two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped...

8

Click here to load reader

Upload: ingrid-nilsson

Post on 06-Jun-2016

216 views

Category:

Documents


2 download

TRANSCRIPT

Page 1: Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori

������������ ��� ���������� �� �������������� �� ��� ���� � ������ �� ������������� � ��� ���� �� ���������� �����

���� ������ ���� �� �� ��� ����� ����� ������� ���������� ����� �������� ���� �� � ������� � ��� ������ ����� ���� �������� �� ���� ��� ����� ���� ���� ��������������� � ����� ��� ����� ��� �� ���� ���������� ������������ �� ��������� ���� ��� ��� � �� �� �� � ��������� ��� �� ��� ��� ��� �������� �� ������ ����� ����� ��� !� �������������" #$% �� ��� ����� �� ���� ���� � ��������� ��� �������� ����� � �������� �� �� �� �� �� � ����� ������� !� �&���� ������� � ��������� ����� ���� ��� ������ � ����" ���� �� � �� ��� �������� ������ �� '( �����& )�� ���� ������� � ��� ����� ������� ���� � ������� � ���� �� ������ ��������� * ���� � �������� �� � � �� �� ��� ���� ���) ���� � �+���� �������",�$&� ��� � $� )�� ���� �" ��� ������ ������ �" ���� ���� � �� � �������� ����� �� �� ��" '�" ��� ������ �������� ���� ��-����� �� ������� ������ �� � �-������ ��� ���� �� '���� ������� � � �-����� �.& ����� ������ � �� ���� � ������������ ����� ���� � � �-����� �$& ������ ���� ���������� �������� � �� ���� ����� � �� ��� ��� �� �� ��/�� �� ����� ���� �� ��� �� ��� *� ��� ������ �� �� ��������� ��� ,�$& ������ � � ��� ���� - �� �� ������ ���� �� �������� ���� ��" '�" ��������� �������" ������� �� ���� ����� ���� �� ���� � �������� ���� ����� 0��������� ���� ������ �� ���� �������� � �� � ��������� ���� ������ �� ������ ��������) �� �� ��� ��� ���� ���� - �� �� �������� �� � ���� �� � ���� ����������� ������ ���� ���� �� �� - � ���" ��� �� � ���� - �� ������� ��������� � ��� � �-��������� �� �� ��� �� � ���� �� ,�$& ��� ������ ���� �� ��� � ���� � �� ��� �����)�

�������� ���������� ����� 1 2 ��� ��� �� � ���� 1 3���� ���� ���� ����������� � 1

!��������� �4 5&$5

����� ��������� ���������� ������ !������"�� #����$�

���������� �� !���� ���� ������ ��� 6�� ��6 ��� �����" 7� -��� �� ��4���" 2�����

% ������ ���

���������� ����� � � � ��������� � ������� �� ����� � �� ��� ����� ����� � ���� ��� ��� �� ���� ������ � �" � �� ���� � ���� ��� � ������ ����� �������8�9� �� ����� �������� ����� �� � � ��������� ����� ������ ��-���� �� �� � ����� � ��� �������" ��� ��� ������� �� �� ���� �� ����� ���� - ���� 8�:.9� 3�� �� � �������� ���� ���� �����-�� � ��� ����� ����� ���" �������;������ ��� � ������ �������" � � ����� ���� ����� ���� �� ���� ��� )� �� ���� � �� �� ����� 8$9� 3������� �� � ���� �������� �� ��� ����� ����� ���

����� ��� � � ��� � � � ������ �������� � �� ��������� 8(9� ��� � ����� �� �� ����� ��� �� �-��-�� ���� ������ �� �� �� ��� ���� �� ��� � ���� ���������� ��� ��� � ������ �� ��� ���� �� ����� ��� � �� ������ �� ����� 8'" #9� ,���-��" ��� ������� �� ����� � ����� �� �� ����� � ������ �� �� �� ��� ���� �� � ��� �����

��������� � �� ������� ��� -�� ���� ����� ���� ���� �������������� � ������ ��-� ���� ������ ���� ��� � ������� �� � ������� ��� ��� ���� � ���" �������� ����������" ����� �� ����� 8�&:�59� ��� �� ��� ����� �������� � ��� ��������� � �� �� ����� ���� �� ��� �����)�������� ����� ��� ����� ���������� �� �� �� � ��� �� 8�5" �.9" ���� ��� ��� ��� ���� �� �� � ���� �� ����� ����� ������ ���� �� �� ��� ��� �������� �������� 3�� � � �� ��� ������ ����� ��� �� ����� ��������� ���� �� ���� � ��������� ��� �� � ����� ���� ��������� ���� � ��7+ �('(5 ���7+" ������ ������ �� �� ��� 7� -��� �� �� +����������" �� ����" ���� ����� ���������" ���� ��- � �� ������� �� ����� ����� ����� ���� � ��� ���� ��� ��� � ������� �� � ����� ��

&�������� �� ��� !��� � < �����" ��������� �� !���� ���� ������ ��� 6�� �� 6 ��� �����" 7� -��� �� �� 4���" 2=�-������� �>" 2���>$� 4���" 2�����'������ ��� ��� �����?���������(�)� @5$�5$��'#��(

*����+������ &&�," ������� ������ �� �� 7� -��� �� �� +����������A ,-" �� ������ �����A ��" ���� ���) ���� �A .� *"-������ �� ������ � *

�$(& ������������ �&&&" ��" �$(&:�$((

B C!4�D�E�, E����� +��," $#5.� C� ��� �" �&&& &�(>�&'>.1&&1�>�>��$(& F�(�.&@�.&1&

Page 2: Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori

/ �������� �� ������

/0% -� ������ ���� �� ������ ������

���������� ����� ���� � ��7+ �('(5 ��� ������� ����� ������ ���) �:��.��� �� +��*���� ��� �. �14 � 4"��)���- ���" 6�" 72*�" ��� *��� > �14 �� �� 4��������� ��" ����� �" 6!" 72*�" '% ����� �����" �&% ���������� ��� &�>.% !��E ����G � 4� 8�$9 � ����� ��� � �� ���� ��� ���� �� >(�� � � � ������� ��������� �.%H�" �&% �H�" '.% <��� 2 ���� ���� �� ���� �������� ��� ����)� ���� � �� .& �4 �� �� ������ ����� �+ �"�� � ����� ���� ��� ��� ����� �� �� �������� �� �����8�(9" ���������� � �� .% ����� ����� �+ �� I4"0� ����" 2�������� �������� ���� ������� �� >(�� �� ������� ���)�� ��&& ��� � ������� /��� � �� � � �������� ��������� ��������� �� *��������� ��-������6��)" ���������" +�������� +�� ������� �� ��-����� � ��� ������ /��� ���� ������� �-��� �5 �� J�� ���������� � ������ ���" ������ ���� � ������� �� ���� �"'" ��� ��� ����� ���� ���� ����� �>&&& � � ��� �. � ��"������ ��� � ��� �� ������� �������� ��� ��" ,(�� �0 2A &�&� 6 ��� �� �������" &��. 6 <���� ��������� � � ��� �� ��������� ���� 2�� �� ��>��

/0/ * ����� ����� �����

2����� ��� ��� � �� ���� ����-�� �-��� �5 � ��� �������� ������� �� ���� ����� �� �>&&& � � ��� �& � ��"������ ��� � 0 2" ���������� � 0 2" ��� ��� ������� �� ��� ��/����� �� ��& �* .5& ���� H�� �4 �� ������� � ��� � �� # �4 �� � �� ������ ����� �� ���& ���� � �� ������ ��� �� �4 0 2� �� � �� �� ��� ���� ������ ���� � � ���������� � ����� �K� �� *� ��)�+ 5����&�" �&& � 0����<������� ����" ������ 6� �&&AK� ��" L���" +������� ��� �� ���� �� � ��� �� �� ������� 3�� ������� ����� � �� ��� �� ����� ��������� ��� ���� ���� ����

/01 ')��� ��� �� ��� ���� � ������ �� %�2323�4*,'

* � ��� �� ������ �� �� ��� ������ ���� �� ���� ��" '�"��� ������ ���� �� �� ����� ���� �������� �� ��- ��������� ��� 8�'9� !� �� ��" ���� ���� ���-����� ��� �������� � � 0 2" , (��" ��� ���� ���������� � &�� 6 ���� �� ��������� ��" , ��� �5 � ����1�&& �4�� 3�� ������� �� ��� �� ���� ������ ���� ��� �. � � �� �&�� ������ ���� ���� ����-�� �� ���� ����� �� ��� &&& � � ����. � ��� 3�� ���������� ��� ������� ��� � �� <�H, ���� ������ ��� �' � �� '�� ��� ��� 0 2� 3�� ���� � �������� ��� ������ ��� ������ ��� �� � � +��.& �������� � ��I��" I �����" �*" 72*� �� �$& ��1�4" �'&��1�4" >&& ��1�4 �� �������� ���� �� �� ��" '�" ��������� �������" ����� -���� 2�2�0*+� ��� ��������

����� ���� �� ��� � ��� 8�#9 � 0������ !! ���� ��� -��� ��� ����������� � �;� ���� � ��I��� �� �� � .:�&%������ �� ���� ��� ��� ��� � 5% ���) �� ���� 0���� ����>& ��1���� ���� � ����� � �������� ����� ������"������ ��� > � � �� #.��" ��� �������� �� '& E ��� �$ ��3�� �������� ������ �� ���� �� ���� ������ ���� �� �����)�� ���� �� ���� 0����� � ���� �7����" 2�������� *���� ����������� �" ���� ���� � ��� ��� � �-����� ��� 8�&9� 0���� � ��� �������� ���� ��� �����

/05 ����� ��� �� ��� 6�'(7

3�� � � ��� ����������� ���� �� ���� � ������������ �� � ����� �� �� ����� ���� �������� �� !�J �!���� � ��M ���2�� �" , >:�&" � ����" �> � �!0+ ��� �A0����� � ������ 2�� � ���� ���������� �-��� ��� ������ � � ������� �� ���� �������� � �� ��� ���� �� 8��9����� ������ �& �� �� ��� � � � ����� �� ���� � ��# 6 ����" �& �14 �,*02" !0+ ����� ������ , >:�&�0����� � �����" �& �14 �33" ��� �. �4 �� &�.% ����

������������ �&&&" ��" �$(&:�$(( ���� ��� ��������� �� �� ����� ���� �� �$(�

(����� %0 *� � �� ������ ��� � �� �� �*� � �������������� �� �� ����� ���� � �('(5 ���7+�" ���-����� ���� ������ ����� ������A � � �� � ����� �� �� ����� ���� ��('(5 ���7+�" ���-����� ���� �� '���� ����� �������

4������� ��/�2'

Page 3: Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori

������� ����� !�J ��� ������� � � ��� ������ ����������� �� ������� �6��� 0��� !!A 0����� � ��������� �� �� ��� �����������N� ������ ���� E������ ��� ������� ���� >&& �� >.&& E ��� �� ��� � ��� 5 � ��� ������ ��� ��� ������� �� >.&& E ��� � ����� �� �& )E��

/08 /�2 323�4*,'

����� � ��� 0*+� ���� ���� ��� �������" !0+ ��� ����� �;� � ������ ��� ��� ����-��� �� �. � � � � ����� ������ � �� .& �6 3� ��,��" , $�'" $ 6 ����" >&% -1-�������" ��� �% �1- 2�2� �33 ��% �1-� ��� ����� ����� � ��� �;� � ���� �� ����� �� ��� ������� �� �5�'%�1-� ��� ����� �� ��� ����� �;� � ���� �� ����� ���2�� � ���� ���� �� �� �� �� �� .:�&% 2�2�0*+����� ���� ��$ � �$ �" � �� �� )� ��� ����������� ���� �������� �� ���� ��� ��� ����� *���� ������ �� ���� ����� � ���� ��" ���� ���� ������� ��� � �-����� � �� ��� ���������� 3�� !�J ��� ��� ��� 0*+����� ����� ���� ������� ���� �� � � � ����

/09 ��������� ���

0����� ��� �����-�� �� ���� ���� ����������� ��������������� �� 0E�J ��������� �6 ��� 2����� ���"C����������" 6*" 72*�" �� �� ��� ��� ��������������;� ���� �*���" E �" ������)�" ��� ��� � �� � ������������� �� &�' �*1��� 6�������� ���� ���)�� ��� � ��. � � � ������� ���� � �� ���������� ����� ��" ���- �������� ����" 3������&" ��������� ��" ��� ��� ��" ��� �������� � �� � ���� ��� ���� ���� ������ ��� �$ � ��'��� *���� ������� ���� ���" ��������� ���� �������� ��� � � �� '�� � �� �������� �� ���� ��������������� ������ �� ��� ����� � !�+ ��� ��� �� ���)�" +������"������)� ��� ����� ��� ��� �� ���� ������� �� ��� ��� .& �6 ��� �� ������ ������ ���� � �� &�&5% >��� ����#�������������� �2 ���" 2�� 4�� �" 6H" 72*� ���&�&�.% ,�H� 8��9� 6�������� ���� � �� �������� ����� �� �� ����� ������� ���� ����� � �� � ��� �� � -����� ���� ��� ���� �� ���� �������� ��� ��������� ����� ����� ��� � �� ��� �� � -� ��� �� ����� �� ������ ������� � ���� 3�� ���� ��� �� ���� ��� ���� ��������� �� ����� ������� ���� ��& �4 �� ��� ������ ��" �� ��� ���� �� ��& �� .#. �� ��� �&& �4 ������ ��� 5 � ������ ����� ������ ���) �� �������� �� ����-�� �� ������ � �� ���� ����� ��� 6�������� ���� � �� ������������ �� �� ��� �� � ���� ���� ����� � �� ��� ��������� ������ *������ ��������� ��� �������� � �� ���� �� ���� ���� � ��� ���� �� � � -������ �� ������ �E�* ����� ��� ���� ��� �� ����� " �� ��� E� ���"2 ���" !�����" � � ������*" � � ������ ����� ��� ���� ���,� 6�����" � - � �� �� !���� ��� � ������" 7� -��� �� ��6������� 2���� �� 6�� ��" ��� ����" 6�" 72*� ���

� -� ���� ���) ���� � �,�$&� ��� ��� ��� 3�� ,�$&���� � ����� ������ .' )��� ��� �� � �� ���� �� ��������� � ��7+ �('(5 �� ��� � ����� �� �2������ ��MA 0������ � ����� ��� �� ������� �������������6���OMA 0����� � ������ <�� K������ �� �� ����� �� ���� �/���� ������������� � �� �5& �� �� ��� �� �� �� ,�$& ���� ��" � ��� � �� J�����N� ��/�-���" � � -�� - ��� ����� ���� �" $" ��" �' ��� �5�� 3���� ���)� �������� �� ���� ���� ���� ��� ��� ����� ��� �������� ��������� �� :�&��

/0: ����� �����

+��� ���� ������ � �� � +2�(�& !��� �� ���� �������� ��I���� 3�� ���� ������ �" ���� �� �" ��������������" ��� ;���� � �� �� ��� ���� �� ������� ����"��� �� �-�� � �� ��� 6���� � E��� �� > �������� ������� � ��I����

1 ;����

10% * ����� ����� �����

!� + �����" � ��������� ���� ���� ����� ��� ��/�� ���� ���� �P #.%� � ������� ������� ��� � �������� ���� �� ���� � ��������� �� �� � ����� ������ �

�$(� !� < ����� � ��� ������������ �&&&" ��� �$(&:�$((

(����� /0 0���� � ��� ��� �� � � ��� ����������� ��������� ���� �� ���� �� ����� ���� � �('(5 �������� ������ �.:�&% ���� ��� ���� �������� �� � �-�� ��� � ���4��� ��� 0���� �� �������� ���� ����� ����A ��� ����'���� ����A �>� ���� ������ ����� � �������� � ���� ���� ��� ���� ��� -�� ��� ������� ��� �� ���� � ��������� 6������� ���� �������� ���� �� ��� ����� ����� �����

Page 4: Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori

������������ �&&&" ��" �$(&:�$(( ���� ��� ��������� �� �� ����� ���� �� �$(>

*

(����� 10 2 �-������ ��� � � ��� ����������� ���� �� �� �� ��� '���� ������� �� �� ������ 2��� ������� � �� � ��������� ���� ������� �*� ���� � �� ��� � ��������� ���� �� � � ���� � �� ��� �� � ����� 2��� ������� � �� � ��� ������� ������� � �� ���� �� ��� '���� ��� ������� �* ��� �� 2��� �:5 ���� � ��� ����� ��� �� ��� � ��������� �����*" 3���� �� �� � ������� � ����� �� � �� �������� ���� �� �� ��� �� � ���� � A ��� <�� �:5�� �������� �� ��� ����� ��� . ��� $� ��� ��� ��/�� ���� � A ��� <�� ( ��� 'A 3���� �� � �� �������� ������ �� �� ��� >& )�� ��� �� �� .����� .�#" ����� -���" ���� ���� ������� � ���� � �� ���� �� �� ��� �� � �����

Page 5: Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori

.� �� (���� �������� *���� � ��� ����" ��� ���� ��� ������ ��� ���� �� ������� ��� � ��� ����� ���� ��� ������-�� �J �� �* ��� ��

10/ 4����� ������� � %�2 323�4*,'

���� ������ ���� �� �� ��� ��� ����� �� �� ����� ���������� ����� ������ �� �� ���� ��� � �-�� ��� � ���2����� ���� �� �� �� � ����� � ������ ���� ���� ����� ������� ���� ��� � �� ��� ������� �� � ��������������� * ��& )�� ���� � ����*� ��� ���� - � ��� � ������� ��� �������" ��� )� �� '( )�� ���� � �E�*� ���� �� �� � ���� �� ��� '���� ��� ������� �J �� �" ���� � ������ <��� �� ����� � �� �������� ���� ���� �� ������������� � ������� �� ������ ���� �J �� �" ���� >�� !�������� ����� �� ��� � �� �� ���� �� � �� �������������� �� ..:$. )��" �������� �� � � �� �� ��� ,�$&��� ������ ����� � �� �� �����" ��� ��� �� � �� '������� ������� �J �� �" ���� ��� 2�� � �� �� ��� ������ �$� )��� ��� ��� ���)���� � ������ ��� ������� ��� ��� ����� -� ��� � �� �� ��� ���� �������� �� �� ,�$&���� ���� * >> )�� ��� � �# )�� ���� � - � ��� � ������� ��� ������� ��� ��� � '���� ��� ������� ��� ������� ������� � �� ������ ��� �������" ��� )� ��� �5 )�*���� � ���� �����-�� � �� �������� ���� �� �� ���������� �J �� �" ���� >��

101 4����� ������� � /�2 323�4*,'

3�� ������� �� �� ��/�� ���� �� ��� ������ ���" ��� �������� -� ������ �� � ��� ����� ��� -�� �� ��� �������� ���� >�' P#�& ��� �������� ������ ���� �& ��#5 )��� 6��� �� �� ���" '. � �� �� �-�����" ���� ���� � �� � ��� ������� �� ��� ��� �������� �� ������J �� >* ��� " ���� �� ���� ������� � �� � ��� ������0���� �� ���� ������� � �� ������� �� � ���� ��� � ��������� ���� ��� �-����� 5$� �� ��� �� � ���� ��� �-������ ��& ����� ��� ������� � �� � ����� ���� �J �� >*��� > �� 3�� ��/�� ���� �J �� > " ��� <�� ( ��� '� � ���������� ������ �� �� ��� >& )�� ��� �� �� .�� ���.�#" ����� -���" ���� ���� ������� � ���� � �� ���� ���� ��� �� � ���� �3���� ���

!������� ������� �� ���� ���� �� �J �� >* ��� " ���<�� �:5� ���� ����� � ���� � �� ��� �� � ��� �������3���� ��� �������� �� ��� ���� ���� ����� � ��� ����� �� �������� ���� �� �� ��� �� � ���� ��� ��������� �� ��� ������� �� ��� � � � �� �J �� > " ��� .��� $�� * -��� �� � �� �� ���� �� � ������ ���� �� ������ ��� �� ��� ����" ��������� �� ��� )E� ����"������ �������-�� ����� ��� ������ �� �� ������H� ��� ��� � �� ��� �� ����� ������ �������� 8�>9 � ��(&% �� ������ ���� �� ��-� � � P ( ��� ���� �� ������ P #� 3� � ���� ���� � ��� ��� '( )�� ���� � �E�*�

�� �� ����� � �� � � �� #�� ��� ��� �����-�� � �� � ��� ,���� ��� ���� � �� � ������ 3�� � ��� ��� �� �� ���� ��� �� ������ ��� ������� ������ � � � ��� ������ ������� �� ���� � �� '���� ���� ����� ��� �������

105 ��������� �����

*���� ��� 2�2�0*+�" ���� �� ���� ����������� �� 0E�J���������" ��� ���������� ��������� * ��� �� � -����� ���� �� ������ ������ �� ���� ���� ���� ��� ����������A ��� ��� ���� ���� - �� �� ���� �� �������� ������� � ��������� ���� � ����� � J �� 5� *���� ������ ��� �� ����� � ��������� ���� �� ��� �� ��� ����� ���"������ ��� ��� ���� ���� - �� � ������� ���� ��� ��������� ��� ����� �� �������� � �� �������� ���� ���� ��� �� � ����� I��� - �� �� �' ���� �� �� ���� ���"���� ������� �������� �� ,�$& � �� ������� �� 5��:.��A .5 )��� ���� <�� ��" � ����� ���" ��� ������ ��5�#:.�&A .' )��� ���� <�� ��" � ����� ��� �� �� �� ���� � �-�������� �� �� ����� ���� �� �� ��� �� ������ � �� ��� �� ���)� J������ ��� ���� � �� �� �� 5�#��� $�> ��� �������� ������ �� (. ��� $� )��" ������ -���" ���� ������� � ���� ���������� ���� <�� >�"5�" � ����� >�" 5��� 3�� �������� �����" ���� � ����� ��� �� �� �� � �� ����� ���� �� �������*" ������� " ,�$&�" ��-����� ���� �� ���� - �� � �� ��� ������������ ���� ���� �� ��� ��� �������� �� ����� �J ��." ������� �" � ��� " ����� -����" ������� �� ���� �������� ���� ���� � �������� � 3�� ����� ���� �������� ��� ���� �� -�� ��� �� ��� �������� ������" �������� �������� �� ��������� - �� �� ����� ���� ��� 3��E�* ���� � ��� ��� ������� � ��� �� ��� �����������

5 2� ���

��� � �� ������ ���� �� �� ��� ����� ����� ��������� ����� � �� ����� �������" � �� ��-���� �� ����� ����� �� ��� ��� ��� ��� ����� ��� �� ��� � ������ �����

�$(5 !� < ����� � ��� ������������ �&&&" ��� �$(&:�$((

����� %0 4 ���� ���� �� �� ��� � ��� ��� �� � ������� �� ����� ���� � �� � � �-������ ��� ���� ����

2�� 6������� � ��������<���� ������ �)���

� �& 5��# !������� ������� � �� ��� �$ >�.$ !������� ������� � �� ��> �5 5�5> !������� ������� � �� ��5 �,�$&� .' .�>' !������� ������� � �� ��( �� .��& H��� ������� � �� ��' >& .�#� H��� ������� � �� ��

�� ���������� �� ��� ������� � J �� >* ���

Page 6: Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori

����� �� ����� ���� ��� ��� ��� -� �� ��� ��� ����� ��� �� ���� �� � ����� �� �� ����� ��-� ���� ������-�� � ��� ����� ����� ����� 8$9" � ����� � )������� �� � ����" �� ���� �� � ��������� �����" ���� �� ���� �� �� ���� �� ������� � �������� ���� ��� *����� ������ �� ��� ���� ����� �� �����" ����" ������ ����� ������ ��!*�� ��-� ���� ��-����� ����� ������ �������� ��� �� ����� ��� ���� 8�>9� *� ������� ������� ��� ������� � ������ ����� 8�59 � ����� -��������� ��-��� ��� �-�� -� ������ �� � ���� �� � �� ��������� � �� ��� ���� �� ��� �� � ����� 3�� ���� ����� ;�� �� � ����� ���� � �� �� �� ���� �� � � �������� ��� �� � � ���� ������ ���� ���� ���� ��� �-������� ��� ������ � �� �� ���� �� ���� ��� 2� � � ��������� � ��� ���� � ������ �� �� � ��� ��� �� ������ �� �� ����� ���� ���� ��� �� ��� ��� � ��� 8.9�� �� ����� ��� ��� ����� �� ���������� ����� �� 3���������� ���� ���� ��� ���� ���� �� ���� � " ������� �� ���������" ��� ���� �������� ��� �� ����� ��� ,��� �� ���� ����� ������� ��� �������� ��� ������� ���� � � �� � � ��� �� ���������" � � �� ������� �� � � � ��� �� ��� ��� ��

3�� ��� ���� ������� �� ��� ������ ������ ���� ���*����� � �� �� ����� ��� ���� �-������� 8�." �$9� ,���-��"��� ��� -�� �� �� �� ��� ���* ���� � � ���� �� ���� � �������� �� ��� ����� ��� ���� � -� ������ -� �!*������� � ���� ���*���� ��� �� � �� ���� ��� � ��������� � � ����� !� �� � ����� ��� ���* ���& )��� ��� ����������� �� ���� � �� �������� ���� �� �� ��� � ��������� ���� ��� ��� ����� �� ����" �� � � ��� �� ����� � �� ��� �� ��� ���� �� �� � �� �������� ���� �P�&&)��� �� ����� ��� !0+ ��� ��� �� ��� �������� �� ���� ������� �� ���� 0����� � ������ *������ !�J ����� ;�� � ��� �� �������� ������ ���� ������ � �� �� � �������� ���� ���)�� ���� �� 3�� E�* �'( )��� ��� ���� � �� � ���� �� ��� '���� ���� ��� � ������� ����� �� ��" � )��� �� �� ���� ���� � �� ������� �� - ���� � ����������� �� �� ������� �� 3� � ���� � ��� ��� ���� � �� � ���� ��� ����� ��� �� ��� ��� ��" �������� �� �� � �� � �#���" ��� ���� ��-� � ������� ������� !0+ ��� ��� �� ��� !�J ���� 3���� � � ��� ��� � ����� ��� ���� �-����� �� �� �� � ������� ����� �� , ����� ���� � ��� !�J" �� � ��- �� � ������ ������� �� ����� ���� ���

������������ �&&&" ��" �$(&:�$(( ���� ��� ��������� �� �� ����� ���� �� �$(.

(����� 50 ���� ��������� � �� �������� ������ ���� �� �� ����� ����� 3�� �������� ��� ����� � �� � ��� �� � -����� ���� ��� ���� �� ������ ������ �� ����� 3�� ���� ����� ��� �������� � �� ����� � ��� ����" ���� ��� � 2�� ����$" ��� ����� �� �������� � �� �������� ���� �� �� ��� �� � ����� *����� ��� ��� ���� ���� - �� ��� ���)������ ��� �' ���� � ������� 2�� ������� �� ��� �� �������� �� ,�$& ��� �������" ��� �� ��� �� �� ������ " �� ��� �� � ��� � �-�������� �� �� ��� �� � ���� �� � �� ��� �� ���)� 2�� ������� >� ��� >� �(. )��A � 5�#� �� ���� ��5� ��� 5� �$� )��A � $�>� ���� ������� � ���� �����������

Page 7: Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori

*� ������� ��� � �� ����� �� �� ��� ,�$& 8�(" �'9 ���������� ���� �� ���� ��� ���� ���� � �� '� ��� ���������� � �������" ������� �� �� �������� �� �� ��� ,�� � ���� ��������-�� ����� 2����� ���� �� ��� � ���� ������-�� �������� �������� ����� �� ����" ������������ ��� �����" ��� ����� ����� �� ��� ���� �� ����������-�� ��" ��� 8�#9� !������� ��� ���� ���� - �� ������� �����-�� � ��� ��������� ���� ������

4 ���� � )���� ����� ��� ����� ������� �� ����� ��� � �� ����� ��� ���� � ������������������� ���� � �������� *�� ��� �� �� ��� �������� ���� ��� ���� ��������� �� �� �� ������� -���� ��� �� ����� ���� �� ��D����)� � ��� 8>&9" �����- �� ��� ���� ���� - �� �� �>>:>. )�� ��� ��� ������ � #(�.% �� �� ���� � �� ������ �� �������� ���� ��� ���� ����� � �� ���� � ������ ���� ����� � �� C��� � ��� 8>�9 ���� ��� ����� ���� ������� �� � �$ )�� ���� � � � ����� ������� ����� ���� �� ���� ��� ��� � ���� ���� �������� �� ������ ������ �� ����� !� � ��- ��� ���������� �����" ��� ���� ���� - �� �� � ��� �� ��� ������������ ������ ���� �� ��$:>> )��� ��� ����� �� ���������������� � �� �� ����� ���� �� 8��9� 0���� �� � �� ������ ���� ���� ����� � �� � �����" ���� � �� ��� � ����

����� ��� �� � ����" � �� � �������� � ������ ������ ��� � �-�� ��� � �� ����� �� ����� ��� �������,���-��" ����� ������ �� � �� � ��� ���� �� ��� � ����������� ���" ��� ���� ���� - �� �� ����� ���� �� ��� �������� ��� ����� �� � ���� �� � �������� 3�� �������� ���� ������� �� ��������� ����� ��� ������ ����� ������� �������� ������� �� ��� ,�$& ��������� " ���� �� �� �������� ���� ��� ��" �-����������� �� ��� �� � ���� ��� ���� � �� ��� �� ���)� H� ������� ���� � �� )�� ���� � ��� � >& )�� ���� ��3���� �" ��� <�� ( ��� '� ���� � �� �� ���� � �� ���� �������� *�� ���� ������� �� �� ����� ���� �� ������� �� ����� �� ���������A ������" ���� � ��� ��-���� � �� ���� ��� � ���� �����

!� ����� ��" � � ��� ����������� ������ ���� �� ����� ��� �������� �� ����� �� �� ����� � ���� � �������� ���� ��� ���� � ������ ��" ��� ���� � � ��� � �������� �� ���� �-������� �� ���� ����������7� ;�� ���� �� �� ��� � ��������� ��� �� � �������� ��� ��� �� ����� � �� ����� ���� � ������ ���������� 2���� �� � �� �� �� �� ������� ������������� ��� ���-� ��� ������ �� �� �� ����� ��� ���� �� ��� �������� �� �� � ��� ���� ���

�$($ !� < ����� � ��� ������������ �&&&" ��� �$(&:�$((

(����� 80 ���� ��������� � �� �������� ���� �� �� '���� ���� ����� � �� ���� ����� �������� ���� ���� � �� ��� ���� �� �� ������* ��� � �� ��" ������ ��� � �� ��" ��� ,�$& ��� � �� �� !���������� � �� ������� ���� �� ��� ��������� ������� ������ �� ������ ���� �� ���� - �� ����� ��� ������" ������� �� ���� ����� ���� �� ���� � �������� ���� ���� �-�� � ���� ��� ���� ������������ �����

Page 8: Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins of spiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori

��� ����� �� � �� �� ��� �� ���� ���� ��� !�� ������� �� �� "������ ������� �# � #������ ��������� $ �%����� �# "���� & !����� �# "�&��� � ����'��� "��%�� &� $!(� #� �� &�� ����&� � � ����� ���� ��&� )��������& �� �� � #�' �� !)�&��� "�&���� *��������� ��� +�,-./0�1 � & ,-����23� � �$*�4( ��5��+�$%�01.3� � & � �� +(673 #�' �� $ ������ ��������# 6� &�

I�� -�� H����� �>" �###

8 ;����� �

8�9 6�������" �" ('� 8� ����� ���� �##5" 92" .��$:.��'�8�9 ������ �" �� ��" 6�) �" Q� 6�" !�� � 8� ����� ����

�##�" �," .':$5�8>9 ���" +�" 6���" J�" 6�������� ���" 0�" ���&�'���� � #���

�##>" ���" 5'>:5#&�859 2�������" 6�" 6� �" 7�" 0���)��Q��-�" ��" Q�����" 6�" ����

����" I� I�" (���� � ��� � "�������� �##>" :2" ��>�:��>.�8.9 ��� ���" 6�" �� �" 0�" O�������" <�" 0������" 4�" �����

� ���" D�" J���R��" L� 4�" � #��� �''� � �##$" ,/" �>>�:�>>.�

8$9 ����" C� D�" ,� " 0� Q�" 4����" Q� 6�" ����" L�" Q��)" J�"<�" �� 2�" ('� 8� ��� � ;����� �##5" �.�" .&>:.&(�

8(9 C���" G�" 2�����S��" ��" I���" I�" < �����" ,��H�" *���/���"0�" ����R�" �" C ��R�" I�" C�����=�" 3� 8� "�&� "���������##(" /," $.(:$$>�

8'9 ������" Q� �" )���" L�" ���� ��" L� 2�" L�������" � 3�"0����" 2�" �����" E�" H���" I� L�" 2����" L� 6�" �� �##>"1/" �>5':�>.&�

8#9 ����" E�" L��� ���" Q�" C�������" +�" ( �'����� (�� ����'����" �##." 12" �'.#:�'$��

8�&9 J�� ����" I� ��" *����" 6� ��" C� ��" H�" �������" I� *�"Q �)�����" �� J�" Q����-���" *� I�" ���" �� L�" 3���" L��J�"���������" � *�" 6��� )" L� 6�" 6Q������" Q�" 2�����"+�" J ��,���" C�" J ����" ��" +�����" L� ��" 2���" L�" 2� �����" I�" 4 �" 4�!�" +����)" *�" Q�����" L� 6�" C� ����" L� J�"0� �� �" �� *�" 2� ���" 3�" ,������" ��" ������" 6� ��"7������)" 3� I�" ,����" 6� ��" <�����" �� 3�" 2����)" ��6�" ������" I� ��" J ��" 4� ��" J� �����" L� 4�" J������"L� 4�" +��������" �� 4�" +����" �� 4�" 6������" 4� *�"2����" Q� E�" J�����" �� 6�" 2� ��" ,� H�" E�����" L� ��" !��%� �� �##." �,2" 5#$:.���

8��9 �������" J� I�" 0���)��� !!!" +�" ���" �� *�" 0����" <� 3�" ������" E�" I ���" 6�" ��������E ���" L�" +������" L� ��"I���" �� Q�" 6�����" +� J�" +�����" L�" ��- �" <� C�" Q �)���� )" ,� *�" +�����" 6� *�" I���" �� L�" 6��" �" 2���"D�" !��� �� �##(" �00" �5.>:�5(5�

8��9 J�����" �� 6�" ���/���" 2�" ,����" C� 6�" 2�����" +� +�"�������" I�" 4��� ���" I�" C� ��" H�" Q�����" Q� *�" �������" I�" , )��" �� Q�" +� ��" 6�" ���������" �" 3���" L�J�" J�� ������" I� ��" I �������" ��" 0�������" L�" Q�����-���" *� I�" O��)������" L�" 2��������" 2�" ,�����" 6�"-�� E���" I�" 0�����" <�" *����" 6� ��" +�����" L�" C� �����" L�" 7������)" 3�" C������" 4�" 6������" 4�" *�� ��"

0�" �����" ��" +������" 2�" J�/ " ��" ������" 6� ��" ,����"Q�" I������" Q�" ,���" �" 2� ��" ,� H�" E�����" L� ��"���� �##(" 12." .'&:.'$�

8�>9 3���" L��J�" C� ��" H�" Q����-���" *� I�" �������" I� *�"2�����" +� +�" J�� ������" I� ��" Q�����" Q� *�" Q���)",� 0�" + ��" 2�" ���������" � *�" <�����" Q�" O��)������"L�" K���" 4�" Q �)����" �� J�" 0�������" 2�" 4�����" �"I �������" ��" ������" I�" Q����)" ,� +�" +����)" *�"6Q�����" Q�" J ���������" 4� 6�" 4��" <�" *����" 6� ��", )��" �� Q�" ���" �� ��" +�����" L� ��" 7������)" 3� I�"0�������" L� �� Q�����" L� 6�" ������" 6� ��" C� ����" L� 6�"J�/ " ��" �����" ��" C������" 4�" C��� �" ��" ,����" C� 2�" �����-�)�" 6�" Q��" 0� ��" 2� ��" ,� H�" J�����" �� 6�"E����� L� ��" ���� �##(" 199" .>#:.5(�

8�59 I�� " L�" Q���" ��" 6� ����" 6�" Q�)" ��" 2 ��" *�" +����" 0�I�" 2�������" C�" 8� ��� � "�������� �##'" 1," #55:#5'�

8�.9 *�������" L� ��" ���" 0�" 0��) L��" I� 6�" 3������" 6� Q�I�" �����" 6� L�" ��-��" 3� 4�" 8� ����� ���'� �##." �0."�(((�:�((((�

8�$9 2������" E�" K������" �" C�����=�" 3�" 8� ��� � "���������22�� 1.� �/:1<�/:,�

8�(9 2������" E� 4�" 6S���" 0��*�" ��� "�������� �#'&" /"5.:5#�

8�'9 4�������+�����" L�" 2���R�" ��" < �����" !�" 4/����" T�"3���) �� �" 3�" C )�����" 6�" C�����=�" 3�" !�� &� 8�� #��� ���� �##&" ��" 5.(:5$.�

8�#9 4����� " 7� Q�" ���� �#(&" ��0" $'&:$'.�

8�&9 ,��)����-��" L�" ���� )" I�" ������������ �#''" 2"�':>��

8��9 2�����" L����" I����" E�" 0 �����" 6�" I�- ��" J�" 3������"4�" 6��������" 6�" C �) ��" 6� I�" ,����������" �� J�"������������ �##(" �9" >�5:>�(�

8��9 < �����" !�" 4/����" T� *���/���" 0�" C�����=�" 3�" 8� ��� �"�������� �##(" 1:" 5�(:5>��

8�>9 +������) " D�" ��� "�&� ����� �##'" :/" �(.:�'$�

8�59 Q�))���" *�" I����� �" ,�" 0����))� ���" 0�" 2 ����" 0�"JU�)) �U" 6�" ,�� � ���" I�" Q������" 3� 7�" 8� ��� � "���%����� �##'" 1," �'&':�'�&�

8�.9 ��-��" 3� 4�" +������) " D�" 4���" *� 0�" ������" *�" 3�������" 6� Q�" 0�����0����" +� !�" �����" 6� L�" 8� ��� � "���%����� �##." 11" �5#$:�.&&�

8�$9 0��������" L�" J� �����" +� ��" H������ �" <�" E�������",�" �� �##(" /." �#(:>&��

8�(9 E����" *�" 4 � ���" *�" � #��� �''� � �##'" ,," �&�>:�&�(�

8�'9 0���� �" 2� ,�" 0�����" 6� ,�" 4�-�" 6� 4�" !�-��" ��" �����) ��" �� 6�" �������" L� �" ����" � ��" � #��� �''� ��##$" ,/" #&.:#���

8�#9 ��������" L�" E=�)��" 7�" E=�)��" *�" *��������" 3�" 2�� �"I�" 6��" ,�" ,�)��" 6�" "���������� �##(" �/1"###:�&�(�

8>&9 D����)�" D�" Q�����" 3�" +�����" �� D�" Q��� ��" Q�"���� ���� !��� �##'" /1" �5'�:�5'(�

8>�9 C���" L��3�" �����" ���2�" 4��" ���K�" D���" L����" 4 �"L��3�" C���" 3��,�" ������'� �������� *��� ��''� � �##'"�//" >$&:>$>�

������������ �&&&" ��" �$(&:�$(( ���� ��� ��������� �� �� ����� ���� �� �$((