uji toksisitas akut ekstrak n heksan daun … · 2.3 definisi operasional ..... bab iii metode...

UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK n-HEKSAN DAUN

Garcinia benthami Pierre TERHADAP LARVA Artemia

salina Leach DENGAN METODE BRINE SHRIMP

LETHALITY TEST (BSLT)

Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

SARJANA KEDOKTERAN

OLEH :

Nur Rizqillah

NIM: 1110103000068

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI

SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA

1434 H/2013 M

vii

ABSTRAK

Nur Rizqillah. Program Studi Pendidikan Dokter. Uji Toksisitas Akut Ekstrak n-

heksan Daun Garcinia benthami Pierre Terhadap Larva Artemia salina Leach

dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). 2013

Garcinia benthami Pierre merupakan salah satu spesies dari genus Garcinia di

Indonesia.Daun ini mengandung senyawa xanton, kumarin, flavonoida dan

terpenoid. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui toksisitas ekstrak n-

heksan daun Garcinia benthami Pierre terhadap larva Artemia salina Leach

dengan metode Brine Shrimp lethality Test (BSLT). Penelitian ini menggunakan

hewan uji 330 ekor larva Artemia salina Leach yang dibagi dalam 10 kelompok.

Tiap kelompok terdiri dari 10 ekor, dengan replikasi 3 kali tiap kelompok.

Kemudian ekstrak daun Garcinia benthami Pierre dimasukkan dalam konsentrasi

akhir 5 ppm,10 ppm,20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 250 ppm, 500 ppm,

1000 ppm, dan 1500 ppm. Pengamatan terhadap larva yang mati 24 jam setelah

pemberian ekstrak. Berdasarkan data, LC50 ekstrak n-heksan daun Garcinia

benthami Pierre ditentukan dengan analisis probit menggunakan metode probit.

Hasil dari analisis probit menunjukkan harga LC50 dari ekstrak n-heksan daun

Garcinia benthami Pierre adalah 3981 ppm. Hasil tersebut menunjukkan bahwa

ekstrak daun Garcinia benthami Pierre tidak mempunyai potensi toksisitas

terhadap larva Artemia salina Leach. Hal ini ditunjukkan dengan harga

LC50>1000 ppm.

Kata kunci : Toksisitas, ekstrak daun Garcinia benthami Pierre, Brine Shrimp

Lethality Test (BSLT)

ABSTRACT

Nur Rizqillah. Medical Education Study Program. Acute Toxicity Test of

Garcinia benthami Pierre Extract Against Artemia salina Leach Larvae Using

Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Method. 2013

Garcinia benthami Pierre is one kind of Garcinia species in Indonesia. The leaves

contain xanton, kumarin, flavonoid and terpenoid bioactive coumponds. The aims

of the research is determine the lethal toxicity value of Garcinia benthami Pierre

n-hexane leaves extract toward Artemia salina Leach larva by Brine Shrimp

lethality Test (BSLT) method. This research use 330 larva Artemia salina Leach

that devided into 10 groups. Each group consist of 10 animals with three

replication. Later Garcinia benthami Pierre leaves extract included in every

concentration 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 250 ppm, 500

ppm, 1000 ppm, and 1500 ppm. Observations were made during 24 hours of

Artemia salina Leach larvae mortality. Based on the data, LC50 extract n-hexane

Garcinia benthami Pierre leave determined by analysis of probit by using probity

method. The result of probity analysis shows LC50 value from n-hexane extract

Garcinia benthami Pierre leave is 3981 ppm. Result indicates that the extract

Garcinia benthami Pierre leave didn`t have any potential toxicity to Artemia

salina Leach larvae. In this case indicates with LC50>1000 ppm.

Keywords : Toxicity,Garcinia benthami Pierre extract, BSLT

viii

DAFTAR ISI

LEMBAR JUDUL ...........................................................................................

LEMBAR PERNYATAAN ............................................................................

LEMBAR PERSETUJUAN ...........................................................................

LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................

KATA PENGANTAR .....................................................................................

ABSTRAK ........................................................................................................

DAFTAR ISI ....................................................................................................

DAFTAR TABEL ............................................................................................

DAFTAR GAMBAR .......................................................................................

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang ...................................................................................

1.2 Rumusan masalah .............................................................................

1.3 Tujuan penelitian ..............................................................................

1.3.1 Tujuan umum ..........................................................................

1.3.2 Tujuan khusus ..........................................................................

1.4 Manfaat penelitian ............................................................................

1.4.1 Bagi masyarakat.......................................................................

1.4.2 Bagi institusi ............................................................................

1.4.3 Bagi peneliti ............................................................................

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Landasan teori ...................................................................................

2.1.1 Obat Tradisional ......................................................................

2.1.2 Toksikologi .............................................................................

2.1.3 Garcinia benthami Pierre.........................................................

2.1.4 Uji Toksisitas metoda Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)…

2.1.5 Metode ekstraksi ......................................................................

2.2 Kerangka konsep ...............................................................................

2.3 Definisi operasional ..........................................................................

BAB III METODE PENELITIAN

1.1 Desain penelitian ..............................................................................

1.2 Waktu dan tempat penelitian ............................................................

1.3 Bahan yang diuji ...............................................................................

1.4 Alat dan bahan penelitian .................................................................

1.4.1 Alat penelitian .........................................................................

1.4.2 Bahan penelitian ......................................................................

1.5 Cara kerja penelitian .........................................................................

1.5.1 Penyiapan sampel atau pembuatan Simplisia..........................

1.5.2 Pembuatan ekstrak daun Garcinia benthami Pierre...............

1.5.3 Uji aktivitas toksisitas dengan metode BSLT.......................

1.5.4 Pengukuran toksisitas............................................................

i

ii

iii

iv

v

vii

viii

x

xi

1

2

2

2

3

3

3

3

3

4

4

4

6

8

11

14

15

16

16

16

16

16

17

17

17

17

18

20

ix

1.5.5 Analisis data toksisitas.........................................................

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil ekstraksi daun Garcinia benthami Pierre.................................

4.2 Perhitungan nilai LC50.....................................................................

BAB V SIMPULAN DAN SARAN

5.1 Simpulan ...........................................................................................

5.2 Saran ..................................................................................................

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................

LAMPIRAN .....................................................................................................

21

23

23

30

30

31

34

x

DAFTAR TABEL

Tabel 4.1 Hasil mortalitas larva Artemia salina Leach dengan penambahan

ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre………..………..

24

Tabel 4.2 Hasil uji toksisitas ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami

Pierre………………………………………………..…………….

26

Tabel 4.3 Hasil Mortalitas larva Artemia salina Leach dengan pemberian

DMSO…………………………..……………………………......

29

Tabel 6.1 Perhitungan % kematian larva Artemia salina Leach, nilai probit,

dan LC50 daun Garcinia benthami Pierre........................................

36

Tabel 6.3 Nilai probit .................................................................................... 43

xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Daun Garcinia benthami Pierre.................................................... 6

Gambar 6.1 Hasil determinasi ..........................................................................

Gambar 6.2 Foto Depan Kaleng Telur Artemia salina Leach………………...

Gambar 6.3 Foto Belakang Kaleng Telur Artemia salina Leach…………….

Gambar 6.4 Grafik Regresi Linier ekstrak daun Garcinia benthami Pierre….

34

35

35

37

Gambar 6.5 Simplisia daun Garcinia benthami Pierre...................................... 47

Gambar 6.6 Destilasi pelarut n-heksan….........................................................

Gambar 6.7 Proses maserasi..............................................................................

47

47

Gambar 6.8 Penyaringan filtrat daun Garcinia benthami Pierre ..................... 47

Gambar 6.9 Pembuatan ekstrak kental.............................................................. 47

Gambar 6.10 Ekstrak kental daun Garcinia benthami Pierre........................... 47

Gambar 6.11 Pemberian air laut………............................................................ 48

Gambar 6.12 Wadah penetasan Artemia salina Leach...................................... 48

Gambar 6.13 Telur Artemia salina Leach yang akan ditetaskan......................

Gambar 6.14 Ekstrak yang akan diencerkan………………………………….

Gambar 6.15 Tabung Pengenceran……………………………………….......

48

48

48

1

BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Obat-obatan yang bersumber dari bahan alam saat ini sudah dikenal dan

digunakan pada sebagian besar masyarakat Indonesia atau yang biasa disebut

sebagai obat tradisional. Obat tradisional mudah diterima oleh masyarakat

karena harga lebih murah dan mudah di dapat. Banyak penelitian sebelumnya

yang telah meneliti mengenai macam obat tradisional, kandungan kimia serta

khasiat yang ada di dalamnya. Namun, adapula tanaman yang belum diketahui

manfaatnya, sehingga perlu diteliti lebih lanjut.1

Umumnya masih banyak tanaman yang dapat dijadikan bahan obat

tradisional tetapi belum diketahui oleh masyarakat Indonesia karena jenis-

jenisnya dianggap tidak banyak memberikan manfaat. Ada beberapa jenis

tanaman Garcinia yang ada di Indonesia, seperti G. Mangostana L, G.

Lancilimba, dan G. benthami Pierre. Namun, masyarakat Indonesia hanya

mengetahui satu jenis tanaman saja, yaitu manggis ( G. Mangostana L.).

Sehingga mendorong para peneliti untuk mencari tahu kandungan kimia

sampai manfaat atau khasiat yang dapat diperoleh dari tanaman Garcinia

lainnya.

Garcinia termasuk famili Clusiaceae yang telah diketahui mempunyai

manfaat yang besar untuk kesehatan karena mengandung senyawa yang

mempunyai bioaktivitas sebagai antioksidan. Garcinia benthami Pierre

merupakan salah satu spesies dari genus Garcinia yang tumbuh di Indonesia.2

Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa kandungan kimia yang

terdapat dari spesies Garcinia diantaranya yaitu senyawa golongan xanton,

kumarin, flavonoida dan terpenoid. Berdasarkan hasil penelitian, xanton dari

genus Garcinia diketahui mempunyai aktivitas sebagai antioksidan,

antibakteri, antimalaria, antikanker dan antiinflamasi. Xanton dari G.

Lancilimba berperan aktif terhadap sel kanker MDA-MB-435S pada payudara.

2

Selain itu, pada G. Mangostana L yaitu mangostenon C juga mempunyai

aktivitas aktif terhadap sel kanker. Senyawa tersebut aktif terhadap tiga cell

line kanker manusia, epidermoid carcinoma of the mouth (KB), breast cancer

(BC-1) dan small sell lung cancer (NCI-H187).2

Peneliti belum menemukan penelitian tentang uji toksisitas pada daun

Garcinia benthami Pierre dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

Penelitian ini menerapkan metode BSLT dengan menggunakan larva Artemia

salina Leach sebagai hewan uji. Hasil uji toksisitas dengan metode ini telah

terbukti memiliki hubungan dengan daya sitotoksitas senyawa antikanker pada

suatu tanaman. Selain itu, metode ini sering digunakan sebagai skrining awal

untuk mengetahui senyawa aktif yang terkandung di dalam ekstrak tanaman.3

Oleh karena itu, penting dilakukannya penelitian ini untuk mengetahui potensi

toksisitas akut ekstrak n-heksana daun Garcinia benthami Pierre terhadap

larva Artemia salina Leach dengan metode BSLT. Hasil yang didapatkan

diharapkan dapat dijadikan bahan informasi tentang potensi toksisitas akut

pada ekstrak n-heksana daun Garcinia benthami Pierre sebagai salah satu

tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai tanaman obat tradisional dan dapat

digunakan secara luas oleh masyarakat Indonesia.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas rumusan masalah dalam penelitian ini

adalah apakah ekstrak n-heksana daun Garcinia benthami Pierre mempunyai

potensi toksisitas akut terhadap larva Artemia salina Leach.

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Tujuan umum penelitian ini adalah untuk mengetahui toksisitas akut ekstrak

n-heksan daun Garcinia benthami Pierre terhadap larva larva Artemia salina

Leach dengan metode BSLT.

3

1.3.2 Tujuan Khusus

Tujuan khusus penelitian ini adalah untuk menentukan nilai LC50 ekstrak n-

heksan daun Garcinia benthami Pierre terhadap larva Artemia salina Leach

dengan metode BSLT.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Bagi Masyarakat

Menambah informasi tentang tumbuhan keluarga manggis yang berpotensi

sebagai tanaman obat.

1.4.2 Bagi Institusi

1. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang

potensi toksisitas akut ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre

sehingga dapat digunakan sebagai alternatif dalam pengembangan

obat-obat alami sebagai pengobatan serta pencegahan dari penyakit

kanker.

2. Dapat dijadikan bahan rujukan penelitian di Fakultas Kedokteran dan

Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.

1.4.3 Bagi Peneliti

1. Sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar Sarjana Kedokteran di

Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri

Syarif Hidayatullah Jakarta.

2. Dapat menambah pengalaman peneliti dalam melakukan uji potensi

toksisitas terutama pada tanaman Garcinia benthami Pierre.

4

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Landasan Teori

2.1.1 Obat Tradisional

Obat tradisional adalah pilihan pengobatan yang akhir-akhir ini diminati

dan sering menjadi pilihan masyarakat luas, terlebih lagi dengan kesadaran

untuk memilih pengobatan dari bahan alami, bahkan dengan perkembangan

zaman, kini pengobatan alternatif dalam melayani kesehatan pada

masyarakat juga banyak diminati. Dari banyak penelitian, obat tradisional

memang sudah diakui kekhasiatannya oleh masyarakat. Oleh karena itu,

memanfaatkan tanaman dari bahan alami dan menggunakannya untuk

kesehatan dapat meningkatkan berkembangannya obat-obatan tradisional.3

Selain itu, memanfaatkan tanaman obat yang terbuat dari bahan alami juga

dapat digunakan untuk mengatasi penyakit kanker, telah diketahui bahwa

pengobatan kanker saat ini sangat mahal. Di Indonesia, penyakit kanker

merupakan urutan kelima, karena itulah penyakit kanker merupakan salah

satu penyakit yang menakutkan bagi masyarakat. Sudah banyak penelitian

yang telah dilakukan untuk mencari senyawa antikanker yang terkandung

pada berbagai tanaman tradisional sehingga akan dikembangkan menjadi obat

tradisional yang efektif dalam menghambat dan menghentikan aktivitas sel

kanker di dalam tubuh seseorang. Sehingga upaya pengembangan obat

tradisional perlu dikembangkan dan disebarluaskan.3

Salah satu tumbuhan yang perlu dikembangkan sebagai obat antikanker

adalah daun Garcinia benthami Pierre. Tumbuhan ini merupakan tumbuhan

yang belum banyak diketahui oleh masyarakat luas dan juga dapat

digunakan menjadi salah satu obat tradisional.

2.1.2 Toksikologi

Uji toksisitas merupakan salah satu bagian dari toksikologi. Uji

toksisitas diawali dari skrining mencari senyawa aktif kemudian dapat

5

dilanjutkan kembali dengan uji efektivitas atau selektivitas pada hewan

coba. 4

Toksikologi merupakan ilmu yang mempelajari secara kuantitatif dan

kualitatif pengaruh yang buruk dari zat kimiawi, fisis, dan biologis terhadap

suatu sistem biologis.4 Selain itu, dapat diartikan sebagai ilmu yang

mempelajari racun, tidak saja efeknya, tetapi juga mekanisme terjadinya

efek tersebut pada organisme. Racun tersebut dapat berupa zat kimia, fisis,

dan biologis. Toksin atau racun diartikan sebagai zat yang bila masuk ke

dalam tubuh dalam dosis cukup, bereaksi secara kimiawi dapat

menimbulkan kematian/kerusakan berat pada orang sehat.5

Sedangkan toksisitas merupakan kemampuan racun (molekul) untuk

menimbulkan kerusakan apabila masuk ke dalam tubuh dan lokasi organ

yang rentan terhadapnya. 6

Suatu zat mempunyai kadar toksisitas yang berbeda sehingga

menentukan tingkat toksisitas suatu toksin yang sedang diuji coba pada

berbagai organisme. Tetapi toksisitas ini bergantung pada berbagai faktor,

antara lain : 7

a) Spesies uji

b) Cara racun memasuki tubuh/ portal entri

c) Frekuensi dan lamanya paparan

d) Konsentrasi zat pemapar

e) Bentuk, sifat kimia/fisik zat pencemar

f) Kerentanan berbagai spesies terhadap pencemar

Semuanya faktor- faktor yang dapat menentukan efek yang terjadi.

Ada 2 jenis sifat efek toksik, yakni bersifat reversible (dapat kembali

seperti semula) dan bersifat irreversible (tidak dapat dirubah kembali).

Berikut ciri efek toksik yang bersifat reversible, yaitu : 7

1. Bila jumlah zat toksik dalam tempat kerjanya atau reseptornya telah

habis, maka reseptor akan kembali seperti keadaan semula.

2. Efek toksik yang diakibatkan akan cepat hilang atau kembali normal.

6

3. Ketoksikan sangat tergantung pada dosis, kecepatan absorbs,

distribusi, dan eleminasi

Sedangkan ciri-ciri dari sifat efek toksik yang bersifat irreversible, yaitu : 7

1. Kerusakan yang terjadi sifatnya permanen

2. Paparan berikutnya akan menimbulkan kerusakan yang sifatnya

sama sehingga memungkinkan terjadinya akumulasi efek toksik.

3. Paparan dengan takaran yang sangat kecil dalam jangka panjang

akan menimbulkan efek toksik yang sama efektifnya dengan yang

ditimbulkan oleh paparan dosis besar jangka pendek. Ini

menunjukkan zat yang dapat menimbulkan efek toksik irreversible

adalah zat beracun yang terakumulasi atau sangat sukar dieleminasi.

2.1.3 Garcinia benthami Pierre

Umumnya Garcinia merupakan tumbuhan yang masih belum diketahui

oleh banyak masyarakat luas karena jenis-jenisnya tidak banyak

memberikan manfaat kecuali manggis (Garcinia Mangostana L.).

Gambar 2.1 Garcinia benthami Pierre

Sumber : Dokumen pribadi

7

Klasifikasi taksonomi tumbuhan Garcinia benthami Pierre : 2

a. Regnum : Plantae

b. Divisi : Spermatophyta

c. Anak divisi : Angiospermae

d. Kelas : Dicotyledoneae

e. Sub kelas : Archichlamydeae

f. Ordo : Guttiferales

g. Familia : Clusiaceae

h. Genus : Garcinia

i. Species : Garcinia benthami Pierre

Tumbuhan Garcinia, sudah banyak ditemukan sebagian besar hutan di

Indonesia, selain itu juga dapat ditemukan di India dan Sri Lanka. Di Indonesia,

tumbuhan Garcinia juga terdapat di Kalimantan Timur, Borneo, Sarawak, Sabah. 8

Garcinia merupakan tumbuhan yang tidak terlalu besar, dan sering ditemukan di

bawah pohon-pohon yang besar. Garcinia benthami Pierre merupakan salah satu

spesies dari garcinia. Tumbuhan ini memiliki tinggi sekitar 17 meter, diameter

tajuk 12 m dan memiliki diameter batang sekitar 43,13 cm.9

Memiliki batang yang

lurus, mengecil ke arah ujung. Bentuk pohon seperti kerucut, memiliki

percabangan berselang-seling. Selain itu, tanaman ini juga mempunyai nama lain

yaitu Garcinia ferrea Pierre.2

Jika dipotong, pada seluruh bagian tanaman akan mengeluarkan getah

kuning yang kental dan lengket. Daunnya berwarna hijau. Bunga berada di ketiak

daun. Daun kelopak dan daun mahkota terdiri dari 4-5 helai. Bunga jantan

memiliki benang sari yang jumlahnya bervariasi, dengan tangkai sari bersatu

menjadi satu. Pada bunga betina biasanya berukuran lebih besar dari bunga jantan,

benang sari semu dengan tangkai sarinya yang bersatu menjadi sebuah cincin di

bagian pangkal, bakal buah beruang 2-12 dan biasanya berbentuk papila. Bijinya

besar, biasanya terbungkus oleh arilus yang berisi banyak sari buah. Embrionya

berupa masa padat, hanya tersusun atas hipokotil, sedangkan bijinya tidak ada.10

8

2.1.4 Uji Toksisitas Metoda Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

Zat yang telah diuji dengan uji toksisitas, akan melalui beberapa test

keamanan pada hewan coba, meliputi :7

1. Uji toksisitas akut, yaitu uji untuk mengetahui nilai LC50 atau LD50 yang

masih dapat ditoleransi oleh binatang percobaan, yang hasilnya akan

ditransformasi pada manusia.

2. Uji toksisitas subakut, adalah suatu uji untuk menentukan organ sasaran

(organ yang rentan) atau tempat kerjanya. Umumnya dilakukan dengan

menggunakan 3 dosis dan menggunakan 2 spesies yang berbeda.

3. Uji toksisitas kronik, adalah suatu uji yang tujuannya hampir sama dengan

toksisitas sub akut. Uji ini diperlukan jika obat nantinya akan digunakan

dalam jangka waktu yang panjang.

4. Uji efek pada organ reproduksi, suatu uji untuk melihat perilaku yang

berkaitan dengan reproduksi (perilaku kawin), perkembangan janin,

kelainan janin, proses kelahiran, dan perkembangan janin setelah

dilahirkan.

5. Uji karsinogenik, adalah uji untuk mengetahui apakah suatu zat jika

dipakai jangka panjang akan dapat menimbulkan kanker. Uji ini dilakukan

jika obat tersebut nantinya akan digunakan dalam jangka panjang.

6. Uji mutagenik, adalah suatu uji untuk melihat adanya perubahan gen jika

zat digunakan jangka panjang.

Metode BSLT merupakan salah metode uji toksisitas akut. Metode BSLT

yang digunakan menggunakan cara Meyer yang biasanya dilakukan untuk

penapisan pada ekstrak dari tumbuhan ataupun buah yang diperkirakan

memiliki sifat antitumor atau antikanker sebelum melakukan uji in vitro yang

menggunakan sel lestari tumor.11

Metoda ini diketahui digunakan sebagai

bioassay guided fractionation bahan alam, juga dapat digunakan untuk metoda

pra-skrining penelitian sel tumor di Cell Culture Labaratory of the Purdue

Cancer Center, Purdue University. Metode Meyer ini ditujukan terhadap

tingkat mortalitas larva udang Artemia salina L. yang disebabkan oleh ekstrak

uji.12

9

Hasil uji toksisitas dengan metode BSLT telah dibuktikan memiliki korelasi

dengan daya sitotoksitas dari senyawa antikanker.3 Hasil uji toksisitas

dinyatakan dalam persen LC50

(Lethal Consentration).12

LC50 didefinisikan

sebagai dosis atau konsentrasi yang diberikan sekali (tunggal) atau beberapa

kali dalam 24 jam dari suatu zat yang secara statistik diharapkan dapat

mematikan 50% hewan coba.7 Besarnya toksisitas tergatung dari jumlah

kematian larva setelah pemberian zat yang mengandung senyawa antikanker.

Ekstrak dikatakan bersifat toksik jika harga LC50

< 1000 ppm, sedangkan untuk

senyawa murni jika LC50

<200 ppm berpotensi sebagai antikanker.13

Ekstrak

atau fraksi senyawa yang memiliki harga LC50 > 0-30 ppm berpotensi sebagai

antikanker, LC50 > 30-200 ppm berpotensi sebagai antibakteri, sedangkan LC50

> 200-1000 ppm berpotensi sebagai pestisida.13

Artemia salina Leach merupakan kelompok udang-udangan (Crustaceae)

dari filum Arthropoda, kingdom Animalia. Artemia salina Leach biasanya

hidup di lingkungan danau berair asin. Kadar garam perairan sangat

berpengaruh pada proses penetasan udang, kadar garam < 6% menyebabkan

telur udang tenggelam dan tidak bisa menetas. Jika kadar garam > 25%, telur

akan berada pada kondisi tersuspensi, sehingga telur udang dapat menetas

dengan normal.14

Siklus hidup Artemia salina Leach dimulai dari saat penetasan telur atau

embrio. Setelah 15-20 jam, pada suhu 250C kista akan menetas menjadi

embrio. Dalam waktu 20-24 jam, embrio tersebut berubah menjadi naupli

(larva udang) yang dapat berenang bebas. Siklus hidup Artemia salina Leach

dipengaruhi oleh beberapa faktor, diantaranya pH, cahaya, suhu, kadar garam,

dan aerasi O2. pH terbaik untuk siklus hidup Artemia salina Leach adalah

sebesar 8-9, sedangkan pH di bawah 5 atau di atas 10 dapat membunuh

Artemia salina Leach. Cahaya sangat diperlukan untuk proses penetasan dan

pertumbuhan Artemia salina Leach. Selain itu, kadar oksigen harus tetap dijaga

dengan baik untuk mendukung pertumbuhan Artemia salina Leach.15

10

Jika faktor-faktor tersebut dapat dilakukan dengan optimal, Artemia salina

Leach akan tumbuh dan berkembang dengan cepat. Apabila kadar oksigen

dalam air rendah, air mengandung polutan organik, atau salinitas perairan

meningkat, Artemia salina Leach akan memakan bakteri, plankton, dan sel

khamir. Pada kondisi tersebut, Artemia salina Leach akan memproduksi

hemoglobin sehingga tampak berwarna jingga kemerahan.14

Pada proses inkubasi selama 24 jam, larva udang Artemia salina Leach

membutuhkan proses aerasi dengan menggunakan aerator. Aerasi merupakan

proses terjadinya kontak antara air dan udara, sehingga terjadi perpindahan

seyawa yang bersifat volatile. Proses aerasi dapat meningkatkan jumlah O2 di

dalam air, menghilangkan CO2, H2S, dan menghilangkan rasa serta bau yang

disebabkan oleh zat-zat organik. Aerasi juga dapat meningkatkan pH dan

menurunkan suhu termal air laut.16

Proses aerasi dapat dilakukan dengan dua

cara yaitu cara pertama adalah dengan memompakan udara atau oksigen ke

dalam air, sehingga dihasilkan gelembung udara yang berkontak langsung

dengan air. Cara yang kedua adalah dengan menekan air ke atas untuk

berkontak langsung dengan udara, proses tersebut dilakukan dengan bantuan

pemutaran baling-baling pada permukaan air.17

Pemilihan larva udang sebagai hewan uji pada penelitian didasarkan karena

Artemia salina Leach memiliki beberapa kesamaan dengan mamalia, misalnya

pada tipe DNA-dependent RNA polimerase Artemia salina Leach serupa

dengan yang terdapat pada mamalia dan organisme yang memiliki ouabaine-

sensitive Na+ dan K

+ dependent ATPase, sehingga senyawa maupun ekstrak

yang terdapat aktivitas pada sistem tersebut dapat terdeteksi.18

Selain itu,

pemilihan Artemia salina Leach dikarenakan telur Artemia salina Leach

memiliki daya tahan yang lama (dapat tetap hidup dalam kondisi kering,

selama beberapa tahun), lebih mudah menetas dalam waktu 48 jam, sehingga

dapat dihasilkan naupli (larva udang) dalam jumlah banyak untuk diuji.15

Larva

udang pun memiliki kemampuan untuk mengatasi perubahan tekanan osmotik

dan regulasi ionik yang tinggi.19

Alasan lain yang menyebabkan dipilihnya

larva udang (naupli) sebagai hewan uji adalah karena larva udang memiliki

11

membran kulit yang tipis, sehingga kematian suatu larva akibat efek sitotoksik

dari senyawa bioaktif dapat dianalogikan dengan kematian sebuah sel dalam

organisme.20

Disamping itu, larva udang juga memiliki toleransi yang tinggi

terhadap selang salinitas yang luas, mulai dari air tawar hingga air yang

bersifat jenuh garam.21

Persen kematian Artemia salina Leach dapat dihitung setelah periode

inkubasi selama 24 jam, setelah pemberian sejumlah larutan uji pada media

hidupnya. Kematian tersebut disebabkan, karena larva udang mengalami

keracunan (toxicity) akibat keberadaan senyawa bioaktif yang masuk ke dalam

tubuhnya. Selain itu, sistem pertahanan tubuh (imunitas) yang dibentuk larva

udang masih belum mampu untuk menghambat dan menoleransi senyawa

bioaktif yang terdapat pada media hidupnya. Kematian larva udang dinyatakan

berdasarkan hasil pengamatan menggunakan kaca pembesar dan ditunjukkan

dengan tidak adanya motilitas (pergerakan) dari larva udang. Selanjutnya

dihitung efek farmakologis, berdasarkan analisis probit (LC50).15

2.1.5 Metode Ekstraksi

Ekstraksi adalah penarikan dari kandungan kimia yang dapat larut

sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Ada

beberapa cara pembuatan ekstraksi : 2

2.1.5.1 Cara Dingin

a. Maserasi

Maserasi adalah proses ekstraksi simplisia menggunakan pelarut

dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur

ruangan (suhu kamar). Cara ekstraksi ini menggunakan prinsip metode

pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Remaserasi adalah melakukan

beberapa kali pengulangan dengan menambahkan pelarut setelah

dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya. 2

12

b. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai

sempurna (exhaustive extraction) biasanya dilakukan pada suhu kamar.

Terdapat beberapa proses yang terdiri dari tahapan pengembangan bahan,

tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan atau

penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat)

yang jumlahnya 1-5 kali bahan. 2

2.1.4.2 Cara Panas

a. Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya

selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan

dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses

pada residu pertama sampai 3-5 kali. Sehingga termasuk proses ekstraksi

sempurna. 2

b. Soxhlet

Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang

umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu

dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik. 2

c. Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada

temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara

umum dilakukan pada temperatur 400-50

0C.

2

d. Infus

Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air

(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur

(960- 98

0C) selama waktu tertentu (15-20 menit).

2

13

e. Dekok

Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama dan temperatur sampai

titik didih air selama 30 menit. 2

14

2.2 Kerangka Konsep

METODE BSLT

Penetasan Artemia salina Leach

selama 48 jam

Didapatkan hasil penelitian

Persentase Persen kematian

larva udang

Nilai Probit,

Persamaan linier

y=a+bx

Pemberian larutan uji (ekstrak n-

heksan daun Garcinia benthami

Pierre) dan menghitung persen

kematian Artemia salina Leach

menggunakan kaca pembesar setelah

periode inkubasi selama 24 jam

Uji Toksisitas Akut

Memiliki Senyawa Bioaktif

Ekstrak daun Garcinia benthami Pierre

NILAI LC50

UJI TOKSISITAS

15

2.3 Definisi Operasional

No Variabel Definisi Cara ukur Alat ukur Skala

ukur

Hasil ukur

1. Konsentra

si ekstrak

daun

Garcinia

benthami

Pierre

Konsentrasi

larutan uji

dalam ppm (1

μg/mL)

V1M1=V2M2

(perbandingan

μg ekstrak

dengan mL n-

heksan)

- Numerik 50 ppm,

100 ppm,

200 ppm,

500 ppm

1000 ppm

2. Toksisitas

sampel

Nilai toksisitas

sampel yang

diuji pada

masing-masing

konsentrasi

Pengukuran

dilakukan

dengan

menghitung

jumlah

Artemia salina

Leach yang

mati sebanyak

50 % dari total

larva uji (10

ekor pada

tabung

reaksi).

Menggunaka

n kaca

pembesar

dan

ditunjukkan

dengan tidak

adanya

motilitas

(pergerakan)

dari larva

udang.

Numerik Hasil

toksisitas

dalam

persen LC50

3. LC50 Dosis atau

konsentrasi

yang diberikan

dalam 24 jam

dari suatu zat

dan dapat

mematikan 50%

hewan coba

Menentukan

persamaan

garis lurus

hubungan

antara nilai

probit dengan

log dosis

- Kategorik Ekstrak LC50

< 1000 ppm

= bersifat

toksik

Sedangkan

senyawa

murni LC50

<200 ppm =

antikanker

16

BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1 Desain Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan pendekatan Post

Test-Only Control Group Design dan cara pengambilan sampel yaitu

Purposive Random Sampling terhadap larva Artemia salina Leach di

Laboratorium untuk menguji potensi toksisitas. Perlakuan dengan pemberian

ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre terhadap larva Artemia salina

Leach.

3.2 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini akan dilakukan pada bulan Maret sampai bulan Agustus 2013 di

Laboratorium Farmakognosi dan Fitofarmaka, Laboratorium Farmakologi,

dan Laboratorium Biologi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan

Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.

3.3 Bahan yang Diuji

Daun Garcinia benthami Pierre diambil dari Kebun Raya Bogor dan telah di

determinasi di laboratorium LIPI-Bogor (lampiran 1). Tujuan dilakukannya

determinasi dan identifikasi daun yaitu untuk mengetahui dan memastikan

famili dan spesies tanaman yang akan diteliti. Proses ekstraksi dilakukan di

Laboratorium Farmakognosi dan Fitofarmaka Fakultas Kedokteran dan Ilmu

Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.

3.4 Alat dan Bahan Penelitian

3.4.1 Alat Penelitian

Gelas ukur, neraca analitik, gelas beaker, tabung reaksi, pipet, batang

pengaduk kaca, rotary evaporator, lup, vial atau botol kaca, lakban,

kertas saring, lemari asam, wadah bening, mikropipet, dan lampu,

sterofoam, aluminium foil, cawan penguap.

17

3.4.2 Bahan Penelitian

Ekstrak daun Garcinia benthami Pierre, aquadest, pelarut yang

digunakan yaitu n-heksan mempunyai sifat non polar sehingga akan

melarutkan senyawa-senyawa nonpolar yang terdapat dalam ekstrak

kasar n-heksan daun Garcinia benthami Pierre. Pemilihan n-heksan

sebagai pelarut karena n-heksan memiliki titik didih rendah, mudah

menguap, bersifat tidak berbahaya, dan tidak beracun. Hewan uji yang

digunakan yaitu larva Artemia salina Leach, sebagai pelarut tambahan

digunakan larutan DMSO (Dimethyl Sulfoxide) untuk membantu

kelarutan ekstrak n-heksan dalam aquades, dan air laut.

3.5 Cara Kerja Penelitian

3.5.1 Penyiapan Sampel atau Pembuatan Simplisia

Daun Garcinia benthami Pierre yang dipilih dalam penelitian ini yaitu

daun segar dan tidak cacat dari strukturnya sebanyak 6 kg, kemudian

dikeringkan di Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik (BALITRO)

dengan cara oven sampai kering.

Setelah kering, simplisia dibersihkan dari kotoran-kotoran yang mungkin

menempel pada permukaan maupun belakang daun. Selanjutnya simplisia

dihaluskan dengan menggunakan blender sampai terlihat halus. Setelah itu,

simplisia ditimbang sebanyak 1 kg untuk proses ekstraksi dan proses

selanjutnya.

3.5.2 Pembuatan Ekstrak Daun Garcinia benthami Pierre

Sebanyak 1 kg dari daun Garcinia benthami Pierre dimasukkan ke dalam

botol untuk dilakukan maserasi dengan pelarut n-heksan sebanyak 6 L yang

sebelumnya telah di destilasi dengan rotary evaporator. Maserasi dilakukan

sebanyak 3 hari. Hasil maserasi disaring dengan menggunakan kertas saring

dan dari hasil penyaringan diperoleh filtrat. Kemudian filtrat tersebut

dipekatkan menjadi ekstrak kental dengan memasukkan ke dalam labu

18

evaporator. Pelarut diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu +

450C sampai pelarut tidak keluar lagi pada labu alas bulat tempat sisa

penampungan pelarut, sehingga didapatkan ekstrak kental n-heksan. Hasil

penyaringan juga didapatkan ampas simplisia dan kemudian kembali

maserasi dengan pelarut n-heksan hingga didapatkan filtat n-heksan

mendekati hijau bening agar klorofil yang terdapat pada daun dapat hilang

semua. Telah dilakukan tujuh kali proses maserasi dan dilakukan dalam

waktu + 1 bulan. Setiap dilakukannya proses maserasi tersebut, masing-

masing ekstrak kental yang disatukan dan dipindahkan ke dalam cawan

penguap. Setelah diproses maserasi telah selesai, maka hasil ekstrak kental

yang telah didapatkan dikeringkan dalam oven sampai didapatkan ekstrak n-

heksan yang kering (konsentrasi 100 %) ditimbang.

3.5.3 Uji Aktivitas Toksisitas Dengan metode BSLT

Pengujian dilakukan pada ekstrak kental daun Garcinia benthami Pierre

dengan metode BSLT. Metode BSLT merupakan metode skrining awal

terhadap senyawa aktif yang terdapat pada tanaman yang akan diuji. Selain

itu, proses pengerjaannya pun mudah, relatif tidak mahal, dan tidak

membutuhkan waktu yang lama. Metode BSLT pun mempunyai tingkat

kepercayaan sekitar 95% untuk uji toksisitas suatu senyawa di dalam ekstrak

kasar tanaman.22

Sebelum melakukan pengujian, dilakukan penetasan larva Artemia salina

Leach terlebih dahulu dengan menetaskan telurnya 48 jam. Air laut yang

digunakan untuk penelitian, pH nya diukur terlebih dahulu. Dari hasil

pengukuran didapatkan pH air laut adalah pH 8-9. Penetasan dilakukan

dengan cara merendam telur tersebut dalam air laut secukupnya pada wadah.

Wadah tersebut dibagi menjadi dua bagian dengan menggunakan sterofoam

dan diberi lubang di bagian bawahnya. Wadah yang telah dibagi menjadi dua

bagian tersebut, sebagian diberi lakban pada samping wadah dan ditutupi

aluminium foil diatasnya serta tidak dikenai sinar lampu dan yang sebagian

lagi tidak dilakban dan tidak diberikan aluminium foil di atasnya dan diberi

19

sinar lampu. Perlakuan tersebut digunakan untuk meletakkan telur pada

tempat yang tidak di terang/gelap sehingga telur dapat menetas dan berpindah

ke lubang pada daerah yang tidak diberi sinar lampu.

Setelah didapatkan larva Artemia salina Leach, dilakukan penimbangan

pada ekstrak n-heksan sebanyak 2000 mg. Kemudian dilakukan pengenceran

dengan akuades, akan tetapi karena n-heksan merupakan pelarut non polar

sehingga pada ekstraknya diberikan tambahan 2 ml larutan DMSO dalam

labu 100 ml ditambahkan aquades sampai batas kalibrasi. Kemudian

dilakukan pengenceran dengan membuat konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 200

ppm, 500 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm, 2500 ppm, 5000 ppm, 10.000 ppm, dan

15.000 ppm dari masing-masing dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali

(triplikat). Kemudian dimasukkan 10 ekor larva Artemia salina Leach ke

dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 9 ml air laut dan dicampurkan 1

ml larutan pengenceran dari masing-masing konsentrasi 50 ppm, 100 ppm,

200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm, 2500 ppm, 5000 ppm, 10.000 ppm,

dan 15.000 ppm. Sehingga didapatkan konsentrasi ekstrak pada tabung reaksi

terisi larva Artemia salina Leach yaitu 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100

ppm, 150 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, dan 1500 ppm, karena adanya

penambahan dengan 9 ml air laut dan 1 ml ekstrak. Untuk memastikan efek

DMSO terhadap larva Artemia salina Leach dilakukan uji BSLT hanya

dengan menggunakan DMSO dengan cara memasukkan 2 ml DMSO di

dalam labu 100 ml tanpa penambahan ekstrak ditambahkan aquades sampai

batas kalibrasi labu tersebut. Kemudian dilakukan pengenceran dengan

membuat konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm 1500

ppm, 2500 ppm, 5000 ppm, 10.000 ppm, 15.000 ppm, dan 20.000 ppm. 10

ekor larva Artemia salina Leach dimasukkkan ke dalam tabung reaksi

kemudian diambil 9 ml air laut dan ditambahkan 1 ml dari pengenceran

DMSO tersebut, sehingga konsentrasi DMSO pada masing-masing tabung

reaksi yaitu yaitu 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 250

ppm, 500 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm, dan 2000 ppm. Selain itu, pembuatan

kontrol negatif pada air laut juga telah dilakukan. Dimasukkan 10 ekor larva

20

Artemia salina Leach ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 ml air laut

tanpa penambahan ekstrak.

3.5.4 Pengukuran Toksisitas

Uji toksisitas yang dilakukan dengan metode BSLT menggunakan larva

Artemia salina Leach terhadap ekstrak n-heksan. Sehingga diperoleh suatu

data yang kemudian diolah dengan menggunakan metode analisis probit

untuk menentukan nilai LC50.

Pengukuran dilakukan dengan menghitung jumlah Artemia salina Leach

yang mati sebanyak 50 % dari total larva uji (10 ekor pada tabung reaksi).

Kemudian nilai LC50 dihitung dengan memasukkan angka probit (50%

kematian larva uji). Efek toksisitas dihitung dari persen kematian larva

Artemia salina Leach.23

% kematian =

x 100 %

Kemudian membuat persamaan regresi linier:24

y = a+bx

y = nilai probit,

x = log konsentrasi.

a =Intercept (garis potong)

b = Slope (kemiringan dari garis regresi linear)

LC50 adalah nilai y yang dimasukkan ke dalam nilai x = 50%. Apabila pada

kontrol ada larva yang mati, maka persen kematian ditentukan dengan rumus

Abbot: 23

% kematian =

x 100 %

Keterangan :

21

T = jumlah larva uji yang mati,

K = jumlah larva kontrol yang mati

10 = jumlah larva uji.

3.5.5 Analisis Data Toksisitas

Ada banyak cara untuk menentukan nilai LC50. Salah satu cara yaitu

dengan metode probit. Cara ini dilakukan dengan menghitung frekuensi (%

respon) efek yang ditimbulkan kemudian dihubungkan dengan dosis dalam

skala logaritma, maka akan diperoleh kurva dengan bentuk sigmoid ( ʃ ).

Bagian tengah kurva yaitu, antara 16-84 % respon cukup proporsional (lurus)

untuk memperkirakan efek hubungan dosis versus respon, baik efek

farmakologi (ED50) atau toksikologi (LC50). Sedangkan bagian yang tidak

lurus, menunjukkan respon kematian kurang dari 16% atau lebih dari 84%

dapat diluruskan dengan memprobitkan.7

Untuk menghitung LC50 berdasarkan metode probit, berikut merupakan

langkah pembuatan perhitungan LC50, yaitu : 7

1. Mempunyai tabel probit

2. Menentukan nilai probit dari % kematian tiap kelompok hewan uji

3. Menentukan log dosis tiap-tiap kelompok

4. Menentukan persamaan garis lurus hubungan antara nilai probit

dengan log dosis, y= ax+b

5. Masukkan nilai 5 (probit dari 50% kematian hewan coba) pada

persamaan garis lurus, pada nilai y. Nilai LC50 dihitung dari nilai anti

logX pada saat Y= 5.

Dari langkah-langkah yang telah disebutkan diatas, maka pada penelitian

akan dibuat:

1. Data persentase kematian larva Artemia salina Leach dilihat pada

tabel probit sehingga diperoleh nilai probit,

22

2. Kemudian membuat grafik antara log konsentrasi (x) dan nilai

probit (y) sehingga diperoleh persamaan regresi linier y = a+bx.

3. Masukkan nilai y = 5 (probit dari 50%) pada persamaan y=a+bx,

maka nilai LC50 ditentukan dengan nilai x

4. Selanjutnya nilai X dikonversikan ke bentuk antilog.

Ekstrak dikatakan bersifat toksik jika harga LC50

< 1000 ppm, sedangkan

untuk senyawa murni jika LC50


23

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Ekstraksi Daun Garcinia benthami Pierre

Ekstraksi dibuat dari daun Garcinia benthami Pierre yang diambil sebanyak 6

kg daun segar dari Kebun Raya Bogor. Pengeringan daun dilakukan di Balai

Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik (BALITRO) agar proses pengeringan

berlangsung lebih cepat. Dari proses pengeringan didapatkan berat daun menjadi

3,5 kg. Daun juga telah diidentifikasi serta determinasi di Pusat Penelitian Biologi

LIPI–Bogor.

Proses pembuatan ekstraksi daun Garcinia benthami Pierre dilakukan dengan

cara maserasi bertingkat, berdasarkan tingkat kepolaran dari masing-masing

pelarut. Pelarut yang digunakan secara berurutan, yaitu n-heksan, etil asetat, dan

methanol. Pada penelitian ini, pelarut yang digunakan adalah n-heksan.

Dari hasil proses maserasi didapatkan filtrat akhir pelarut n-heksan sebanyak

1100 ml. Hasil ekstrak kental dari daun Garcinia benthami Pierre yang didapat

sebanyak 5 g. Hasil ekstrak kental yang telah didapat, ditimbang sebanyak 2 g

kemudian dilakukan pengenceran pada konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50

ppm, 100 ppm, 150 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, dan 1500 ppm. Untuk

melarutkan ekstrak n-heksan perlu ditambahkan DMSO sebanyak 2 ml.

Penambahan DMSO pada ekstrak n-heksan sebelum ditambahkan aquades

bertujuan untuk membantu kelarutan senyawa uji dalam aquades sehingga

senyawa dapat terlarut secara merata.

4.2 Perhitungan Nilai LC50

Hasil potensi aktivitas antikanker dapat diketahui dari jumlah kematian larva

Artemia salina Leach karena disebabkan adanya pengaruh dari pemberian ekstrak

daun Garcinia benthami Pierre pada konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm,

100 ppm, 150 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm dan 1500 ppm pada tabung

24

reaksi. Hal ini disebabkan karena adanya pengenceran akibat penambahan air laut

9 ml pada tabung reaksi.

Tabel 4.1. Mortalitas Larva Artemia salina Leach dengan Ekstrak n-heksan Daun

Garcinia benthami Pierre

Ekstrak n-heksan daun


Mortalitas larva Artemia salina Leach

Konsentrasi Pengulangan I Pengulangan II Pengulangan III % mati

5 ppm 0 1 0 3,33

10 ppm 0 1 1 6,67

20 ppm 1 1 1 10

50 ppm 1 2 1 16,67

100 ppm 2 1 3 20

150 ppm 3 2 2 23,33

250 ppm 2 3 3 26,67

500 ppm 3 3 3 30

1000 ppm 4 3 3 33,33

1500 ppm 4 3 4 36,67

Kontrol negatif (air laut) 0 0 0 0,00

Hasil Artemia salina Leach yang mengalami kematian dengan

penambahan ekstrak n-heksan yang telah dilakukan 3 kali pengulangan (triplikat)

sehingga didapatkan persen kematian dari masing-masing konsentrasi sebagai

berikut:

1. Pada konsentrasi 5 ppm menunjukkan persen kematian larva Artemia

salina Leach sebesar 3, 33%.

2. Pada konsetrasi 10 ppm menunjukkan persen kematian larva Artemia

salina Leach sebesar 6,67%.

3. Pada kosentrasi 20 ppm menunjukkan persen kematian larva Artemia

salina Leach sebesar 10%.

25

4. Pada konsentrasi 50 ppm menunjukkan persen kematian larva Artemia

salina Leach sebesar 16,67%.

5. Pada konsentrasi 100 ppm menunjukkan persen kematian larva

Artemia salina Leach sebesar 20%.


Artemia salina Leach sebesar 23,33%




Artemia salina Leach sebesar 30%

9. Pada konsnetrasi 1000 ppm menunjukkan persen kematian larva


10. Pada konsnetrasi 1500 ppm menunjukkan persen kematian larva


11. Pada kontrol negatif menunjukkan persen kematian larva Artemia

salina Leach sebesar 0,00%

Dari tabel 4.1 menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak n-

heksan daun Garcinia benthami Pierre yang diberikan pada larva Artemia salina

Leach maka semakin tinggi pula persen larva kematian Artemia salina Leach.

Akan tetapi kematian 50% larva didapatkan pada konsentrasi >1000 ppm

sehingga ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre disimpulkan tidak

mempunyai potensi toksik dengan uji BSLT.

Berikut hasil analisis uji toksisitas ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami

Pierre dengan metode (BSLT) pada tabel di bawah ini.

26

Tabel 4.2 Data Hasil Uji Toksisitas Ekstrak n-heksan Daun Garcinia benthami

Pierre dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

Hasil Uji Hasil Perhitungan

Konsentrasi

(ppm)

Log

konsentrasi

(X)

% mati Probit (Y) X2 Y

2 XY

0 0,00 0,00 0,00 0 0 0

5 0,69 3,33 3,1616 0,48 9,99 2,18

10 1 6,67 3,5015 1 12,26 3,50

20 1,30 10 3,7184 1,69 13,83 4,83

50 1,69 16,67 3,8877 2,86 15,11 6,57

100 2 20 4,1684 4 17,38 8,34

150 2,18 23,33 4,2710 4,75 18,24 9,31

250 2,39 26,67 4,3781 5,71 19,17 10,46

500 2,69 30 4,4756 7,24 20,03 12,04

1000 3 33,33 4,5684 9 20,87 13,70

1500 3,18 36,67 4,6602 10,11 21,72 14,82

∑ 20,12 40,79 46,84 168,6 85,75

Nilai slope (m) = ∑( )∑( ) ∑( )

(∑( )) ∑( )

Intersep (b) = ∑( )∑( ) ∑( ) ∑

(∑( )) ∑( )

Sehingga nilai slope (m) = ( ) ( ) – ( )

( ) ( )

=

=

= 0,57

27

Intersep (b) = ( )( ) ( )( )

( ) ( )

=

=

= 2,91

Sehingga persamaan garis lurus hubungan antara Y (nilai probit dari %

kematian) dengan X (log dosis) adalah Y = 0,57X +2,91

Y=0,57X+2,91

5=0,57X+2,91

2,09=0,57X

X=3,6

Antilog 3,6= 3981, jadi LC50 untuk zat uji diatas adalah 3981 ppm.

Untuk memastikan kebenaran perhitungan, maka dilakukan perhitungan

regresi linier dengan Microsoft Excel.

Grafik 4.1 Grafik Regresi Linier ekstrak daun Garcinia benthami Pierre

Sehingga didapatkan persamaan linier Y= 0,581x + 2,907

y = 0,5814x + 2,9075 R² = 0,9694

0

1

2

3

4

5

0 1 2 3 4

Nila

i Pro

bit

Log Konsentrasi

Regresi Linier Ekstrak Daun Garcinia benthami Pierre

Series1

Linear (Series1)

28

Berdasarkan persamaan linier tersebut didapatkan nilai LC50 :

Y= 0,581x + 2,907

5= 0,581x + 2,907

2,093 = 0,581x

X= 3,6

Antilog 3,6 = 3981

Dari tabel 4.2 menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan mempunyai nilai

LC50 sebesar 3981 ppm dapat dikatakan memiliki nilai LC50>1000 ppm. Ekstrak

dikatakan bersifat toksik jika harga LC50

< 1000 ppm, sedangkan untuk senyawa

murni jika LC50


Hal ini menunjukkan

bahwa ekstrak n-heksan memiliki nilai LC50> 1000 ppm bersifat non toksik

terhadap larva Artemia salina Leach sehingga diperkirakan tidak memiliki potensi

antikanker.

Perhitungan nilai LC50 juga dilakukan dengan menggunakan metode analisis

probit dengan software SPSS 16. Melalui perangkat tersebut dapat ditentukan

hubungan linearitas antara konsentrasi formula terhadap probit kematian dari larva

udang. Berdasarkan pengujian menggunakan software SPSS 16 tersebut,

diperoleh nilai LC50 sebesar 4587,051 (lampiran 7). Distribusi data juga sudah

diuji menggunakan uji normalitas. Sampel yang digunakan <50, maka

menggunakan uji normalitas dengan Kolmogorov-Smirnov. Nilai p-value yang

diperoleh > 0,05 artinya distribusi data normal (lampiran 7).

Untuk menguji apakah kematian larva Artemia salina Leach disebabkan

karena pengaruh DMSO maka dilakukan pengujian BSLT dengan DMSO tanpa

ekstrak. Hasil pengujian dengan DMSO dapat dilihat pada tabel 4.3. Hasil

pengujian menunjukkan bahwa pada kadar DMSO yang tertinggi sebesar 2000

ppm, persentase kematian larva Artemia salina Leach hanya 13.33%. Hal ini

menunjukkan bahwa DMSO sebagai pelarut ekstrak tidak berefek signifikan pada

kematian larva pada konsentrasi ekstrak 2000 ppm yang mengakibatkan kematian

larva sebesar 90%. Bila dihitung 2000 ppm DMSO setara dengan 0.2 % kadar

29

DMSO dalam larutan. Hal ini masih sesuai dengan penelitian sebelumnya pada sel

mast yang menyebutkan kadar DMSO 0.4% tidak menyebabkan eksositosis

histamine dari sel mast.25

Selain itu, pada penelitian lain juga menyebutkan

penambahan DMSO tidak boleh lebih dari 50 μl, karena jika lebih akan dapat

menyebabkan kematian pada larva udang.26

Pada penelitian ini konsentrasi akhir

terbesar pada ekstrak kadar DMSO nya 20 μl. Sedangkan kontrol negatif

(mortalitas 0%) 10 ml air laut tanpa pemberian ekstrak yang telah diberikan tidak

memberikan kematian pada larva Artemia salina Leach sehingga larva yang mati

merupakan pengaruh senyawa toksik dari ekstrak daun Garcinia benthami Pierre

yang diuji bukan karena pengaruh faktor lainnya.

Tabel 4.3 Mortalitas Larva Artemia salina Leach dengan Pemberian DMSO

Sebagai Kontrol

DMSO

Mortalitas larva Artemia salina Leach

Konsentrasi Pengulangan I Pengulangan II Pengulangan III % mati

Kontrol negatif (air laut) 0 0 0 0,00

5 ppm 0 0 0 0,00

10 ppm 0 0 0 0,00

20 ppm 0 0 0 0,00

50 ppm 0 0 0 0,00

100 ppm 0 0 0 0,00

150 ppm 0 0 0 0,00

250 ppm 0 0 0 0,00

500 ppm 0 1 0 3,33

1000 ppm 1 1 0 6,66

1500 ppm 1 1 1 10

2000 ppm 2 1 1 13,33

30

BAB 5

SIMPULAN DAN SARAN

5.1 Simpulan

Kesimpulan penelitian ini adalah pada penghitungan nilai LC50 didapatkan

ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami Pierre mempunyai nilai sebesar

3981 ppm menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan daun Garcinia benthami

Pierre tidak mempunyai potensi toksisitas terhadap larva Artemia salina

Leach sehingga tidak dapat dijadikan sebagai obat antikanker.

5.2 Saran

Berdasarkan kesimpulan, penelitian selanjutnya disarankan untuk

dilakukan penelitian tentang potensi/manfaat ekstrak n-heksan daun

Garcinia benthami Pierre selain dari potenssi toksik atau antikanker.

Firman Allah SWT dalam surah Al-An’am (6) ayat 141 menyebutkan:

Artinya: “Dan Dia-lah yang menjadikan kebun-kebun yang

berjunjung dan yang tidak, berjunjung, pohon kurma, tanam-tanaman

yang bermacam-macam buahnya, zaitun dan delima yang serupa (bentuk

dan warnanya), tetapi tidak sama (rasannya) Makanlah dari buahnya

(yang bermacam-macam itu) bila dia berbuah, dan tunaikanlah haknya di

hari memetik hasilnya (dengan dikeluarkan zakatnnya); dan janganlah

kamu berlebih-lebihan. Sesungguhnya Allah tidak menyukai orang-orang

yang berlebihan." (Q.S Al An’am: 141).

31

DAFTAR PUSTAKA

1. Ramadhani, A. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Sukun (Artocarpus

altilis) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp

Lethality Test (BSLT). Tesis. Semarang, 2009.

2. Amelia, P. Isolasi, Elusidasi, Struktur dan uji aktivitas antioksidan senyawa

kimia dari daun Garcinia Benthami. Tesis. Jakarta: Farmasi UI, 2011.

3. Mutia, D.Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Buah Anggur (Vitis vinifera)

Terhadap Larva Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality

Test (BSLT). Tesis. Yogyakarta: Fakultas Kedokteran Universitas

Diponegoro, 2010.

4. Soemitrat, Juli. Toksikologi Lingkungan. Bandung: Gadjah Mada University

Press, 2005.

5. Goodman, L.S. and Gilman, A. The Pharmacological Basis of

Therapeutics.2nd

ed. N.Y.: The MacMilan Co., 1956.

6. Sax, N.I. et al. Dangerous Properties of Industrial Materials. N.Y.: Reinhold

Pub.Co.,1957.

7. Priyanto. Toksikologi Mekanisme, Terapi Antidotum, dan Penilaian Resiko.

Depok : Lembaga Studi dan Konsultasi Farmakologi Indonesia (LESKONFI),

2009.

8. Garcinia benthami Pierre, Fl. Forest. Conchinch.

http://www.asianplant.net/Clusiaceae/Garcinia_benthami.htm.

9. Sari, R. Garcinia (Clusiaceae) Di Kebun Raya Bogor : Fisiognomi,

Keragaman dan Potensi, 2000.

10. Rachman, I. Sumber Koleksi Herbarium Bogoriense. Bogor: Bidang Botani

Pusat Penelitian Biologi-LIPI, 2003.

11. Widjhati R, A., Supriyono dan Subintoro. Pengembangan Senyawa Bioaktif

dari Biota Laut. Forum Bioteknologi Kelautan dan Perikanan. Pusat Riset

Pengolahan Produk dan Sosial Ekonomi Kelautan dan Perikanan, Depertemen

Kelautan dan Perikanan, 2004.

http://www.asianplant.net/Clusiaceae/Garcinia_benthami.htm

32

12. Alam G. Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Sebagai Bioassay Dalam Isolasi

Senyawa Bioaktif dari Bahan Alam. Majalah Farmasi dan Farmakologi.,

2002.

13. Meyer BN, Ferrigni NR, Putnam JE, Jacobsen LB, Nichols DE, McLaughlin

JL. Brine Shrimps: A Convenient General Bioassay for Active Plant

Constituent. Planta Medica, 1982.

14. Purwakusumah W. Artemia Salina (Brine Shrimp). [terhubung berkala].

http://www. O-fish.com/artemia/php, 2007.

15. Kurniawan, A. Aktivitas Antioksidan dan Potensi Hayati dari Kombinasi

Ekstrak Empat Jenis Tanaman Obat Indonesia. Bogor: Fakultas Matematika

dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor, 2011.

16. Setiarto HB. Deteksi dan uji toksisitas LC50 Senyawa Aflatoksin B1, B2, G1,

G2 Pada Kacang Tanah (Arachis hypogeal L) [skripsi]. Bogor: Fakultas

Matematika dan IPA, Institut Pertanian Bogor, 2009.

17. Moss B. Ecology of Fresh Waters. Norwich: Anglia, 1937

18. Panjaitan, RB. Uji toksisitas akut ekstrak kulit batang pulasari (Alyxiae

Cortex) dengan metode brine Shrimp Lethality test (BSLT). Universitas Sata

Dharma Fakultas Farmasi. Yogyakarta: 2011.

19. Croghan PC. The osmotic and ionic regulation of Artemia salina. Zoology

Journal, 1957.

20. Fenton J. Toxicology : A Case Oriental Approach. Boca Raton; ORC Pr,

2002.

21. Diah SH. Pembenihan udang galah Macrobrahium rosenbergi de Man

[laporan kerja praktik]. Bandung: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan

Alam, Institut Teknologi Bandung, 1991.

22. Lisdawati, V., Wiryowidagyo, S., Kardono S. Brine Shrimp Lethality Test

(BSLT) dari Berbagai Fraksi Ekstrak Daging Buah dan Kulit Biji Mahkota

Dewa (Phaleria macrocarpa).

23. Septyanti, C. Potensi Pelepah Temulawak (Curcuma xanthorriza) Sebagai

Antikanker dan Antioksidan. Bogor: Departemen Kimia Fakultas Matematika

dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor, 2012.

33

24. Rahmah, M. Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Heksana, Diklorometana dan

Metanol Daun Keji Beling (Sericocalyx crispus. L) Terhadap Artemia salina

Leach.

25. Agung EN, et all. Anti-allergic Effects Of 1,5-(4’-HYDROXY-3’-

METHOXYPHENYL)-1,4-PENTADIENE-3-ONE On Mast Cell-Mediated

Allergy Model. Malaysian Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 7, No. 1,

51–71, 2009.

26. Noveri R, et all. Skrining Aktivitas Sitotoksik Ekstrak dan Fraksi Beberapa

Jenis Spon Laut Asal Pulau Mandeh Sumatera Barat.

34

LAMPIRAN

Lampiran 1

Gambar 6.1 Hasil determinasi

35

Lampiran 2

Gambar 6.2 Foto Depan Kaleng Telur Artemia salina Leach

Gambar 6.3 Foto Belakang Kaleng Telur Artemia salina Leach

36

Lampiran 3

Tabel 6.1 Perhitungan % kematian larva Artemia salina Leach, nilai probit, dan

LC50 daun Garcinia benthami Pierre

Hasil Uji Hasil Perhitungan

Konsentrasi

(ppm)

Log

konsentrasi

(X)

% mati Probit (Y) X2 Y

2 XY

0 0,00 0,00 0,00 0 0 0

5 0,69 3,33 3,1616 0,48 9,99 2,18

10 1 6,67 3,5015 1 12,26 3,50

20 1,30 10 3,7184 1,69 13,83 4,83

50 1,69 16,67 3,8877 2,86 15,11 6,57

100 2 20 4,1684 4 17,38 8,34

150 2,18 23,33 4,2710 4,75 18,24 9,31

250 2,39 26,67 4,3781 5,71 19,17 10,46

500 2,69 30 4,4756 7,24 20,03 12,04

1000 3 33,33 4,5684 9 20,87 13,70

1500 3,18 36,67 4,6602 10,11 21,72 14,82

∑ 20,12 40,79 46,84 168,6 85,75

Regresi Linier

y = a+bx

jadi,

y = a+ bx

Y=0,57X+2,91

5=0,57X+2,91

2,09=0,57X

X=3,6

Antilog 3,6= 3981

LC50 = 3981 ppm

37

Lampiran 3

Gambar 6.4 Grafik Regresi Linier ekstrak daun Garcinia benthami Pierre

y = 0,5814x + 2,9075 R² = 0,9694

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

4

4,5

5

0 1 2 3 4

Nila

i Pro

bit

Log Konsentrasi

Regresi Linier

Series1

Linear (Series1)

38

Pembuatan larutan ekstrak induk 20000 ppm :

=

= 20000 µg/ml = 20000 ppm

Pembuatan pengenceran dengan konsentrasi 15000 ppm

M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (15000) (25)

V1 = 18,75 ml

V1 = 187500 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (10000) (25)

V1 = 12,5 ml

V1 = 12500 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (5000) (25)

V1 = 6,25 ml

V1 = 6250 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (2500) (25)

V1 = 3,125 ml

V1 = 3125 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (1500) (25)

39

V1 = 1,875ml

V1 = 1875 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (1000) (25)

V1 = 1,25 ml

V1 = 1250 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (500) (25)

V1 = 0,625 ml

V1 = 62,5 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (200) (25)

V1 = 0,25 ml

V1 = 25 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (100) (25)

V1 = 0,125 ml

V1 = 12,5 µl


M1 V1 = M2 V2

20000 V1 = (50) (25)

V1 = 0, 0625 ml

V1 = 6,25 µl

40

Pembuatan larutan DMSO induk 20000 ppm :

= 0,02

Sehingga persen DMSO yang digunakan pada larutan induk 20000 ppm yaitu

0,02 x 100% = 2%, kadar DMSO dilakukan pengenceran sesuai dengan

pembuatan konsentrasi ekstrak.


M1 V1 = M2 V2

(18,75) (2%) = M2 (25)

M2 = 1,5%

Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 15000 yaitu 1,5%


M1 V1 = M2 V2

(12,5) (2%) = M2 (25)

M2 = 1%

Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 10000 yaitu 1%


M1 V1 = M2 V2

(6,25) (2%) = M2 (25)

M2 = 0,5%



M1 V1 = M2 V2

(3,125) (2%) = M2 (25)

M2 = 0,25%


41


M1 V1 = M2 V2

(1,875) (2%) = M2 (25)

M2 = 0,15%



M1 V1 = M2 V2

(1,25) (2%) = M2 (25)

M2 = 0,1%



M1 V1 = M2 V2

(0,625) (2%) = M2 (25)

M2 = 0,05%



M1 V1 = M2 V2

(0,25) (2%) = M2 (25)

M2 = 0,02%



M1 V1 = M2 V2

(0,125) (2%) = M2 (25)

M2 = 0,01%


42

Pembuatan Pengenceran dengan konsentrasi 50 ppm

M1 V1 = M2 V2

(0,0625) (2%) = M2 (25)

M2 = 0,005%

Sehingga persen DMSO yang terdapat pada larutan 50 yaitu 0,005

43

Lampiran 4

Tabel 6.2 Nilai Probit

47

Lampiran 5

Gambar Alat dan Bahan Penelitian

Gambar 6.5 Simplisia daun Garcinia Gambar 6.6 Proses destilasi pelarut

benthami Pierre n-heksan

Gambar 6.7 Proses maserasi Gambar 6.8 Penyaringan filtat n-heksan daun


Gambar 6.9 Pembuatan ekstrak kental Gambar 6.10 Ekstrak kental daun


48

Gambar 6.11 Pemberian air laut Gambar 6.12 Wadah penetasan

Artemia salina Leach

Gambar 6.13 Telur Artemia salina Leach Gambar 6.14 Ekstrak yang akan

yang akan ditetaskan diencerkan

Gambar 6.15 Tabung pengenceran

49

Lampiran 6

DAFTAR RIWAYAT HIDUP

Nama : Nur Rizqillah

Tempat, tanggal lahir : Jakarta, 7 Juli 1992

Alamat : Jln. Tebet Timur Dalam XI/76 Rt: 008 RW: 006

Jakarta Selatan

No. HP : +62 856 9343 5005

Email : [email protected]

Riwayat Pendidikan :

1. SDN Tebet Timur 20 Pagi (1998-2004)

2. SMPN 73 Jakarta (2004-2007)

3. SMAN 37 Jakarta (2007-2010)

4. PSPD FKIK UIN Jakarta (2010 - Sekarang)

mailto:[email protected]

50

Lampiran 7

uji toksisitas akut ekstrak n heksan daun … · 2.3 definisi operasional ..... bab iii metode...

Documents