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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD CIENCIAS QUÍMICAS
MODALIDAD:
INVESTIGACIÓN
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA DE LA
MEZCLA HIDROALCOHÓLICA DE MATRICARIA CHAMOMILLA Y
URTICA URENS EN RATAS WISTAR
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA
OPTAR AL GRADO DE QUÍMICOS Y FARMACÉUTICOS
AUTORES:
GRACE PATRICIA BORBOR TOMALÁ
KLEBER JAVIER COLOMA ENCALADA
TUTOR (A):
Q.F. GLENDA MARCELA SARMIENTO TOMALÁ M. Sc.
CO – TUTOR (A):
Q.F. ZORAIDA DEL CARMEN BURBANO GÓMEZ M. Sc.
GUAYAQUIL - ECUADOR
2015
i
APROBACIÓN DEL TUTOR
En calidad de tutor/a del Trabajo de Titulación, Certifico: Que he asesorado,
guiado y revisado el trabajo de titulación en la modalidad de investigación,
cuyo título es Evaluación de la actividad antiinflamatoria de la mezcla
hidroalcohólica de Matricaria chamomilla y Urtica urens en ratas wistar,
presentado por Grace Patricia Borbor Tomalá, con cédula de ciudadanía Nº
093085625-7, y por Kleber Javier Coloma Encalada, con cédula de ciudadanía
Nº 092839818-9, previo a la obtención del título de Químicos y Farmacéuticos.
Este trabajo ha sido aprobado en su totalidad y se adjunta el informe de Anti-
plagio del programa URKUND. Lo Certifico.-
Guayaquil, octubre 2015
ii
CERTIFICADO DE URKUND
iii
CERTIFICADO DEL TRIBUNAL
El Tribunal de Sustentación del Trabajo de Titulación de la Srta. GRACE
PATRICIA BORBOR TOMALÁ y del Sr. KLEBER JAVIER COLOMA
ENCALADA después de ser examinado en su presentación, memoria científica
y defensa oral, da por aprobado el Trabajo de Titulación.
iv
CARTA DE AUTORÍA DEL TRABAJO DE TESIS
Guayaquil 15, octubre 2015
Yo, Grace Patricia Borbor Tomalá y Kleber Javier Coloma Encalada,
autores de este trabajo declaro ante las autoridades de la Facultad de Ciencias
Químicas de la Universidad de Guayaquil, que la responsabilidad del contenido
de este TRABAJO DE TITULACIÓN, me corresponde a mi exclusivamente; y
el patrimonio intelectual de la misma a la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad de Guayaquil.
Declaro también es de mi autoría, que todo el material escrito, salvo el que
está debidamente referenciado en el texto. Además ratifico que este trabajo no
ha sido parcial ni totalmente presentado para la obtención de un título, ni en
una Universidad Nacional, ni una Extranjera.
v
AGRADECIMIENTO
A Dios, a mí mamá Mariana Encalada, quien fue mí apoyo incondicional, mí
pilar en todo momento; mí tutora la Q.F. Glenda Sarmiento M. Sc., quien nos ha
guiado con su esfuerzo y apoyo a esta gran meta final; a nuestra co-tutora Q.F.
Zoraida Burbano M. Sc., al Dr. Oswaldo Pesantes, a mí amiga y compañera de
tesis Grace Borbor y a mis amigos. Además agradezco a la Facultad de
Ciencias Químicas y a mis maestros por los conocimientos adquiridos.
Kleber Coloma Encalada.
vi
AGRADECIMIENTO
A Dios, a mis padres, a mí esposo, a mí hijo Jeremy que mediante sus sonrisas y
lágrimas fortaleció mí entusiasmo de persuadir este objetivo, a mis amigos
Lourdes Puig, Kleber Coloma que sin su compañía no hubiésemos logrado
obtener resultados en este trabajo, a Kenny Oleas, Cyntia Betancourt que nos
brindaron su apoyo desde la distancia, y a Fernando Lara que siempre nos
brindó su ayuda incondicional. Agradezco además a la Universidad de
Guayaquil, Facultad de Ciencias Químicas, a mí tutora Q.F. Glenda Sarmiento
M. Sc. debó de agradecerle su comprensión, paciencia y dedicación, a nuestra
querida cotutora Q.F. Zoraida Burbano M. Sc. que nos facilitó el área de
PROGECA y al Q.F. Oswaldo Pesantes que nos permitió trabajar en el
Laboratorio de Fitoquímica en los inicios de este proyecto.
Grace Borbor Tomalá.
vii
ÍNDICE GENERAL
APROBACIÓN DEL TUTOR i
CERTIFICADO DE URKUND ii
CERTIFICADO DEL TRIBUNAL iii
CARTA DE AUTORÍA DEL TRABAJO DE TESIS iv
AGRADECIMIENTO v
ÍNDICE GENERAL vii
ÍNDICE DE FIGURAS xi
ÍNDICE DE TABLAS xii
RESUMEN xv
ABSTRACT xvi
Introducción 1
Planteamiento del problema 3
Formulación del problema 5
Justificación 6
Objetivos 8
Hipótesis 9
Variables 10
Variables, conceptualización e indicadores 11
CAPITULO I
1.1 Antecedentes 12
1.1.1 Estudios de la Urtica 12
1.1.2 Estudios de la de la Matricaria chamomilla 13
1.1.3 Estudio del arte 15
1.2 Fundamentos teóricos 17
1.2.1 Ortiga 17
viii
1.2.1.1 Características macroscópicas y microscópicas 17
1.2.1.2 Composición química 18
1.2.1.3 Mecanismo de acción 19
1.2.1.4 Contraindicaciones 19
1.2.2 Manzanilla 19
1.2.2.1 Características macroscópicas y microscópicas 20
1.2.2.2 Composición química 20
1.2.2.3 Mecanismo de acción 22
1.2.2.4 Contraindicaciones 23
1.2.3 Flavonoides 23
1.2.4 Taninos 24
1.2.5 Mecanismo de acción de los flavonoides y taninos 25
1.2.6 Carragenina 26
1.2.6.1 Mecanismo de acción de la carragenina 26
1.2.7 Inflamación 27
1.2.7.1 Factores desencadenantes 28
1.2.7.2 Respuesta inmune 29
1.2.7.3 Mecanismos de acción que intervienen en la inflamación 30
1.2.8 AINEs (Antiinflamatorios No Esteroides) 31
1.2.8.1 Fármacos antiinflamatorios (AINEs) 31
1.2.8.2 Mecanismo de acción de los AINEs 33
1.2.8.3 Indicaciones terapéuticas 36
1.2.8.4 Reacciones adversas medicamentosas 36
1.2.8.5 Efectos indeseables 37
1.2.8.5.1 Efectos gastrointestinales 37
1.2.8.5.2 Efectos cardiovasculares 38
1.2.8.5.3 Efectos renales 39
1.2.8.5.4 Hipertensión arterial 39
1.3 Glosario 40
CAPITULO II
2.1 Métodos científicos empleados en la investigación 45
2.1.1 Diagrama de flujo 45
2.1.2 Métodos teóricos 46
ix
2.1.3 Métodos empíricos 46
2.1.4 Métodos matemáticos o estadísticos 46
2.2 Metodología 46
2.2.1 Adquisición de las especies 47
2.2.2 Parámetros Físico y Fisicoquímicos de las especies vegetales 47
2.2.2.1 Humedad 47
2.2.2.2 Cenizas 48
2.2.2.3 Screening− Taminzaje Fitoquímico 49
2.2.2.3.1 Alcaloides 49
2.2.2.3.1.1 Ensayo de Dragendorff 49
2.2.2.3.1.2 Ensayo de Mayer 49
2.2.2.3.1.3 Ensayo de Wagner 50
2.2.2.3.2 Saponinas 50
2.2.2.3.3 Cumarinas 50
2.2.2.3.4 Triterpenos y/o esteroides 50
2.2.2.3.4.1 Ensayo de Lieberman-Bouchard 50
2.2.2.3.5 Azúcares reductores 51
2.2.2.3.5.1 Ensayo de Fehling 51
2.2.2.3.6 Compuestos fenólicos y/o taninos 52
2.2.2.3.6.1 Ensayo de Cloruro Férrico 52
2.2.2.3.7 Flavonoides 52
2.2.2.3.7.1 Ensayo de Shinoda 52
2.2.3 Extractos Hidroalcohólicos 53
2.2.3.1 Extracción de los principios activos de Matricaria chamomilla y Urtica
urens 53
2.2.3.2 Obtención de las mezclas hidroalcohólicas de Matricaria chamomilla y
Urtica urens 53
2.2.4 Parámetros Físico y Fisicoquímicos de los extractos hidroalcohólicos y
mezcla 54
2.2.4.1 Características Organolépticas 54
2.2.4.1.1 Olor 54
2.2.4.1.2 Color 54
2.2.4.2 Determinación de los Sólidos Totales 55
2.2.4.3 Determinación de la Densidad Relativa 56
x
2.2.4.4 Determinación del pH de los extractos 56
2.2.5 Cuantificación de principios activos 57
2.2.5.1 Cuantificación de quercetina 57
2.2.5.2 Cuantificación de taninos 59
2.2.6 Estudio Farmacológico 60
2.2.6.1 Material biológico 60
2.2.6.2 Materiales y Métodos “Actividad Antiinflamatoria” 60
2.2.6.2.1 Materiales 60
2.2.6.2.2 Reactivos 60
2.2.6.3 Método 61
2.2.6.3.1 Conformación de grupos tratamientos 61
2.2.6.3.2 Inducción del Edema Plantar 63
2.2.6.3.3 Medición de la Inflamación plantar 64
2.2.7 Bioética 64
2.2.8 Resultados 65
2.2.9 Cálculos de los resultados 65
2.2.10 Análisis de los resultados 65
2.3 Tipo de investigación 66
2.4 Diseño experimental de la investigación 66
CAPITULO III
3.1 Análisis Físico y Fisicoquímicos 67
3.1.1 Humedad 67
3.1.2 Cenizas 68
3.1.3 Screening o Tamizaje Fitoquímico 69
3.1.4 Análisis Físico y Fisicoquímicos en los extractos hidroalcohólicos
independientes y mezcla hidroalcohólica 71
3.2 Cuantificación de los principios activos presentes en las especies vegetales
y mezcla hidroalcohólica (80O:20M) 72
3.2.1 Quercetina 73
3.2.2 Taninos 74
3.3 Evaluación de la Actividad Antiinflamatoria 75
3.3.1 Primera fase 75
xi
3.3.2 Segunda fase 82
Conclusiones 91
Recomendaciones 93
Referencias Bibliográficas 94
Anexos 101
xii
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura I. Estructura química del α-bisabolol.
Figura II. Estructura molecular de los flavonoides.
Figura III, Clasificación de los taninos.
Figura IV. Estructura química de la carragenina.
Figura V. Aspectos básicos en un proceso inflamatorio.
Figura VI. Fases de la inflamación.
Figura VII. Isoformas de la ciclo-oxigenasa.
Figura VIII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la primera
Fase de la primera hora.
Figura IX. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la primera
Fase de la tercera hora.
Figura X. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la primera
Fase de la quinta hora.
Figura XI. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda
Fase de la primera hora.
Figura XII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda
Fase de la tercera hora.
Figura XIII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda
Fase de la quinta hora.
xiii
ÍNDICE DE TABLA
Tabla I. Conceptualización de las variables e indicadores
Taba II. Composición Química de la Urtica urens
Tabla III. Componentes del aceite esencial de manzanilla (matricaria
chamomilla).
Tabla IV. Clasificación de los AINEs, según su capacidad para inhibir la COX.
Tabla V. Diluciones para la elaboración de la curva de calibrado.
Tabla VI. Tratamiento de los extractos para la cuantificación de quercetina.
Tabla VII. Grupos trabajados en la valoración para la Actividad Antiinflamatoria:
Urtica urens y Matricaria chamomilla de las Mezclas hidroalcohólicas (Primer
Ensayo).
Tabla VIII. Grupos trabajados en la valoración para la Actividad Antiinflamatoria:
Urtica urens y Matricaria chamomilla de los extractos independientes frente a la
mezcla hidroalcohólica 80O:20M (Segundo Ensayo).
Tabla IX. Tabla de resultados de los porcentajes de humedad en especies
vegetales.
Tabla X. Tabla de resultados de los porcentajes de cenizas en especies
vegetales.
Tabla XI. Screening Fitoquímico de las especies vegetales de ortiga (Urtica
urens) y manzanilla (Matricaria chamomilla), en extracto acuoso y hidro-
alcohólico.
Tabla XII. Caracterización Organoléptica de los extractos independientes y
mezcla hidro-alcohólica (80O:20M).
Tabla XIII. Determinación de Solidos Totales; Densidad Relativa, y pH de las
especies vegetales y mezcla hidroalcohólica (80O:20M)
Tabla XIV. Cuantificación de Quercetina de ambas especies vegetales y mezcla
hidroalcohólica (80O:20M) en alcohol al 70%.
Tabla XV. Cuantificación de Taninos Totales de extracto de Urtica urens y
mezcla hidroalcohólica (80O:20M)
xiv
Tabla XVI. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con
su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la primera fase de la evaluación durante la Primera Hora Post-
Inducción
Tabla XVII. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con
su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la primera fase de la evaluación durante la Tercera Hora post-
inducción.
Tabla XVIII. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con
su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la primera fase de la evaluación durante la Quinta Hora post-
inducción.
Tabla XIX. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con
su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Primera Hora post-
inducción.
Tabla XX. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con
su respectiva desviación estándar, y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Tercera Hora post-
inducción.
Tabla XXI. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con
su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Quinta Hora post-
inducción.
xv
RESUMEN
La acción farmacológica de fármacos con fines terapéuticos; está unida al riesgo
de aparición de efectos indeseables, debe evitarse el uso inadecuado de
medicamentos. Se han desarrollado estudios a partir de extractos de manzanilla
y ortiga por separado, demostrando su actividad como antiinflamatorio. El
presente estudio tuvo como objetivo evaluar la mezcla de los extractos
hidroalcohólicos de ambas especies vegetales, y extractos independientes. El
estudio se realizó en dos fases: la primera consistió en determinar que
concentración de las mezclas hidroalcohólicas; presentó menor porcentaje de
inflamación, se formó 5 grupos de 4 animales cada uno, un grupo control
negativo sin tratamiento con inflamación, control positivo tratado con diclofenaco,
los grupos tratados con las mezclas de manzanilla y ortiga (20:80); (50:50);
(80:20), respectivamente. En tanto, que en la segunda fase consistió en
comparar la mezcla hidroalcohólica con mayor actividad farmacológica de la fase
uno, frente a los extractos independientes. En cada una de las fases se
administró una hora antes los tratamientos, luego se indujo la inflamación con
carragenina al 2%, a nivel plantar en los animales de los diferentes grupos
tratados, se realizó las lecturas a partir de la tercera hora post- inducción. En la
primera fase, de la quinta hora se encontró los siguientes porcentajes de
inflamación: control negativo (48,6±10%), diclofenaco (34,61±4,43%), y el grupo
muestra 80O:20M (14,35±3,59%); determinando que el grupo muestra 80O:20M
posee mayor actividad antiinflamatoria. En la segunda fase, de la quinta hora se
encontró los siguientes porcentajes de inflamación: control negativo (45±20%),
grupo muestra 80O:20M (13,6±5%), diclofenaco (22,9±2,95%). De lo que se
puede concluir que, el efecto antinflamatorio lo presentó la mezcla
hidroalcohólica (80O:20M), al potenciar su acción mediante el uso de dos
especies vegetales.
Palabras claves: extractos hidroalcohólicos; Urtica urens, Matricaria
chamomilla; mezcla hidroalcohólica; carragenina; actividad antiinflamatoria.
xvi
ABSTRACT
The pharmacological action of drugs with therapeutic purposes; is attached to the
risk of occurrence of undesirable effects, the inappropriate use of medications
should be avoided. Studies from extracts of Chamomile and nettle separately,
showing as an anti-inflammatory activity have been developed. The present study
aimed to evaluate the mix of both plants species hydroalcoholic extracts, and
independent extracts. The work was carried out in two phases: the first was to
determine concentration of hydroalcoholic mixtures; presented lower percentage
of inflammation, It was formed 5 groups of 4 animals each one, a negative control
group without treatment with inflammation, positive control treated
with diclofenac, the groups treated with mixtures of Chamomile and nettle
(20:80); (50:50); (80:20), respectively. Meanwhile, that in the second phase it
consisted in comparing the mixture hydro-alcoholic with increased
pharmacological activity of the phase one, against independent extracts. In each
of the phases was administered one hour before the treatments, after
inflammation was induced with carrageenan to 2%, to level planting in the
different groups of treated animals, held readings from the third hour post-
induction. In the first phase, the fifth time found the following percentages of
inflammation: negative control (48,6±10%), diclofenac (34,61±4.43%), and
the Group shows 80O:20M (14,35±3.59%); determining the group
shows 80O:20M has greater anti-inflammatory activity. The following percentages
of inflammation was found in the second phase of the fifth hour: negative control
(45±20%), group shows 80O:20 M (13,6±5%), diclofenac (22,9±2.95%). Can in
fact the anti-inflammatory effect presented the hydro-alcoholic (80O:20 M), the
mixture to enhance its action through the use of two plant species.
Key words: extracts hydroalcoholic; Urtica urens, Matricaria chamomilla; mixing
hydroalcoholic; carrageenan; anti-inflammatory activity.
1
INTRODUCCIÓN
La inflamación se debe a procesos fisiopatológicos que se produce como una
respuesta a estímulos externos, como: infecciones, lesiones en las que el
organismo necesita defenderse ante estas agresiones (Rodríguez, s. f.). La
inflamación se produce en algunas fases en la existe vasodilatación local,
infiltración leucocitaria, aumento de la permeabilidad capilar y signos de fase
crónica, se puede presentar degeneración y fibrosis de tejidos afectados, en este
mecanismo intervienen factor activador de plaquetas, eicosanoides, citocinas,
histamina y bradicinina (Salaices, 2012).
En muchas ocasiones la inflamación es temporal, proceso característico de la
misma, está determinada en relación al tiempo de acuerdo a la causa que la
desencadenó; en tanto que otras, cuando las agresiones son autoinmunes
generan procesos en cascada (vasodilatación, quimiotaxis), lo que conlleva a
una patología crónica; haciendo así, que el paciente consuma frecuentemente
ciertos fármacos que alivien el malestar que se produce como consecuencia esta
afectación (Herrera, García, Herrera, Pérez, & Saura, 2006).
Por otro lado, existen fármacos Antinflamatorios No Esteroideos (AINEs), que
poseen actividad antiflogística; debido a sus acciones farmacológicas, con
frecuencia se autoprescriben sin control médico para aliviar dolores, ya sea
como fármacos aislados o asociados. Muchos de ellos presentan una capacidad
elevada de provocar reacciones adversas de intensidad y gravedad, de las
cuales generalmente, los consumidores no son conscientes de la toxicidad que
puede ser aguda o crónica en dependencia del consumo; resulta de gran interés
epidemiológico, siendo motivo de preocupación a nivel mundial.
En muchos países utilizan raíces y hojas de la Urtica urens y las flores de la
Matricaria como tratamiento en la medicina tradicional. Estudios realizados han
demostrado que el aceite esencial y los flavonoides de la Matricaria chamomilla,
2
serían los responsables del efecto farmacológicos mencionado, al inhibir la
inflamación, y regular las distintas actividades celulares de las ciclooxigenasas
(COX), además, bloquea la formación de las prostaglandinas, leucotrienos. En
tanto, que el mecanismo de acción de la ortiga, radica fundamentalmente en
inhibir la COX y LOX (lipooxigenasas); la producción de prostaglandinas y
leucotrienos se encuentran disminuidos. Lo que ha sido demostrado en varios
modelos con animales en la que algunos flavonoides inhiben la inflamación
crónica a través de diversos mecanismos (Muñoz, et al., 2012).
Por lo expuesto, se hace necesario realizar una investigación que permita
aportar conocimientos sobre la actividad sinérgica de los componentes que
posee la Matricaria chamomilla y la Urtica urens, y que presentan actividad
antiinflamatoria. El presente estudio comprende varios capítulos, los mismos que
se encuentran distribuidos como a continuación se detalla: en la primera sección
encontraremos lo relacionado objetivos, hipótesis, variables que se miden para
establecer la actividad anti-inflamatoria; planteamiento del problema,
justificación, antecedentes de las bases conceptuales en la que se fundamenta
la realización de esta investigación de estudios que existen, y se ha demostrado
que debido a la presencia de principios activos como: flavonoides y taninos
actúan como anti-inflamatorios.
El segundo capítulo, incluye lo referente al mecanismo de inflamación,
componentes presentes en la manzanilla y ortiga; mecanismo de acción,
acciones farmacológicas con respecto a los grupos químicos, fármacos
antiinflamatorios (AINEs), reacciones adversas. En el tercer apartado se
encuentra la obtención de los extractos, los análisis físicoquímicos que se les
realizó tanto a las especies vegetales, como a los extractos; para su
identificación, cuantificación y valoración de la actividad antiinflamatoria de los
extractos aislados y en mezclas. En otro apartado, encontramos los resultados y
análisis, en el que se detalla los hallazgos y las respuestas en los diferentes
momentos de evaluación. Finalmente, están las conclusiones, recomendaciones,
a las que se llegó en base a los resultados.
3
PROBLEMA
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Enunciado/Contextualización
Alrededor del mundo existen personas que por múltiples factores reciben
medicación, sea por prescripción médica, automedicación para el control del
dolor leve a moderado; como consecuencia de procesos inflamatorios, ya sea
por presentar enfermedades tales como: artritis reumatoide, esclerosis sistémica,
ruptura espontáneas de huesos, fracturas, lesiones, tendinitis, osteomielitis,
trastornos inflamatorios de la pelvis femenina, procesos inflamatorios de la
próstata, osteoporosis, entre otros (INEC, 2013).
Según, datos estadísticos, el consumo de antiinflamatorios no esteroideos
(AINEs) se encuentran en el segundo lugar en referencia después de los
antibióticos betalactámicos (Duarte de Prato, 2010). De acuerdo a la
Organización Mundial de la Salud (OMS), existen tres escalones en que en cada
nivel está representado por fármacos específicos de acuerdo a la intensidad del
dolor que van desde los opioides potentes, opioides débiles hasta los AINEs
(Anexo1) (Prieto Setién, 2007).
El consumo de AINEs, posee un efecto máximo de techo, es decir, que el
incremento de dosis no mejora la actividad terapéutica, pero si incrementa los
efectos adversos, por lo tanto, el tratamiento por su uso irracional, continuo, y
muchas veces prolongado produce reacciones adversas y genera patologías
(Prieto Setién, 2007), que pueden ir desde una alergia hasta complicaciones
mayores a nivel tracto gastrointestinal y renal (Duarte de Prato, 2010).
4
Por consiguiente, se hace necesario realizar esta investigación con la
finalidad de comparar la efectividad y eficacia de la actividad antiinflamatoria de
Matricaria chamomilla y Urtica urens respectivamente, frente a la mezcla
hidroalcohólica de ambas especies en ratas Wistar, cuya concentración ejerce
mayor actividad antiinflamatoria. De tal forma indicar que la mezcla
hidroalcohólica de Matricaria chamomilla y Urtica urens, desempeña mejor efecto
terapéutico a comparación del estudio por separado de ambas especies, por lo
cual se propone emplear dicha mezcla fitoterapéutica como un coadyuvante
natural que actúe como antiinflamatorio, conservando su eficacia terapéutica, de
manera que posea un mínimo de efectos adversos sobre todo en aquellos
tratamientos a largo plazo.
5
FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Es posible establecer el nivel de concentración de la mezcla hidroalcóholica
de Matricaria chamomilla y Urtica urens, con mayor actividad terapéutica entre
los diferentes grupos tratados y demostrar la acción sinérgica al ser comparado
frente a los extractos aislados de las plantas que contiene la misma proporción
de principios activos que en la mezcla estudiada?
6
JUSTIFICACIÓN
Estudios realizados por el FDA (Federal Drug administration), indican que el
21% de los AINEs en Estados Unidos son la causa más frecuente de producir
reacciones medicamentosas (RAM). En España, el 35% de las reacciones
medicamentosas (pacientes que acuden a consultas), se deben al uso de AINEs
(Duarte de Prato, 2010).
Las reacciones adversas se dan por factores como los dependientes del
fármaco o del paciente, tales como: la edad, sexo, raza, debido a que ciertos
grupos étnicos muestran más sensibilidad de presentar procesos alérgicos, o
también cuando padecen de alguna patología (Jara Arévalo, Jaramillo Castro, &
Macías Matamoros, 2011).
Las lesiones de la mucosa gástrica en pacientes que consumen AINEs por un
período de 3 meses se da en un 40%, así también como en personas mayores
de 60 años, pudiendo estas lesiones causar perforaciones o hemorragias lo que
ocasiona un incremento en el número de ingresos hospitalarios y muertes
(Ponte, s.f.). Existen otros factores de riesgo, tales como: la presencia del H
Pylori, tabaquismo y el consumo crónico de alcohol que administrado
conjuntamente con algún tipo de AINEs, generan toxicidad a nivel
gastrointestinal (Jara Arévalo, Jaramillo Castro, & Macías Matamoros, 2011).
Según, OMS (2012), estableció que la Artritis Reumatoide (proceso de
inflamación severa), afecta a un 30% de la población mundial, donde se calcula
que quienes la padecen en su mayor porcentaje son mujeres entre 30 y 50 años
de edad.
7
Un estudio realizado en año 2011 en Cuenca, se obtuvo que la frecuencia de
razón de automedicación de AINEs, era la siguiente: 52,4%, cefalea; 38,5%,
lumbalgia; 31,8%, dolor muscular; 20,3%, malestar general; 19,2%, artrosis;
14%, dismenorrea; 11,2%, traumatismo sin fractura; 1,4%, fracturas (Jara
Arévalo, Jaramillo Castro, & Macías Matamoros, 2011).
El objetivo 3 del Plan del Buen Vivir de la salud, plantea garantizar
condiciones de fomentar la salud, y a partir de prevenir las enfermedades de las
personas para el mejoramiento de su calidad de vida (Secretaría Nacional de
Planificación y Desarrollo, 2009).
El tratamiento de enfermedades puede requerir de la ayuda de las
propiedades medicinales de las plantas, o de sus derivados. Las plantas
medicinales ofrecen una medicina sana y natural que está en dependencia de
sus características, y de los principios activos presentes en ellas; pudiendo
ejercer un efecto sinérgico, en las que es posible que todos interactúen al mismo
tiempo, y su función sea de complementar o potenciar a otros, y de esta forma
neutralice los posibles efectos negativos que pudieran presentar estos fármacos.
En base a esto, es la siguiente propuesta de investigación para establecer la
actividad antiinflamatoria mediante la combinación de manzanilla y ortiga, y
ayudará a disminuir, no solo el uso de otros fármacos, sino también, la presencia
de efectos secundarios, además cabe recalcar que la manzanilla presenta otros
beneficios, de ser protectora y reparadora de la membrana gástrica.
8
OBJETIVOS
Objetivo General
Evaluar el efecto antiinflamatorio de la mezcla hidroalcohólica de
Matricaria chamomilla y Urtica urens en animales de
experimentación.
Objetivos Específicos
Determinar las características físico y físicoquímicas de las especies
vegetales utilizadas en la elaboración del extracto.
Cuantificar la presencia de flavonoides (quercetina) y taninos en
extracto hidroalcohólico de Matricaria chamomilla y Urtica urens.
Establecer la concentración de la mezcla hidroalcóholica a partir del
cual se obtendrá el menor porcentaje de inflamación, determinado
por el volumen de agua desplazado en patas normales e inflamadas.
Comparar el porcentaje de inflamación que presentan los grupos
tratados con la mezcla hidroalcóholica de Matricaria chamomilla y
Urtica urens de mayor actividad antiinflamatoria vs al extracto
hidroalcohólico aislado tanto de Matricaria chamomilla y Urtica urens.
9
HIPÓTESIS
Con el suministro de la mezcla hidroalcóholica (80 manzanilla − 20 Ortiga), el
porcentaje de inflamación de la pata que presenten los animales de
experimentación será menor al ser comparados con los extractos aislados de
ortiga y manzanilla.
10
VARIABLES
Dependientes
Porcentaje de Inflamación (%).
Independientes
Tiempo (horas).
Niveles de concentraciones de la mezcla hidroalcohólica (mg/ml).
11
VARIABLES, CONCEPTUALIZACIÓN E INDICADORES
Tabla I
Conceptualización de las variables e indicadores
Variables Conceptualización Indicadores/
Escalas
Dependiente
Porcentaje de inflamación
Medido a partir del volumen desplazado
con la pata normal y con el edema
plantar inducido en el animal.
%
Independiente
Tiempo
Tomado en horas post administración de
los tratamientos y de la inducción.
Horas
Niveles de concentraciones
Mezcla hidroalcohólica de Matricaria
chamomilla y Urtica urens (80O:20M),
(50O:50M) y (20O:80M).
mg/ml
Nota. Conceptualización de las variables dependientes expresadas en porcentaje de
inflamación; y las variables independientes en tiempo y niveles de concentraciones
80O (80 ml de ortiga), 50O (50 ml de ortiga), 20M (20 ml de manzanilla) y 50M (50 ml
de manzanilla). Elaboración propia.
12
CAPÍTULO I
1.1 ANTECEDENTES
1.1.1 Estudios de la Actividad Antiinflamatoria de la Urtica
En 1988, Piñeros C., realizó un primer ensayo en Colombia donde evaluaron
la actividad antiinflamatoria que presentaron 78 pacientes a nivel de piel.
Aplicándose de forma local un extracto de Urtica, obteniéndose los siguientes
resultados: 53%, excelente; 40%, bueno y 7%, nulo. Otro estudio realizado en
1997 por Ramm S. & Chrubasik S., mediante la combinación de 50 g de
extractos de ortiga ligado a 50 mg de diclofenaco diarios, produciendo una
acción sinérgica, obteniéndose el mismo efecto anti-inflamatorio que si se tratase
con la administración de 200 mg diarios de diclofenaco. Al administrar extractos
de ortiga conjunto con el diclofenaco, permitió comprobar la menor cantidad de
efectos adversos percibidos en el caso con monodrogas AINEs (Alonso, 2007).
Además, Randall C. en 1999, realizó un estudio con 18 pacientes quienes
presentaban problemas de procesos reumáticos, como resultados se obtuvo que
con la toma de extracto de ortiga por vía oral, produjo un alivio sintomático en 17
de ellos, presentando buena tolerancia al producto, además se registró un caso
de reacción adversa (presencia de un rash cutáneo pasajero) (Alonso, 2007).
Según, estudios encontrados en la Biblioteca Digital de la Medicina
Tradicional Mexicana, comprobaron la actividad antiinflamatoria del aceite
esencial de manzanilla en ratas; empleando una dosis efectiva media de 35
mg/kg y extractos etanólicos al 30 y 80%, un primer ensayo por vía intravenosa y
un segundo ensayo por vía intraperitoneal induciendo un edema plantar en ratas
empleando carragenina, comprobándose su efecto antiinflamatorio debido a la
presencia de los azúlenos, camazuleno y guaiazuleno, quienes poseen esta
13
actividad, además de que ayudan a la regeneración del hígado (Zamudio &
Argueta, 2009).
A su vez realizaron estudios en humanos por vía oral en adultos, empleando
aceite esencial a quienes indujeron un eritema por irradiación y aplicando sobre
tejidos inflamados por diferentes orígenes, comprobando así la actividad
antinflamatoria en ambos casos (Zamudio & Argueta, 2009).
1.1.2 Estudios de la Actividad Antiinflamatoria de la Matricaria chamomilla
En 1984, Tubaro A., determinó que la presencia de mucílagos, flavonoides,
taninos y compuestos fenólicos captadores de radicales libres en los extractos
de Matricaria chamomilla aplicados por vía dérmica, favoreció la actividad
desinflamatoria (Alonso, 2007).
En 1986, Mann C. & Staba E., comprobaron que los esteroles presentes en la
Matricaria chamomilla, influyen en el proceso antiinflamatorio favoreciendo la
liberación de la hormona adrenocorticotropa (ACTH) a nivel suprarrenal (Alonso,
2007).
En 1988, Retamar J., comprobó que los flavonoides “apigenina” en animales,
tuvo un efecto antiinflamatorio superior al evidenciado por indometacina,
manteniéndose así luego de 18 horas de su administración. Esta actividad fue
diez veces superior a la observada con matricina, y veinte veces superior a la
demostrada por camazuleno. En el aceite esencial de Matricaria chamomilla se
encuentran presentes, los azúlenos no así en las infusiones. La familia de los
azúlenos tienen propiedades importantes como antiinflamatorios (Alonso, 2007).
En 1990, Della Loggia R., demostró que las aplicaciones tópicas de extractos
frescos de manzanilla en solución hidroalcohólica en orejas de ratones, con
inflamaciones inducidas con aceite de crotón presentaron un gran porcentaje de
14
inhibición inflamatoria. La dosis efectiva 50 (DE50) de la fracción lipofílica fue de
374 µg/oreja, y la de la fracción flavónica alcanzó 193 µg/oreja (Alonso, 2007).
En 1995, Ríos Cañavate J., estableció que la actividad antiinflamatoria de la
Matricaria chamomilla se debe a la interacción de flavonoides y los componentes
del aceite esencial (fracción sesquiterpénica conformada por el α-bisabolol y los
bisabolóxidos A y B), este estudio fue realizado en ratas mediante la prueba de
un edema inflamatorio plantar, producido bajo inducción por carragenina
(Alonso, 2007).
En 1999, Liang Y. et al., demostró el efecto inhibitorio de la activación
transcripcional del óxido nítrico sintasa inducible en lipopolisacáridos activados
por macrófagos (Alonso, 2007).
En el 2001, Shulz V. et al., demostraron el efecto sinérgico entre la apigenina
y la quercetina, sobre los mecanismos de acción en la actividad inhibitoria de las
enzimas 5-lipooxigenasa y ciclooxigenasa. Se demostró además, que la
apigenina in vitro posee un efecto inhibitorio de la activación transcripcional de la
enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2) (Alonso, 2007).
Un estudio realizado en la Facultad de Odontología de la Universidad de San
Carlos de Guatemala, confirma la hipótesis nula, sobre la medición del efecto
antiinflamatorio del gel de Matricaria recutita o Matricaria chamomilla en niños de
6 meses a 2 años con inflamación de la encía en la zona de erupción de la
dentición primaria, en la Casa Nº 1 de la Sociedad Protectora del Niño de la
Ciudad de Guatemala, durante el mes de septiembre del 2001. Al utilizar la
Matricaria recutita o Matricaria chamomilla en preparación de gel sobre la zona
inflamada, se presentó a las 96 horas del inicio de su uso un 46,67, ausencia de
inflamación, y un 53,33% de los casos con inflamación leve, lo cual evidencia
una notable disminución en el grado de inflamación (Herrera Gómez, 2002).
15
1.1.3 Estado del arte
Otros estudios en las que se evaluaron extractos hidroalcohólicos de plantas
comestibles: actividad antiinflamatoria (in vivo medido en la oreja del ratón con
inducción de aceite de crotón) y antioxidante (in vitro propiedades
antiradicales), todos los extractos estudiados demostraron poseer acción sobre
los efectos medidos, con un porcentaje de reducción del edema entre 21 y 27%,
siendo que Mentha aquatica L. (Lamiaceae), presentaba mayor efectividad
debido a la presencia de compuestos fenólicos y de flavonoides (Conforti et al.,
2008).
El Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la
Universidad de Costa Rica, realizó un estudio sobre el efecto de la manzanilla en
las ojeras y en la inflamación en la zona periocular. Se realizó un estudio en
paralelo (n=15), donde se aleatorizó los sujetos en proporción de 2:1, el grupo
interviniente (tratamiento tópico Matricaria chamomilla n=10), y el grupo control
tratados con agua. Las infusiones se obtuvieron a partir de 6 g de flores en 1 litro
de agua. El tratamiento consistía en aplicarse unos apósitos de gasa alrededor
del ojo por 7 noches en un tiempo de 15 minutos diarios (Jiménez Delgado,
Madrigal Rojas, & Salazar Barrantes, 2009).
Dentro de los resultados se obtuvo que, el 70% de los individuos del grupo
intervención consideraron efectivo el tratamiento en la disminución de la
tonalidad y volumen de las ojeras; el 80%, sintió mayor relajación en la región
periocular. En la que demostraron una disminución de la tonalidad de las ojeras.
Conclusiones: No se encontró diferencia estadísticamente significativa en la
disminución de las ojeras, sin embargo, se observa una tendencia a su
disminución (Jiménez Delgado, Madrigal Rojas, & Salazar Barrantes, 2009).
16
Se determinó que debido a la presencia del ácido clorogénico en extractos
hidroalcohólicos de la parte aérea de Urtica urens, se usó para medir la
actividad: térmica, analgésica y antiinflamatoria; bajo la aplicación de modelos
experimentales, además se demostró que poseía actividad antinociceptiva, cuyo
experimento consistió en la inducción química del dolor medido a partir del
retorcimiento en que el porcentaje de inhibición fue de 62,8%; asimismo, se
definió la actividad antiinflamatoria en ratas, induciendo un edema en la pata
trasera inducida por carragenina (inhibición de 41,5% a una dosis de 300 mg/kg
ip) (Marrassini, Acevedo, Miño, Ferraro, & Gorzalczany, 2010).
17
1.2 FUNDAMENTOS TEÓRICOS
1.2.1 Ortiga
El nombre científico es Urtica urens L. Se trata de una planta anual
perteneciente a la familia de las Urticáceas. La parte utilizada de la planta son
las hojas, o la parte desecada con los tallos, raíces (Botero, 2011).
1.2.1.1 Características macroscópicas y microscópicas
La forma del rizoma se presenta de forma torcida irregular, donde nacen las
raíces se encuentra un surco longitudinal con protuberancias. El rizoma se
presenta una forma fibrosa y de color blanco amarillento claro, y con una cavidad
medular pequeña. El tamaño de sus raíces son largas 2mm, de color amarillo
marrón. La raíz en forma de un corte transversal se muestra un color blanco
pálido casi puro. Presenta periciclo, y parte externa del floema secundario
(parenquimatoso con grupos de tejido criboso de pared delgada). El xilema es
denso y en su totalidad lignificado. La médula está formada por un parénquima
redondeado no lignificado que colapsa en su parte central para formar una
cavidad (Botero, 2011).
18
1.2.1.2 Composición química
Tabla II
Composición Química de la Urtica urens
Sumidad
Florida
Flavonoides 0,7 - 1,8% (heterósidos de quercetina,
isoramnetina y kenferol, rutina, isoquercitrina 0,02%; aceite
esencial: cetonas 38,5%; ésteres 14,7%, alcoholes libres 2%;
ácidos fenólicos derivados del ácido cinámico; ácido
clorogénico: clorofila a y b, ácido caféico; taninos; ácidos
orgánicos: ácido acético, cítrico, fórmico, fumárico; sales
minerales: hierro, azufre, manganeso, sales potásicas y
cálcicas, nitratos; carotenos, esteroides; vitamina A, B2, C, K,
ácido fólico y pantoténico.
Tricomas
(Pelos
urticantes)
Histamina 0,2 - 1%, acetilcolina no mayor al 1%, histamina
serotonina.
Raíz
Taninos, fenilpropanoides, fitoesteroles ceramidas, heterósidos
esteroidales, lignanos, polifenoles, escopoletina, léctina,
monoterpendioles.
Semillas
(aceite)
Mucílagos, proteínas, ácido linoleico, glicerol, tocoferoles, ácido
oleico, ácido linolenico y ácidos saturados.
Hojas
Clorofila a y b (2,5-3%), carotenoides (beta-caroteno);
Flavonoides: quercetina (0,7-1,8%) rutina, isoquercitrina
(0,02%), quercetina, isoramnetina, kaempferol y ramnetol,
sales minerales (20%), ácidos orgánicos como el: caféico,
clorogénico, gálico, fórmico, acético, provitamina (A, B, C y K),
mucílagos, escopoletósido, sitosterol, betaína, colina,
polisacáridos, esteres del ácido caféico, taninos.
Fuente: Huerta, J. (2007). Ortiga Mayor Urtica dioica L. Medicina Naturista, 1, 131.
19
1.2.1.3 Mecanismo de acción
Inhibe la producción de prostaglandinas o COX y a la vez disminuye la LOX o
la producción de leucotrienos.
1.2.1.4 Contraindicaciones
Genera una fuerte irritación al entrar en contacto con la piel frente a la acción
urticante y pruriginosa. Puede llegar a ocasionar ronchas, pápulas, eritemas o
edemas que van siempre precedidas de fiebre (Nogué, Simón, & Blanché, 2009).
A la vez el uso de Urtica urens es contraindicado frente a la actividad diurética en
manifestaciones como hipertensión, cardiopatías o insuficiencia renal moderada
o grave, también es contraindicada en caso de diabetes (Dueñas, s. f.).
1.2.2 Manzanilla
Cuyo nombre científico es Matricaria chamomilla, Matricaria recutita, es una
planta herbácea que pertenece a la familia de las Compuestas. La parte utilizada
de la planta son las flores, con sabor ligeramente amargo y olor aromático
característico. La mayor concentración de aceites esenciales en la manzanilla se
encuentra en la noche o en las primeras horas del amanecer (Alonso, 2007).
20
1.2.2.1 Características macroscópicas y microscópicas
Tallo cilíndrico, erguido, ramoso, mide aproximadamente 30 cm de alto, las
hojas están divididas en pequeños segmentos lineales muy finos. Se compone
de cabezuelas de forma semiesférica de un diámetro aproximadamente 6 mm,
de color amarillo-dorado. Poseen de 10 a 20 pistilos, su corola es ligulada y de
color blanco. La parte externa de la epidermis se compone de células papilares
con cutícula estirada desde los extremos. La epidermis del ovario está
compuesta de células alongadas con paredes sinuosas, en las que se hallan
tricomas secretores, presentan numerosas agrupaciones de oxalato de calcio
(Cosco, 2010).
1.2.2.2 Composición química
Aceite esencial se lo obtiene a partir de las cabezuela de la planta entre el 0,3
- 1,5%. De acuerdo a la Farmacopea Argentina (2003), no debe de contener más
del 10% de otras partes de la planta, ni más de 2% de materia orgánica extraña.
La Farmacopea Británica (2012) exige un contenido de aceite esencial entre
0,25-0,70%. La Farmacopea Brasilera al igual que la Española, Alemana y
Europea (2007), exige un tenor de aceite esencial no menor del 0,4% (Jiménez
Delgado, Madrigal Rojas, & Salazar Barrantes, 2009).
21
Tabla III
Componentes del aceite esencial de manzanilla (Matricaria chamomilla)
Azúlenos 26-
46%,
Principalmente camazuleno entre el 6-15% y en menor
medida guajazuleno.
Sesquiterpenos
α-bisabolol entre el 10-25% y derivados (bisaboloxidos
A, B, C; bisabonlonóxido A). Además se encuentra
trazas de antecotúlido.
Lactonas
sesquiterpénicas
Matricina, matricarina y desacetilmatricarina. La
matricina sería también precursora del camazuleno.
Fuente: Cosco, D. (2010). Actividad inhibitoria del crecimiento de Streptococcus
mutans y de flora mixta salival por acción de aceite esencial de la Matricaria
chamomilla. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.
.
Figura I. Estructura química del α-bisabolol
Fuente: Gibers, T., & Jimenez, P. (s. f.).
Cabe recalcar, que tanto el camazuleno y el bisabolol son los principales
componentes del aceite esencial a los cuales se les atribuye la actividad como
antiinflamatorio (Cosco, 2010).
22
Flavonoides entre el 1-3%, forman junto a los mucilagos el grupo hidrofílico
de la droga. Entre los flavonoides encontramos: flavonas y flavonoles
metoxilados, apigenina, quercetina. Entre otros como: luteolina, petuletina,
lisorhamnetol, apiína, rutina, presencia de cumarinas: diocicumarina,
umbreliferona, hemiarina; ácidos como: acido valeriánico, taninos, ácidos
fenólicos, ácido ascórbico, ácidos grasos, mucilagos urónicos en un 19% (Cosco,
2010).
Figura II. Estructura molecular de los flavonoides
Fuente: Instituto Quimico Biológico. (2014).
1.2.2.3 Mecanismo de acción
Los ácidos grasos esenciales tienen adquieren la propiedad antiinflamatoria,
ya que la ingestión de Matricaria chamomilla infiere en la disminución de la
inflamación por medio de dos formas. La primera que se encarga de inhibir la
producción de prostaglandinas (COX), y la producción de leucotrienos (LOX). La
segunda forma se encarga de inhibir la producción de prostaglandinas E1 que
realizan su efecto sobre las células pro-inflamatorias. A la vez posee actividad
antioxidante y antimicrobiana (Cosco, 2010).
23
1.2.2.4 Contraindicaciones
En la ingesta por dosis elevadas ocasiona irritación de la mucosa digestiva
acompañada de mareos y vómitos. A nivel dérmico produce dermatitis en
pacientes hipersensibles o alérgicas. Está contraindicado el alcohol, ya que
posee efecto ansiolítico, a la vez interactúa con fármacos que tienen efecto
sedante y está contraindicado en pacientes que ingieran warfarina que es un
anticoagulante cumarinico (Cosco, 2010).
1.2.3 Flavonoides
Se conoce como flavonoide a los compuestos fenólicos que se encargan de
proteger al organismo, en sí son pigmentos naturales hallados en el reino
vegetal; tales como las semillas, frutas e incluso en bebidas como el vino. Se
conocen más de 5.000 clases de diferentes flavonoides, se debe estimar que 23
mg/día en la ingesta humana, predominando así la quercetina con un valor
medio de 16 mg/día; posee acción antioxidante y elimina radicales libres, ya que
actúan como protectores frente a enfermedades cardiovasculares, cáncer y
diversas patologías (Martínez, González, & Culebras J. M. y Tuñón, 2002).
Szent-György, (1930) descubrió a los flavonoides aislando la citrina de la
cascara de limón encargada de regular la permeabilidad de los capilares, por lo
tanto, se la consideró como vitamina P o vitamina C2, en el año 1950 se
descarta esta denominación, al determinar que los flavonoides contienen un
número indefinido de grupos hidroxilo fenólicos en su estructura química, con
propiedades de quelación del hierro y entre otros metales de transición que le
confieren la propiedad antioxidante (Martínez, González, & Culebras J. M. y
Tuñón, 2002).
24
1.2.4 Taninos
Pertenecen al grupo de los compuestos polifenólicos de gusto amargo y muy
astringentes; se clasifican en taninos hidrolizables o hidrosolubles, también
denominados como pirogálicos, son hallados en pétalos de la rosa roja
presentando 15% de taninos gálicos usadas como colutorios y lociones; en las
hojas y cortezas destinadas tanto para vía interna como externa; también se
presentan en la sumidad florida con un 10% de taninos elágicos empleadas en
efectos antidiarreicos (Botero, 2011).
También se clasifican en taninos condensados llamados proantocianidinas,
ya que trascienden de polímeros del flavonoide antocianidina; prioritariamente se
los halla en maderas de plantas leñosas, poseen una estructura similar a los
flavonoides pero carecen de osas en las moléculas. Entre ellos predominan los
taninos catéquicos que poseen de 2 o más moléculas de 3-flavonoles y los
leucoantocianos o procianidoles del mismo modo estructurados por 2 o más
moléculas de 3,4-flavandioles (Cabrera, Morón, Victoria, & Acosta, 2012).
Figura III. Clasificación de los taninos.
Fuente: Khanbabbaee y Van Ree, 2001)
25
1.2.5 Mecanismo de acción de los flavonoides y taninos
Se conoce la relación entre especies reactivas entre el oxígeno y el nitrógeno
que inducen a procesos oxidativos, entre ellas se encuentran las enfermedades
inflamatorias; por consiguiente existen especies vegetales que al presentar entre
sus compuestos: flavonoides, polifenoles y tocoferol adquieren la propiedad
antioxidante influyendo en el efecto antiinflamatorio (García, Rojo, García, &
Hernández, 2002).
El mecanismo de acción de los compuestos fenólicos tales como: taninos y
flavonoides; se basa en disminuir la formación de mediadores proinflamatorios
tales como leucotrienos, prostaglandinas, y óxido nítrico. Además el efecto
anticanceroso va ligado a la acción antiinflamatoria; demostrado por Narizawa (s.
f.), donde empleó la Indometacina, siendo esta capaz de inhibir la acción
anticancerosa inducida en el colon de las ratas (González, Larionova, Martínez &
Marrero, 2003).
26
1.2.6 Carragenina
La carragenina es un polisacárido de peso molecular alto, el cual se sitúa en
la pared de las células y en la matriz intercelular del tejido de algas rojas de la
familia Rhodophycae, de los géneros
Chrondus, Gigartina, Euchema, Hypnea e Iridaea. Polvo o granulado, insípido e
inodoro, de color blanco a beige. Esta estructuralmente comprendida de éster
sulfato de 15% a 40% formado por unidades alternadas de D-galactosa y 3,6-
anhidro-galactosa (3,6-AG) unidas por ligaduras α-1,3 y β-1,4-glucosídica
(Yueqin, 2007).
Figura IV. Estructura química de la carragenina.
Fuente: Sánchez-Barreiro, et al. (2012)
1.2.6.1 Mecanismo de acción de la carragenina
Al administrar carragenina a nivel plantar, se provocará un edema en la pata
del ratón; dicho mucopolisacárido de origen marino produce un efecto bifásico,
en el cual intervienen mediadores para generar una respuesta inflamatoria. Se
genera está reacción en su fase inicial de cero a la primera hora, a partir de la
liberación de bradicina, histamina y serotonina. Posteriormente, en la segunda
fase se origina desde la primera a la sexta hora; que se relaciona con la
producción de PGs y la inducción de la COX-2. En la fase tardía es cuando se
llega al nivel máximo y estable entre la primero a la tercera hora (Yueqin, 2007).
27
1.2.7 Inflamación
La inflamación se basa en un proceso tisular, frente a una lesión que
responden a estímulos ocasionados por una serie de fenómenos moleculares,
celulares y vasculares de finalidad defensiva frente a agresiones físicas,
químicas, infecciosas y traumáticas (Bordés González, Martínez Beltrán, García
Olivares, & Guisado Barrilao, s. f.). La reacción de la inflamación se altera
dependiendo del agente causal y por la capacidad que posee de respuesta el
huésped (EUSALUD, 2015).
Figura V. Aspectos básicos en un proceso inflamatorio.
Fuente: Bordés González (s. f).
Se fundamenta la inflamación a partir de los signos de celso; tales como
calor, rubor, tumor, y dolor; que proceden de alteraciones vasculares indicando
una acumulación sanguínea en el sitio afectado (Martínez, s. f.). El tumor se
produce por el edema y acúmulo de células inmunes, el dolor es producido por la
actuación de determinados mediadores sobre terminaciones nerviosas del dolor
(García-Barreno, 2008).
Focalización dela respuesta,que tiende acircunscribir lazona de luchacontra elagente agresor.
La respuestainflamatoria esinmediata, deurgencia.
Focoinflamatorioatrae a lascélulasinmunes de lostejidoscercanos.
Lasalteracionesvasculares vana permitir, lallegada demoléculasinmunes desdela sangre.
28
Una lesión cuando se genera es precedida por una inflamación que puede
ser aguda o crónica; una inflamación se presenta a través de un daño tisular,
provocada por procesos físicos, químicos, infecciosos, radiaciones
electromagnéticas y traumáticas. En tanto que, en una mínima lesión no ocurre
daño tisular iniciándose la regeneración de células. Cuando ocurre una lesión
mayor se iniciará con la restauración de los tejidos afectados, y se genera una
inflamación crónica con formación de absceso (Gómez-Barrera, 2010).
1.2.7.1 Factores Desencadenantes
Al generarse una inflamación, participan moléculas con efectos
proinflamatorios con actividad anafiláctica, que permiten la fagocitosis o ayudan
a la adhesión celular de los polimorfos nucleares y macrófagos de las células
endoteliales, existiendo factores que atrapan y atraen a los leucocitos hacia el
foco inflamatorio y favorece la vasodilatación. Los factores que originan una
respuesta inflamatoria se clasifican de acuerdo a su origen interno: propia o
autogénicos u origen externo o xenógenicos y alérgenos (Gómez-Barrera, 2010).
Figura VI. Fases de la inflamación
Fuente: Bordés González, Martínez Beltrán, García Olivares, & Guisado Barrilao (s. f.).
FASES DE LA INFLAMACIÓN
Liberación de mediadores
Moléculas de estructura elemental, liberadas o
sintetizadas por el mastocito
bajo la actuación de determinados
estímulos.
Efecto de los mediadores
Liberadas,producen alteraciones vasculares, que
favorecen la llegada de
moléculas y células inmunes
al foco inflamatorio.
Llegada de moléculas y
células inmunes al foco
inflamatorio
Proceden en su mayor parte de la sangre, pero también de las
zonas circundantes al
foco.
Regulación del proceso
inflamatorio
El fenómeno inflamatorio,
además integra una serié de mecanismos inhibidores tendentes a finalizar o
equilibrar el proceso.
Reparación
Fenómenos que van a
determinar la reparación total o parcial de los tejidos dañados
por el agente agresor o por la
propia respuesta
inflamatoria.
29
1.2.7.2 Respuesta Inmune
Cuando ocurre una lesión, se inicia la respuesta del sistema vascular que
está dada por los tejidos, la respuesta inmunitaria es realizada linfocitos y células
presentadoras de antígenos, interviniendo también, otro tipo de células como
proteínas extracelulares. En casos de edema o inflamación los signos están
dados en los vasos sanguíneos de tejidos circundantes, pues se dilatan las
arteriolas aumentando el riesgo vascular, las vénulas postcapilares son
permeables, lo que produce el escape de líquido vascular hacia los tejidos
afectados (Villalba, 2014).
Ciertos tipos de células nucleadas migran al sitio de afectación, se genera
moco u otras secreciones. Los fibroblastos y células endoteliales proliferan
produciendo cicatrices; por otro lado las respuestas inmunitarias se caracterizan
por la formación de coágulos locales e incluso fiebre por afectaciones sistémicas
(Villalba, 2014).
Existen vías inflamatorias que son controlada por citocinas y mediadores
inflamatorios que son moléculas reguladoras solubles, estimulan la producción
de otros mediadores que se encargados de controlar otro tipo de afectaciones. A
su vez se originan efectos secundarios por complejos antígeno vs anticuerpo.
Las células efectoras de la inflamación incluyen a otras células que intervienen
en las respuestas inmunes, tales como: macrófagos, neutrófilos, linfocitos T
citotóxicos, y células NK (Bordés González, Martínez Beltrán, García Olivares, &
Guisado Barrilao, s. f.).
30
1.2.7.3 Mecanismos de acción que intervienen en la inflamación
Según, Grabowski (2002), entre las sustancias que contribuyen a la
vasodilatación, el aumento de la permeabilidad, y otros aspectos de la respuesta
inflamatoria, se cuentan los siguientes:
Histaminas: en respuesta a una lesión, las células cebadas o mastocitos del
tejido conectivo y los basófilos y plaquetas sanguíneas liberan histaminas.
Los neutrófilos y macrófagos atraídos al sitio de la lesión, también estimulan
su liberación, lo cual produce una vasodilatación y mayor permeabilidad de
los vasos sanguíneos.
Cininas: estos polipéptidos, formados en la sangre a partir de precursores
inactivos llamados cininógenos, inducen la vasodilatación y aumento de la
permeabilidad, además de servir como agentes quimiotácticos que atraen a
fagocitos.
Prostaglandinas PG: estos lípidos, en especial las prostaglandinas E, son
sustancias que liberan las células dañadas e intensifican los efectos de las
histaminas y las cininas, las PG inducen la emigración de fagocitos a través
de la pared de los capilares.
Leucotrienos LT: producidos en los basófilos y las células cebadas por
desdoblamiento de fosfolípidos de la membrana plasmática, los LT
incrementan la permeabilidad vascular, además de participar en la adhesión
de los fagocitos y como agentes quimiotácticos de los fagocitos mismos.
Sistema del complemento: Los diversos componentes de este sistema
estimulan la liberación de histamina, atraen a neutrófilos por quimiotaxia y
promueven la fagocitosis, además de que algunos pueden destruir bacterias.
31
1.2.8 AINEs (antiinflamatorios No Esteroides)
Los AINEs, tienen actividades analgésicas, antiinflamatorias y antipiréticas
dependiendo de la dosificación. Así, en dosis únicas, presentan actividad
analgésica similar a la del paracetamol. A dosis completa regular, poseen efecto
analgésico y antiinflamatorio duradero, por lo que se prescriben en dolor
continuo y regular secundario a inflamación. En cuanto al porcentaje de actividad
antiinflamatoria entre los diferentes AINE son mínimas, existiendo grandes
variaciones en cuanto a respuestas que presentan cada paciente, la incidencia
y tipo de efectos adversos (Batlouni, 2010).
Los AINEs, deben ser utilizados con precaución en personas de edad
avanzada, trastornos alérgicos, durante la gestación y la lactancia. En pacientes
con alteración renal, cardíaca o hepática, se recomienda administrar la menor
dosis posible y vigilar la función renal, no se deben administrar en pacientes con
úlcera péptica activa. Los efectos adversos más frecuentes son generalmente
gastrointestinales, como: náusea, vómitos, diarrea y dispepsia; se han descrito
reacciones de hipersensibilidad, como anafilaxia, broncoespasmo y erupción
cutánea; así como retención de líquidos (OMS, 2004).
1.2.8.1 Fármacos antiinflamatorios (AINEs)
Es un conjunto heterogéneo de fármacos, a diferencia de otros fármacos con
el mismo efecto terapéutico, estos en cambio tienen mayor propiedad antipirética
que inflamatoria. En el año 1952 se definió el término AINEs o Antiinflamatorio
no esteroideo, son componentes químicos similares a los corticoides, pero se
diferencia al evitar consecuencias secundarias. Estos llamados glucocorticoides
con efecto antiinflamatorio, en sí bloquean las síntesis de las prostaglandinas
(Batlouni, 2010).
32
Según, la OMS (2004), de acuerdo a su composición química estos se
clasifican por grupos:
Ácidos:
Ácidos enólicos: Son derivados oxicams o amidas benzotiazínicas (como el
piroxicam). A su vez se encuentran las Pirazolonas, como la fenilbutazona.
Ácidos carboxílicos: Como los salicilatos, ácidos propiónicos, ácidos
acéticos, ácidos antranílicos o fenamatos y ácidos nicotínicos.
No Ácidos:
Sulfoanilidas
Alcanonas
En la actualidad desde que se conoce de los Coxibs o inhibidores selectivos
de la COX-2, por lo tanto se los agrupa por su capacidad de inhibir el 50% de la
COX-2, y comparar con la concentración necesaria para inhibir el 50% de la
COX-1. Por lo tanto, mientras mayor sea la relación IC50 COX-2/IC50 COX-1,
mayor es la selectividad COX-2 (OMS, 2004).
33
Tabla IV
Clasificación de los AINEs, según su capacidad para inhibir la COX
Muy
Selectivos a
la COX-1
Relativamente
Selectivos a
la COX-1
Igualmente
Selectivos
Relativamente
Selectivos a
la COX-2
Muy
selectivos a la
COX-2
Flurbiprofen
Ketoprofen
Fenoprofen
Piroxicam
Sulindac
Aspirina
Ibuprofeno
Indometacina
Naproxeno
Tenoxicam
Tolmetín
Etodolac
Meloxicam
Nabumetona
Nimesulide
Lumiracoxib
Rofecoxib
Valdecoxib
Parecoxib
Celecoxib
Nota: COX= Inhibidor de prostaglandinas. Fuente: Prieto Setién, J. (2007).
Antiinflamatorios No Esteroideos (AINEs).
Existen pacientes intolerantes de AINEs, pero por esta razón se realiza esta
clasificación y a la vez relación, ya que se ha comprobado que a mayor
selectividad a la COX-2, estos son tolerados e incluso evitan menos efectos
adversos a nivel gastrointestinal.
1.2.8.2 Mecanismo de acción de los AINEs
La clase terapéutica considerablemente utilizada son los analgésicos,
antipiréticos y los antiinflamatorios no esteroideos, de acuerdo a su propiedad
analgésica, antipirética y antiinflamatoria que interfieren con una variedad de
enzimas y sistemas celulares (Rodríguez, s. f.).
34
Se conoce que en la década de los 70, inició la etapa sobre el mecanismo de
acción de los AINEs. Se descubrió principalmente el rol de las prostaglandinas
(PGs) en cuanto a la fiebre, dolor, concentración uterina, circulación sanguínea,
secreción y protección gástrica (Prieto Setién, 2007).
Más tarde descubrió, Vane y col y Beaver que los AINEs, incluyendo a los
salicilatos, se encargan de inhibir la enzima ciclooxigenasa que directamente
interviene en la vía metabólica del ácido araquidónico. Por otro lado, Brunne
demuestra que el ASS inhibe de manera definitiva a la ciclooxigenasa por su
cualidad de acetilar proteínas (OMS, 2004).
En sí, la actividad de los AINEs es inhibir a la ciclooxigenasa, enzima que
permite al organismo producir sustancias (prostaglandinas), capaces de
transformar al ácido araquidónico en endoperóxidos cíclicos, convirtiéndose así
en PGs y en TX, por ende la inhibición de su síntesis por parte de los AINEs es
el responsable, tanto de su actividad terapéutica como de los efectos
secundarios de estos fármacos (Batlouni, 2010).
Isoenzimas de la ciclooxigenasa: La ciclooxigenasa se la haya como dos
isoformas COX-1, COX-2, y actualmente fue descubierta la COX-3. Nos
referiremos a la COX-1, responsable de la síntesis de prostaglandinas, por
ejemplo se le atribuye a la reducción de secreción gástrica al estimular la
secreción de bicarbonato y moco, así asegura protección de la mucosa gástrica.
Actúa a nivel renal y en los túbulos colectores al mantener la homeostasis renal
en situaciones de depleción de volumen, o de disminución de la presión de
perfusión renal (Batlouni, 2010).
35
Al hablar de la COX-2, era referirse a inflamación y, por tal razón se la llamó
COX-2 inducida. La PGE2, generaba la fiebre endógena y está vinculada con el
estímulo de la COX-2 a través de los lipopolisacáridos e interleucina-1 en las
células endoteliales de los vasos cerebrales. Se establece diferencias de ambas
enzimas de acuerdo a su expresión temporal, la COX-1 es constitutiva; mientras
que la COX-2 se expresa a través de estímulos, pero es constitutiva en el riñón y
SNC (Batlouni, 2010)
Por otro lado, la COX-3 es descubierta en el perro, pero se localiza en el
cerebro humano, también en el corazón, aunque su función aun es desconocida
(Batlouni, 2010).
Figura VII. Isoformas de la ciclo-oxigenasa
Fuente: Batlouni, 2010.
Ácido Araquidónico
COX-1
(Constitutiva)
Prostaglandinas Fisiológicas
(Citoprotección)
Tromboxanos
AINEs
COX-2
(inducible)
Prostaglandinas Patológicas
(Proinflamatorias)
Prostaciclinas (Vasodilatadoras)
36
1.2.8.3 Indicaciones terapéuticas
Todos los AINEs incluyendo a los inhibidores selectivos de la COX-2 como
los antipiréticos, analgésicos y antiinflamatorios. Estos modifican o reducen la
inflamación, ayudan a mejorar el dolor y disminuye la fiebre. La primordial
indicación de los AINEs se refiere al alivio de enfermedades inflamatorias
osteoarticulares, se utilizan en tratamientos sintomáticos como: artritis
reumatoide, la osteoartritis, entre otras (Batlouni, 2010).
1.2.8.4 Reacciones adversas medicamentosas
Los antiinflamatorios no esteroides (AINEs) constituye una clase heterogénea
de fármacos que más se prescriben, los cuales pueden ser selectivos o no; así
como: la aspirina y otros agentes inhibidores de la COX. Los AINEs no selectivos
son llamados también tradicionales y/o convencionales, y se designan COXIBEs
(Batlouni, 2010).
Los inhibidores selectivos de la COX-2 (inhiben la ciclooxigenasa 2 y así la
síntesis de prostaciclina), en cuanto a su seguridad de su uso, se encontraron
evidencias sobre el aumento del riesgo cardiovascular, pero aún son escasos,
por la falta de ensayos clínicos. Además se realizaron estudios clínicos
prospectivos, demostrando así que los inhibidores selectivos de la COX-2
producen efectos adversos como: aumento de riesgo de infarto del miocardio,
accidente cerebrovascular, insuficiencia cardiaca, insuficiencia renal e incluso
hipertensión arterial; se presenta con mayor frecuencia en pacientes con
enfermedad cardiovascular, en los que el uso de estos inhibidores de la COX-2
deben ser establecido en meticulosas dosis y en un lapso de tiempo mínimo,
pues se relaciona a la inhibición selectiva de la COX-2 frente a efectos adversos
frecuentes. Por lo tanto no se descarta el riesgo de eventos cardiovasculares
ante la ausencia de la selectividad para esta isoenzima (Batlouni, 2010).
37
1.2.8.5 Efectos indeseables
Generan efectos indeseables a nivel gastrointestinal, cardiovascular, renal,
hepático, y en general en todo el organismo dependiendo de la susceptibilidad
de cada persona (Batlouni, 2010).
1.2.8.5.1 Efectos Gastrointestinales
Los AINEs generan como efecto secundario más frecuentes a los
gastrointestinales siendo parte de la morbilidad y de mortalidad relativa.
Provocando úlcera gástrica, dispepsia, micro sangrado gástrico, hemorragia
gastrointestinal alta y lesiones sobre el intestino delgado distal. Esto ocurre, ya
que los AINEs inhiben la COX-1, aunque los que inhiben la cox-2 presenta una
mayor seguridad sobre este efecto adverso, pero no demuestran en su totalidad
diferencias significativas en la incidencia de úlceras complicadas, así como de
hemorragias gastrointestinales (Batlouni, 2010).
Entre los efectos colaterales por el consumo de AINEs es que, alrededor de
20% de pacientes que lo consumen no toleran el tratamiento, presentan dolor
abdominal, acidez y diarrea (Batlouni, 2010).
Al emplear un tratamiento a largo plazo ocasiona erosiones, úlceras gástricas
y duodenales. En su mayoría no presentan síntomas, pero sin embargo, pueden
desarrollarse complicaciones severas, tales como sangrado y perforación del
estómago. Anualmente el riesgo es del 1 al 4% en tratamientos crónicos
(Batlouni, 2010).
38
Generalmente, los más susceptibles a presentar estos síntomas son
pacientes adultos mayores, mujeres que como consecuencia de los desórdenes
hormonales en etapas post menopáusicas presentan procesos de artritis
reumatoides, osteoporosis. Otros pacientes que presentan marcada
susceptibilidad al consumo de AINEs, pueden ser los que presenten historia
clínica de sangrado gastroduodenal, el uso de agentes antitrombóticos o
corticosteroides, y presencia de enfermedad sistémica severa (Batlouni, 2010).
Mecanismo que resulta por el bloqueo de la COX-1 y por la inhibición de la
producción de prostaciclina, PGE2 y PGD2 en la mucosa gastrointestinal. La
función de las prostaglandinas es citoprotectora ayudando a inhibir la secreción
ácida del estómago, y así, de esta manera aumentando el flujo sanguíneo local y
la secreción de moco. En casos, que el pacientes requiera de la administración
diaria de AINEs es recomendable usar inhibidores de la bomba de protones
entre ellos el omeprazol (Batlouni, 2010).
1.2.8.5.2 Efectos cardiovasculares
Los inhibidores selectivos de la COX-2, designados COXIBEs, se introdujeron
en la terapéutica clínica, con el fin de minimizar la toxicidad gastrointestinal de
los AINEs no selectivos15. Los COXIBEs son iguales o más efectivos que los
AINEs no selectivos para el tratamiento de la inflamación, como las plaquetas
expresan primariamente la COX-1, estos fármacos no tienen propiedades
antitrombóticas (Batlouni, 2010).
De los experimentos en animales, seguimiento de la observación de registros
y ensayos clínicos, se pudo establecer las consecuencias de la inhibición
selectiva de la trombosis, por la desviación del balance
protrombótico/antitrombótico en la superficie endotelial, por la pérdida del efecto
protector de la regulación superior de la COX-2 en la isquemia miocárdica y en el
infarto del miocardio (Batlouni, 2010).
39
1.2.8.5.3 Efectos renales
Prostaglandinas homeostáticas - prostaciclina, PGE2 y PGD2, generadas por
acción de la COX-1 en distintas regiones de los riñones, dilatan la vasculatura,
disminuyen la resistencia vascular renal y aumentan la perfusión del órgano. Lo
que conlleva a la redistribución del flujo sanguíneo de la corteza renal para los
nefronas en la región intramedular (Batlouni, 2010).
1.2.8.5.4 Hipertensión arterial
Batlouni (2010), cita a Pope et al. (1993), quienes demostraron que los AINEs
pueden elevar la presión arterial. En aquellos pacientes con presión arterial alta
con la administración de indometacina y naproxeno, la presión arterial se elevó
en un promedio en 3,59 mmHg y 3,74 mmHg, respectivamente. En tanto que,
con el piroxicam el aumento no fue significativo. Este aumento se asocia a la
disminución significativa de las concentraciones de prostaglandinas y renina
(Batlouni, 2010).
Según los datos obtenidos por Johnson et al. (1994), demostraron que los
AINEs aumentan la presión arterial aproximadamente hasta 5,0 mmHg, El
piroxicam aumentó en un 6,2 mmHg, La aspirina presentó un menor incremento
de la presión arterial, en tanto que la indometacina e ibuprofeno mostraron
efectos intermediarios (Batlouni, 2010).
40
1.3 GLOSARIO
Aceite de crotón: Se utiliza farmacológicamente para provocar una inflamación
localizada en las orejas de los animales de laboratorio, inflamación que responde
a los anti-inflamatorios no esteroídicos.
Ácido clorogénico: Es un compuestos fenólicos que se clasifica dentro de los
fenólicos simples o no flavonoides.
Actividad antiflogística: Se encarga de combatir la inflamación.
AINEs: Denominado como antiinflamatorios no esteroideos son un grupo variado
y químicamente heterogéneo de fármacos principalmente antiinflamatorios,
analgésicos y antipiréticos, por lo que reducen los síntomas de la inflamación, el
dolor y la fiebre.
Anafilaxia: Es una reacción alérgica grave en todo el cuerpo originado por un
químico que se ha convertido en alérgeno.
Antinociceptiva: Es un proceso que se despliega por su capacidad de
detección de daño necrótico consumado, inminente o potencial, tan pronto como
se den las condiciones codificadas como inductoras de dicho daño.
Apigenína: Es una molécula que pertenece a la clase flavona, como la
anglicona de varios glucósidos de origen natural.
Apósitos: Es la reepitelización del tejido dañado y en consecuencia la
cicatrización de la herida.
41
Azúlenos: Compuesto orgánico y un isómero del naftaleno, pero mientras este
es incoloro, el compuesto de título es azul profundo.
Bradicinina: Es un polipéptido compuesto por nueve aminoácidos que se forma
en las plaquetas y que se libera por acción de ciertos venenos o de la tripsina;
tienen efectos similares correspondientes a las quininas.
Camazuleno: Compuesto químico aromático con la fórmula molecular C₁₄H₁₆
que se encuentra en una variedad de plantas, incluyendo en la manzanilla.
Carragenina: Es una mezcla de varios polisacáridos, se encuentra rellenando
los huecos en la estructura de celulosa de las paredes celulares de
algunas algas de varias familias de Rhodophycae.
Ciclooxigenasa (COX): Es una enzima responsable de la formación de
mediadores biológicos importantes llamados prostanoides, que incluye la
prostaglandina, la prostaciclina, y los tromboxanos, a partir del ácido
araquidónico. La inhibición farmacológica de la ciclooxigenasa alivia los síntomas
de la inflamación.
Cininas: Son proteínas en la sangre que causan inflamación, afectan a la
presión arterial, facilitan el paso de líquidos a través de pequeños vasos
sanguíneos y estimulan os receptores del dolor.
Citocinas: Son proteínas encargadas de regular la función de las células que las
producen sobre otros tipos celulares.
42
Eicosanoides: Corresponde al grupo de moléculas de
carácter lipídico originadas de la oxigenación de los ácidos grasos esenciales de
20 carbonos tipo omega-3 y omega-6, compuesto de prostaglandinas (PG),
tromboxanos (TX), leucotrienos (LT) y lipoxinas (LX). El PG y TX colectivamente
identificados como los prostanoides.
Fibrosis de tejidos: Genera endurecimiento de los tejidos a partir de la
formación de nuevos tejidos conectivos endurecimiento de tejido debido a la
formación de nuevo tejido conectivo
Guaiazuleno: También es conocido como azulón o 1,4-dimethyl-7-
isopropylazulene, es un hidrocarburo sólido cristalino de color azul oscuro.
Histamina: Amina idazólica involucrada en las respuestas locales del sistema
inmune.
Isoenzima: Son enzimas que difieren en la secuencia de aminoácidos, pero que
catalizan la misma reacción química.
Leucotrienos: Son ácidos grasos derivados del metabolismo oxidativo del ácido
araquidónico por la vía de la 5-lipooxigenasa
Lipooxigenasas: Es una enzima humana, miembro de la familia de
lipooxigenasas con un peso molecular entre 72,000-80,000 y 672 o 673
aminoácidos.
Osteomielitis: Inflamación simultánea de la médula ósea y del hueso.
43
Osteoporosis: Enfermedad ósea que se caracteriza por una disminución de la
densidad del tejido óseo y tiene como consecuencia una fragilidad exagerada de
los huesos.
Prostaglandinas (PGs): Es un conjunto de sustancias de carácter lipídico
derivadas de los ácidos grasos de 20 carbonos, que contienen un anillo
ciclopentano y constituyen una familia de mediadores celulares.
Quercetina: Es un flavonol que se encuentra presente generalmente como O -
glicósidos y raramente como C - glicósidos en altas concentraciones tanto en
frutas como en verduras en especial en la cebolla.
Quimiotácticos: Son un conjunto de factores que tienen la capacidad de atraer
los eosinófilos al foco inflamatorio, los cuales liberan mediadores en las
reacciones de hipersensibilidad inmediata y en la respuesta a parásitos.
Quimiotaxis: Reacción de orientación de los organismos celulares libres como
respuesta a un estímulo químico
Randomizados: Consiste en asignar aleatoriamente a los participantes en un
ensayo a dos o más grupos de tratamiento o de control. Es una de las formas de
evitar los sesgos de selección; su propósito es posibilitar las comparaciones en
los grupos de asignación de los tratamientos.
Reacciones Adversas Medicamentosas (RAM): Reacción tóxica o no
intencionada de una medicación utilizada a dosis adecuada estándar con fines
profilácticos, diagnósticos o terapéuticos.
44
Tendinitis: Es el resultado de una lesión o sobrecarga. También puede ocurrir
con la edad a medida que el tendón pierde elasticidad.
Vasodilatación: Permite un mayor flujo de sangre al aumentar el tamaño de la
cavidad hueca.
45
CAPÍTULO II
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
2.1 Métodos científicos empleados en la investigación
2.1.1 Diagrama de flujo
Idea de la investigación
Planteamiento del problema
Elaboración del marco
teórico
Definición del tipo de
investigación
Desarrollo de la hipótesis
Diseño de la investigación
Extracción de los extractos
Parámetros de Control de
Calidad de los extractos
Conformación de grupos
Primera fase del ensayo
Segunda fase del ensayo
Recolección de datos
Análisis de resultados
Conclusiones y RecomendacionesInforme Final
Presentación final
46
2.1.2 Métodos teóricos
El método científico utilizado concierne al hipotético deductivo, dado que en la
investigación realizada existe un planteamiento de hipótesis que a través de los
resultados logrados nos permitirá aceptar o rechazar la misma; esto es, que con
la administración de la mezcla hidroalcohólica se obtendrá el efecto buscado.
2.1.3 Métodos empíricos
Otro método empleado es de carácter Observacional y experimental, debido a
que en la evaluación realizada empezó desde la obtención y cuantificación de
los principios activos presentes en las plantas y culminó con la aplicación de la
actividad antiinflamatoria en los animales de experimentación.
2.1.4 Métodos matemáticos o estadísticos
Se aplicó la fórmula del porcentaje de inflamación, y además análisis
estadísticos para definir la diferencia significativa entre grupos.
47
2.2 Metodología
2.2.1 Adquisición de las especies
La adquisición de las especies vegetales de Matricaria chamomilla y Urtica
urens, se lo realizó en el Mercado Central de la ciudad de Guayaquil. Se
procedió a separar las hojas y raíces de Urtica urens y la sumidad florida (flores)
de Matricaria chamomilla; fueron llevadas al laboratorio de fitoquímica para su
cualificación y al laboratorio de PROGECA de la Universidad de Guayaquil −
Facultad de Ciencias Químicas para su cuantificación y extracción, estas
especies deberán de encontrarse frescas y en buen estado. Además, se tomó un
ejemplar de cada especie y fueron enviadas a la Facultad de Ciencias Naturales
al departamento de Botánica Sistemática del Herbario GUAY para la
identificación de los especímenes y su descripción (Anexo 1 - 2).
2.2.2 Parámetros Físico y Fisicoquímicos de las especies vegetales
2.2.2.1 Humedad
Se siguió el método que se encuentra descrito en el CIBE, (2015), por
Miranda, M. et. al:
Se pesó alrededor de 2 gramos de muestra triturada en un crisol de vidrio
(Anexo III).
Se desecó en la estufa a una temperatura de 105 ± 2 ˚C, durante 2 horas.
Se dejó enfriar el crisol con la muestra en el desecador, y se llevó hasta
peso constante (Gráfico IV).
48
Se calculó mediante la siguiente ecuación matemática:
Hg=M2-M1
M2-M*100
Hg= pérdida en peso por desecación (%).
M2= Masa de la cápsula con la muestra de ensayos (g).
M1= Masa de la cápsula con la muestra de ensayo desecada (g).
M= masa de la cápsula vacía.
Obtenido de (Miranda & Dranguet, 2015).
2.2.2.2 Cenizas
Según, Cabrera, H. et al. (2012), sigue los siguientes pasos para la
determinación del porcentaje de humedad:
Se pesó alrededor de 2 gramos de muestra triturada en un crisol de
porcelana (Anexo V).
Se llevó a carbonizar la muestra en la mufla a una temperatura de 600 ˚C.,
durante 2 horas. Se dejó enfriar el crisol con la muestra en el desecador y se
pesó (Anexo VI).
Se calculó mediante la siguiente ecuación matemática:
C=M2-M
M1-M*100
C= Porcentaje de cenizas totales en base hidratada.
M= Masa del crisol vacío (g).
M1= Masa del crisol con la porción de ensayo (g).
M2= Masa del crisol con la ceniza.
49
2.2.2.3 Screening −Tamizaje Fitoquímico
Siguiendo el método de Pereira, S et al. (2009), se realizó el Screening de la
siguiente manera:
2.2.2.3.1 Alcaloides
2.2.2.3.1.1 Ensayo de Dragendorff
En el caso que si el extracto esta disuelto en solvente orgánico, debe
evaporarse en baño de agua y el residuo redisolverlo en 1ml de HCl al 1% en
agua. Si se trata de un extracto acuoso, añadir 1 gota de HCl concentrado a la
alícuota, calentar suavemente y dejar enfriar hasta acidez.
Añadir a la solución acuosa acida 3 gotas del reactivo de Dragendorff, y proceder
a la observación: Opalescencia: (+), Turbidez definida: (++), Precipitado: (+++)
(Anexo VII).
2.2.2.3.1.2 Ensayo de Mayer
En una solución acida adicionar una pizca de ClNa en polvo, agitar y filtrar. Al
filtrado se le adiciona de 2 a 3 gotas de la solución reactiva de Mayer. Se
procede a reportar: Opalescencia: (+), Turbidez definida: (++), Precipitado: (+++).
Si se tratase de alcaloides cuaternarios o aminos-óxidos libres, estos
únicamente se encontrarán en extractos acuosos y para corroborar su presencia
la reacción debe ser (++) o (+++), pues si es de (+) esta puede ser la reacción de
una extracción incompleta de bases primarias, secundarias e incluso terciarias
(Anexo VII).
50
2.2.2.3.1.3 Ensayo de Wagner
Es necesario emplear una solución ácida y adicionar de 2 a 3 gotas del
reactivo de Wagner, y se reportan los resultados según la observación (Anexo
VII).
2.2.2.3.2 Saponinas
Proceder a medir 3 ml., del extracto acuoso y agitar vigorosamente, de
manera que permita observar la espuma persistente que indica la presencia de
saponinas (Anexo VIII).
2.2.2.3.3 Cumarinas
Colocar en un tubo de ensayo de 3 a 4 ml., de extracto acuoso de la muestra
vegetal, luego se cubre el tubo con un papel filtro humedecido en solución de
NaOH al 10% (Anexo IX). Colocar el tubo en baño maría por 5 minutos (Anexo
X), retirar el papel filtro del tubo y observar en luz ultravioleta. Presencia positiva
de cumarinas, se observa una fluorescencia verdosa o rosada en el papel filtro
(Anexo XI).
2.2.2.3.4 Triterpenos y/o esteroides
2.2.2.3.4.1 Ensayo de Lieberman-Bouchard
En ambos tipos de productos que posean el núcleo del androstano,
generalmente insaturado en el anillo B y la posición 5-6. La extracción debe
realizarse en una solución clorofórmica tomar 1 ml., del extracto adicionar 1 ml.,
51
de anhídrido acético y mezclar. Por la parte del tubo de ensayo se deja resbalar
de 2 a 3 gotas de Ácido Sulfúrico concentrado.
Se considera positivo al adquirir la siguiente coloración: Rosado-azul (muy
rápido); Verde intenso-visible (aunque rápido); Verde oscuro-negro- final de la
reacción (Anexo XII).
Las coloraciones pueden variar por interferencias producidas por carotenos,
xantofilas y esteroides saturados que puedan estar presentes.
2.2.2.3.5 Azúcares reductores
2.2.2.3.5.1 Ensayo de Fehling
Si se tratase de un extracto, cuyo solvente no sea agua dejar evaporar en
baño de agua y el residuo redisolverlo en 1-2ml., de agua, luego se adiciona
2ml., del reactivo y se calienta en baño de agua de 5 – 10 minutos la mezcla. Se
considera positivo en el caso de que se colorea de rojo o precipite de rojo
(Anexo XIII).
El reactivo se prepara de la siguiente forma:
Solución A: Se pesa 35g., de sulfato cúprico hidratado cristalizado y se
disuelve con agua hasta un volumen total de 100ml.
Solución B: Se pesa 150 g., de tartrato de Na y K y 40g., de Hidróxido de
Sodio y se disuelve con agua hasta un volumen de 100ml.
Las soluciones se mantienen preparadas de forma individual, y se mezcla de
igual cantidad en volumen de cada una de ellas en el momento de realizar el
ensayo, en la alícuota que se va a evaluar.
52
2.2.2.3.6 Compuestos fenólicos y/o taninos
2.2.2.3.6.1 Ensayo de Cloruro Férrico
Tomar una alícuota de 1 ml., del extracto hidroalcohólico y adicionar 3 gotas
de la solución de Cloruro Férrico al 5 o 10%. Si hay presencia de taninos se
obtiene una coloración azul, verde, pardo o negro (Gráfico XIV).
2.2.2.3.7 Flavonoides
2.2.2.3.7.1 Ensayo de Shinoda
Tomar 1 ml., de la alícuota de un extracto hidroalcohólico, diluir con 1 ml., de
ácido Clorhídrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metálico. Se
espera 5 minutos para añadirle 1ml., de alcohol amílico, se mezclan las fases y
se deja reposar hasta que se separen. Si la alícuota se encuentra en agua,
procede de igual forma, a partir de la adición del ácido clorhídrico concentrado.
Se considera positivo cuando el alcohol amílico se colorea de amarillo, naranja,
carmelita o rojo; intensos en todos los casos.
53
2.2.3 Extractos Hidroalcohólicos
2.2.3.1 Extracción de principios activos de Matricaria Chamomilla y Urtica urens
Se preparó 1 litro de alcohol al 70%, diluyéndolo en agua tipo 1. La extracción
se la realizó por maceración usando alcohol al 70, donde por cada gramo de
planta se colocó 1 ml., de alcohol (Gráfico XV), y se dejó macerar por una
semana (Shaparin, 2000). Se filtró con ayuda de un algodón, permitiendo
separar el residuo, y así quedando el líquido libre de impurezas (Gráfico XVI).
2.2.3.2 Obtención de las mezclas hidroalcohólicas de Matricaria chamomilla y
Urtica urens
Para la preparación de las mezclas hidroalcohólicas a distintas
concentraciones, se tomó volúmenes diferentes de las extracciones realizadas
de la Matricaria chamomilla y Urtica urens (Anexo XVII) de la siguiente manera:
80O:20M 80 ml., de Ortiga y 20 ml., de Manzanilla.
50O:50M 50 ml., de Ortiga y 50 ml., de Manzanilla.
20O:80M 20 ml., de Ortiga y 80 ml., de Manzanilla.
54
2.2.4 Parámetros Físicos y Fisicoquímicos de los extractos
hidroalcohólicos y mezcla.
2.2.4.1 Características Organolépticas
2.2.4.1.1 Olor
Con un tira de papel de 1x10 cm., se introdujo en un extremo de la muestra.
Posteriormente oler y determinando su olor (Anexo XVIII).
2.2.4.1.2 Color
En un tubo de ensayo colocar 3 ml., de muestra, observar el color
(transparencia, opalescencia o separación de capas) (Anexo XIX).
55
2.2.4.2 Determinación de los Sólidos Totales
Se siguió el método que se encuentra descrito en el CIBE, (2015), por
Miranda, M. et. al:
Se tomó 5 ml., del extracto de las distintas muestras a una cápsula
previamente tarada a 105º C., se evaporó a baño de agua hasta casi
sequedad (Anexo XX).
Se llevó a la estufa y se dejó hasta peso constante (aproximadamente 3
horas) (Anexo XXI). Se retiró la cápsula de la estufa y se colocó en un
desecador hasta que alcance la temperatura ambiente (Anexo XXII).
La fórmula para determinar el porcentaje de sólidos totales, se calcula por la
siguiente formula:
St = Pr - P
V x 100
Donde:
P1= masa de la cápsula más el residuo (g).
P = masa de la cápsula vacía (g).
V = volumen de la porción de ensayo.
100 = factor matemático para el cálculo.
Observación: en caso de aceites esenciales se denomina como residuo de
evaporación (R).
56
2.2.4.3 Determinación de Densidad Relativa
Se siguió el método que se encuentra descrito en el CIBE, (2015), por
Miranda, M. et. al:
Se pesó el picnómetro vacío y seco. Posteriormente se enrasó con agua,
ajustando el líquido al nivel empleado y se pesó (Anexo XXIII).
Se secó el picnómetro y se enrasó con el extracto; y se repitió la misma
operación que en el paso anterior.
Para determinar la densidad relativa se calculó por la siguiente formula:
D25
M1-M
M2-M
Donde:
M1= peso del picnómetro con la muestra (g).
M2= peso del picnómetro con el agua (g).
M = peso del picnómetro vacío (g).
2.2.4.4 Determinación del pH de los extractos
Se realizó un ajuste del equipo con una solución reguladora de pH.
Posteriormente se procedió a determinar el valor del pH, de las muestras (Anexo
XXIV).
57
2.2.5 Cuantificación de principios activos
2.2.5.1 Cuantificación de quercetina
Estándar
Se pesó en una balanza analítica 20 mg., de estándar de quercetina
(flavonoides) en un matraz volumétrico, y se diluyó cuantitativamente con
alcohol al 80% (solución stock), hasta volumen final de 50 ml.
De esta solución se preparó una dilución primeria, tomando una alícuota
de 0,75 ml., y llevándolo a un matraz volumétrico de 25 ml.
A partir de esta dilución primaria se preparó los estándares para la curva
de calibrado (Gráfico XXV), tomando volumen de acuerdo indicado en la
Tabla V.
Tabla V
Diluciones para la elaboración de la curva de calibrado.
Alícuota
(ml)
Acetato de Potasio 1M
(µl)
Nitrato de Aluminio 10%
(µl)
VF etanol 80%
(ml)
0,5 200 200 4
1 200 200 4
1,5 200 200 4
2 200 200 4
2,5 200 200 4
3 200 200 4
3,5 200 200 4
4 200 200 4
Nota: µl= microlitros; ml= mililitros. Elaboración propia.
58
Se dejó en reposo por 40 min., y se leyó en el espectrofotómetro (Gráfico
XXVI).
Además, se usó como blanco alcohol al 80%.
Muestra
Para la cuantificación de quercetina en los extractos y en la mezcla, se
procedió según lo indica la Tabla VI y esto se realizó este análisis por triplicado
(Anexo XXVII).
Tabla VI
Tratamiento de los extractos para la cuantificación de quercetina.
Muestra Alícuota
(ml)
Acetato de
Potasio 1M (µl)
Nitrato de
Aluminio 10% (µl)
VF etanol
80% (ml)
Ortiga 1 400 400 10
Manzanilla 1 400 400 10
Mezcla 1 400 400 10
Nota: µl microlitros, ml mililitros. Elaboración propia.
Se dejó en reposo por 40 minutos, y se leyó en el espectrofotómetro UV a 415
nm.
59
2.2.5.2 Cuantificación de Taninos
Se trata de un método volumétrico por Lowenthal, J. pero descrito por Hart &
Fisher, (1984), usado para la cuantificación de taninos. Usando como indicador
el índigo de carmín y una solución titulante de permanganato de potasio (0,005
M). Este método consta de dos fases:
Primera Fase: Se procedió a tomar 1 ml., de la muestra, se agregó 5 ml., del
indicador índigo de carmín y 200 ml., de agua destilada. Valorar frente a la
solución de permanganato de potasio al 0,005 M, hasta una coloración azul,
posteriormente se desvanece a un verde claro. Valorar gota a gota hasta una
coloración amarilla. Consumo 1 (Anexo XXVIII).
Segunda Fase: Se procedió a tomar 1 ml., de la muestra en 50 ml., de
disolución de gelatina, agregar 100 ml., de solución ácida de ClNa y 10 g., de
caolín, se agitó la mezcla durante unos minutos, se esperó a que se sedimente
el residuo y se filtró. Se procedió a valorar con permanganato de potasio al 0,005
M de la misma forma que en la primera fase. Consumo 2 (Anexo XXIX).
60
2.2.6 ESTUDIO FARMACOLÓGICO
2.2.6.1 Material biológico
Se seleccionó ratas machos Wistar de 12 semanas de edad, con un peso
promedio de 240 ± 20 g, donde se conformó 5 grupos de 4 ratas cada uno, y se
distribuyeron en jaulas plásticas con tapa de rejilla metálica, donde además,
poseían un bebedero. Las jaulas fueron identificadas de la siguiente manera:
código del grupo, tipo de ensayo, fecha de inicio y fecha de terminó. Además los
animales fueron asignados con un número en la cola, llevando un control de
registro (Anexo XXXIV - XXXIX). Las condiciones ambientales que se registraron
durante el estudio fueron: temperatura de 22 ± 3 ˚C y una humedad 30 − 70%,
cumpliendo un ciclo circadiano de 12:12 (12 horas de luz y 12 horas de
oscuridad). El período de aclimatización de los animales fueron de
aproximadamente unos 7 días antes de iniciar el ensayo.
2.2.6.2 Materiales y Métodos “Actividad Antiinflamatoria”
2.2.6.2.1 Materiales
Jaulas plásticas, bebedero, balanza analítica, mortero, pistilo, vaso de
precipitación, cánula, pletismómetro.
2.2.6.2.2 Reactivos
Se utilizó como muestra los extractos y las mezclas que fueron objeto de
estudio, cloruro de sodio, carragenina 1%, Diclofenaco.
61
2.2.6.3 Método
El método que se empelará para medir la actividad antiinflamatoria, será el
que se encuentra reseñado en un estudio realizado por Lahoti, Kalra, & Tekur,
(2014).
2.2.6.3.1 Conformación de grupos tratamientos.
Se procedió a la selección de los animales que fueron sometidos a estudio,
los cuales fueron pesados en una balanza pesa animales (Shimadzu-UW82005);
se formó los distintos grupos a trabajar los mismos que se encuentran descritos
en la Tabla VII – VIII, registros de pesos iniciales (Anexo XXX). Y a partir de ello
se realizarán las administraciones a cada grupo (Anexo XXXV - XL).
62
Tabla VII
Grupos trabajados en la valoración para la Actividad Antiinflamatoria: Urtica
urens y Matricaria chamomilla de las Mezclas hidroalcohólicas (Primer
Ensayo).
Grupo Fármaco
Volumen a
administrar
(ml/kg)
Dosis
(mg/kg)
Concentración de
las mezclas
hidroalcohólicas
A Control:
Negativo ClNa 0.9% 2 - -
B Control:
Positivo Diclofenaco 2 75 -
C Muestra Urtica urens y
Matricaria chamomilla 2 2,03 80O:20M
D Muestra Urtica urens y
Matricaria chamomilla 2
-
50O:50M
E Muestra Urtica urens y
Matricaria chamomilla 2 20O:80M
Nota. ml: mililitros; mg/kg: miligramos por kilogramos; 80O: 80 ml de Ortiga; 20O: 20
ml de Ortiga; 500: 50 ml de Ortiga; 80M: 80 ml de Manzanilla; 20M: 20 ml de
Manzanilla; 50M: 50 ml de Manzanilla. Elaboración propia.
63
2.2.6.3.2 Inducción del Edema Plantar
Doce horas antes de haber realizado el inicio a la evaluación de la actividad
antiinflamatoria, se les retiró el alimento a los animales, no así el agua. El día de
la prueba, se procedió a medir el volumen desplazado de agua de la pata trasera
derecha del animal (normal/inicial) en un pletismómetro. A continuación, se
administró la medicación a cada grupo respectivamente. Media hora después, se
les aplicó la carragenina al 1%, administrando así 0,1 ml., en la región suplantar
induciendo de esta manera la inflamación (Anexo XXXI).
Tabla VIII
Grupo Fármaco
Volumen a
administrar
(ml/Kg)
Dosis
(mg/kg)
Concentración
de las mezclas
hidroalcohólicas
A Control:
Negativo ClNa 0.9% 2 - -
B Control:
Positivo Diclofenaco 2 75 -
C Muestra Urtica urens y
Matricaria chamomilla 2 2,03 80O:20M
D Muestra Matricaria chamomilla 2 0,80 -
E Muestra Urtica urens 2 1,67 -
Grupos trabajados en la valoración para la Actividad Antiinflamatoria: Urtica
urens y Matricaria chamomilla de los extractos independientes frente a la mezcla
hidroalcohólica 80O:20M (Segundo Ensayo).
Nota. ml: mililitros; mg/kg: miligramos por kilogramos; 80O: 80 ml de Ortiga; 20O: 20 ml
de Ortiga; 500: 50 ml de Ortiga; 80M: 80 ml de Manzanilla; 20M: 20 ml de Manzanilla;
50M: 50 ml de Manzanilla. Elaboración propia.
64
2.2.6.3.3 Medición de la Inflamación plantar
Una vez que transcurrieron 3 horas después de la administración de la
carragenina, se procedió a medir el volumen de desplazamiento, a partir de este
tiempo se evaluó la inflamación a la primera hora, tercera hora, y finalmente a la
quinta hora (Anexo XXXII).
2.2.7 Bioética
Este estudio farmacológico se realizó aplicando los principios de Bioética de
experimentación con animales, que consiste en las 3 Rs: Reducción (menor
cantidad de animales), Refinamiento (uso de técnicas que eviten, y que no
causen dolor al animal) y Reemplazo (uso de animales de especies menores).
Durante este estudio se evitó todo sufrimiento innecesario, y asimismo, una
vez que se dio por terminado el ensayo se procedió a la eutanasia de acuerdo al
siguiente procedimiento:
En una cabina saturada de éter se colocó al animal, de manera que produzca
inconciencia, y así se procedió a realizar la dislocación cervical comprobando su
muerte.
65
2.2.8 Resultados
Los resultados constaron en tablas elaboradas en Excel que nos permitió,
realizar los cálculos correspondientes, además se elaboraron formatos que
receptaron los datos de las administraciones realizadas en los distintos grupos y
el volumen de desplazamiento de la pata trasera derecha, tanto normal como
inflamada.
2.2.9 Cálculos de los resultados
Los cálculos se realizaron en Excel, y a partir de ella se obtuvo el promedio
del volumen desplazado, y se aplicó la fórmula para obtener los porcentajes de
inflamación medida a través del tiempo.
% Inflamación= Vt - Vo
Vo
X 100
Donde:
Vt = Volumen (final) de la pata inflamada a un tiempo.
Vo = Volumen (inicial) normal.
2.2.10 Análisis de los resultados
Adicionalmente, se realizó un análisis estadístico, tanto del porcentaje de
inflamación, aplicando una comparación de medias (ANOVA), con la ayuda de
un programa estadístico con una probabilidad estadística <0,05.
66
2.3 Tipo de investigación
El tipo de investigación en el que se basa nuestro estudio es correlacional,
debido a que existen variables dependientes como el porcentaje de inflamación,
y las independientes como el tiempo y los diferentes niveles de concentración de
las mezclas hidro-alcohólicas, evaluando el efecto antiinflamatorio esperado.
2.4 Diseño experimental de la investigación
Este estudio se basa en el Diseño experimental verdadero, involucrando así al
diseño experimental de series cronológicas; pues se llega a emplear varios
grupos experimentales, realizando las correspondientes mediciones en
diferentes tiempos (1ra, 3ra y 5ta hora).
67
CAPÍTULO III
RECOLECCIÓN DE DATOS. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
3.1 Análisis Físico y Fisicoquímicos
3.1.1 Humedad
Tabla IX
Tabla de resultados de los porcentajes de humedad en especies vegetales
Repeticiones Manzanilla (%) Ortiga (%)
1 83,52 70,36
2 83,47 70,11
3 82,90 71,17
83,30±0,34 70,55±0,55
Nota. Unidades expresadas en porcentaje de humedad (%). Elaboración propia.
La determinación de humedad de las especies (manzanilla y ortiga), se lo
realizó por triplicado para verificar que no existieran variaciones en los
resultados. La humedad promedio de la manzanilla fue de 83,30 y la ortiga de
70,55 (Tabla IX).
68
3.1.2 Cenizas
Tabla X
Tabla de resultados de los porcentajes de cenizas en especies vegetales
Repeticiones Manzanilla (%) Ortiga (%)
1 2,07 6,27
2 1,99 5,40
3 1,82 6,18
1,96±0,13 5,95±0,48
Nota. Unidades expresadas en porcentaje de cenizas (%). Elaboración propia.
La determinación de cenizas de las especies (manzanilla y ortiga), se realizó
por triplicado para verificar que no existieran variaciones en los resultados. La
ceniza promedio de la manzanilla fue de 1,96% y la ortiga de 5,95% (Tabla X).
69
3.1.3 Screening o Tamizaje Fitoquímico
Tabla XI
Screening Fitoquímico de las especies vegetales de ortiga (Urtica urens) y
manzanilla (Matricaria chamomilla), en extracto acuoso y hidroalcohólico.
Muestra Análisis Reacción Resultados
Manzanilla Ortiga
EXTRACTO
ACUOSO
Alcaloides
Dragendorff - +
Wagner - +
Bouchardat - +
Mayer - +
Saponinas Espuma ++ +++
Cumarinas Hidróxido de
Sodio ++ +
Taninos Cloruro
Férrico - ++
EXTRACTO
ALCOHÓLICO
Glucósidos
Fehling A + +
Fehling B + +
Benedict + +
Flavonoides Shinoda ++ +
Triterpenos
Anhídrido
Acético, Ac.
Sulfúrico,
Cloroformo
- ++
Antraquinonas
Benceno,
Hidróxido de
sodio
- -
Esteroides
Anhídrido
Acético, Ac.
Sulfúrico
- ++
Nota. (-) No hay desarrollo de la reacción; (+) Mínimo precipitado; (++) Moderado
precipitado o presencia de color; (+++) Abundante precipitado o color intenso.
Elaboración propia.
70
De acuerdo al sreening fitoquímico, realizado en las especies vegetales de
ortiga (Urtica urens) y manzanilla (Matricaria chamomilla) como se muestra en la
Tabla XI, se determinó cualitativamente la presencia de alcaloides, saponinas,
cumarinas, taninos en extracto acuoso; y glucósidos, flavonoides, triterpenos,
antraquinonas, esteroides en extracto hidroalcohólico.
Mediante el extracto acuoso, realizado en ambas especies vegetales se logra
identificar la presencia de ciertos metabolitos, tales como: alcaloides dando
positivo solo en ortiga (+); en el ensayo de saponinas se observó la presencia de
espuma dando positivo en ambas, pero siendo más predominante en la ortiga
indicando (+++); a la vez en el ensayo de cumarinas se observa mayor presencia
de esta en manzanilla que en ortiga (++); y finalmente se logra identificar (++)
taninos en ortiga, siendo negativo en manzanilla al no efectuarse la reacción.
Por lo consiguiente, en el extracto alcohólico de ambas especies vegetales se
identifica los siguientes metabolitos: se determinó la presencia de glucósidos en
ambos extractos; en cuanto a la determinación de flavonoides, presentó mayor
coloración en manzanilla dando así el ensayo positivo (++); se observó presencia
de triterpenos en ortiga por medio de la coloración; mediante el ensayo de
antraquinonas dio como resultado negativo en ambas especies; y finalmente en
el ensayo de esteroides dio como resultado positivo en ortiga indicando (++).
71
3.1.4 Análisis Físicos y Fisicoquímicos en los extractos hidroalcohólicos
independientes y mezcla Hidroalcohólica
Tabla XII
Caracterización Organoléptica de los extractos independientes y mezcla
hidroalcohólica (80O:20M)
Caracteres Ortiga Manzanilla Mezcla
(80O:20M)
Olor Herbáceo
característico Dulce a flores Dulce a flores
Color Verde Oscuro Amarillo
verdoso Verde Amarillento
Nota. 80O: 80 ml de ortiga y 20M: 20 ml de manzanilla. Elaboración propia.
Mediante el análisis organoléptico se logró apreciar las siguientes
características de los extractos alcohólicos de las especies vegetales y mezcla
hidroalcohólica (80O:20M) como lo muestra la Tabla XII; indicando que la ortiga
presenta un olor herbáceo característico de la misma; la manzanilla presenta un
olor dulce a flores, y la mezcla también posee un olor dulce a flores; mientras
que el color verde oscuro representa a la ortiga y el amarillo verdoso
corresponde a la manzanilla y ambas otorgan el color verde amarillento a la
mezcla estudiada.
72
Tabla XIII.
Determinación de Solidos Totales; Densidad Relativa, y pH de las especies
vegetales y mezcla hidroalcohólica (80O:20M)
Ensayos Unidades Ortiga Manzanilla Mezcla (80O:20M)
Sólidos Totales % 3,98 4,12 4,14
Densidad
0,9747 0,9753 0,9733
pH 9 6,8 8,3
Nota. (%) porcentaje de sólidos totales. Elaboración propia.
Mediante el estudio fisicoquímico se realizaron determinación en extractos
independientes y en la mezcla hidroalcohólica obteniéndose los siguientes
resultados como lo demuestra la tabla XIII.
3.2 Cuantificación de los principios activos presentes en las especies
vegetales y mezcla hidroalcohólica (80O:20M)
Se realizó la cuantificación de quercetina (flavonoides), en ambas especies
vegetales y taninos, en ortiga (Urtica urens).
73
3.2.1 Quercetina
Tabla XIV
Cuantificación de Quercetina de ambas especies vegetales y mezcla
hidroalcohólica (80O:20M) en alcohol al 70%
Repeticiones Ortiga (µg/ml) Manzanilla (µg/ml) Mezcla (80O:20M) µg/ml
1 29,6 84,9 44,2
2 33,4 85,4 40,6
3 36 68,3 43,4
33±3,22 79,53±9,73 42,73±1,89
Nota. Unidades en microgramos por ml (µg/ml). 80O: 80 ml de Ortiga; 20M: 20 ml de
manzanilla. Elaboración propia.
De acuerdo a los resultados obtenidos de la cuantificación de quercetina,
mediante el uso de una curva de calibrado (Anexo XXXIII) se determinó que por
cada ml; de extracto encontramos: ortiga 33 µg/ml; manzanilla 40,6 µg/ml, y de la
mezcla 80O:20M 43,4 (Tabla XIV).
74
3.2.2 Taninos
Tabla XV
Cuantificación de Taninos Totales de extracto de Urtica urens y mezcla
hidroalcohólica (80O:20M).
Repeticiones Ortiga (g/10ml) Mezcla 80O:20M (g/10ml)
1 0,00179 0,00134
2 0,00089 0,002134
3 0,00134 0,00134
0,00134 0,001607
Nota. g/10ml: gramo por cada 10 ml, 80O: 80 ml de Ortiga, 20M: 20 ml de manzanilla.
Elaboración propia.
De acuerdo a los resultados obtenidos de la cuantificación de taninos por
cada 10 ml de extracto encontramos: ortiga 0,00134, y de la mezcla 80O:20M
0,001607 (Tabla XV).
75
3.3 Evaluación de la actividad antiinflamatoria
3.3.1 Primera fase
Tabla XVI
Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su
respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la primera fase de la evaluación durante la Primera Hora post-
Inducción
GRUPOS
Promedio del
Volumen de
Desplazamiento
Inicial (ml)
SD
Promedio del
Volumen de
Desplazamiento
Inicial (ml)
SD
Diferencia
significativa
Probabilidad
(P<0,05)
Control
Negativo
(ClNa)
1,7 0,18 3,1 0,22 A
Control
Positivo
(Diclofenaco)
1,5 0,13 2,5 0,22 B
Mezcla
(20M:80O) 1,8 0,13 2,4 0,24 B
Mezcla
(50M:50O) 1,4 0,13 2,4 0,2 B
Mezcla
(80M:20O) 1,5 0,13 2,5 0,22 C
Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de significancia:
P<0,05. Elaboración propia.
76
Según, (Tabla XVI) en la primera hora de medición (post–inducción de
inflamación de la pata con carragenina); se puede observar que el grupo control
negativo, el cual no tenía ningún tratamiento el porcentaje de inflamación fue de
84 ± 7,4; para el control positivo tratado (diclofenaco) 64 ± 2,8; los grupos que
recibieron las mezclas de: (20 manzanilla – 80 ortiga) 37 ± 5,4; (50 manzanilla –
50 ortiga) 78 ± 10,7; (80 manzanilla – 20 ortiga) 62,3 ± 7,6. De acuerdo al
análisis estadístico de los datos se observa que presenta diferencias
significativas el grupo control negativo con el resto de grupos tratados, excepto
con el grupo que recibió el tratamiento de la mezcla hidroalcóholica de (50
manzanilla – 50 ortiga), en la que se observa que el porcentaje de inflamación no
presenta diferencias. En tanto que, los resultados analizados tanto del grupo
control positivo (diclofenaco) con la mezcla hidroalcóholica (80 manzanilla – 20
ortiga), presentaron un comportamiento similar. Sin embargo, la mezcla (20
manzanilla – 80 ortiga) fue la que presentó diferencias significativas al ser
comparada con los demás grupos; en cuanto a su porcentaje de inflamación, lo
que se puede inferir que se deba a la presencia de histamina en la ortiga, la
misma que tiene un elevado poder antiinflamatorio, aumentado el porcentaje de
inhibición, y a su vez disminuyendo el porcentaje de inflamación (Figura VIII)
(Anexo XXXVI - XXXVII).
Figura VIII. Porcentajes de Inflamación de los grupos tratamientos en la Primera Fase
de la primera hora. Elaboración propia
- 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00
100,00
A Controlnegativo
B Controlpositivo:
(Diclofenaco)
C Muestra(80 0:20M)
D Muestra(50O:50M)
E Muestra(20O:80M)
77
Tabla XVII
Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su
respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la primera fase de la evaluación durante la Tercera Hora post-
inducción
GRUPOS Promedio del
Volumen de
Desplazamiento
Inicial (ml)
Desviación
Estándar
(SD)
Volumen
Final
(ml)
Desviación
Estándar
(SD)
Diferencia
significativa
Probabilidad
(P<0,05)
Control
Negativo
(ClNa)
1,7 0,18 2,8 0,32 A
Control
Positivo
(Diclofenaco)
1,5 0,13 2,3 0,13 BC
Mezcla
(20M:80O) 1,8 0,13 2,2 0,14 CD
Mezcla
(50M:50O) 1,4 0,13 2,2 0,13 AB
Mezcla
(80M:20O) 1,5 0,13 2,3 0,10 D
Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de
significancia: P<0,05. Elaboración propia.
78
En la tercera hora de la primera fase de evaluación (Tabla XVII), los datos
analizados reportaron que, entre los grupos presentaron diferencias significativas
al ser analizados estadísticamente. El grupo control negativo no tenía ningún
tratamiento el porcentaje de inflamación fue de 64,6 ± 3,9 para el control positivo
(diclofenaco); 47,9 ± 10,2; los grupos que recibieron las mezclas de: (20
manzanilla – 80 ortiga); 25,8 ± 3,9; (50 manzanilla – 50 ortiga); 59,8 ± 8,9; (80
manzanilla – 20 ortiga); 49,57 ± 7.0.
Se reporta que presenta diferencias significativas el grupo control negativo
con el resto de grupos tratados, excepto con el grupo que recibió el tratamiento
de la mezcla hidro-alcohólica de (50 manzanilla – 50 ortiga), en la que se
mantiene la misma tendencia que la primera hora de lectura. El grupo que fue
tratado con (80 manzanilla – 20 ortiga), tuvo proximidad en su respuesta al grupo
se enmarcó más (50 manzanilla-50 ortiga), este resultado también dada a su
tendencia fue comparable con el grupo control positivo. En tanto, que el grupo
que recibió la mezcla (20 manzanilla – 80ortiga), presentó un porcentaje de
inflamación mucho menor, inclusive con el fármaco que se sirvió como control
positivo que posee características antiinflamatorias (Figura IX) (Anexo XXXVI -
XXXVII).
79
Lo que demuestra que la asociación de ambas especies vegetales se
potencializan, esto se le puede atribuir a la presencia de algunos componentes
en la ortiga como son: flavonoides (quercetina), cumarinas, ácidos orgánicos
(gálico, fórmico), compuestos fenólicos, taninos, acetilcolina y una gran cantidad
de clorofila, histamina y serotonina. La clorofila tiene como función eliminar
toxinas de nuestro organismo, posee actividad antioxidante y antiinflamatorio.
Debido a la presencia de tricomas en las hojas de ortiga, estas presentan un alto
contenido de histamina y serotonina (produce picor), pero a su vez ayuda a
contrarrestar el dolor y la inflamación. Se conoce que los ácidos orgánicos
reducen los niveles de sustancias inflamatorias producidas por la activación de
las células T, inhibiendo la producción de células dendríticas maduras y la
producción de citoquinas pro-inflamatorias evitando que el sistema inmune active
el factor que produce inflamación la que puede desencadenar en una necrosis
tumoral.
Figura IX. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Primera Fase
de la tercera hora. Elaboración propia.
-
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
A Controlnegativo
B Controlpositivo:
(Diclofenaco)
C Muestra(80 0:20M)
D Muestra(50O:50M)
E Muestra(20O:80M)
80
Tabla XVIII
Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su
respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la primera fase de la evaluación durante la Quinta Hora post-
inducción.
GRUPOS
Promedio del
Volumen de
desplazamiento
Inicial (ml)
Desviación
Estándar
(SD)
Volumen
Final
(ml)
Desviación
Estándar
(SD)
Diferencia
significativa
Probabilidad
(P<0,05)
Control
Negativo
(ClNa)
1,7 0,18 2,5 0,30 A
Control
Positivo
(Diclofenaco)
1,5 0,13 2,1 0,13 BC
Mezcla
(20M:80O) 1,8 0,13 2,0 0,14 C
Mezcla
(50M:50O) 1,4 0,13 1,9 0,10 AB
Mezcla
(80M:20O) 1,5 0,13 2,0 0,21 C
Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de significancia:
P<0,05. Elaboración propia.
En la quinta hora de la primera fase de evaluación, los grupos presentaron
diferencias significativas al ser analizados estadísticamente (Tabla XVIII). El
grupo control negativo no recibió ningún tratamiento el porcentaje de inflamación
fue de 48,6 ± 10; presentó diferencias entre grupos, excepto con el grupo que
fue tratado con (50 manzanilla – 50 ortiga) presentando una inflamación de
43,09 ± 7,13, el mismo que presentó semejanza con el grupo que recibió
diclofenaco 34,61 ± 4,43, en tanto que la mezcla de (80 manzanilla – 20 ortiga) a
81
esta hora se pudo notar que el porcentaje de inflamación 27,71 ± 5, estuvo por
debajo del control positivo.
En tanto, que con la mezcla, (20 manzanilla – 80 ortiga) el porcentaje de
inflamación fue mucho menor 14,35 ± 3,59, presentando diferencias con todos
los demás grupos (Figura X), de lo que se puede deducir que debido a la
presencia de los componentes que tienen la ortiga incorporados los de la
manzanilla sea este el caso de la presencia de los flavonoides, taninos y
compuestos fenólicos captadores de radicales libres que favorecen la actividad
desinflamatoria (Anexo XXXVI - XXXVII). A la vez los flavonoides (quercetina y
apigenina), que actúan sinérgicamente en el mecanismo de la acción inhibitoria
de las enzimas 5-lipooxigenasa y ciclooxigenasa. También interacciona los
flavonoides y los componentes del aceite esencial, en especial “la fracción
sesquiterpénica conformada por el α − bisabolol y los bisabolóxidos A y B” que
son los principales principios activos de la manzanilla que inhiben la acción
inflamatoria. Además, el ácido caféico inhibe parcialmente la biosíntesis de
metabolitos derivados del ácido araquidónico, y a su vez la síntesis de
prostaglandinas en extractos hidroalcohólicos porque en extracto acuoso no
presenta la misma actividad terapéutica, ya que el compuesto presenta baja
solubilidad en agua.
Figura X. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Primera fase de
la quinta hora. Elaboración propia.
-
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
A Controlnegativo
B Controlpositivo:
(Diclofenaco)
C Muestra(80 0:20M)
D Muestra(50O:50M)
E Muestra(20O:80M)
82
3.3.2 Segunda fase
Tabla XIX
Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su
respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Primera Hora post-
inducción.
GRUPOS
Promedio del
Volumen de
desplazamiento
Inicial (ml)
Desviación
Estándar
(SD)
Volumen
Final
(ml)
Desviación
Estándar
(SD)
Diferencia
significativa
Probabilidad
(P<0,05)
Control
Negativo
(ClNa)
1,4 0,06 2,5 0,08 A
Control
Positivo
(Diclofenaco)
1,5 0,13 2,4 0,15 B
Ortiga 1,4 0,34 2,4 0,39 B
Manzanilla 1,3 0,17 1,9 0,19 C
Mezcla
(80O:20M) 1,3 0,19 2,2 0,22 B
Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de significancia:
P<0,05. Elaboración propia.
83
En esta segunda fase de evaluación se realizó la medición de inflamación por
medio del volumen de agua desplazado (Tabla XIX). Consistió en evaluar si
existía diferencia, en relación al porcentaje de inflamación que presentaban los
grupos que recibieron extractos tanto de manzanilla y ortiga; obtenidas
(independientemente), con los animales que fueron tratados con la mezcla de
(20 manzanilla – 80ortiga), y aquellos a los que, se les administró diclofenaco.
En donde a la primera hora en que se realizó la medición de inflamación, los
porcentajes obtenidos fueron para el control negativo (Cl Na) 85,3 ± 5,6; para el
control positivo (diclofenaco) 66,8 ± 7,8; en el grupo tratado con ortiga 59,5 ±
12,7; para el grupo tratado con manzanilla 68,8 ± 12; y en la mezcla tratada (20
manzanilla – 80 ortiga) 42,2 ± 11,3 (Figura XI).
De lo que se puede establecer que el porcentaje presentado por la mezcla
fue menor que el del diclofenaco que en este estudio fue el control positivo, y
que es un fármaco comercial que se lo utiliza como antiinflamatorio (Anexo XLI –
Anexo XLII). En cuanto al control negativo este fue el que presentó mayor
porcentaje de inflamación existiendo diferencias significativas entre grupos. El
porcentaje presentado, tanto de ortiga como para manzanilla (extractos
independientes), no presentaban diferencias con el control positivo, es decir,
estos aunque son extractos aislados, también poseen actividad antiinflamatoria.
84
La explicación de estos resultados puede estar asociada al estudio realizado
por Wagner y Willer (1990), sobre la actividad antiflogística, en el que se aisló
una mezcla de léctina, y cinco polisacáridos ácidos de las raíces Urtica. Estos
compuestos mostraron actividades inmunológicas, estimulación de los linfocitos
T y los macrófagos inducida por la liberación de factor de necrosis tumoral
(TNF).
Figura XI. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda Fase
de la quinta hora. Elaboración propia.
-
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
A ControlNegativo
B ControlPositivo
(Diclofenaco)
C Muestra(Ortiga)
D Muestra(Manzanilla)
EMuestra(80O:20M)
85
Tabla XX
Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su
respectiva desviación estándar, y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Tercera Hora post-
inducción.
GRUPOS
Promedio del
Volumen de
desplazamiento
Inicial (ml)
Desviación
Estándar
(SD)
Volumen
Final
(ml)
Desviación
Estándar
(SD)
Diferencia
significativa
Probabilidad
(P<0,05)
Control
Negativo
(ClNa)
1,7 0,18 2,8 0,32 A
Control
Positivo
(Diclofenaco)
1,5 0,13 2,3 0,13 CD
Ortiga 1,8 0,13 2,2 0,14 AB
Manzanilla 1,4 0,13 2,2 0,13 D
Mezcla
(80O:20M) 1,5 0,13 2,3 0,10 BC
Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de
significancia: P<0,05. Elaboración propia.
En la tercera hora del estudio se realizó la medición de inflamación por medio
del volumen de agua desplazado. A partir de los cuales se obtuvo el porcentaje
de inflamación, tales como: control negativo (Cl Na) 72,4 ± 10,2; para el control
positivo (diclofenaco) 41,6 ± 20,63; en el grupo tratado con ortiga 34,42 ± 5,6;
para el grupo tratado con manzanilla 56,34 ± 17; y en la mezcla tratada (20
manzanilla – 80 ortiga) 21,28 ± 5,84.
86
En la Tabla XX se demuestra que la diferencia que presenta el grupo
tratamiento (20 manzanilla – 80 ortiga) mantiene la misma tendencia que en la
primera hora de evaluación; es decir, que el porcentaje presentado por este
grupo está por debajo del grupo control positivo (diclofenaco); lo que implica que
exista diferencias significativas en relación con los otros grupos. En tanto, que de
acuerdo a la significancia estadística del porcentaje entre los grupos, se puede
indicar que guardan proximidad ascendente en el siguiente orden: el grupo
tratado con mezcla (80 ortiga – 20 manzanilla), ortiga (extracto aislado), seguido
del diclofenaco, manzanilla (extracto aislado), y finalmente el control negativo
con un elevado porcentaje de inflamación (Figura XII) (Anexo XLI – Anexo XLII).
Por ende, se puede inferir que el mecanismo de acción de los AINES, es la
de inhibir la enzima ciclooxigenasa, (encargadas de transformar el ácido
araquidónico en endoperóxidos cíclicos), es el responsable tanto de la actividad
terapéutica, debido a esto, es que se debe la respuesta obtenida con el
diclofenaco. Del mismo modo, estudios realizados sobre la actividad
antiinflamatoria del extracto hidroetánolico de ortiga, han demostrado que el
ácido cafeilmálico aislado (principal constituyente fenólico) inhiben parcialmente
entre un 20,8 y 68,2%, la biosíntesis de metabolitos derivados del ácido
araquidónico y de leucotrienos in vitro.
87
Otros estudios que fueron realizados por Kavalali y Tuncel, (1997) sobre el
extracto hidroetánolico de la ortiga, el ácido aislado presentaron capacidad de
inhibir la síntesis de prostaglandinas, en donde la actividad anti-inflamatoria U.
pilulifera (ortiga romana), se comprobó que estaba en dependencia de la dosis
de extracto de semilla que se le administro a las ratas, en donde se compara con
la indometacina y placebo usando un edema inducido por carragenina en pata
de rata. Los resultados mostraron una acción antiinflamatoria era similar entre el
extracto U. pilulifera con la indometacina y presentaban diferencias significativas
con el placebo. Estos resultados son semejantes con los obtenidos en este
estudio para la mezcla hidroalcóholica.
Figura XII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda Fase de
la tercera hora. Elaboración propia.
- 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00
A ControlNegativo
B ControlPositivo
(Diclofenaco)
C Muestra(Ortiga)
D Muestra(Manzanilla)
EMuestra(80O:20M)
88
Tabla XXI
Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su
respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos
tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Quinta Hora post-
inducción.
GRUPOS
Promedio del
Volumen de
desplazamiento
Inicial (ml)
SD
Promedio del
Volumen de
desplazamiento
Inicial (ml)
SD
Diferencia
significativa
Probabilidad
(P<0,05)
Control
Negativo
(ClNa)
1,7 0,18 2,5 0,30 A
Control
Positivo
(Diclofenaco)
1,5 0,13 2,1 0,13 C
Ortiga 1,8 0,13 2,0 0,14 AB
Manzanilla 1,4 0,13 1,9 0,10 C
Mezcla
(80O:20M) 1,5 0,13 2,0 0,21 BC
Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de significancia:
P<0,05. Elaboración propia.
La medición efectuada a la quinta hora exhibe volúmenes de agua
desplazado tanto al inicio de la experiencia, como al final de la misma, a partir de
los cuales se establece el grado de inflamación calculados a partir de los
porcentajes (Anexo XLI – Anexo XLII).
89
En cuanto al análisis estadístico realizado; el extracto mostró una actividad
anti- inflamatoria prolongada comparable a la eficacia farmacológica del
diclofenaco, de acuerdo a lo que se puede observar en la Tabla XXI en la que
los porcentajes muestran diferencias entre grupos, así los porcentajes para el:
control negativo (Cl Na) 45 ± 20; control positivo (diclofenaco) 22,9 ±2,95; el
grupo tratado con ortiga 18,3 ± 7; tratado con manzanilla 34,2 ± 5,4; y en la
mezcla tratada (20 manzanilla – 80 ortiga) 13,6 ± 5; este último grupo no
presentó diferencia con el grupo tratado con ortiga (extracto aislado). Se puede
indicar que ambas plantas medicinales (manzanilla y ortiga) presentan efecto
sinérgico debido a que poseen componentes activos con propiedades
antiinflamatorias como el ácido caféico, quercetina, taninos, cumarinas. Además,
la Ortiga contiene otros principios tales como: el ácido linoleico (precursor de las
prostaglandinas), hormonas que bloquean la producción de jugo gástrico,
vitamina B2 y mucilagos que actúan como citoprotectores debido a la reducción
de secreción gástrica al estimular la secreción de bicarbonato y moco, así
asegura protección de la mucosa gástrica.
Estudios realizados in vitro y en animales por Flury (1927), demuestran que la
irritación de la ortiga se debe a la presencia de un fluido que se produce en la
base del cabello urticante que contiene una pequeña cantidad de ácido fórmico
y, que es el que confiere la propiedad antiinflamatoria, disminuye el dolor de
articulaciones e intervienen en el alivio del reumatismo. En tanto que, la
manzanilla presenta un elevado porcentaje de “apigenina la misma que posee un
efecto inhibitorio de la activación transcripcional de la enzima ciclooxigenasa-2
(COX-2) que directamente interviene en la vía metabólica del ácido araquidónico,
que son los antecesores al desarrollo en un proceso de inflamación.
90
De acuerdo al análisis de todas la horas en la primera fase del estudio, se
puede indicar que, según la hipótesis planteada, no se cumplió, puesto que el
resultado esperado era que a partir de la mezcla hidroalcóholica (80 manzanilla -
20 ortiga) se obtendría el menor porcentaje de inflamación debido a que en la
manzanilla están presenten el camazuleno (principio activo que ejerce esta
actividad estudiada); no obstante, la mejor respuesta obtenida fue a partir de la
mezcla de (20 manzanilla − 80 ortiga) debido a otros componentes que se
encuentran presentes en la ortiga (ácido fórmico), por lo que hace que la
hipótesis sea rechazada. En lo concerniente, a la segunda fase en relación a
todas las horas de evaluación, se puede indicar que lo expuesto para la primera
fase se comprueba el rechazo de la hipótesis sobre la respuesta anticipada que
se dio sobre la mezcla hidroalcóholica (80 manzanilla -20 ortiga), debido a que
en esta etapa la mezcla de (20 manzanilla- 80 ortiga) la inhibición fue mayor, la
misma que se encuentra reflejada en el porcentaje de inflamación presentado
(Figura XIII).
Figura XIII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda Fase
de la quinta hora. Elaboración propia.
-
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
A ControlNegativo
B ControlPositivo
(Diclofenaco)
C Muestra(Ortiga)
D Muestra(Manzanilla)
EMuestra(80O:20M)
91
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Conclusiones
1) Con respecto a las caracterizaciones fisicoquímicas de las especies
vegetales se analizó el porcentaje de humedad, obteniendo así 83,30% para
Manzanilla y 70,55% para Ortiga; a la vez se determinó el porcentaje de
cenizas del cual se halló 1,96% Manzanilla y 5,95% Ortiga; a través del
tamizaje fitoquímico, se confirmó la presencia de los metabolitos, tales como
alcaloides, saponinas, taninos, y cumarinas en el extracto acuoso de ortiga;
se encontró mayor presencia de cumarinas y ausencia de taninos, en el
extracto acuoso de manzanilla. Por lo consiguiente se realizan los análisis
en extractos alcohólicos donde se identificó la presencia de glucósidos en
ambos extractos; en cuanto a la determinación de flavonoides, presentó
mayor coloración en manzanilla dando así el ensayo positivo; se observó
presencia de triterpenos en ortiga por medio de la coloración; mediante el
ensayo de antraquinonas dio como resultado negativo en ambas especies; y
finalmente en el ensayo de esteroides dio como resultado positivo en ortiga
indicando.
2) A la vez se realizaron análisis de caracterización organoléptica tanto de los
extractos independientes como de la mezcla; obteniendo así coloración
verde oscuro y olor herbáceo característico en el extracto hidroalcohólico de
ortiga; olor dulce a flores con coloración amarilla verdosa para el extracto
hidroalcohólico de manzanilla; y finalmente se identificó una coloración
verde amarillenta con un olor dulce a flores para la mezcla hidroalcohólica
(80 Ortiga – 20 Manzanilla). Se determinó el análisis de sólidos totales
obteniendo así 3,98% para Ortiga; 4,12% para Manzanilla, y 4,14 para la
mezcla hidroalcohólica (80 Ortiga – 20 Manzanilla). De igual manera se
determinó la densidad específica y el pH adquiriendo 0,9747 de densidad y
9 de pH para Ortiga; 0,9753 de densidad y 6,8 de pH para Manzanilla y
finalmente 0,9733 de densidad y 8,3 de pH para la mezcla hidroalcohólica
(80 Ortiga – 20 Manzanilla).
92
3) En cuanto a la cuantificación de los principios activos se pudo determinar
que la concentración de quercetina en manzanilla: 0,07953 mg/ml, en
ortiga quercetina (0,033 mg/ml) y taninos (1,34 mg/ml), en la mezcla
hidroalcóholica de manzanilla y ortiga fue de quercetina (0,04273 mg/ml), y
taninos (0,1607 mg/ml)
4) De los resultados obtenidos se puede argumentar que se manifiesta una
actividad marcada (antinflamatoria) en la primera fase, primera hora; fue la
que exhibió la mezcla hidroalcohólica de (80 ortiga - 20 manzanilla) con una
dosis de 2,03 mg/kg; el porcentaje de inflamación que presentó la pata
(36,98%). Este porcentaje, inclusive fue menor que el evaluado con el
diclofenaco (63,91%), fármaco utilizado como control (Anexo XXXVIII).
Durante esta etapa, la tendencia en cuanto a la inhibición de inflamación
mostrado por la mezcla hidroalcohólica de (80O:20M), se mantuvo para la
tercera y quinta hora de evaluación.
5) Del mismo modo, en la segunda fase del experimento, primera hora de
evaluación, se determinó que el porcentaje de inflamación para la mezcla
(80O:20M) 42,21%, siendo la dosis trabajada la misma que se ensayó en la
primera fase de evaluación, para los extractos de: ortiga (aislado) 59,54,
manzanilla (aislado) 68,78; diclofenaco 66,78 (Anexo XLIII). Por lo que se
puede inferir que la acción sinérgica de la mezcla (80O:20M) a la dosis
ensayada de 2,03 mg/kg presentó mayor efecto antiinflamatorio que los
extractos alcohólicos aislados de la manzanilla y ortiga, cuyas dosis
trabajadas fue de 0,80mg/kg; 1,67 mg/kg respectivamente.
93
Recomendaciones
Por lo trascendente que resulta la información generada en este trabajo,
sobre la efectividad que presenta la mezcla hidroalcohólica, pero debido a que
pueden presentarse interacciones entre los fármacos y plantas medicinales, los
que pudieran dar origen a efectos no deseados, o afectar a la farmacocinética y
farmacodinamia. Se debe de recurrir a la realización de otros estudios
posteriores, tales como:
La ejecución de ensayos toxicológicos, farmacocinéticos, microbiológicos de
las mezclas hidroalcóholicas, para poder inferir acerca de la inocuidad y
riesgos en el consumo humano.
A la vez se sugiere, efectuar estudios in vitro a partir de las concentraciones
y dosis ensayadas para determinar la efectividad terapéutica como
antibiótico que además se le atribuyen a estas especies.
Se sugiere realizar estudios de otros efectos terapéuticos a partir de los
compuestos que poseen ambas especies, para poder determinar si a la
dosis ensayada actúa eficazmente en otros tratamientos.
Luego de realizar los estudios preclínicos, se requiere ir a la siguiente fase
de estudios clínicos.
Finalmente, se propone la elaboración de una forma farmacéutica con todos
sus análisis de control de calidad correspondiente, y así establecer un
producto fitoterapéutico en el mercado nacional.
Abarcando los análisis, se sugiere realizarlos por método de cromatografía
de líquidos, para poder llegar a cuantificar los análitos específicos sea este
tanto para flavonoides (quercetina) y taninos totales (condensados o
hidrolizables).
94
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFÍCAS
Alonso, J. (2007). Tratado de Fitofármacos y nutracéuticos (1era. ed.). Rosario:
Corpus. ISBN: 978-950-9030-46-6.
Bordés- González, R., Martínez- Beltrán, M., García- Olivares, E., & Guisado-
Barrilao, R. (s. f.). Proceso inflamatorio. Granada. Recuperado el 7 de
julio de 2015, de
https://www.uclm.es/ab/enfermeria/revista/numero%204/pinflamatorio4.ht
m
Botero, H. (2011). Plantas medicinales pasado y presente. Medellín:
Corantioquia. ISBN: 978-958-9936-38-2.
Batlouni, M. (2010). Antiinflamatorios No Esteroides: Efectos Cardiovasculares,
Cerebrovasculares y Renales. Sociedad Brasilera de Cardiología, 94(4),
538-546. Recuperado el 20 de mayo de 2015, de
http://www.scielo.br/pdf/abc/v94n4/es_v94n4a19.pdf
Cabrera, H., Morón, F., Victoria, M. G., & Acosta, C. (2012). Composición
fitoquímica de partes aéreas frescas de Phania matricarioides. Revista
Cubana de Plantas Medicinales, 17(3). Recuperado el 12 de febrero de
2015, de http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1028-
47962012000300007
Conforti, F., Sosa, S., Marrelli, M., Menichini, F., Satatti, G., Uzunov, D., Loggia,
R. (2008). In vivo anti-inflammatory and in vitro antioxidant activities of
Mediterranean dietary plants. PubMed, 116(1):144-151. doi:
10.1016/j.jep.2007.11.015.
95
Cosco, D. (2010). Actividad inhibitoria del crecimiento de Streptococcus mutans y
de flora mixta salival por acción de aceite esencial de la Matricaria
chamomilla manzanilla. (Tesis inédita de Pregrado). Universidad Nacional
Mayor de San Marcos, Lima, Perú.
Duarte de Prato, A. (2010). Reacciones de Hipersensibilidad a los
Antiinflamatorios No Esteroideos. (Tesis inédita de Doctorado).
Universidad de Murcia, Murica, España.
Dueñas, R. (s. f.). Fabricación de extractos fluidos y secos: Ortiga. Recuperado
el 11 de junio de 2015, de
http://redsa.com.mx/descargas/fichastecnicas/ortiga.pdf
EUSALUD. (2015). Inflamación Aguda y Crónica. Recuperado el 7 de julio de
2015, de
http://eusalud.uninet.edu/misapuntes/index.php/Inflamaci%C3%B3n_Agu
da#INFLAMACI.C3.93N_AGUDA
García- Barreno, P. (2008). Inflamación. Real Academia de Ciencias Exactas,
Físicas y Naturales, 102(1), 91-159. Recuperado el 7 de julio de 2015, de
http://www.rac.es/ficheros/doc/00681.pdf
García, L., Rojo, D., García, L., & Hernández, M. (2002). Plantas con
propiedades antiinflamatorias. Revista Cubana de Investigaciones
Biomédicas, 21(3). ISSN 1561-3011.
96
Gibers, T., & Jimenez, P. (s.f.). Terpenos y esteroides. Recuperado el 14 de
agosto de 2015, de
https://alojamientos.uva.es/guia_docente/uploads/2013/470/45820/1/Doc
umento43.pdf
Gómez- Barrera, M. (2010). Determinación de Actividad Anti-Inflamatoria de
sesquiterpenlactonas aisladas de Calea peruviana y Calea prunofolia.
(Tesis inédita de Maestría). Universidad Nacional de Colombia, Bogotá,
Colombia.
González, M., Larionova, M., Martínez, M. & Marrero, O. (2003). Evaluación de la
acción antiinflamatoria del producto FL-1. Scielo, 8 (2). ISSN: 1561-3046.
Grabowski, T. (2002). Principios de anatomía y fisiología (9ena ed.). México:
OXFORD. ISBN:970-613-570-7.
Hart & Fisher. (1984). Determinación de taninos. Recuperado el 18 de febrero de
2015, de http://taninos.tripod.com/metodologiataninos.htm
Herrera- Gómez, F. V. (2002). Medición del efecto antiinflamario del gel de
Matricaria recutita en niños con inflamación de la encía en la zona de
erupción de la dentición de la encía en la zona de erupción de la
detención primaria, comprendidos entre las edades de 6 meses. (Tesis
inédita de Pregrado). Universidad de San Carlos, Guatemala, Guatemala.
Herrera, A., García, D., Herrera, P., Pérez, J., & Saura, A. (2006). Fármacos
analgésicos-antitérmicos y antiinflamatorios no esteroideos. En
Enfermedades sitémicas y del aparato locomotor (pág. 29). Valencia:
CEDRO. ISBN: 978-84-370-8345-2.
97
Huerta, J. (2007). Plantas medicinales de la ribera navarra y el Moncayo
aragones: Ortiga mayor. Medicina naturista, 1(2), 131-137. ISSN: 1576-
3080.
INEC. (2013). Egresos hospitalarios por condición y seco, tasa de letalidad
hospitalaria, según grupos de causa de morbilidad. Recuperado el 29 de
enero de 2015, de http://www.ecuadorencifras.gob.ec/documentos/web-
inec/Estadisticas_Sociales/Camas_Egresos_Hospitalarios/Publicaciones-
Cam_Egre_Host/Anuario_Camas_Egresos_Hospitalarios_2013..pdf
Jara- Arévalo, M., Jaramillo- Castro, L., & Macías- Matamoros, J. (2011).
Frecuencia de automedicación de AINES y analgésicos-antipiréticos y
características que los rodean, en hogares de la parroquia San Blas de la
ciudad de Cuenca en el año 2011. (Tesis inédita de Pregrado).
Universidad de Cuenca, Cuenca, Ecuador.
Jiménez- Delgado, J., Madrigal- Rojas, J., & Salazar-Barrantes, S. (2009).
Tratamiento con Manzanilla (Matricaria chamomilla), para reducción de
las ojeras. Recuperado el 21 de enero de 2015, de
revistas.ucr.ac.cr/index.php/medica/article/download/7833/7477
Marrassini, C., Acevedo, C., Miño, J., Ferraro, G., & Gorzalczany, S. (2010).
Urtica urens L.: Actividades Antiinflamatoria, Antinociceptiva y Análisis
Fitoquímico. Iquimefa. Recuperado el 25 de septiembre de 2015, de
http://www.conicet.gov.ar/new_scp/detalle.php?keywords=&id=05518&ins
t=yes&congresos=yes&detalles=yes&congr_id=914240
98
Martínez, A. (s. f.). Inflamación. Recuperado el 12 de septiembre de 2015, de
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=9&c
ad=rja&uact=8&ved=0CE4QFjAIahUKEwig6733_PDIAhXFdR4KHZHAAy
k&url=http%3A%2F%2Fwww.idap.com.mx%2Fapuntes%2FPatologia%2F
INFLAMACION.doc&usg=AFQjCNEoVX0n2fHtY_ywSp5jGW837xfqhw&si
g2=LdOhQ3ykf4ZA2k
Martínez, S., González, J., & Culebras J. M. y Tuñón, M. J. (2002). Los
flavonoides: propiedades y acciones antioxidantes. Nutrición Hospitalaria,
XVII(6), 271-278. ISSN: 0212-1611.
Miranda, M., Dranguet, J., Manzano, P., Chóez, I., Quijano, M. F., & Barragán, A.
(2015). Curso Teórico-Práctico "Desarrollo de Fitofármacos". En Centro
de Investigaciones Biotecnológicas del Ecuador. Guayaquil.
Muñoz, E., Rivas, K., Flavia, M., Mendoza, S., Reynoso, R., & Ramos, M. (2012).
Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad
antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales. Revista mexicana de
ciencias agrícolas, 3(3). ISSN 2007-0934.
Nogué, S., Simón, J., & Blanché, C. &. (2009). Intoxicaciones por plantas y setas
. Formación sanitaria, XII(587). Recuperado el 18 de julio de 2015, de
http://www.fetoc.es/asistencia/intoxicaciones_plantas_y_setas_completo_
2009.pdf
OMS. (2004). Portal de Información - Medicamentos Esenciales y Productos de
Salud. Recuperado el 20 de junio de 2015, de
http://apps.who.int/medicinedocs/es/d/Js5422s/6.1.3.html#Js5422s.6.1.3
99
OMS. (2012). La artritis reumatoide afecta a cerca del 30% de la población
mundial. Recuperado el 11 de enero de 2015, de
http://www.eluniverso.com/2012/10/13/1/1384/artritis-reumatoide-afecta-
cerca-30-poblacion-mundial-II.html
Pereira, S., Vega, D., Almeida, M., & Morales, G. (2009). Tamizaje fitoquímico de
los extractos alcohólico, etéreo y acuoso de las hojas de la Trichilia hirta
L. Revista Quimica Viva, 8(3). Recuperado el 13 de febrero de 2015, de
http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/v8n3/pereiracabrera.pdf
Rodríguez, R. (2006). Farmacología de la inflamación y de las alergias (pág. 77).
Recuperado el 12 de agosto de 2015, de
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=7&c
ad=rja&uact=8&ved=0CEAQFjAGahUKEwig6733_PDIAhXFdR4KHZHAA
yk&url=http%3A%2F%2Fhighered.mheducation.com%2Fsites%2Fdl%2Ff
ree%2F9701061489%2F444950%2Fcapitulo_muestra.pdf&usg=AFQjCN
EzHQ4cHleEFrFk
Ponte, M. (s.f.). Manual de Farmacovigilancia Hospitalaria. Obtenido de
http://www.aafhospitalaria.org.ar/imagenes/descargas/aafh_Manual_de_F
armacovigilancia_Hospitalaria_version_final.pdf
Prieto- Setién, J. (2007). Antiinflamatorios No Esteroideos (AINEs). Cient Dent,
4(3). Recuperado el 11 de enero de 2015, de
http://www.coem.org.es/sites/default/files/revista/cientifica/vol4-
n3/Revision.pdf
Salaices, M. (2012). Mediadores de la inflamación. Madrid. Recuperado el 01 de
septiembre de 2015, de
https://www.uam.es/departamentos/medicina/farmacologia/especifica/F_
General/FG_T39.pdf
100
Secretaría Nacional de Planificación y Desarrollo. (2009). Plan Nacional del Buen
Vivir. Objetivo 3. Mejorar la calidad de vida de la población, 137-138.
Quito, Ecuador. Recuperado el 19 de 02 de 2015, de
http://www.buenvivir.gob.ec/objetivo-3.-mejorar-la-calidad-de-vida-de-la-
poblacion
Shaparin, N. (2000). Fundamentos de tecnología de productos fitoterapéuticos.
149. Colombia. Recuperado el 05 de mayo de 2015, de
https://books.google.com.ec/books?id=XH2HzSlJPywC&pg=PA149&dq=q
ue+son+las+cenizas+totales&hl=es&sa=X&redir_esc=y#v=onepage&q=q
ue%20son%20las%20cenizas%20totales&f=false
Villalba, E. (2014). Inflamación I. Revista de Actualización Clínica Investiga, 43.
ISSN 2304-3768.
Yueqin, Z. (2007). Identificación y actividad farmacológica de principios de
especies antiinflamatorias. (Tesis inédita Doctoral). Universidad de
Valencia, España. ISBN:978-84-370-6676-9.
Zamudio, G., & Argueta, A. (2009). Atlas de las Plantas de la Medicina
Tradicional Mexicana. México. Recuperado el 9 de febrero de 2015, de
http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/monografia.php?l=3&t
=manzanilla&id=7609
101
Anexos
Anexo I.
Certificados Taxonómico de la Urtica urens, emitido por el Herbario GUAY de la Facultad
de Ciencias Naturales.
102
Anexo II.
Certificado Taxonómico de la Matricaria chamomilla, emitido por el Herbario GUAY de la
Facultad de Ciencias Naturales.
103
Anexo III. Peso de crisol tarado y
muestra, pérdida de humedad.
Anexo IV. Temperatura de 105±2 ˚C por
2 horas en la estufa.
Anexo V. Peso de las muestras.
Anexo VI. Mufla temperatura de 600 ˚C, enfriar y pesar
Anexo VII. Identificación de alcaloides
(opalescencia, turbidez o precipitado).
Gráfico VIII. Identificación de Saponinas
(presencia de espuma).
104
Gráfico IX. Papel filtro humedecido con
NaOH al 10%.
Anexo X. Baño María por 5 minutos.
Gráfico XI. Identificación de
Cumarinas (coloración verdosa).
Anexo XII. Identificación de triterpenos y/o
esteroides (rosado azul, Verde intenso, verde
oscuro).
Anexo XIII. Identificación de azucares reductores (colorea rojo o precipite rojo)
Anexo XIV. Identificación de compuestos fenólicos (presencia de color azul, verde, pardo o negro)
105
Anexo XV. Macerar con alcohol al 70
Anexo XVI. Separar y filtrar
Anexo XVII. Elaboración de las mezclas hidroalcohólicas
Anexo XVIII. Determinación del olor de los extractos independientes y la mezcla.
Anexo XIX. Determinación del color de los extractos independientes y la mezcla.
Anexo XX. Determinación de sólidos totales
106
Anexo XXI. Estufa por aproximadamente 3 horas.
Anexo XXII. Desecador hasta alcanzar una temperatura ambiente.
Anexo XXIII. Densidad relativa de las muestras de los extractos independientes y de la mezcla
Anexo XXIV. Medición del pH mediante el uso de un pH-metro de las muestras (independientes y mezcla)
Anexo XXV. Preparación de la curva de calibrado (quercetina)
Anexo XXVI. Lecturas en el espectrofotómetro a 415 nm.
107
Anexo XXVII. Cuantificación de quercetina en las muestras (extractos independientes y la mezcla)
Anexo XXVIII. Primera fase, consumo 1
Anexo XXIX. Segunda fase, consumo 2
Anexo XXX. Selección de animales
Anexo XXXI. Inducción del edema plantar
108
Anexo XXXII. Medición del edema plantar
Anexo XXXIII. Curva de calibrado de quercetina.
y = 0,0491x + 0,0018R² = 0,9936
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0 2 4 6 8 10 12 14
AB
SOR
BA
NC
IA
CONCENTRACION
CURVA DE CALIBRADO QUERCETINA
109
Anexo XXXIV. Tabla de registro de pesos de los animales de experimentación de los
Grupos Controles y Grupos tratamientos correspondientes a la Primera Fase.
Grupo A: Grupo Control
Negativo (ClNa)
Grupo B: Grupo Control
Positivo (Diclofenaco)
Grupo C: Grupo
Muestra (80O:20M)
Grupo C: Grupo
Muestra (50O:50M)
Grupo C: Grupo
Muestra (20O:80M)
#Rata Peso (g) Peso (g) Peso (g) Peso (g) Peso (g)
1 316,15 293,4 301,1 298,4 301,3
2 304,5 289,8 303,2 297,4 298,4
3 300,7 280,8 291,3 292,5 289,7
4 303,5 275,3 285,5 279,7 288,4
306,21 284,83 295,28 292 294,45
SD 6,82 8,27 8,33 8,60 6,37
Nota. Se muestra los pesos de los animales de experimentación empleados en los
grupos controles tanto negativo (ClNa) como positivo (Diclofenaco) Vs a los grupos
tratamientos de Ortiga y Manzanilla con diferentes concentraciones (80O:20M);
(50O:50M); (20O:80M) correspondientemente.
Anexo XXXV. Tabla de registro de las administraciones de los grupos controles y Grupos
tratamientos correspondientes a la Primera Fase.
Grupo A: Grupo Control
Negativo
Grupo B: Grupo Control
Positivo
Grupo C: Grupo
Muestra (80O:20M)
Grupo C: Grupo
Muestra (50O:50M)
Grupo C: Grupo
Muestra (20O:80M)
#Rata (ml) (ml) (ml) (ml) (ml)
1 2 2 2 2 2
2 2 2 2 2 2
3 2 2 2 2 2
4 2 2 2 2 2
110
Anexo XXXVI. Tabla de registro de las patas con inducción de carragenina durante los periodos de tiempo transcurridos en el ensayo.
Nota. P N: Pata normal, P I: Pata inflamada, ml: mililitros. La pata normal esta dado en volumen de desplazamiento inicial, sin administración de
carragenina. La pata inflamada, es aquella que ya se encuentra administrado la carragenina y producirá una inflamación a nivel plantar de la
pata de la rata. Esto se medirá una vez transcurrido las 3 horas de la administración de la carragenina y aplicado los tratamientos a cada uno de
los grupos (1ra, 3ra y 5ta hora).
Grupo Control Negativo Grupo Control Positivo Grupo Control Muestra
80O:20M Grupo Control Muestra
50O:50M Grupo Control Muestra
20O:80M
1ra h
3ra h
5ta h
1ra h
3ra h
5ta h
1ra h
3ra h
5ta h
1ra h
3ra h
5ta h
1ra h
3ra h
5ta h
#Rata P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
1 1,8 3,4 3,1 2,9 1,5 2,7 2,6 2,3 2,2 2,3 2,3 2,2 1,3 2,7 2,5 1,5 1,5 2,3 2,6 2
2 1,9 3 2,8 2,6 1,5 3,1 3 2 1,9 2,7 2,6 1,9 1,2 2,6 2,3 1,6 1,5 2,2 2,2 1,9
3 1,6 3 2,7 2,4 1,4 3 2,8 2 1,7 2,5 2,4 1,7 1,5 2,4 2,2 1,8 1,4 2,6 2,5 2
4 1,3 3,1 2,8 2,5 1,8 2,9 2,7 2,2 1,6 2 2 1,6 1,8 2,6 2,7 2,1 2,1 2,1 2,1 2,3
2,13 3,13 2,85 2,60 1,84 2,93 2,78 2,13 1,85 2,38 2,33 1,85 1,60 2,58 2,43 1,75 1,84 2,30 2,35 2,05
SD 0,55 0,19 0,17 0,22 0,34 0,17 0,17 0,15 0,26 0,30 0,25 0,26 0,29 0,13 0,22 0,26 0,33 0,22 0,24 0,17
111
Anexo XXXVII. Tabla de registro de los porcentajes de inflamación (edema plantar), durante los períodos de tiempo transcurridos en el ensayo.
Porcentajes de inflamación en los distintos grupos tratados a la 1ra, 3ra y 5ta hora. Donde se puede observar cual es el grupo que posee mejor
poder como antiinflamatorio al comprarlos con el control negativo y con el control positivo vs las mezclas hidroalcohólicas.
Grupo Control Negativo
Grupo Control Positivo
Grupo Control Muestra 80O:20M
Grupo Control Muestra 50O:50M
Grupo Control Muestra 20O:80M
1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h
#Rata P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml)
1 77,78 66,67 61,11 60 46,67 33,33 42,11 26,00 15,79 92,31 61,54 46,15 60,00 46,67 33,00
2 78,95 63,16 36,84 66,67 60,00 40,00 38,89 22,00 11,11 75,00 66,67 50,00 53,33 53,33 26,00
3 87,50 68,75 50,00 64,29 50,00 35,71 37,50 31,00 18,75 66,67 46,67 33,33 71,43 57,14 21,00
4 93,33 60,00 46,67 64,71 35,29 29,41 29,41 23,53 11,76 78,57 64,29 42,86 64,71 41,18 29,00
84,39 64,64 48,65 63,9 47,99 34,61 36,98 25,63 14,35 78,14 59,79 43,09 62,37 49,58 27,25
SD 7,4 3,86 10,01 2,8 10,19 4,43 5,40 3,94 3,59 10,68 9,00 7,13 7,63 7,08 5,06
112
Anexo XXXVIII. Promedio de los porcentajes de inflamación de los distintos grupos
tratados con las diferentes concentraciones de mezclas hidroalcohólica de ortiga y
manzanilla vs diclofenaco
Tiempo (hs)
Grupo Control Negativo
(%)
Grupo Control Positivo
(%)
Grupo Control Muestra 80O:20M
(%)
Grupo Control Muestra 50O:50M
(%)
Grupo Control Muestra 20O:80M
(%)
1 84,39 63,91 36,98 78,14 62,37
3 64,64 47,99 25,63 59,79 49,58
5 48,65 34,61 14,35 43,09 27,25
Anexo XXXIX. Tabla de registro de pesos de los animales de experimentación de los
Grupos Controles y Grupos tratamientos correspondientes a la Segunda Fase.
Grupo A: Grupo Control
Negativo
Grupo B: Grupo Control Positivo
Grupo C:
Grupo Muestra (Ortiga)
Grupo C: Grupo
Muestra (Manzanilla)
Grupo C: Grupo
Muestra (80O:20M)
#Rata Peso (g) Peso (g) Peso (g) Peso (g) Peso (g)
1 239,10 255,9 256,80 224,30 269,30
2 239,40 260,1 258,50 221,10 270,10
3 246,60 252,8 239,40 225,70 275,30
4 237,70 240,9 258,90 226,90 270,10
240,70 252,425 253,40 224,50 271,20
SD 4,00 8,25 9,38 2,50 2,76
113
Anexo XL. Tabla de registro de las administraciones de los Grupos Controles y Grupos
tratamientos correspondientes a la Segunda Fase.
Grupo A: Grupo Control Negativo
Grupo B: Grupo
Control Positivo
Grupo C: Grupo
Muestra (Ortiga)
Grupo C: Grupo Muestra
(Manzanilla)
Grupo C: Grupo
Muestra (80O:20M)
#Rata (ml) (ml) (ml) (ml) (ml)
1 2 2 2 2 2
2 2 2 2 2 2
3 2 2 2 2 2
4 2 2 2 2 2
114
Anexo XLI. Tabla de registro de las patas con inducción de carragenina durante los periodos de tiempo transcurridos en el ensayo.
Grupo Control Negativo Grupo Control Positivo Grupo Control Muestra
Ortiga Grupo Control Muestra
Manzanilla Grupo Control Muestra
80O:20M
1ra h
3ra h
5ta h
1ra h
3ra h
5ta h
1ra h
3ra h
5ta h
1ra h
3ra h
5ta h
1ra h
3ra h
5ta h
#Rata P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P N (ml)
P I (ml)
P I (ml)
P I (ml)
1 1,00 2,80 2,50 1,80 1,5 2,7 2,6 2,3 1,50 2,30 1,90 1,70 1,90 2,70 2,30 1,90 1,10 1,80 1,40 1,30
2 1,40 3,20 2,50 1,80 1,5 3,1 3 2 1,70 2,20 2,10 1,70 1,10 2,20 1,90 1,10 1,40 2,00 1,60 1,60
3 1,30 2,80 2,50 2,00 1,4 3 2,8 2 1,50 2,30 2,20 1,90 1,40 2,40 2,30 1,40 1,30 2,20 2,00 1,50
4 1,30 2,50 2,30 2,20 1,8 2,9 2,7 2,2 1,40 2,50 2,20 1,70 1,30 2,30 2,30 1,30 1,50 2,00 1,60 1,60
1,25 2,83 2,45 1,95 1,84 2,93 2,78 2,13 1,53 2,33 2,10 1,75 1,43 2,40 2,20 1,43 1,33 2,00 1,65 1,50
SD 0,17 0,29 0,10 0,19 0,34 0,17 0,17 0,15 0,13 0,13 0,14 0,10 0,34 0,22 0,20 0,34 0,17 0,16 0,25 0,14
115
Anexo XLII. Tabla de registro de los porcentajes de inflamación (edema plantar), durante los periodos de tiempo transcurridos en el ensayo.
Grupo Control Negativo
Grupo Control Positivo
Grupo Control Muestra Ortiga
Grupo Control Muestra Manzanilla
Grupo Control Muestra 80O:20M
1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h
#Rata P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml) P I
(ml)
1
79,00
57,14
28,57
56,25
12,50
18,75
53,3
26,67
13,33
52,6
47,37
26,32
45,45
27,27
18,18
2
86,00
78,57
28,57
66,67
58,33
25,00
52,9
35,29
11,76
81,8
81,82
36,36
42,86
21,43
14,29
3
85,00
76,92
53,85
69,23
53,85
23,08
53,3
40,00
26,67
71,4
50,00
35,71
53,85
23,08
15,38
4
92,00
76,92
69,23
75,00
41,67
25,00
78,6
35,71
21,43
69,2
46,15
38,46
26,67
13,33
6,67
85,30
72,39
45,05
66,79
41,59
22,96
59,5
34,42
18,30
68,8
56,34
34,21
42,21
21,28
13,63
SD
5,6
10,19
20,04
7,84
20,63
2,95
12,69
5,59
7,00
12,08
17,06
5,39
11,37
5,84
4,92
116
Anexo XLIII. Promedio de los porcentajes de inflamación de los Grupos Controles y
Grupos tratamientos de Ortiga y Manzanilla independientemente Vs Mezcla
Hidroalcohólica (80O- 20M).
Tiempo (hs)
Grupo Control Negativo
(%)
Grupo Control Positivo
(%)
Grupo Control Ortiga (%)
Grupo Control Manzanilla (%)
Grupo Control Muestra 80O:20M
(%)
1 85,30 66,78 59,54 68,78 42,21
3 72,39 41,58 34,42 56,34 21,28
5 45,05 22,96 18,30 34,21 13,63
117
118
119