

Ag Ac

N=100$ 100 100 100 100 100 100 100 50 6 100

N=125£ 125 125 125 125 125 125 125 10 0 125

Sensitivity 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% NA 100% $: corresponding to ARV naive patients; £ : corresponding to ARV experienced patients

a : N=60

Sensibilité VIH-1/M = les échantillons VIH positifs doivent être positifs !

Sensibilité VIH-1/O – VIH-2 – VIH-1+2

Mauvaise sensibilité pour les VIH-1/O (20%-90%): 2 = 100% !

Mauvaise sensibilité VIH-2 pour BioTechMed (web)

Positive samples

EXACTO PRO TEST

HIV

EZ-TRUST HIV 1 & 2

RST

Genie Fast HIV1/2

HIVTOP INSTI STAT-VIEW

HIV 1/2 VIKIA HIV

1/2 BioTechMed

HIV1/2 Rapid-4 HIV Combo

T1 T2 T1 T2 Ag Ac

HIV-1/O

N=10 8 6 6 8 0 6 9 10 2 0 0 10

Sensitivity 80% 60% 60% 80% NA 60% 90% 100% 20% NA NA 100%

HIV-2

N=13 13 13 13 4 13 13 13 13 1 7 0 13

Sensitivity 100% 100% 100% NA 100% 100% 100% 100% NA 54% NA 100%

HIV-1+2

N=2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 1 0 2

Sensitivity 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 50% 100% 100%

Réactivité croisée ++ VIH-2 sur VIH-1 pour HIVTOP

Conclusion VIH

Utilisation/vente élargie TROD/autotests aux non-spécialistes

• Pas d’évaluation de performances

• Soumis à marketing « agressif »

• Contraintes financières

• Confrontés à l’interprétation subjective

essentiel de surveiller performances et leur fournir conseils

Utilisation hors les murs/pays ressources limitées

• Nécessité de revoir modalités d’évaluation - Sur sang total

- Panel représentatifs de diversité virale et situations viro-cliniques

intérêt sang reconstitué, mais limite et chronophage

Conclusion VIH

Diversité des performances des tests

• Très bonne sensibilité infection chronique

• Toujours difficultés avec VIH-1/O et discrimination VIH-1+2

• Performances variables pour infection récente/primo-infection = argument marketing !

• Intérêt 4G : bonne performance Alere (autres à tester), proche EIA 4G ?

Offre internet = loterie

• EZ-Trust 3G : pas plus mauvais que certains 3G CE

• BioTechMed 4G = 3G = publicité mensongère + très mauvaise détection variants

• Offre pléthorique

• Aucun service associé (pas aide téléphonique, notice succincte si elle existe…)

• Frais livraison + frais bancaires…

• Non-livraison sans recours

Informer usagers des limites et risques de ce type d’achat

Sensibilité primo-infection VIH-1/M

Patient No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12 14 13 11 18 16 15 19 17 20 21 22 23 24 25 27 26 28 29 30 31 32 33 34 36 35 40 41 37 38 39 43 44 45 42 46 47 48 49 50 Nb of positive test

Nb Western blot lines 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 6 6 6 6 8 8 8 8 9

Alere HIV Combo Ag+Ab 43

EXACTO PRO TEST HIV 36

Genie Fast HIV1/2 31

HIVTOP 30

BioTechMed HIV1/2 Rapid-4 Ag+Ab 29

VIKIA HIV 1/2 29

EZ-TRUST HIV 1 & 2 RST 28

INSTI 27

STAT-VIEW HIV ½ 26

Vérification sur des cultures de virus : - Alere HIV Combo : tous les surnageants (sauf VIH-2) sont détectés - BioTechMed = pas de détection de p24

Publicité mensongère

Des tests et des tests…et pas que des tests

Et pour les hépatites ?

Et pour les hépatites ?

• Contage 1-3 mois.

• Ag HBs précède de 2-4 semaines ALAT et clinique.

• Anti HBc: pas de signification évolutive.

• Anti HBc IgM peuvent persister 1 an (70% des cas).

• Ag HBe = réplication virale.

• Séroconversion Hbe avant HBs

Hépatite B, quels marqueurs ? À quel stade ?

Hépatites B chroniques : quels profils sérologiques ?

AgHBs > 6 mois

1ere séroconversion: système

HBe.

2éme séroconversion: système

HBs.

Et le VHC ?

ANRS 12379 (Etude rétrospective bicentrique)

Performances des TDR pour la Détection des

anti-VHC et de l’AgHBs à partir de sérum/plasma

Stéphane Chevaliez/Richard Njouom

CNR hépatites virales B, C et delta & Centre Pasteur du Cameroun

(Henri Mondor)

Hépatites : des études en cours …

Mais résultats non diffusables … en dehors de la présentation !

Tests VHC sérum Spécificité Sensibilité

SD Bioline HCV

Hexagon HCV

First Response® HCV Card Test

Multisure® HCV

Anti-HCV Card Cypress

TOYO® anti-HCV test

Tests VHB Sérum

SD Bioline HBsAg

Hexagon HBsAg

First Response® HBsAg

HBsAg Card Cypress

TOYO® HBsAg

VIKIA HBsAg

Hépatites : des données déjà disponibles…

Tests HCV Spécificité Sensibilité

Sang total capillaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 99,4%

TOYO® anti-HCV test 98,8% 95,8%

Labmen® HCV test * 100% 63,1%

Liquide craviculaire **

OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 97,6%

Chevaliez et al.,. Clin Microbiol Infect 2016;22(5):459.e1-6.

* Retiré du marché ** cf ultérieurement

318 patients avec une infection chronique C, 25 patients avec une infection guérie et 170 individus VHC-séronégatifs (N=513)

Hépatites : des données déjà disponibles…

Tests HCV Matrices Spécificité Sensibilité

OraQuick® HCV Rapid Ab Test Sang total, sérum, plasma

99,8% 99,5%

OraQuick® HCV Rapid Ab Test Liq. craviculaire 99,4% 95,9%

SD Bioline HCV Sérum 99,5% 93,5%

WHO guidelines HBV and HCV testing, Geneva 2017; Khuroo et al., PLoS One 2015;10(3):e0121450.

Tests HBV Matrices Spécificité Sensibilité

Determine HBsAg Sérum, plasma 99,1% 90,8%

VIKIA® HBsAg Sérum, plasma 99,9% 82,5%

WHO guidelines HBV and HCV testing, Geneva 2017; Amini et al., BMC Infect Dis 2017;17(Suppl 1):698.

Le futur ?

• Les tests mixtes ?

• Tests POCT moléculaires ?

• Autres matrices ?

• Papier filtre ou dried blood spot (DBS) pour collecter le sang total = « buvard »

Les tests mixtes ?

Trousses de Détection-Quantification de l’ARN VHC & VHB au laboratoire

VHC RealTime HCV (Abbott)

CAP/CTM HCV 2.0 (Roche)

Xpert® HCV VL (Cepheid)

Xpert HCV VL FS (Cepheid)

Genedrive® HCV ID Kit

Aptima® HCV Quant Dx (Hologic)

Principe Real-time PCR Real-time PCR Real-time PCR Real-time PCR PCR Real-time TMA

Volume nécessaire (µL) 500 650 1 000 100 30 500

Matrice biologique Plasma/serum Plasma/serum Plasma/serum Whole blood Plasma/serum Plasma/serum

Extraction Automated Automated Automated Automated - Automated

Délai (min) 276* 345* 105 <60 90 150*

“Random access“ No No Yes Yes Yes Yes

Tests POCT moléculaires ?

VHB RealTime HBV (Abbott)

CAP/CTM HBV 2.0 (Roche)

Xpert® HBV (Cepheid)

VERIS HBV (Beckman)

Aptima® HBV Quant (Hologic)

Principle Real-time PCR Real-time PCR Real-time PCR Real-time PCR Real-time TMA

Volume required (µL) 500 650 600 700 500

Biological matrix Plasma/serum Plasma/serum Plasma/serum Plasma Plasma/serum

Time to have results (min) 321* 330* <60 105 150*

Random access No No Yes Yes Yes

Principe *

Collecter 100 µL de sang capillaire après auto-piqure

Déposer l’échantillon dans la cartouche

Résultat ≤ 60 minutes

1

2

3

*CE IVD; not available in the US

Tests POCT moléculaires ?

Abbott RealTime HCV

No. of quantifiable No. of unquantifiable No. of total

Xpert HCV VL FS

No. of quantifiable 59 0 59

No. of unquantifiable 0 108 108

No. of total 59 108 167

Lamoury et al., J Infect Dis 2018;217(12):1889-1896.

Quantification/Detection ARN VHC (Xpert HCV VL FS, Cepheid)

Tests POCT moléculaires ?

Quantification/Detection ARN VHC (Xpert HCV VL FS, Cepheid)

Abbott RealTime HCV

No. of quantifiable No. of unquantifiable No. of total

Xpert HCV VL FS

No. of quantifiable 59 0 59

No. of unquantifiable 0 108 108

No. of total 59 108 167

Abbott RealTime HCV

No. of detectable No. of undetectable No. of total

Xpert HCV VL FS

No. of detectable 59 0 59

No. of undetectable 1 107 108

No. of total 60 107 167

Lamoury et al., J Infect Dis 2018;217(12):1889-1896.

Tests POCT moléculaires ?

= Valeurs très faibles !

Le Liquide Craviculaire … ? • Simple, indolore, non invasif, peu couteux à collecter

• Contient des immunoglobulines (et des marqueurs viraux) en quantité plus faible que le sang

• Taux d’acceptation du test salivaire 100% chez des Jeunes Détenus au Royaume Uni

McKie et al., Lancet Infect Dis 2002;2(1):18-24.

Matrices IgG (mg/L) IgM (mg/L) IgA (mg/L)

Plasma 14730 1280 2860

Salive mixte 14,4 2,1 19,4

Salive parotidienne 0,36 0,43 39,5

Liq. craviculaire 3500 250 1110

Candfield et al., Int J STD AIDS 2017;28(12):1234-1238.

Autres matrices ?

• 318 patients « chronique », 25 patients « guéris » et 170 « séronégatifs » (VIH négatif)

Tests Spécificité Sensibilité

Sang total capillaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 99,4%

TOYO® anti-HCV test 98,8% 95,8%

Liquide craviculaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 97,6%

Chevaliez et al.,. Clin Microbiol Infect 2016;22(5):459.e1-6.

Autres matrices ?

• 318 patients « chronique », 25 patients « guéris » et 170 « séronégatifs » (VIH négatif)

Tests Spécificité Sensibilité

Sang total capillaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test

100% 99,4%

TOYO® anti-HCV test 98,8% 95,8%

Liquide craviculaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test

100% 97,6%

Chevaliez et al.,. Clin Microbiol Infect 2016;22(5):459.e1-6.

• 63 patients VIH-pos incluant 18 patients avec une infection chronique C, 32 avec une infection guérie et 13 patients séronégatifs pour le VHC • => diminution de la sensibilité, et ce quelquesoit

la matrice !

Tests Spécificité Sensibilité

Sang total capillaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test

100% 89,8%

TOYO® anti-HCV test v1.0 100% 71,4%

TOYO® anti-HCV test v2.0 100% 92,0%

Multisure™ HCV Antibody Assay

100% 87,8%

Liquide craviculaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test

100% 79,6% Chevaliez et al., AASLD 2018; Abstract 1633.

Autres matrices ?

• Accès « universel » : éloignement géographique, précarité veineuse, problèmes de stockage, absence de tests …

• Faible volume de sang (1 à 2 gouttes), facile à collecter, indolore et possibilité d’acheminement par courrier à température ambiante, possibilité d’auto-prélèvement

• Bonne stabilité

• Diminution des coûts (personnel formé, facilité de transport et de stockage)

• Détection de nombreux analytes : recommandé par l’OMS pour certaines maladies tropicales (Trachome, filariose lymphatique, schistosomiase, onchocercose, helminthiase) ;

• Prévention de la résistance aux ARV (détermination des profils de résistance du virus)

Buvard ? Leurs avantages :

• Nature de l’échantillon biologique • Perturbations analytiques dues à l’hémolyse

• Quel papier filtre ? Quel volume ? Quelle extraction ?

• Faible sensibilité analytique • Quels seuils d’inteprétation ?

=> Absence de procédures standardisées !

Buvard ? Quelques inconvénients :

- Détection des Anticorps VHC (aHCV Vitros, Ortho-Clinical Diagnostics)

Soulier et al., J Infect Dis 2016;213(7):1087-95.

Sensibilité = 99,1% Spécificité = 98,2%

Buvard ? Quelques exemples :

- Détection des Anticorps VHC (aHCV Vitros, Ortho-Clinical Diagnostics)

Sensibilité = 99,1% Spécificité = 98,2%

- Quantification de l’ARN VHC (Abbott RealTime HCV, CAP/CTM HCV v2.0)

Soulier et al., J Infect Dis 2016;213(7):1087-95.

Buvard ? Quelques exemples :

- Détection des Anticorps VHC (aHCV Vitros, Ortho-Clinical Diagnostics)

Sensibilité = 99,1% Spécificité = 98,2%

- Quantification de l’ARN VHC (Abbott RealTime HCV, CAP/CTM HCV v2.0)

- Quantification de l’ARN VHC (Xpert HCV VL, Cepheid)

Wlassow et al., submitted

Buvard ? Quelques exemples :

- Détection des Anticorps VHC (aHCV Vitros, Ortho-Clinical Diagnostics) Sensibilité = 99,1%

Spécificité = 98,2%

- Quantification de l’ARN VHC (Abbott RealTime HCV, CAP/CTM HCV v2.0)

- Quantification de l’ARN VHC (Xpert HCV VL, Cepheid)

- Sang Total Déposé sur DBS sur 129 patients avec une infection chronique VHC, 10 patients avec une infection guérie et 68 individus séronégatifs

Tests Spécificité Sensibilité

OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 100%

First Response® HCV Card test 100% 99,3%

Assure HCV Rapid Test 100% 98,6%

MultiSure ™ HCV Antibody Assay 100% 98,6%

Poiteau et al.,. J Viral Hepat 2016;23(5):399-401.

Test Point-of-care : une seule visite suffirait …!

Grebely et al., Expert Rev Mol Diagn 2017;17(12):1109-1115.

Remerciements très sincères

À Stéphane Chevaliez du CNR hépatites virales B, C et delta (Henri Mondor), pour ses diapositives concernant les hépatites, avec ou sans retouches …

Suivez le logo !

Sans oublier toute l’équipe du laboratoire de virologie, et du COREVIH … !