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UBA III – Biologia Moleculare Biologia Molecular e Humana
Aula Laboratorial 1 2015/2016
Maria José [email protected]
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UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
Sumário L1
Apresentação sucinta do programa das aulas laboratoriais;
Segurança no laboratório Introdução às técnicas básicas para o estudo
dos ácidos nucleicos Isolamento e purificação de DNA
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Programa
Aula
Data Tema
1 8/10 Introdução às técnicas básicas para o estudo dos ácidos nucleicos.
2 15/10 Separação dos fragmentos de DNA em gel de agarose e análise dos resultados.Ficha de avaliação (a realizar no dia 21 de outubro)
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Regras gerais:
Nunca COMER, BEBER, FUMAR, aplicar lentes de contacto ou cosméticos!
Nunca cheirar soluções ou reagentes
Nunca pipetar com a boca
Lavar as mãos antes de iniciar o trabalho
Segurança no laboratório
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Atitudes:
Usar o senso comum (a maioria dos acidentes de laboratório começa com algo simples);
Estar consciente – conhecer os reagentes antes de os usar (ler os rótulos, etc.)
Estar protegido – conhecer as práticas e equipamentos que podem aumentar a proteção (bata, luvas, etc.)
Segurança no laboratório
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Bancada:
As bancadas de trabalho devem ser mantidas organizadas e limpas
Identificar todo o material utilizando para isso marcadores de vidro apropriados
Os lixos devem ser perfeitamente identificados O material de vidro estalado ou partido deve ser
imediatamente rejeitado
Segurança no laboratório
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Protecção pessoal:
Usar bata e manter os cabelos compridos apanhados;
Usar a hotte sempre que necessário; Antes de abandonar o laboratório , limpar a
bancada, retirar a bata e lavar as mãos.
Segurança no laboratório
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Ler os protocolos antes de cada aula prática Seguir atentamente as instruções fornecidas
pelo docente antes de executar o trabalho proposto
Depois de terminar o trabalho de cada aula arrumar a bancada.
Instruções gerais
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Manipulação de moléculas de DNA
Isolamento e purificação de DNA genómico Separação em gel de agarose Aplicações biotecnológicas
Introdução às técnicas para estudar os ácidos nucleicos
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DNA
lise celular libertação de todo o material
intracelular precipitação de proteínas e
detritos celulares purificação do DNA
Técnicas de extração de DNA genómico
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Lise mecânica/física Homogenizador Ultra-sonicador French pressure cell press Fervura e pressão osmótica
Lise alcalina soluções fortemente alcalinas (de hidróxido de sódio) SDS (dodecil sulfato de sódio)
Lise enzimática Proteases Rnases
Lise celular
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Fenol/Clorofórmio/Álcool isoamílico Fenol e clorofórmio desnaturam as proteínas Fase fenólica (proteínas em solução) separa-se da fase
aquosa (DNA) Precipitação com etanol absoluto (ou
isopropanol) Insolubilidade do DNA em etanol Presença de catiões monovalentes
Precipitação diferencial
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UBA-III BM e Biologia Molecular e Humana 2015/2016
amostras diversas
lise celular
Precipitação de proteínas
Precipitação de DNA
Ressuspensão do DNA em TE (pH8.0) ou em água
estéril
Extração de ácidos nucleicos
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Técnicas “nova geração”
Colunas de silica
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Técnicas “nova geração”
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Lavagem
Lise celular
Eliminação de residuos celulares
Mat
riz d
e Ch
elex
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Técnicas “nova geração”
Colunas de silica
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