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LLIIMMAA –– PPEERRÚÚ
22000099
2
AGRADECIMIENTO:
DR. JORGE CHUNA ESPINOZA (ASESOR PRINCIPAL)
DRA. NIMIA PELTROCHE ADRIANZÉN (ASESOR DE CONSULTA)
DR .ELOY MENDOZA GARCÍA (ASESOR DE CONSULTA)
AGRADECIMIENTO ESPECIAL:
DR. SYLVIA SCHEIN
ING. QUÍMICO JOSÉ FÉLIX ROJAS LÉVANO
3
DEDICATORIA:
A DIOS POR PERMITIRME LLEGAR HASTA ESTE PUNTO DE MI VIDA
A MIS PADRES POR SU APOYO
INCONDICIONAL
4
MIEMBROS DEL JURADO
PRESIDENTE: Mg. CD. MARÍA INÉS CASTRO HURTADO
SECRETARIO: CD. JOSÉ LUIS TORRES FLORES
1ºVOCAL: Mg. CD. PAUL MENDOZA MURILLO
MIEMBRO DEL JURADO: CD. JOSÉ SALAZAR CABREJOS
SUPLENTE: CD. ENRIQUE GABRIELLI ALFARO
5
ÍNDICE
• TÍTULO
• RESUMEN
• ABSTRACT
Nº págs.
I. INTRODUCCIÓN 1
II. HIPÓTESIS 48
III. OBJETIVOS 49
IV. MATERIALES Y MÉTODOS 50
V. RESULTADOS 56
VI. DISCUSIÓN 83
VII. CONCLUSIONES 86
VIII. RECOMENDACIONES 87
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 88
X. ANEXOS 96
6
EFECTO CITOTÓXICO DEL CLORURO DE METILENO (CH2CL2) SOBRE LAS GLÁNDULAS
SALIVALES DE RATAS HOLTZMAN
7
RESUMEN
El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto citotóxico del
cloruro de metileno (CH2CL2) sobre la glándula parótida y submaxilar. Se
utilizaron 25 ratas Holtzman de un mes y 3 semanas de edad con un peso
promedio de 200 g., cloruro de metileno al 99.9% de pureza. Las ratas
fueron divididas en cinco grupos, todos los grupos fueron sometidos a
cloruro de metileno por inhalación: primer grupo, fue sometido a 2000
ppm por un tiempo de 15 minutos por día; segundo grupo fue sometido a
dos exposiciones sucesivas de 2000 ppm por un tiempo de 15 minutos
cada una por día, con un tiempo de descanso de 3 minutos entre cada
exposición; tercer grupo fue sometido a 4000 ppm por un tiempo de 15
minutos por día; cuarto grupo fue sometido a dos exposiciones sucesivas
de 4000 ppm, con un tiempo de descanso de 3 minutos entre cada
exposición; todos los grupos fueron expuestos durante 22 días. El quinto
grupo o grupo control no fue sometido a ninguna concentración y se
mantuvieron los 22 días con los cuidados necesarios. Resultados
obtenidos luego del análisis histológico señalan diferencias significativas
en las lesiones provocadas entre los diferentes grupos, analizando
tamaño y peso de las glándulas salivales, mostró diferencia significativa la
glándula submaxilar entre sus grupos, no así la glándula parótida.
Palabras clave: cloruro de metileno, glándulas salivales, ppm.
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ABSTRACT
This study aimed to evaluate the cell toxicity effect of methylene chloride
(CH2CL2) over parotid glands and submaxillary glands. For this purpose
twenty-five Holtzman male rats (7 wk old, 200 g.) were used and
methylene chloride at 99.9% purity. Rats were randomized into five
groups, all the groups were exposed to methylene chloride by inhalation,
first group was subjected to 2000 ppm for a time of 15 minutes per day,
second group was subjected to two successive exposures of 2000 ppm for
a period of 15 minutes each day, with a rest period of 3 minutes between
each exposure; third group was subjected to 4000 ppm for a period of 15
minutes per day; fourth group was subjected to two successive exposures
of 4000 ppm, with a rest period of 3 minutes between each exposure, all
groups were exposed for 22 days. The fifth group or control group was not
subjected to any concentration and stayed 22 days with proper care. After
the histological analysis results showed significant differences in injuries
among different groups, analyzing the size and weight of salivary glands
showed significant difference among groups of submaxillary glands, but
not on the parotid glands.
Keywords: methylene chloride, salivary glands, ppm.
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I. INTRODUCCIÓN
El cloruro de metileno (CH2CL2), llamado también diclorurometano, cloruro
de metileno o diclorometano (DCM) no se produce naturalmente, es
producido por dos principales procesos en los Estados Unidos : cloración
del metano, cloración del cloruro de metilo e hidrocloración del metanol.
Evidencia disponible indica que la mayor de las patologías de la
exposición a diclorometano es relativa al monóxido de carbono (CO) que
induce hipoxia, mediante metabolitos de DCM. Mecánicamente, el
monóxido reduce la disponibilidad de oxihemoglobina en la sangre y
cambia la curva de desaturación de oxihemoglobina. Estos efectos se
suman a la baja proporción de oxigeno a los tejidos. La extensión de la
hipoxia de los tejidos determina la extensión del daño del órgano. (1,2)
Diclorometano se considera un carcinógeno animal y se ha clasificado
como un probable carcinógeno humano grupo B2 por la Agencia de
Protección Ambiental (EPA). Sobre la base de las pruebas suficientes de
carcinogenicidad en animales y la insuficiencia de pruebas en seres
humanos, la Agencia Internacional de Investigación sobre el Cáncer
(CIIC) clasifica al DCM como un posible agente cancerígeno para los
seres humanos, en el Grupo 2B. (1) Según el Programa Nacional de
Toxicología (NTP) existen pruebas suficientes de la carcinogenicidad de
DCM según los experimentos con animales. La agencia de Seguridad
Ocupacional y Administración en Salud (OSHA), no ha clasificado al DCM
en la lista como carcinógeno. La Conferencia Americana de Higienistas
Industriales Gubernamentales (ACGIH) considera al DCM como un
10
carcinógeno humano sospechoso y el Instituto Nacional de Seguridad y
Salud Ocupacional (NIOSH) recomienda que el DCM sea regulado como
un carcinógeno ocupacional. (2)
En el estudio de Burek, J. D & col., se determinó la toxicidad crónica y
oncogenicidad del cloruro de metileno sobre las glándulas salivales. Los
resultados encontrados fueron un aumento estadísticamente significativo
de sarcomas de glándulas salivales en los grupos de 1500 y 3500 ppm.
(20)
Amsel, J (2001), reportó que el tiempo dependiente predicho para la tasa
de formación de CO luego de la exposición a diclorometano en los 7 días
de estudio fue similar a la evolución en el tiempo para DCM en la sangre y
la en el hígado. Los niveles de carboxihemoglobina, así como la
formación de metabolitos en el hígado, parecen ser paralelas a la
concentración de DCM. (4)
Jacubovich, R. & cols. (2005), presentó el caso clínico de un paciente que
desarrolló una parálisis del nervio facial después de la exposición
ocupacional al diclorometano. Este es el primer informe que describe un
posible vínculo entre la exposición aguda a diclorometano y la parálisis
del nervio facial. (24)
Kobayashi, A. & cols. (2008), reportó el caso clínico de un paciente de 65
años que fue encontrado inconsciente en su lugar de trabajo en un tanque
que contenía diclorometano (pureza del 99%, sobre la base de la hoja de
referencia presentada por la empresa). El diagnóstico fue narcosis
causada por inhalación de diclorometano, recuperándose 4 días después
11
del accidente. Dieciséis meses más después el paciente presentó edema
de retina alrededor de la cabeza del nervio óptico, que finalmente se
convirtió en excavación profunda, de manera que la cabeza del nervio
óptico era grande y se asemejaba al de un glaucoma en los estadíos
finales. (27)
No se encontraron estudios más actuales sobre el estudio de las
glándulas salivales, entonces nos planteamos el siguiente problema:
¿Cuál es el efecto citotóxico del cloruro de metileno sobre las glándulas
salivales: parótida y submaxilar de ratas Holtzman luego de la exposición
inhalatoria experimental a esta sustancia?
Los compuestos orgánicos sustituídos con halógeno están muy difundidos
en la naturaleza y tienen gran cantidad de aplicaciones en los procesos
industriales modernos. Los derivados dihalogenados tienen como fórmula
CnH2nX2, los dihalogenuros son líquidos incoloros de olor dulzaino y, con
los dos átomos de halógeno en un mismo carbono, no son tan reactivos
como los halogenuros de alquilo. Los dihalogenuros más importantes son
el bromuro de etileno y el cloruro de metileno. El primero se adiciona,
junto con el plomo tetraetilo, a la gasolina, con el fin de aumentar sus
propiedades antidetonantes. El segundo se utiliza como disolvente
industrial. (9)
En el pasado, el diclorometano fue ampliamente usado como refrigerante.
Sin embargo, ya no se usa en refrigeradores debido a sus efectos tóxicos.
12
También se usó como agente para introducir burbujas en resinas
aislantes y como plaguicida o fumigante. Hoy en día, casi toda la
producción comercial de diclorometano se usa para fabricar otras
sustancias, principalmente siliconas (72% del clorometano usado). Otros
productos que son fabricados por reacciones que usan clorometano
incluyen a productos químicos agrícolas (8%), metil celulosa (6%), aminas
cuaternarias (5%) y caucho de butilo (3%). (2) Diclorometano se
encuentra en el aire del ambiente, agua para beber si ha sido clorada,
superficie de agua y agua embotellada artesanalmente comercializada,
también en removedores de pinturas, adhesivos y gomas, diluyentes de
pintura, vidrio glaceado y nieve artificial, repelentes de insectos líquidos,
removedores de pintura especial para madera y barnices, pintura en
spray, líquidos limpiadores y desengrasantes, pintura en aerosol para
automóviles, y productos vendidos como DCM. Diclorometano produce
una mezcla explosiva en la presencia de oxígeno líquido. (52)
En estas reacciones el diclorometano es consumido casi completamente,
de manera que al final del proceso queda poco o nada de diclorometano
para ser liberado, desechado o vuelto a usar. Sin embargo, el
diclorometano se encuentra como contaminante en aguas de descargas
municipales. En este caso el diclorometano proviene de plantas de
tratamiento de aguas y en corrientes de desechos como resultado de su
formación o remoción incompleta. También hay algunos procesos de
manufactura de cloruro de vinilo en los que se genera diclorometano
como impureza. (2)
13
PROPIEDADES QUÍMICAS Y FÍSICAS
Sinónimos: Bicloruro de metileno, diclorometano, aerothene MM , cloruro
de metileno (DCM), dichlormethane, uvasol, 1,1-Diclorometano, freón 30,
metano diclorado, metano,dicloro- , metileno biclorado, metileno clorado,
metileno diclorado, metylenu chlorek, narkotil, NCI-C50102, R 30,
solaesthin, solmethine, WLN: G1G . (52)
Fórmula: CH2Cl2.
Peso molecular: 84.94.
Composición: 99.9% de pureza.
Apariencia: Líquido volátil, sin color.
Gravedad Específica (Agua=1): 1.320.
Punto de Ebullición (ºC): 39.8.
Punto de Fusión (ºC): -97.
Densidad Relativa del Vapor (Aire=1): 2.930.
Viscosidad (cp): 0.430 / 20°C.
Olor: Umbral de tolerancia 25-150 ppm; característicamente dulce no
desagradable.
Solubilidad en el agua: 20000 mg 1-l at 20"C, &, = 1.30 Ligeramente
soluble en agua, soluble con una gran variedad de solventes orgánicos
sobre todo alcohol y éter & = 8.80 g m1-l.
Presión de vapor: 349 y 500 mmHg a 20 y 30°C.
pH: N.R.
14
METABOLISMO Y DISPOSICIÓN
ABSORCIÓN
Diclorometano se absorbe rápidamente de los pulmones y en el tracto
gastrointestinal. La absorción cutánea también puede ocurrir. La cantidad
de DCM absorbida depende del peso corporal y el contenido de grasa del
cuerpo. El riesgo de acumulación de DCM en el tejido adiposo se espera
que sea mayor para las personas obesas. (52)
Dood, H. & Stewart, R. (1964) Midieron la tasa de absorción cutánea de
DCM en los seres humanos mediante la medición del aire alveolar en
cuatro sujetos que sumergieron sus pulgares en DCM líquido durante 30
minutos. Los niveles pico de DCM en el aire alveolar (3,1 ppm) se
produjeron dentro de los 30 minutos y en relación con otros hidrocarburos
clorados fue absorbida 3 - 5 veces más rápidamente que el tetracloruro
de carbono, percloroetileno, tricloroetano y el tricloroetileno. (21)
DISTRIBUCIÓN
El DCM se concentra rápidamente en la sangre hasta alcanzar niveles de
equilibrio que dependen primariamente de la concentración de exposición.
Hay también una uniforme distribución por corazón, hígado y cerebro. (52)
METABOLISMO
Estudios in vivo sobre el metabolismo del DCM confirman la existencia de
dos rutas metabólicas dañinas para el químico: una oxidativa, oxidasa de
función mixta (FMO), vía mediada por el sistema P-450 que rinde para CO
y CO2, y una vía glutatión dependiente (GST) vía que sólo rinde para CO2.
La ruta oxidasa de función mixta (FMO) se satura a las concentraciones
15
en el aire de aproximadamente a 500 ppm, pero la vía GST no muestra
ningún indicio de saturación en concentraciones inhaladas de hasta
10000 ppm. (52)
Mc Kenna, M. & Zempel, J. (1981), reportaron que hay alguna evidencia
de cambios bioquímicos en hígado de ratas luego de administración oral.
El contenido de citocromo microsomal p-450 en ratas fue reducido 18
horas después de ser dosificadas con 1g/kg de DCM. El incremento del
contenido de triglicéridos, reducción de la secreción de triglicéridos y del
contenido de la proteína tubulina fueron reportados por ratones
sacrificados 2.7g kg DCM. (33)
EXCRECIÓN
La dosis absorbida es la mayor determinante para la excreción del
producto. A concentraciones bajas se excreta principalmente por la de vía
de espiración como CO o CO2 y en concentraciones altas más de un
componente originario (no metabolitos) es espirado. También pequeñas
fracciones absorbidas son excretadas por la orina. (52)
TOXICIDAD
TOXICIDAD AGUDA
En general, DCM tiene un bajo orden de toxicidad y resultados en
humanos confirman los estudios animales. Hay individuales casos
esporádicos reportados asociados a una variedad de síntomas,
incluyendo síntomas neurológicos. Evidencia disponible indica que la
mayor de las patologías de la exposición de DCM es relativa al monóxido
de carbono (CO) que induce hipoxia, mediante un metabolito de DCM.
16
Mecánicamente, el monóxido reduce la disponibilidad de oxihemoglobina
en la sangre y cambia la curva de desaturación de oxihemoglobina. Estos
efectos se suman a la baja proporción de oxígeno a los tejidos. La
extensión de la hipoxia de los tejidos determina la extensión del daño
del órgano. (52)
INGESTIÓN
Davidson, R. & Memon, N. (1981), reportó el caso de un intento de
suicidio un hombre de 38 años de edad que ingirió 1-2 copas de un
removedor de pintura conteniendo predominantemente DCM, algo de
metanol, cera de parafina y detergentes (Nitromor, removedor de pintura,
porcentaje de composición no probado). El paciente estuvo inconsciente y
no respondía a la estimulación de dolor y un extenso daño sostenido
gastrointestinal con ulceración de la unión duodeno- yeyunal, que
desarrolló en un divertículo a los 6 meses. (17)
Moody, D. & cols. (1981), encontraron en animales experimentales, que
hay alguna evidencia de cambios bioquímicos en hígado de ratas luego
de la administración oral de DCM. El contenido de citocromo microsomal
p-450 en ratas fue reducido 18 horas después de ser dosificadas con
1g/kg DCM (35). Boyd D. & Weinstein, R. (1972), encontró un incremento
del contenido de triglicéridos, reducción de la secreción de triglicéridos y
del contenido de la proteína tubulina en ratones sacrificados 2.7g/ kg de
DCM. (9)
17
INHALACIÓN
Cortos períodos de exposición a DCM han sido asociados con irritación
de piel y ojos, ahogamiento, irritación del sistema digestivo, irritación del
tracto respiratorio y parálisis. Excesivos síntomas de exposición pueden
incluir mareos, nausea, dolor de cabeza, sensación de calor, estupor,
letargo, pesadez y embriaguez. La exposición a una alta concentración
puede conducir a una rápida inconsciencia y muerte. (52)
Un número de casos reportados indican desórdenes multisistémicos
asociados con inhalación o exposición. Miller, L. & cols.(1985), reportó el
caso de un hombre de 19 años de edad quién usó DCM como removedor
en un cuarto de poca ventilación, mostró una elevación de enzimas
hepáticas, mínimamente localizado dolor abdominal y una aguda necrosis
tubular del riñón. Estudios histológicos demostraron daño por anoxia a la
membrana plasmática hepática y mitocondria. (34)
Memon, N. & Davidson, R. (1981), reportaron el caso de un contador de
25 años desarrollo inflamación, entumecimiento de articulaciones y un
profuso sarpullido rosado (rash) seguidos de una exposición de 4 horas
de DCM. (17)
Boventre, J. & cols. (1977), reportaron una muerte accidental luego de
una exposición aguda a DCM durante una remoción de pintura. La
concentración de exposición no fue reportada pero el análisis de tejido
reveló la presencia de DCM en el hígado (14.4 mg 100 g-tejido), sangre
(510 mg I-tejido) and cerebro (24.8 mg 100 g-tejido). (17) Leikin, J. & cols.
(1990), reportaron el caso de dos trabajadores que murieron luego de una
18
exposición a DCM en un espacio cerrado. La causa de la muerte fue
indicada como narcosis debida al solvente. (8)
Snyder, R. & cols. (1992), reportaron un desarrollo individual no
cardiogénico de edema pulmonar y subsecuentemente actividad de las
vías respiratorias seguidos a una aguda exposición de removedor de
pintura que contenía DCM. (>80% por peso). La tos y el dolor de pecho
empeoró en un período de 24 horas y desciende por las 48 horas, pero
la tos y jadeo continúan hasta el siguiente año. Sin embargo, hubo una
posibilidad de conversión de DCM a fosgeno porque el paciente también
usó pistola eléctrica de aire caliente en la operación de remoción de
pintura. (46)
Winneke, G. (1974), realizó estudios de exposición humana controlada
que revelaron disturbios del performance psicomotor a 800 ppm de DCM.
Hubo depresión del umbral de fusión de parpadeo y el performance de
vigilancia bajo a 330ppm y un decremento de performance en la
combinación tarea de rastro –monitoreo a 200ppm. (53)
TOXICIDAD CRÓNICA
INGESTIÓN.
La ingestión prolongada de DCM puede causar daño al hígado en
experimentos con animales.
Morris, B. & cols. (1979), informaron de la infiltración de grasa en ratas
Fischer 344 después de la ingestión de agua que contiene 125 o 250 mg
kg-DCM día durante 78 o 104 semanas, respectivamente. Todos los
daños hepáticos consistían en alteraciones histológicas de las células
19
hepáticas, tales como las observadas en el envejecimiento de los
animales. Los cambios grasos fueron reportados como reversibles. El
siguiente estudio que realizó, ratones machos y hembras B6C3F1
expuestos a 0, 60, 125,185, o 250 mg /kg/día de DCM en su agua potable
por dos años mostraron daños hepáticos sólo en las dosis más altas. (36)
INHALACIÓN.
DCM de inhalación crónica puede producir una variedad de efectos en el
SNC, incluyendo dolores de cabeza, mareos, náuseas, pérdida de
memoria, parestesia, sensación de hormigueo en manos y pies y pérdida
de consciencia.
Cherry, N. & Venable, H. (1983), encontraron cambios significativos en
una evaluación subjetiva de la somnolencia, cansancio físico y mental, el
cansancio por la mañana entre los trabajadores expuestos a cambios de
28-173 ppm de DCM. Además, la magnitud de la respuesta se asoció
significativamente con la sangre y sus niveles de COHB. (12)
Barrowcliff D. F. (1978) La intoxicación crónica por CO y el aumento de
los niveles de carboxihemoglobina estaban implicados en un caso
reportado de degeneración bilateral de lóbulos temporales seguidos a
una exposición de 3 años a niveles de DCM de 300-1000 ppm. Este
paciente se quejó de la pérdida de memoria reciente, exhiben dificultades
con el habla y tenía un andar inestable. También reportó la exposición
diaria en siete de ocho trabajadores. Los síntomas típicos incluyen
mareos, pérdida de consciencia, pérdida de memoria, depresión y
cambios de personalidad. (7)
20
Welch, L. (1987), atribuyó la etiología de la lenta aparición de cambios
neuroconductuales a la exposición a DCM y otras mezclas de disolventes,
y sugiere que puede desarrollar síntomas de neurotoxicidad el DCM en
niveles tan bajos como 70 ppm. Este informe documenta 100 trabajadores
que se quejaban de dolor de cabeza, mareos, náuseas, pérdida de
memoria, parestesia en las manos y los pies (subjetiva) y la pérdida de la
conciencia. Estos efectos se produjeron durante el pintado, la limpieza y
las operaciones de pulverización. Los niveles de DCM fueron estimados
en un rango de 100 ppm, porque esos niveles, o más, fueron medidos
durante operaciones similares. La duración de la exposición fue de 6
meses a 2 años. (50)
Boyd D. & Weinstein, R. (1972), reportaron que además de efectos en el
SNC, la inhalación crónica de DCM también puede causar toxicidad
hepática. La continua inhalación por exposición a DCM (100 ppm)
durante 10 semanas dió lugar a elevados niveles de grasa hepática,
disminución de glucógeno hepático e infiltración grasa centrolobulillar en
el ICR del ratón. (9)
La exposición prolongada a DCM causó efectos renales en animales de
experimentación, pero los estudios epidemiológicos no han mostrado una
asociación entre exposición y efectos adversos renales.
Welch, L. (1987), informó sobre un fabricante de plantilla que desarrolló
dermatitis de contacto secundario a la exposición DCM. Este paciente
desarrolló posteriormente la pérdida de memoria y un fallo renal que se
diagnosticó como consecuencia de amiloidosis. (50)
21
El contacto prolongado con la piel puede causar dermatitis. (52)
Memon, N & Davidson, R. (1981) Informaron sobre un paciente que
desarrolló hinchazón, rigidez en las articulaciones y una profusa erupción
rosada en el cuerpo dentro de las 72 h de un 3-4 h de exposición a un
removedor de pintura que contenía DCM. (17)
EFECTOS DE ÓRGANO DIANA
Animales y algunos estudios en humanos indican que los principales
órganos diana de la toxicidad de DCM son el hígado y el SNC. Además
de estos efectos, la exposición a los vapores puede causar irritación de la
piel y los ojos. Existe poca literatura disponible en el hepatotoxicidad de
DCM aguda en los seres humanos. (52) Bang, K. (1984), reportó el
siguiente caso, un técnico de laboratorio desarrolló hepatitis aguda
después de un derrame de 2-4 cuartos de DCM en el suelo, las manos,
las piernas y los pies. El derrame fue limpiado dentro de 5-10 minutos,
pero no se cambió la ropa. La duración de la exposición se estimó en 4 h.
El paciente fue admitido al hospital el día siguiente y posteriormente se
recuperó. (6) Simonsen, N. & Wilcosky, T. (1991), propusieron una
asociación entre las enfermedades cardiovasculares (ECV) y DCM,
debido a la producción metabólica de CO. Sin embargo, la causalidad de
DCM -ECV sigue siendo incierta. (45)
NEUROTOXICIDAD
La exposición crónica a DCM produce principalmente efectos
neurotóxicos, como la depresión, cambio de personalidad, irritabilidad,
insomnio y trastornos de la visión, así como el daño hepático. Welch, L.
22
(1987), observó que la neurotoxicidad fue el síntoma más destacado en
más de 100 casos relacionados con la exposición ocupacional al DCM.
Las denuncias incluyen dolores de cabeza, mareos, náuseas, pérdida de
memoria, parestesia, sensación de hormigueo en las manos y pies y
pérdida de conciencia. Una persona sufrió síntomas de ansiedad durante
un mes después de un episodio de exposición neurotóxica aguda a
DCM.(17)
Weiss, G.(1992), reportó confusión mental, amnesia, lentitud de reacción
mental e insomnio se informó en un individuo expuesto a DCM durante 10
años, otro caso que reportó fue el de un químico que desarrolló
encefalosis tóxica después de una exposición crónica (5 años) a DCM
(5660 ppm) por inhalación y contacto con la piel y reportó además que un
paciente masculino de 60 años de edad que fue expuesto a DCM a
niveles de 500-1000 ppm durante 3 años se quejó de la pérdida de la
memoria y la dificultad con la enunciación de palabras. (49) Tariot, B.
(1983), describió trastornos neurosiquiátricos en un paciente masculino
de 52 años de edad operador de depósito tras 4 - años de duración de
la exposición. La presentación de los síntomas fueron intermitentes
dolores de cabeza, visión borrosa, a corto plazo el déficit de memoria,
alucinaciones auditivas, comportamiento violento para el personal del
hospital y delirios. Siete días más tarde localizadas convulsiones
generalizadas se manifestaron, lo que fue confirmado por EEG en el
hemisferio derecho. (47) Ballantyne, M. (1976), observó que en
voluntarios humanos, los ojos, la parte de coordinación se vio afectada
23
negativamente en los niveles de exposición de 300 ppm por 3-4hrs. La
exposición a niveles superiores a 300 ppm, para un máximo de 4 horas
alteró algunas modalidades de comportamiento en las funciones visuales
y auditivas. Hubo una disminución de la frecuencia crítica de parpadeo
fusión (CFF) y una disminución en la vigilancia auditiva. A 800 ppm, hubo
un decremento en tareas psicomotrices. No efectos nocivos para la salud
o el rendimiento se han detectado en los seres humanos cuando los
adultos sanos de ambos sexos fueron expuestos a niveles de DCM hasta
250 ppm para el 2, 3 ó 7,5 h de día, 5 días a la semana para
2semanas.Obreros de fábrica expuestos a niveles de DCM en el rango de
400-1000ppm de 7,7 años mostró debilidad en la función cerebral, la
debilidad en la percepción, debilidad en la capacidad de concentración y
de EEG anormales. (5) Cherry, N & Venable, H. (1983) no pudieron
demostrar toda relación de exposición con los síntomas subjetivos,
efectos neuroconductuales, velocidad motora de conducción nerviosa
cambios, cambios en el electrocardiograma u otros efectos clínicos de los
trabajadores que fueron expuestos a 75-100 ppm de DCM. En la opinión
del autor, éste fue el nivel sin efectos adversos observados (NOAEL). En
un estudio posterior estos mismos investigadores evaluaron los síntomas
de la somnolencia subjetiva y física, cansancio mental en 56 trabajadores
expuestos a 28-173 ppm de DCM en una atmósfera que también contenía
metanol. Sólo por la mañana mostró un cambio estadísticamente
significativo en el cambio de los parámetros a prueba y los cambios
fueron correlacionados con los niveles de CO en la sangre. (12)
24
Pankow, D. & cols. (1979) observaron que sus estudios realizados con
animales, los altos niveles de exposición son necesarios para inducir a los
signos de toxicidad DCM. Durante la inhalación de 500 ppm para los 4
días, las ratas demostraron mayor actividad apareamiento: 500 ppm, 7
horas diarias, 5 días a la semana durante 6 meses disminuyó la actividad
motora espontánea en ratas macho, 500 ppm durante 24 horas no tuvo
ningún efecto sobre el EEG para dormir, pero a niveles de 100 y 3000
ppm de 2.5-6 h produjo una reducción en el movimiento ocular rápido
(REM), durante el sueño. Ligero efecto narcótico, se observó en varias
especies animales en los niveles de 4000 ppm para los mismos períodos.
Capacidad de aprendizaje se ha visto afectado en los ratones 1-4 días
después de una sola exposición a 168 mg/I de DCM. Como resultado de
ello, el DCM puede influir en tres perjuicios: producir depresión del SNC:
un inhibidor de la acción directa sobre la membrana del nervio, que
reduce la actividad nerviosa, una reducción de capacidad de transporte de
oxígeno de la hemoglobina formando carboxihemoglobina (COHB); y la
producción de formiato como metabolitos intermedios mitochondriales que
inhibe la respiración y la COHB exacerba hipoxia por infligir una hipoxia
tisular que puede producir daños en las células nerviosas y su pérdida.
(40)
Rosengren, L. & cols. (1986) reportaron que gerbos expuestos a 210 ppm
continuamente por 3 meses demostró una disminución significativa en el
contenido de ADN de la zona del hipocampo del cerebro, lo que indica
pérdida de células y para sugerir una hipótesis que podría explicar los
25
cambios del déficit de la memoria observados con la exposición a DCM.
El mecanismo de acción de DCM en el sistema nervioso se puede atribuir
a sus propiedades lipofílicas. Sustancias lipofílicas pueden entrar en el
cerebro más fácilmente que los compuestos iónicos en el proceso y
disminuir la función nerviosa. (43)
TOXICIDAD REPRODUCTIVA
Se reportaron casos de olisgospermia, anormal motilidad espermática y la
morfología y la atrofia testicular bilateral. (52) Nitshke, K. & cols. (1983)
reportaron que tras la exposición de ratas a DCM se produjo fetos con un
importante aumento en el promedio de peso corporal, aumento en el peso
absoluto del hígado y el retraso en la osificación del cartílago del
esternón. (38)
CARCINOGENICIDAD
Diclorometano se considera un carcinógeno animal y se ha clasificado
como un probable carcinógeno humano grupo B2 por la Agencia de
Protección Ambiental (EPA). Sobre la base de las pruebas suficientes de
carcinogenicidad en animales y la insuficiencia de pruebas en seres
humanos, la Agencia Internacional de Investigación sobre el Cáncer
(CIIC) clasifica al DCM como un posible agente cancerígeno para los
seres humanos, en el Grupo 2B. (1) Según el Programa Nacional de
Toxicología (NTP) existen pruebas suficientes de la carcinogenicidad de
DCM según los experimentos con animales. La agencia de Seguridad
Ocupacional y Administración en Salud (OSHA), no ha clasificado al DCM
en la lista como carcinógeno. La Conferencia Americana de Higienistas
26
Industriales Gubernamentales (ACGIH) considera DCM como un
carcinógeno humano sospechoso y el Instituto Nacional de Seguridad y
Salud Ocupacional (NIOSH) recomienda que el DCM sea regulado como
un carcinógeno ocupacional. (1,2)
INTERACCIÓN CON EL MEDIO AMBIENTE
Aproximadamente el 85% de todo el DCM producido en EE.UU. se
liberan en el medio ambiente, principalmente en zonas industrializadas, y
la mayoría probablemente liberados al aire. En la atmósfera, DCM se
dispersa fácilmente y es transportado a cierta distancia de su fuente. La
degradación de DCM por radicales hidroxilo, la fotólisis y la transferencia
a través de lluvia intermedia prevenir su acumulación en la atmósfera. (1)
Basados en los rangos de reacción estudiados y resumidos por la EPA,
la vida útil de DCM en la troposfera oscila entre un mínimo de unos meses
a un máximo de 1,4 años, en condiciones típicas EE.UU.
Diclorometano es soluble en agua, por lo que su lixiviación del suelo y el
transporte en el agua subterránea es importante. La tasa de volatilización
de la superficie del agua es fuertemente afectada por el viento y las
condiciones de mezcla. Adsorción del suelo y abióticos los procesos de
transformación en los sistemas acuáticos no se consideran factores
importantes. (1,2)
Biodegradación puede ser un importante destino de proceso en tanto sea
bajo las condiciones aeróbicas y anaeróbicas. La hidrólisis no es un
proceso de degradación importante en condiciones normales de las
27
condiciones ambientales. El mínimo informado de vida media de hidrólisis
es aprox. 18 meses. (2)
VALORES NUMÉRICOS REFERIDOS A LA SALUD
REFERENCIA NUMÉRICA PARA LA SALUD (EPA 2003) (1)
Nivel de riesgo de cáncer (1 en un millón): 0.002 mg/m3
Rf C (Concentración Referencial-provisional): 3 mg/m3
Rf D (Dosis referencial): 0.06mg/kg/d
NOAELC: 695 mg/m3 ~ 200 ppm
LC50 (ratones): 50 020 mg/m3 ~ 14155 ppm
LC50 (ratas): 88 000 mg/m3 ~ 25331 ppm
REFERENCIA NUMÉRICA DE ADVERTENCIA Y REGULATORIA (1)
OSHA PEL: 88 mg/m3 ~ 25.33 ppm, límite de exposición permitido para
los trabajadores sin efecto adverso por unas 8 hrs diarias o 40 horas
semanales. Es la única regulada por el gobierno de los EE.UU.
ACGIH TVL: 174 mg/m3 ~ 50 ppm, valor para el que la mayoría de los
trabajadores no les causa efectos adversos.*
AIHA- ERPG-1: 694 mg/m3 ~ 200 ppm, valor para el que la mayoría de
individuos puede exponerse hasta una hora sin efectos adversos.*
AIHA-ERPG-2: 2602 mg/m3 ~ 750 ppm, valor para el que la mayoría de
individuos puede exponerse hasta una hora sin efectos adversos
irreversibles u otros serios efectos adversos que puedan ocurrir.*
NIOSH-IDLH: 7980 mg/m3 ~ 2300 ppm, es una concentración peligrosa
para la vida, puede causar la muerte o desarrollar un efecto adverso
permanente para la salud.*
28
*Son valores no regulados que son publicados por el gobierno u otros
grupos como advertencia.
TOXICIDAD CELULAR
TOXICOCINÉTICA
El proceso de penetración de un tóxico desde el medio ambiente hasta los
lugares en que va a producir su efecto tóxico dentro del organismo puede
dividirse en tres fases:
1. La fase de exposición, que comprende todos los procesos que se
producen entre diversos tóxicos y/o la influencia que tienen sobre ellos los
factores ambientales (luz, temperatura, humedad, etc.).
2. La fase toxicocinética, que comprende la absorción de los tóxicos en el
organismo y todos los procesos siguientes: transporte por los fluídos
corporales, distribución y acumulación en tejidos y órganos,
biotransformación en metabolitos y eliminación del organismo (excreción)
de los tóxicos y/o metabolitos.
3. La fase toxicodinámica, que se refiere a la interacción de los tóxicos
(moléculas, iones, coloides) con lugares de acción específicos en las
células o dentro de ellas—receptores con el resultado último de un efecto
tóxico. (20)
Son muchos los factores que influyen en esos procesos, y que cabe
dividir en dos grupos básicos:
• La constitución química y las propiedades fisicoquímicas de los tóxicos.
• La estructura de la célula, especialmente las propiedades y función de las membranas que rodean la célula y sus orgánulos interiores.
29
ABSORCIÓN DE TÓXICOS
Las personas se hallan expuestas a numerosos tóxicos que están
presentes en el medio ambiente profesional o general y que pueden
penetrar en el organismo humano por tres vías de entrada principales:
A través del tracto respiratorio, por inhalación de aire contaminado. (20)
A través del tracto gastrointestinal, por ingestión de comida y bebida
contaminadas.
A través de la piel, por penetración dérmica, también llamada percutánea.
En el caso de la exposición en la industria, la principal vía de entrada de
tóxicos es la inhalación, seguida por la penetración percutánea. En la
agricultura, los casos de exposición a plaguicidas por absorción a través
de la piel equivalen prácticamente a los casos en que se combinan la
inhalación y la penetración percutánea. En la población general, la
exposición se produce sobre todo por ingestión de comida y bebida
contaminadas, seguida de la inhalación y, con menos frecuencia, de la
penetración percutánea. (20)
ENZIMAS METABOLIZANTES DE XENOBIÓTICOS O DE FÁRMACOS
Prácticamente todas las sustancias químicas a las que están expuestos
los seres humanos son modificadas por esas enzimas para que sea más
fácil eliminar del cuerpo la sustancia extraña. Se suele agrupar a esas
enzimas bajo las denominaciones genéricas de enzimas metabolizantes
de fármacos y enzimas metabolizantes de xenobióticos. (20) En realidad
ambas expresiones son poco apropiadas. En primer lugar, muchas de
30
esas enzimas no sólo metabolizan fármacos, sino también cientos de
miles de sustancias químicas procedentes del medio ambiente y de la
dieta. En segundo lugar, todas esas enzimas utilizan asimismo, como
sustratos, compuestos normales del organismo; ninguna de ellas
metaboliza sólo sustancias químicas extrañas. Desde hace más de cuatro
décadas, los procesos metabólicos mediados por esas enzimas se suelen
clasificar como reacciones de Fase I o de Fase II. Las reacciones de la
Fase I (“funcionalización”) suelen comportar modificaciones estructurales
relativamente menores de la sustancia original mediante oxidación,
reducción o hidrólisis para obtener un metabolito más hidrosoluble. Es
frecuente que las reacciones de la Fase I “den pie” a que el compuesto se
vuelva a modificar después en las reacciones de la Fase II. Las
reacciones de la Fase I están mediadas básicamente por una superfamilia
de enzimas de gran versatilidad, conocidas con el término colectivo de
citocromo P450, aunque también pueden intervenir otras superfamilias.
(20)
Las reacciones de la Fase II comportan el acoplamiento de una molécula
endógena hidrosoluble y una sustancia química (sustancia original o
metabolito de la Fase I) con miras a facilitar la excreción. Las reacciones
de la Fase II suelen calificarse de “conjugación” o “derivación”. El nombre
con que se conoce a las superfamilias de enzimas que catalizan las
reacciones de la Fase II suele derivarse del radical endógeno que
participa en la conjugación: por ejemplo, N-acetiltransferasas cuando hay
acetilación, sulfotransferasas cuando hay sulfatación,
31
glutatióntransferasas cuando se trata de conjugación con el glutatión y
UDP-glucuroniltransferasas cuando se trata de glucuronación. Aunque el
principal órgano del metabolismo de los fármacos es el hígado, algunas
enzimas metabolizantes de fármacos se encuentran con niveles bastante
altos en el tracto gastrointestinal, las gónadas, el pulmón, el cerebro y el
riñón, y enzimas de ese tipo están sin duda presentes en cierto modo en
todas las células vivas. (20)
LESIÓN CELULAR La lesión celular se define como un hecho o estímulo, por ejemplo una
sustancia química tóxica, que perturba la homeostasis normal de la célula,
lo que hace que se produzcan diversos acontecimientos. Las dianas
principales de la lesión letal son la inhibición de la síntesis del ATP, la
interrupción de la continuidad de la membrana plasmática y la supresión
de factores esenciales para el crecimiento. (20) Las lesiones letales
acaban en la muerte de la célula al cabo de un período de tiempo
variable, que depende de la temperatura, el tipo de célula y el estímulo;
pero también pueden producirse lesiones subletales o crónicas -que
provocan un estado de alteración de la homeostasis que, aunque
anómalo, no desemboca en la muerte de la célula. En los casos de lesión
letal se observa antes de la muerte celular lo que se llama la “fase
preletal”. Si durante ese tiempo se elimina el estímulo causante, la anoxia
por ejemplo, la célula se recupera; sin embargo, llega un momento (el
“punto sin retorno” o punto de muerte celular) en el que a pesar de
eliminarse la causa de la lesión la célula no puede recuperarse, sino que
32
pasa por un proceso de degradación e hidrólisis hasta llegar finalmente al
equilibrio físico-químico con el entorno. Es la fase que se conoce como
necrosis. Durante la fase preletal se producen principalmente dos tipos de
alteraciones, dependiendo de la célula y del tipo de lesión. Esos dos tipos
de alteraciones se denominan apoptosis y oncosis. (20)
APOPTOSIS La célula se retrae y se forman en su periferia numerosas vesículas que
después se desprenden y se alejan flotando. Es especialmente
pronunciada en los linfocitos, donde es el principal mecanismo de
reposición de clones linfocíticos. Los fragmentos resultantes se convierten
en los cuerpos basófilos que se observan en el interior de los macrófagos
en los ganglios linfáticos. En otros órganos, la apoptosis se produce
típicamente en células aisladas que se eliminan rápidamente, antes y
después de la muerte, al fagocitar sus fragmentos células parenquimales
vecinas o macrófagos. Cuando se produce en células aisladas con la
fagocitosis subsiguiente, la apoptosis no suele provocar inflamación. En la
apoptosis, el aumento de [Ca+2] puede estimular el flujo de salida de K+,
que hace que la célula se retraiga, probablemente con necesidad de ATP.
Por consiguiente, es más probable que deriven en apoptosis las lesiones
que inhiben totalmente la síntesis de ATP. El incremento sostenido del
[Ca+2] tiene diversos efectos deletéreos, como la activación de
proteasas, endonucleasas y fosfolipasas. La activación de las
endonucleasas provoca roturas sencillas y dobles del ADN, lo cual
estimula a su vez un aumento de los niveles dep53, y poli-ADP
33
riboxilación, así como de proteínas nucleares que son esenciales para la
reparación del ADN. La activación de las proteasas modifica una serie de
sustratos, como la actina y proteínas conexas, lo que lleva a la formación
de vesículas. La cromatina presenta configuración en escalera. (20)
ONCOSIS
La célula empieza a aumentar de tamaño casi inmediatamente después
de la lesión. Y se hincha porque aumentan los cationes en el agua
intracelular. El catión más responsable de que esto ocurra es el sodio,
que normalmente está regulado para mantener el volumen celular. (20)
Sin embargo, en ausencia de ATP o cuando se inhibe la Na-ATP asa de
la membrana plasmática, se pierde el control del volumen debido a la
proteína intracelular, y siguen aumentando los cationes de sodio en el
agua. Entre las primeras manifestaciones de la oncosis están por lo tanto
un aumento del [Na+], que hace que la célula se hinche, y un aumento
también del [Ca+2] debido bien a la entrada de espacio extracelular, bien
a la liberación de depósitos intracelulares. Ello hace que se hinchen el
citosol, el retículo endoplásmico y el aparato de Golgi, y que se formen
vesículas acuosas entorno a la superficie de la célula. Las mitocondrias
se condensan al principio, pero después se hinchan también, y
considerablemente, al estar dañada la membrana mitocondrial interior. En
este tipo de alteración preletal, la cromatina se condensa y en última
instancia se degrada; no se observa sin embargo la configuración en
escalera que es característica de la apoptosis. (20)
34
NECROSIS
Con el término necrosis se designa una serie de alteraciones que se
producen después de la muerte celular, cuando la célula se convierte en
detritos que son típicamente eliminados por la respuesta inflamatoria.
Cabe distinguir dos tipos: la necrosis oncótica y la necrosis apoptótica.
La necrosis oncótica suele darse en zonas amplias, por ejemplo en un
infarto de miocardio, o regionalmente en un órgano que ha sufrido
toxicidad química, como el túbulo proximal del riñón tras la administración
de HgCl2. Se ven afectadas amplias zonas del órgano, y las células
necróticas incitan rápidamente a una reacción inflamatoria, al principio
aguda y después crónica. (20)
Si el organismo sobrevive, en muchos órganos siguen a la necrosis la
eliminación de las células muertas y la regeneración, por ejemplo en el
hígado o en el riñón después de una toxicidad química.
La necrosis apoptótica, en cambio, se desarrolla típicamente a nivel de
células individuales, y los detritos necróticos se forman en el interior de
los fagocitos o macrófagos o de las células parenquimales vecinas. Entre
las primeras manifestaciones de la necrosis celular están las
interrupciones de la continuidad de la membrana plasmática y la aparición
de densidades floculentas, que son proteínas desnaturalizadas dentro de
la matriz mitocondrial. En algunas formas de lesión que inicialmente no
interfieren la acumulación de calcio en las mitocondrias, se observan en el
interior de éstas depósitos de fosfato de calcio. También se fragmentan
de manera análoga otros sistemas membranosos, como el RE, los
35
lisosomas y el aparato de Golgi. Al final, la cromatina del núcleo sufre una
lisis resultado del ataque de hidrolasas lisosómicas. Tras la muerte
celular, las hidrolasas lisosómicas desempeñan un papel importante en la
eliminación de los detritos con el concurso de catepsinas, nucleolasas y
lipasas, pues éstas tienen un pH ácido óptimo y pueden sobrevivir al pH
bajo de las células necróticas mientras que otras enzimas celulares se
han desnaturalizado y desactivado. (20)
BIOMARCADORES
El término biomarcador, o marcador biológico en forma desarrollada, se
define como un hecho que se produce en un sistema biológico, el cuerpo
humano por ejemplo, y que puede medirse. Ese hecho se interpreta
después como reflejo, o marcador, de un estado más general del
organismo o de su esperanza de vida. (20) En el ámbito de la salud en el
trabajo, los biomarcadores suelen utilizarse como indicadores del estado
de salud o del riesgo de enfermedad. Se utilizan biomarcadores en
estudios tanto in vitro como in vivo que pueden incluir a seres humanos.
Los marcadores biológicos se clasifican por lo general en tres tipos
concretos. Aunque algunos de ellos pueden ser difíciles de clasificar,
suelen separarse en biomarcadores de la exposición, biomarcadores del
efecto y biomarcadores de la susceptibilidad. Dado un grado aceptable de
validez, los biomarcadores pueden emplearse con varios fines. A nivel
individual, un biomarcador puede utilizarse para apoyar o rechazar el
diagnóstico de un determinado tipo de intoxicación o de otro efecto
adverso inducido por sustancias químicas. (20) En un sujeto sano, un
36
biomarcador puede reflejar también una hipersusceptibilidad individual a
determinadas exposiciones químicas y por consiguiente puede tomarse
como base para la predicción del riesgo y el asesoramiento. En grupos
de trabajadores expuestos pueden aplicarse algunos biomarcadores de la
exposición para valorar el grado de cumplimiento con las normas de
reducción de la contaminación o la eficacia de las medidas preventivas en
general. (20)
BIOMARCADORES DE LA EXPOSICIÓN
Un biomarcador de la exposición puede ser un compuesto exógeno (o un
metabolito) que se introduce en el cuerpo, un producto interactivo entre el
compuesto (o metabolito) y un componente endógeno, o cualquier otro
hecho relacionado con la exposición.8 Lo más habituales que los
biomarcadores de exposiciones a compuestos estables, como los
metales, comprendan mediciones de las concentraciones del metal en
muestras apropiadas, como la sangre, el suero o la orina. En el caso de
las sustancias volátiles puede evaluarse su concentración en el aire
espirado (tras la inhalación de aire libre de contaminación). Si el
compuesto se metaboliza en el cuerpo, pueden elegirse uno o varios
metabolitos como biomarcadores de la exposición; los metabolitos suelen
determinarse en muestras de orina. Los métodos de análisis modernos
permiten en ocasiones separar los isómeros de los compuestos
orgánicos, y determinar la especiación de los compuestos metálicos o
coeficientes isotópicos de determinados elementos. Análisis más
complejos permiten deteminar los cambios que se producen en la
37
estructura del ADN u otras macromoléculas por la unión con sustancias
químicas reactivas. Se trata de compuestos reactivos que pueden formar
aductos con macromoléculas, como proteínas o el ADN. De especial
interés, esos compuestos reactivos pueden generar aductos de
hemoglobina que pueden utilizarse como biomarcadores de la exposición
a los compuestos. La ventaja es que de una muestra de sangre pueden
obtenerse grandes cantidades de hemoglobina y, dado que los glóbulos
rojos tienen una vida de cuatro meses, los aductos formados con los
aminoácidos de la proteína indican la exposición total durante ese
período. Los aductos pueden determinarse mediante técnicas sensibles
como la cromatografía de lípidos de alta resolución, y también mediante
algunos métodos inmunológicos. En general, los métodos analíticos son
recientes y costosos, y precisan de más desarrollo y validación. Los
biomarcadores de la exposición han de evaluarse con respecto a la
variación temporal de la exposición y a la relación de ésta con diferentes
compartimentos. Así, para interpretar el resultado es necesario
determinar, a partir de datos toxicocinéticos, el marco o los marcos
temporales representados por el biomarcador, es decir, el grado en que la
medida del biomarcador refleja una exposición o exposiciones pasadas
y/o la carga corporal acumulada. Aunque en los estudios con
biomarcadores suelen utilizarse muestras de sangre, la sangre periférica
no se considera en general un compartimento propiamente dicho, aunque
actúa como medio de transporte entre compartimentos. El grado en que la
concentración en sangre refleja los niveles existentes en diferentes
38
órganos varía considerablemente según la sustancia química de que se
trate, y por lo general depende también de la duración de la exposición y
del tiempo transcurrido desde ésta. (20)
Acontecimientos de la vida como la reproducción y la senectud pueden
afectar a la distribución de una sustancia química. La distribución de las
sustancias en el cuerpo se ve notablemente afectada por el embarazo, y
muchas de ellas pueden atravesar la barrera placentaria, con la
consiguiente exposición del feto. La lactancia puede producir una
excreción de sustancias químicas liposolubles, lo que se traduce en una
menor retención en la madre y una mayor absorción en el niño. En las
situaciones de pérdida de peso o en la osteoporosis pueden liberarse
sustancias almacenadas, que producen después una nueva y prolongada
exposición “endógena” de órganos diana. Hay otros factores que pueden
afectar a la absorción, metabolismo, retención y distribución de
compuestos químicos en un individuo, y existen algunos biomarcadores
de la biosusceptibilidad. (20)
BIOMARCADORES DEL EFECTO
Los marcadores del efecto pueden ser componentes endógenos o
medidas de la capacidad funcional, o cualquier otro indicador del estado o
equilibrio del cuerpo o de un sistema orgánico afectado por la exposición.
Suelen utilizarse como indicadores preclínicos de anomalías. Los
biomarcadores del efecto pueden ser específicos o no específicos. Los
específicos son útiles porque indican un efecto biológico de una
exposición concreta, por lo que aportan datos que pueden ser valiosos de
39
cara a la prevención.8 Los biomarcadores no específicos no indican una
causa individual del efecto, pero pueden reflejar el efecto total integrado
debido a una exposición combinada. Por consiguiente, los dos tipos de
biomarcadores pueden ser de considerable utilidad en el ámbito de la
salud en el trabajo. No hay una distinción clara entre biomarcadores de la
exposición y del efecto. Por ejemplo, podría decirse que la formación de
aductos refleja más un efecto que la exposición. No obstante, los
biomarcadores del efecto suelen indicar cambios en las funciones de las
células, de los tejidos o del cuerpo en su conjunto. Algunos investigadores
incluyen entre los biomarcadores del efecto los cambios muy visibles,
como un aumento del peso del hígado en animales de laboratorio
expuestos o un defecto de crecimiento en los niños. En el contexto de la
salud en el trabajo, los biomarcadores del efecto deben limitarse a los que
indican cambios bioquímicos subclínicos o reversibles, como la inhibición
de enzimas. El que se utiliza con más frecuencia es probablemente la
inhibición de la colinesterasa motivada por determinados insecticidas
(organofosforados y carbamatos). En la mayoría de los casos este efecto
es totalmente reversible, y la inhibición de esta enzima refleja la
exposición total a ese grupo concreto de insecticidas. Algunas
exposiciones no producen una inhibición de la enzima, sino por el
contrario un aumento de su actividad. Así ocurre con varias enzimas
pertenecientes a la familia P450 que pueden inducirse por la exposición a
determinados disolventes e hidrocarburos poliaromáticos. Como esas
enzimas se expresan principalmente en tejidos de los que puede ser difícil
40
obtener material para biopsia, la actividad enzimática se determina
indirectamente in vivo administrando un compuesto que es metabolizado
por esa enzima concreta, y después se mide en la orina o el plasma el
producto de descomposición. Otras exposiciones pueden inducir la
síntesis de una proteína protectora en el organismo. Análogamente, la
excreción en la orina de proteínas de bajo peso molecular, como la
albúmina, puede utilizarse como biomarcador precoz de daño renal.
También pueden ser útiles como biomarcadores diversos parámetros que
se emplean habitualmente en la práctica clínica (por ejemplo, los niveles
hormonales o enzimáticos en el suero). No obstante, es posible que
muchos de esos parámetros no sean lo suficientemente sensibles para
detectar precozmente el problema. Otro grupo de parámetros de este tipo
es el que se refiere a los efectos genotóxicos (cambios en la estructura de
los cromosomas). Esos efectos pueden detectarse examinando al
microscopio glóbulos blancos en división celular. El daño grave a los
cromosomas -aberraciones cromosómicas o formación de micronúcleos—
puede observarse al microscopio. Se puede observar asimismo mediante
la tinción de las células durante la división celular. La exposición a un
agente genotóxico puede visualizarse después como un incremento del
intercambio del colorante entre las dos cromatidas de cada cromosoma
(intercambio entre cromatidas hermanas). Las aberraciones
cromosómicas están relacionadas con un aumento del riesgo de cáncer,
pero no está tan clara la significación de esa tasa mayor de intercambio
entre cromatidas hermanas. Una evaluación más compleja de la
41
genotoxicidad es la que se basa en determinadas mutaciones puntuales
en células somáticas—glóbulos blancos de la sangre o células epiteliales
tomadas de la mucosa de la boca. Una mutación en un locus determinado
puede hacer que las células sean capaces de crecer en un cultivo que
contiene una sustancia química por lo demás tóxica (como la 6-
tioguanina). Otra posibilidad es valorar un determinado producto génico
(porejemplo, las concentraciones en suero o en tejido de oncoproteínas
codificadas por determinados oncogenes). Evidentemente, esas
mutaciones reflejan el daño genotóxico total producido y pueden no
indicar nada sobre la exposición causante. Estos métodos aún no están lo
suficientemente desarrollados para utilizarlos en la vigilancia de la salud
en el trabajo, pero los rápidos avances que se están produciendo en esta
línea de investigación sugieren que podrán emplearse dentro de no
muchos años. (20)
BIOMARCADORES DE LA SUSCEPTIBILIDAD
Un marcador de la susceptibilidad, sea heredada o inducida, es un
indicador de que el individuo es especialmente sensible al efecto de un
xenobiótico o a los efectos de un grupo de xenobióticos. Se ha hecho
hincapié sobre todo en la susceptibilidad genética, aunque hay otros
factores que pueden tener al menos la misma importancia. La
hipersusceptibilidad puede deberse a un rasgo heredado, a la constitución
del individuo o a factores ambientales. La capacidad de metabolizar
determinadas sustancias químicas es variable y está determinada
genéticamente. Parece que algunas enzimas de interés a este respecto
42
están controladas por un único gen. Por ejemplo, la oxidación de
sustancias químicas extrañas la realiza principalmente una familia de
enzimas pertenecientes a la familia P450.8 Otras enzimas hacen los
metabolitos más hidrosolubles por conjugación (por ejemplo, la N-
acetiltransferasa y la - glutatión-S-transferasa). Ya se han caracterizado
algunos genes, y se dispone de técnicas para determinar el genotipo.
Estudios importantes sugieren que el riesgo de desarrollar determinadas
formas de cáncer está relacionado con la capacidad de metabolizar
compuestos extraños.8 La mayor parte de la investigación relacionada
con la susceptibilidad se ha dedicado a la predisposición genética. Pero
hay otros factores que también intervienen y que han quedado en cierto
modo relegados. Por ejemplo, los individuos que padecen una
enfermedad crónica pueden ser más sensibles a una exposición
profesional. Asimismo, cuando un proceso patológico o una exposición
anterior a sustancias tóxicas ha provocado un daño orgánico subclínico es
probable que se haya reducido la capacidad de soportar una nueva
exposición al tóxico. El mejor ejemplo de esta hipersusceptibilidad es
probablemente el que se refiere a las respuestas alérgicas. Si un individuo
se ha sensibilizado a una determinada exposición, en su suero se pueden
detectar anticuerpos específicos. Aun cuando el individuo no se haya
sensibilizado, otras exposiciones actuales o pasadas pueden incrementar
el riesgo de un efecto adverso relacionado con una exposición
profesional. (20)
43
GLÁNDULAS SALIVALES
GLÁNDULA PARÓTIDA
Las glándulas parótidas son las más grandes de las salivales. A uno y
otro lado del maxilar inferior, están situadas en el espacio que hay entre la
apófisis mastoides y la rama del maxilar inferior, por debajo del arco
cigomático. Los orificios de sus conductos están situados en la superficie
de mucosa de los carrillos, frente a los segundos molares el maxilar
superior. Cada glándula parótida está envuelta por una cápsula fibrosa
resilente y es una glándula tubuloalveolar compuesta de tipo seroso.
Además de las características especiales de este tipo de glándulas, las
parótidas se caracterizan por tener numerosos conductos intralobulillares
prominentes, además que es común que halla adipocitos en sus tabiques
de tejido conectivo. Se piensa que los gránulos secretores contienen
moco, además de enzimas. (16)
GLÁNDULA SUBMAXILAR
Las glándulas submaxilares están frente a la cara interna del cuerpo del
maxilar inferior, y sus conductos se abren en el suelo de la boca, por
detrás de los dientes incisivos del maxilar inferior y de manera adyacente
al frenillo lingual. Se trata de glándulas tubuloalveolares o alveolares
compuestas de tipo mixto, y la mayor parte de sus unidades secretoras
son serosas. Por lo general, también hay unidades mucosas, aunque
cubiertas por semilunas serosas. Lo mismo que las glándulas parótidas,
44
las submaxilares tienen una cápsula bien desarrollada y un sistema de
conductos relativamente prominente. (16)
Richard D. & cols. (1976), el objetivo fue evaluar el uso de un removedor
de pintura que contenga CH2Cl2 en su mayor parte (80%) y metanol
(20%). Se esperaba encontrar altas concentraciones de
carboxihemoglobina en la sangre. Cuatro sujetos voluntarios fueron
divididos en 2 grupos: dos fueron sometidos a niveles de CH2CL2 que se
encuentran en sótanos de casas (0-576ppm) y también a metanol, y dos a
niveles encontrados en ambientes industriales (0-1277ppm) ambos
grupos sometidos a 3 hrs de exposición y estudiados hasta las 21 hrs
pos-exposición . Reportándose que el nivel de COHb comenzó a
aumentar poco después que la exposición había comenzado. Estos
niveles de COHb aumentaron constantemente durante la exposición,
siguió aumentando durante varias horas tras el cese de la exposición y, a
continuación, muy lentamente volvió a la normalidad .Concluyendo que en
contraste con el modelo habitual de la formación de COHb siguientes
CH2Cl2 exposición, con un máximo nivel de elevación de COHb que se
producen una hora después de la exposición, el nivel de COHb en las
personas expuestas a DCM y a metanol siguió aumentando durante
varias horas tras la exposición. Esto sugiere que el metanol es altera el
metabolismo normal de la degradación CH2Cl2.
No se produjeron respuestas desfavorables durante el período de 24
horas después de cada. (42)
45
Laboratorios Hazelton de América (1982), el objetivo fue evaluar la
toxicidad crónica y oncogenicidad en ratas a nivel hepático. En un estudio
de dos años encargado por la Asociación Nacional del Café, ratas F344
recibieron 0, 5, 50, 125 o 250 mg/kg de DCM diariamente en el agua
potable. Resultados fueron las ratas hembras mostraron una mayor
incidencia de nódulos neoplásicos y carcinomas hepatocelulares, lo que
fue significativa en comparación con los controles. Ratones machos
tenían una elevada, aunque no significativa, incidencia combinada de los
nódulos tumorales y carcinomas hepatocelulares. (28)
Laboratorios Hazelton de América (1983). El objetivo fue evaluar la
toxicidad crónica y oncogenicidad en ratas a nivel hepático. Se espera
encontrar daño a nivel hepático. Ratones machos y hembras B6C3F1
expuestos a 0, 60, 125,185, o 250 mg/kg/día de DCM en su agua potable
por 2 años. Resultados, ratones machos tuvieron un incremento en la
incidencia de la combinación nódulos neoplásicos y carcinoma
hepatocelular mostraron daños hepáticos sólo en la dosis más alta
siendo del 55- 65% del total. (29)
Withey, J. & cols. (1983), el objetivo fue comparar la velocidad de un
vehículo acuoso y un vehículo oleoso en la administración vía oral de
DCM en dosis equivalentes de cloruro de metileno, cloroformo,
dicloroetano y tricloroetileno. Se espera que la velocidad del vehículo
acuoso sea mayor que la del vehículo oleoso. Las ratas serán preparadas
46
con cánulas en la vena yugular para hacer más rápida la toma de
muestras de 0.1 ml de sangre. El cloruro de metileno, cloroformo,
dicloroetano, y tricloroetileno fueron disueltos en agua destilada y aceite
vegetal para dar soluciones homogéneas con una concentración de
aproximadamente 2/3 de su solubilidad acuosa. Diferentes pares de
animales elegidos al azar, fueron tratados por intubación intragàstrica con
3-5 ml de cloruro de metileno (I 25 mg/kg), cloroformo (75 mg/kg) y
dicloroetileno (100mg/kg) en solución diariamente por 15 días. Uno de los
animales de la pareja fue dosificada con una solución acuosa y la otra con
una solución de aceite vegetal y la concentración de hidrocarburos
clorados fue idéntico en cada disolvente. La concentración de
tricloroetileno debido a su baja solubilidad fue 18mg/kg. Resultados,
fueron medidos mediante: area under blood concentration-time
curve(ug.min/ml), el cloruro de metileno(5303) fue la de mayor
concentración en sangre luego de 300 minutos seguidos por el
dicloroetano(4825) y el compuesto que llegó más rápido al nivel pico de
concentración en sangre fue el dicloroetano (3.2 minutos) seguido por el
DCM (5.21 minutos). Concluimos que las soluciones con base acuosa
tuvieron una absorción más rápida y dio lugar a niveles pico superiores
que las soluciones aceitosas. (54)
Burek, J. D & cols. (1984). El objetivo fue determinar la toxicidad crónica y
oncogenicidad del cloruro de metileno a nivel hepático, de glándulas
salivales y de glándulas mamarias. Se esperaba encontrar toxicidad y
47
oncogenicidad a nivel de los órganos objetivo. Ratas y hámsters fueron
expuestos por inhalación a 0, 500, 1500 o 3500 ppm de DCM 6hrs por
día, 5 días a la semana por 2 años. Los resultados encontrados fueron un
aumento estadísticamente significativo de sarcomas de glándulas
salivales en las ratas macho en los grupos de 1500 y 3500 ppm. Se
encontró mínimos efectos histopatológicos a nivel hepático en ratas
expuestas a 500, 1500, 3500. Mientras el número de ratas hembras con
un tumor benigno mamario fue incrementado. En contraste hámsters
expuestos a la misma concentración de cloruro de metileno presentaron
mínima incidencia de toxicidad en los órganos objetivo. (11)
Programa Nacional de Toxicología (1986), el objetivo fue evaluar la
oncogenicidad a nivel hepático y de glándulas mamarias. Se esperaba
encontrar daño significativo en los órganos objetivo. Estudio de ratas
machos y hembras F344/N y ratones fueron expuestos a DCM por
inhalación 6hrs/día, 5 días/semana por 2 años. Las concentraciones de
exposición fueron 0, 1000, 2000 y 4000 ppm para ratas y 2000 y 4000
ppm para ratones. Mostraron un aumento significativo de tumores
mamarios (fibroadenoma, adenoma y fibroma) en machos de grupos de la
más alta dosis y ratas hembras. Ratas hembras muestran un aumento en
la incidencia de leucemia de células mononucleares. Entre ratones
hembras y machos hubo un significativo incremento en la incidencia de
hemosiderosis, citomegalia, vacuolización citoplasmática, necrosis,
inflamación granulomatosa, carcinomas hepatocelulares en ratones
48
machos a altas dosis y en altas y bajas dosis en hembras. La incidencia
de adenomas y carcinomas hepatocelulares en los machos a grandes
dosis fue significativamente más alta que en el grupo control. También fue
observado en ratones un incremento significativo en la incidencia de
adenomas alveolares/bronquiales y carcinomas en grupos de altas y
bajas dosis en machos y hembras. (41)
Kelly M. (1988), reportó el caso de cuatro trabajadores con exposición
crónica a DCM que proporcionaron muestras de semen, fueron
reportados de tener una cuenta de semen en la gama de infértiles,
anormal motilidad espermática y la morfología y la atrofia testicular
bilateral. Otros cuatro trabajadores se negaron a participar en la toma de
muestras de semen, pero reportaron los síntomas de mareo, pérdida de
memoria, depresión y cambios de personalidad. Las mediciones en el
lugar de trabajo encontró un promedio de 69 ppm de DCM con una serie
de 3.3-154.4 ppm. (25)
Westbrook, B. & cols (1990), el objetivo fue evaluar aberraciones
cromosomales y el intercambio de cromátidas hermanas de células de la
médula ósea seguidas a la exposición intraperitoneal de 100 a 2000
mg/kg de DCM. Se esperaba no encontrar incremento en la frecuencia ya
sea de intercambio de cromátidas hermanas o aberración cromosomal.
Se trabajo con ratones C57B1/6J de 3 a 5 meses de edad, el DCM al 99%
fue disuelto. Cuatro ratones por dosis (100, 1000, 1500, 2000 mg/kg)
49
fueron inyectados intraperitonealmente (0.1 ml x 10g de peso corporal),
ciclofosfamida CP (15 o 50 mg/kg, controles positivos), aceite de maíz
(como vehículo control) y el último grupo de los no tratados (control
negativo). Resultados, los índices de replicación aparentemente no fueron
afectados por el DCM, con la excepción de un animal del grupo de
tratamiento de 1500 mg/kg que mostró una relativa alta proporción de
células observadas en la primera fase de división (metafase) lo que
sugiere toxicidad. Los resultados de los análisis de aberración
cromosomal muestran que para todos los tipos de aberración cromosomal
el efecto del DCM fue negativo, ya sea por porcentaje por células o
porcentaje de aberración celular. Se concluye que los resultados
negativos obtenidos en el presente trabajo se añaden a un creciente
cuerpo de datos que sugieren que la exposición in vivo de DCM no da
lugar a daño genético. (51)
Foster, J. R. & cols. (1992), el objetivo fue investigar efectos patológicos y
bioquímicos ocurridos en el pulmón de ratón posteriores a la inhalación de
DCM por un período de 90 días. Se esperaba encontrar efectos mínimos
debido a la inactivación del citocromo P-450. Ratones machos B6C3F1
fueron expuestos a 4000ppm de cloruro de metileno por 6hrs/día, 5
días/semana por 13 semanas. Grupos de ratones fueron sacrificados a
intervalos desde el día 2 a la semana 13.Todos los pulmones fueron
examinados morfológicamente, inmunohistoquímicamente y
bioquímicamente. Resultados el principal efecto inicial fue daño agudo a
50
nivel de células claras de pulmón, este daño pareció resolverse en 5 días
de someter diariamente a DCM. Después de 2 días las lesiones de las
células claras reaparecieron con la subsecuente reexposición a DCM. Sin
embargo la severidad de la lesión disminuye a lo largo de la duración del
estudio. Esto se correlaciona bien con la actividad del citocromo P450
evaluada inmunocitoquímicamente en todo el pulmón y bioquímicamente
en células claras aisladas. Lo que sugiere que con el tiempo el pulmón
(célula clara) ha desarrollado tolerancia al DCM debido posiblemente a la
inactivación del citocromo P450. Se concluye hubo un aumento
significativo en la no proteína sulfifril en el pulmón de todos los animales
expuestos, se encontró placas alteradas características de las células
aisladas de los pulmones expuestos después de 24 hrs en cultivo, hubo
un aumento en el número de células bronquiales en la fase S después de
la exposición a DCM. (22)
Amsel, J (2001), el objetivo del estudio fue comparar el tiempo predicho
para la tasa de formación de carboxihemoglobina con la tasa de
formación de la misma en la exposición laboral por producción de
celulosa triacetato. Niveles de carboxihemoglobina fueron medidos en
trabajadores no fumadores expuestos a diferentes concentraciones de
DCM durante la fabricación de fibra de triacetato de celulosa. Resultados,
el tiempo dependiente predicho para la tasa de formación de CO en los 7
días fue similar a la evolución en el tiempo para DCM en la sangre y la en
el hígado. El patrón de la formación de CO se puede explicar por la no
51
saturación de la vía MFO, especialmente en el hígado. No parece haber
ninguna acumulación de DCM ni en el hígado o sangre desde el 1º día a
los siguientes días. Los niveles de carboxihemoglobina, así como la
formación de metabolitos en el hígado, parecen ser paralelas a la
concentración de DCM. En consecuencia, los niveles de COHb no
parecen persistir en los individuos expuestos a 50 ppm o menos de DCM.
(4)
Warbrick E. (2003), el objetivo fue evaluar el efecto inmunotóxico del
DCM. Ratas Sprague-Dawley machos (8-12 semanas de edad, 154-
177gr.). Un grupo de ratas machos y hembras fueron expuestas solo a
aire (control negativo), otro grupo fue expuesto a cloruro de metileno a
5000 ppm por 6 horas diarias, 5 días por semana por un período de 28
días. Un grupo adicional fue expuesto a una sola dosis de ciclofosfamida
de 100 mg/kg un día antes a la inmunización con SRBC, debido a que es
recomendado por la EPA como control positivo para estudios de
inmunotoxicidad (USA, EPA 1998). Cinco días antes del sacrificio (23 días
después de la iniciación de la exposición a cloruro de metileno) todos los
animales fueron inyectados intravenosamente en la vena de la cola con 1
ml de SRBC. Animales fueron sangrados serialmente de la vena de la
cola en el 4, 5 y 6 días después de la inmunización con SRBC y
terminado por punción cardíaca en el día 7. Estas muestras de suero
fueron utilizadas para examinar la respuesta cinética de la anti-SRBC IgM
en esta cepa de ratas. Resultados, en ninguno de los grupos hubo
52
diferencias significativas en la concentración de IgM entre los animales
expuestos a aire solamente y los expuestos a DCM. La exposición de
ratas a ciclofosfamida 100 mg/kg por inyección i.p. 1 día antes de la
inmunización con SRBC, resulto en una significante reducción en los
niveles de IgM comparado con el grupo control expuestos a aire
solamente. Concluyendo que lo reportado aquí, indica que el tratamiento
de ratas con DCM por la ruta más relevante para el ser humano y a una
concentración que muestra otros signos síntomas no tiene efecto en la
función inmunológica. No hay peligro de inmunotoxicidad en seres
humanos. (48)
Jacubovich, R. & cols. (2005), presentó el caso clínico de un paciente que
desarrolló una parálisis del nervio facial después de la exposición
ocupacional al diclorometano, tres soldados que trabajaban en una
pequeña habitación cerrada de 25 m2 con una puerta que se abrió en la
sala y una ventana de 10x10 cm, no había un dispositivo de ventilación
adicional en la habitación, uno de los soldados poco después que
comenzó a trabajar presentó dolor de cabeza, mareos e irritación de
garganta, los soldados salían de la habitación cada cierto tiempo un par
de minutos aproximadamente, no llevaban guantes de protección o
máscaras. Luego de tres horas de trabajo aproximadamente pararon
debido a un exceso de vapores en la sala y la exacerbación de los
síntomas. Dos horas más tarde, uno de los soldados informó dolor de
cabeza, mareos y nauseas. Sus signos vitales eran normales, así como el
53
resto de su examen físico que incluyó un minucioso examen neurológico.
El médico tratante ordenó un cambio de ropa, recibió hidratación y leve
analgésico. Al despertar la mañana siguiente el paciente notó la asimetría
del lado izquierdo de su cara, se le realizó diagnóstico diferencial de
infección viral, tinnitus, disminución de la audición, hiperacusia o pérdida
del gusto, enfermedad de Lyme. Las pruebas de laboratorio revelaron
valores normales en riñón y pruebas de función hepática y de la
saturación de oxígeno 98%. Los niveles de carboxihemoglobina en sangre
fueron 0.3-0.4%, se recuperó después de tres semanas. Los bajos niveles
de carboxihemoglobina encontrados se sospecha fueron debido a la
demora de la toma de muestra de sangre, debido a que el tiempo de vida
media de la COHb es de 13 horas luego de la exposición. Este es el
primer informe que describe un posible vínculo entre la exposición aguda
a diclorometano y la parálisis del nervio facial. (24)
Kim, S. (2007), el objetivo fue evaluar los efectos de dimetilsulfóxido
(DMSO) en el metabolismo y toxicidad de metanos clorados. Se utilizó
ratones machos, tratados previamente con DMSO (1, 2.5 y 5 ml/kg, i. p.)
diluído en un medio salino normal, luego fueron tratados con DCM
(6nmol/kg) y CCl4 (0.1 y 0.2 nmol/kg) diluídos en aceite vegetal fue
administrado intraperitoneal 15 min. Luego de administrado el DMSO, el
grupo control fue inyectado con un volumen equivalente del vehículo
(aceite vegetal) 10 ml/kg, 24 horas luego de la administración, los
animales fueron muertos por decapitación y sangre del tronco fue
54
colectada. Resultados, en ratones tratados con una dosis i. p. de DCM el
nivel de COHb fue elevado rápidamente, alcanzando el máximo pico 30-
60 min luego del tratamiento. La dosis de DMSO antes de la aplicación de
de DCM inhibió la elevación de los niveles de COHb significativamente.
La elevación de la actividad enzimática sérica no fue alterada por una
mínima dosis de DMSO (1.0 ml/kg i. p.) en ratones probados con CCl4
(0.1 mmol/kg, i. p.) pero a grandes dosis, DMSO disminuye la inducción
de CCl4, administrado a dosis de 0.2 mmol/kg. Adicionalmente a las
características fisicoquímicas, CH2Cl2 y CCl4 comparten una propiedad
común ellos son convertidos a metabolitos tóxicos por un idéntico sistema
enzimático. La disminución de los niveles pico de COHb dependió de la
dosis de DMSO utilizado. Los efectos de DMSO en la inducción de la
hepatotoxicidad de CCl4 mostró ser una variable dependiente de las dosis
de DMSO y CCl4. La hepatotoxicidad inducida por CCl4 no fue alterada en
ratones pretratados con DMSO a 1.0 ml/kg, pero a una larga dosis de
DMSO, la toxicidad fue disminuida significativamente. (26)
Kobayashi, A. & cols. (2008), reportó el caso clínico de un paciente de 65
años que fue encontrado inconsciente en su lugar de trabajo en un tanque
que contenía diclorometano (pureza del 99%, sobre la base de la hoja de
referencia presentada por la empresa). El paciente no presentaba
antecedentes significativos en su historia. Cuando fue encontrado había
olor a disolvente orgánico perceptible en su ropa y su aliento, pero no
hubo vómitos, por lo que se considera que hubo inhalado vapor pero no
55
tragado líquido. El nivel de carboxihemoglobina fue de 7.5% y se confirmó
la acidosis metabólica de sangre arterial de gases. El diagnóstico fue
narcosis causada por inhalación de diclorometano, recuperándose 4 días
después del accidente. Un mes después el paciente acudió al servicio de
oftalmología describiendo un estrechamiento de su campo visual, en
ambos ojos la agudeza visual fue de 0.3 y presión intraocular de 14 y 16
mmHg (derecho e izquierdo respectivamente). La frecuencia crítica de
parpadeo (CFF) presentó midriasis y pérdida de la reacción pupilar a la
luz, 16 meses más después el paciente presentó edema de retina
alrededor de la cabeza del nervio óptico, que finalmente se convirtió en
excavación profunda, de manera que la cabeza del nervio óptico era
grande y se asemejaba al de un glaucoma en los estadíos finales.
Concluyendo que es el primer caso de neuropatía óptica causada por
inhalación de diclorometano. (27)
56
II. HIPÓTESIS
Dada la citotoxicidad probada del cloruro de metileno a nivel de tejido
hepático, renal y neurológico es probable que produzca daño a nivel de
glándulas salivales.
57
III. OBJETIVOS
III.1.Objetivo General
Determinar cuál es el efecto citotóxico del cloruro de metileno sobre
las glándulas salivales submaxilar y parótida de ratas Holtzman.
III.2.Objetivos Específicos
• Determinar la alteración de las medidas físicas: tamaño y peso en
las glándulas submaxilar y parótida de ratas Holtzman.
• Evaluar mediante estudio histológico la cantidad de acinos, el
grosor de pared de acinos, de ductos granulosos y ductos estriados
en las glándulas submaxilar y parótida de ratas Holtzman después
de la exposición inhalatoria de cloruro de metileno a la
concentración de 2000ppm durante un tiempo de 15 y 30 minutos
diarios.
• Evaluar mediante estudio histológico la cantidad de acinos, el
grosor de pared de acinos, de ductos granulosos y ductos estriados
en las glándulas submaxilar y parótida de ratas Holtzman después
de la exposición inhalatoria de cloruro de metileno a la
concentración de 4000 ppm durante un tiempo de 15 y 30 minutos
diarios.
58
IV. MATERIALES Y MÉTODO
IV.1. Tipo de estudio
Experimental
Longitudinal
Comparativo
Prospectivo
IV.2. Población y Muestra
Ratas Holtzman machos, de 1 mes 3 semanas de edad con peso
promedio de 200 gr. Será obtenida mediante criterio de conveniencia de
antecedentes.
Tamaño de muestra para comparación de dos grupos
n = 2 (Zα + Zβ) 2 s2 D2
La fórmula reemplazando datos es: n = 2 ( 0.05 + 0.90) (3.1)2= 20
22
Zα : corresponde al valor de la tabla normal para un nivel de significación
del 5% (α= 0.05)
Zβ: corresponde al valor de una tabla normal para una potencia del test
De 90% (1-β= 0.90)
D: Mínima diferencia en la respuesta (grosor o cantidad) de importancia
Práctica.
59
Siendo 20 el número de replicas, entonces para cada combinación de
tiempo de exposición y concentración sería 5.
IV.3. Operacionalización de Variables
Dependiente:
Citotoxicidad de glándulas salivales.
Independiente:
Cloruro de metileno a 2000 y 4000ppm.
*La lectura será mediante cruces que marcarán el grado de lesión: 0= Ausencia 1=Leve 2=Moderada 3=Severa
VARIABLES DIMENSIÓN INDICADOR ESCALA VALORDependiente: Citotoxicidad de glándula parótida Citotoxicidad de glándula submaxilar
Medidas físicas Histológico
Tamaño de parótida Tamaño de submaxilar Peso de parótida Peso de submaxilar Grosor de acinos Cantidad de acinos Grosor de conducto estriado Grosor de conducto granuloso
De razón ordinal
0-x kg. 0* 1 2 3
Independiente: Dosis de cloruro de metileno a 2000 y 4000ppm
Concentración Tiempo de exposición
ppm minutos
Nominal Nominal
2000 4000 15´ 30´
60
IV.4. PROCEDIMIENTOS Y TÉCNICAS
A.-Selección de animales de experimentación
Los animales fueron seleccionados del bioterio de la Universidad Nacional
Agraria La Molina, se utilizaron un total de 25 ratas albinas de raza
Holtzman machos de 1 mes y 3 semanas de edad en promedio y con un
peso promedio de 200 gr. al momento de inicio de la experimentación.
Fueron sometidos a una dieta balanceada con alimento elaborado en la
UNALM, a base de harina de maíz, torta de soya 48, harina integral
extruída de soya, subproductos de molinería de trigo, aceite vegetal,
carbonato de calcio, fósforo dicálcico, cloruro de colina 60%, cloruro de
sodio, aminoácidos sintéticos, premezcla de vitaminas y minerales,
antioxidantes y antifúngicos.
B.-Obtención del producto químico
El cloruro de metileno fue obtenido del laboratorio PFLUCKER al 99.9%
de pureza.
C.-Diseño de grupos experimentales
Los animales fueron encerrados en un invernadero de vidrio de medidas
50 cm de profundidad, 40cm de ancho y 30 cm de altura con una ventana
de ventilación de 4.75 cm x 38.9 cm de modo que entre aire y una
plataforma de 16.5 cm de altura con base de 27.5 y 36.3 cm. Fueron
expuestos al cloruro de metileno de manera que sea inhalado por estos,
para ello fueron divididos en 5 grupos de 5 ratones cada uno, de la
siguiente manera:
61
GRUPO I: este grupo fue sometido a una exposición de cloruro de
metileno a 2000 ppm por un tiempo de 15 minutos por día por un
período de 22 días. (Fueron marcados con violeta de genciana en el
LOMO)
GRUPO II: este grupo fue sometido a dos exposiciones sucesivas de
cloruro de metileno a 2000 ppm por un tiempo de 15 minutos cada una
por día, con un tiempo de descanso de 3 minutos entre cada exposición;
por un período de 22 días. (Fueron marcados con violeta de genciana en
la CABEZA)
GRUPO III: este grupo fue sometido a una exposición de cloruro de
metileno a 4000 ppm por un tiempo de 15 minutos por día por un período
de 22 días. (Fueron marcados con violeta de genciana en el CUELLO)
GRUPO IV: este grupo fue sometido a dos exposiciones sucesivas de
cloruro de metileno a 4000 ppm por un tiempo de 15 minutos cada una,
con un tiempo de descanso de 3 minutos entre cada exposición; por día
por un período de 22 días. (Fueron marcados con violeta de genciana en
la PATITA)
GRUPO V: este grupo es el grupo control, no fue sometido a ningún
tratamiento.
D.-Cálculo de la concentración de cloruro de metileno
Teóricamente la velocidad del aire es 1m/s en un cuarto cerrado donde no
se sienta corriente de aire.
A=4.75cm x 38.9cm=0.0475mx0.389m=0.018m2
Hallando el caudal:
62
Q aire = 1m/s x 0.0185m2 = 0.018m3/s pasándolo a hora 0.0018m3/s
x3600s/h= 66.6m3/h esto en masa 66.6m3/h x1.204 kg/m3 =80.1864 kg/h =
60 682gr/h.
Densidad del aire= 1.204 g/l = 1.204kg/m3
DCM
52 cm3/h x 1.32 g/cm3= 68.64gr/h
Masa total= (80186+68.64) gr =80 254.64gr
80 254.64gr ----------106
X -------------------2000 x=160.3ppm
Esa cantidad es la que se disuelve por hora de DCM a temperatura
ambiente
V= 160.3 = 121.5
1.32g/cm3
De acuerdo a todo lo que he resuelto sale que debe consumirse 121.5
cm3 en una hora de DCM para decir que la concentración en la cámara de
vidrio y lo que inhalan las ratas es 2000ppm. Por ende para 4000 ppm es
el doble 243 cm3.
E.-Fase experimental
Los animales fueron sacrificados por inhalación con cloroformo. Las
glándulas salivales fueron extraídas e inmediatamente inmersas en
63
solución fijadora de alcohol 80% -85ml, formaldehído-10ml y ácido acético
-5ml y mantenidas durante 24 horas. Después de fijadas, las glándulas
fueron deshidratadas, diafanizadas, incluídas en parafina, cortadas en
forma semi-seriada con 6 um de espesor y teñidas con hematoxilina y
eosina.
Para el estudio histopatológico los cortes fueron analizados por un
patólogo ciego al microscopio óptico con aumento total de 1000x, con
una cámara clara (MOTI) acoplada.
Los datos de las exposiciones diarias y de las lecturas de láminas
realizadas por el patólogo ciego fueron recogidas en las fichas Nº1 y Nº2.
(Anexo Nº1 y Nº2)
F. Plan de Análisis
En la interpretación de los resultados se usaran pruebas no paramétricas.
Se utilizó la prueba estadística de Kruskal-Wallis, para evaluar el
comportamiento global de los grupos para las combinaciones
concentración-tiempo de exposición y la prueba de U. Mann Whitney
para la comparación intra grupos. Para el procesamiento de datos se
utilizara el programa ssps-v15.
Para la interpretación de los resultados de los indicadores tamaño y peso
se utilizó la Prueba T – Student para dos muestras.
64
V. RESULTADOS
Luego de concluido el período experimental y de haberse realizado la
lectura y análisis correspondiente se obtuvieron los siguientes resultados.
Lesión Celular analizando concentración:
Analizando el grosor de acinos de glándula parótida, en la concentración
de 2000ppm se observó una tendencia de leve a moderado: 8 muestras
(80%) presentaron una lesión leve y 2 muestras (20%) presentaron una
lesión moderada. En la concentración de 4000 ppm se observó una
tendencia de moderado a severo: 9 muestras (90%) presentaron lesión
moderada y 1 muestra (10%) presentó una lesión severa. (Tabla 1, figura
1a).
Analizando la cantidad de acinos de la glándula parótida en la
concentración de 2000 ppm se observó la presencia de los tres niveles de
lesión: 1 muestra (10%) presentó lesión leve, 8 muestras (80%)
presentaron lesión moderada y 1 muestra (10%) presentó lesión severa.
En la concentración de 4000 ppm se observó una tendencia de moderado
a severo: 7 muestras (70%) presentaron lesión moderada y 3 muestras
(30%) presentaron lesión severa. (Tabla 1, figura 1b).
Analizando grosor de conducto estriado de glándula parótida en la
concentración de 2000 ppm se observó una tendencia de leve a
moderado: 5 muestras (50%) presentaron lesión leve y 5 muestras (50%)
presentaron lesión moderada. En la concentración de 4000 ppm se
observó una tendencia de moderado a severo: 6 muestras (60%)
65
presentaron lesión moderada y 4 muestras (40%) presentaron lesión
severa. (Tabla 2, figura 2a)
Analizando grosor de conducto granuloso de glándula parótida en la
concentración de 2000 ppm se observó la presencia de los tres niveles de
lesión: 6 muestras (60%) presentaron lesión leve, 3 muestras (30%)
presentaron lesión moderada y 1 muestra (10%) presentó lesión severa.
En la concentración de 4000 ppm se observó una presencia de: 5
muestras (50%) presentaron lesión moderada y 5 muestras (50%)
presentaron lesión severa. (Tabla 2, figura 2b)
Analizando grosor de acinos de glándula submaxilar en la concentración
de 2000 ppm se observó una tendencia de leve a moderado: 8 muestras
(80%) presentaron lesión leve y 2 muestras (20%) presentaron lesión
moderada. En la concentración de 4000 ppm se observó una tendencia
de moderado a severo: 7 muestras (70%) presentaron una lesión
moderada y 3 muestras (30%) presentaron una lesión severa. (Tabla 3,
figura 3a)
Analizando cantidad de acinos de glándula submaxilar en la
concentración de 2000 ppm se observó la presencia de los tres niveles de
lesión: 8 muestras (80%) presentaron lesión moderada, 1 muestra (10%)
presentó lesión leve y 1 muestra (10%) presentó lesión severa. En la
concentración de 4000 ppm se observó una tendencia de moderado a
severo: 7 muestras (70%) presentaron lesión moderada y 3 muestras
(30%) presentaron lesión severa. (Tabla 3, figura 3b)
66
Analizando grosor de conducto estriado de glándula submaxilar en la
concentración de 2000 ppm se observó una tendencia de leve a
moderado: 5 muestras (50%) presentaron lesión leve y 5 muestras (50%)
presentaron lesión moderada. En la concentración de 4000 ppm se
observó una tendencia de moderado a severo: 7 muestras (70%)
presentaron lesión moderada y 3 muestras (30%) presentaron lesión
severa. (Tabla 4, figura 4a)
Analizando grosor de conducto granuloso de glándula submaxilar en la
concentración de 2000 ppm se observó una tendencia de leve a
moderado: 6 muestras (60%) presentaron lesión leve y 4 muestras (40%)
presentaron lesión moderada. En la concentración de 4000 ppm se
observó una tendencia de moderado a severo: 5 muestras (50%)
presentan lesión moderada y 5 muestras (50%) presentan lesión severa.
(Tabla 4, figura 4b)
Lesión Celular analizando tiempo de exposición:
Analizando para grosor de acinos de glándula parótida para el tiempo de
exposición 15 minutos se observó: 5 muestras (50%) presentaron lesión
leve y 5 muestras (50%) presentaron lesión moderada. En el tiempo de
exposición 30 minutos se observó una presencia de los tres niveles de
lesión: 3 muestras (30%) presentaron lesión, 6 muestras (60%)
presentaron lesión moderada y 1 muestra (10%) presentó una lesión
severa. (Tabla 5, figura 5a)
67
Analizando para cantidad de acinos de glándula parótida para el tiempo
de exposición 15 minutos se observó la presencia de los tres niveles de
lesión: 1 muestra (10%) presentó lesión leve, 8 muestras (80%)
presentaron lesión moderada y 1 muestra (10%) presentó lesión severa.
Para el tiempo de 30 minutos se observó una tendencia de moderado a
severo: 7 muestras (70%) presentaron lesión moderada y 3 muestras
(30%) presentaron lesión severa. (Tabla 5, figura 5b)
Analizando grosor de conducto estriado de glándula parótida para el
tiempo de exposición de 15 minutos se observó la presencia de los tres
niveles de lesión: 5 muestras (50%) presentaron lesión moderada, 4
muestras (40%) presentaron lesión leve y 1 muestra (10%) presentó
lesión severa. Para el tiempo de 30 minutos se observó la presencia de
los tres niveles de lesión: 6 muestras (60%) presentaron lesión moderada,
3 muestras (30%) presentaron lesión severa y 1 muestra (10%) presentó
lesión leve. (Tabla 6, figura 6a)
Analizando para grosor de conducto granuloso de glándula parótida para
el tiempo de 15 minutos se observó la presencia de los tres niveles de
lesión: 5 muestras (50%) presentaron lesión leve, 4 muestras (40%)
presentaron lesión moderada y 1 muestra (10%) presentó lesión leve.
Para el tiempo de 30 minutos se observó la presencia de los tres grados
de lesión: 5 muestras (50%) presentaron lesión severa, 4 muestras (40%)
presentaron lesión moderada y 1 muestra (10%) presentó lesión leve.
(Tabla 6, figura 6b)
68
Analizando para grosor de acinos de glándula submaxilar para el tiempo
de 15 minutos se observó la presencia de los tres grados de lesión: 5
muestras (50%) presentaron lesión leve, 4 muestras (40%) presentaron
lesión moderada y 1 muestra (10%) presentó lesión severa. Para el
tiempo de 30 minutos se observó la presencia de los tres grados de
lesión: 5 muestras (50%) presentaron lesión moderada, 3 muestras (30%)
presentaron lesión leve y 2 muestras (20%) presentaron lesión severa.
(Tabla 7, figura 7a)
Analizando para cantidad de acinos de glándula submaxilar para el tiempo
de 15 minutos se observó la presencia de los tres grados de lesión: 8
muestras (80%) presentaron lesión moderada, 1 muestra (10%) presentó
lesión leve y 1 muestra (10%) presentaron lesión severa. Para el tiempo
de 30 minutos se observó una tendencia de moderado a severo: 7
muestras (70%) presentaron lesión moderada y 3 muestras (30%)
presentaron lesión severa. (Tabla 7, figura 7b)
Analizando para grosor de conducto estriado de glándula submaxilar para
el tiempo de 15 minutos se observó una tendencia de leve a moderado: 4
muestras (40%) presentaron lesión leve y 6 muestras (60%) presentaron
lesión moderada. Para el tiempo de 30 minutos se observó la presencia
de los tres grados de lesión: 6 muestras (60%) presentaron lesión
moderada, 3 muestras (30%) presentaron lesión severa y 1 muestra
(10%) presentó lesión leve. (Tabla 8, figura 8a)
Analizando para grosor de conducto granuloso de glándula submaxilar
para el tiempo de 15 minutos se observó la presencia de los tres grados
69
de lesión: 5 muestras (50%) presentaron lesión leve, 4 muestras (40%)
presentaron lesión moderada y 1 muestra (10%) presentó lesión severa.
Para el tiempo de 30 minutos se observó la presencia de los tres grados
de lesión: 5 muestras (50%) presentaron lesión moderada, 4 muestras
(40%) presentaron lesión severa y 1 muestra (10%) presentó lesión leve.
(Tabla 8, figura 8b)
Lesión Celular analizando la combinación concentración- tiempo de
exposición:
Los indicadores grosor de acinos de glándula parótida, grosor de
conducto estriado de glándula parótida, grosor de conducto granuloso de
parótida, grosor de acinos de glándula submaxilar, grosor de conducto
estriado de glándula submaxilar y grosor de conducto granuloso de
glándula submaxilar presentaron diferencias significativas. Se observa las
únicas no significativas son los indicadores: cantidad de acinos de
glándula parótida y cantidad de acinos de glándula submaxilar.
Análisis de tamaño y peso para concentración:
En el peso de parótida ninguno fue significativo. En el peso de glándula
submaxilar los grupos fueron diferentes entre sí y con el grupo control
significativamente. En el ancho de glándula parótida la diferencia fue
significativa entre 4000 ppm y el grupo control. (Tabla 9, figura 9a, 9b y
9c)
70
En el largo de parótida ninguna fue significativa. En el largo de glándula
submaxilar se observó diferencia significativa entre 2000 ppm y el grupo
control y entre 4000 ppm y el grupo control. En el ancho de glándula
submaxilar se observó diferencia significativa entre 2000 ppm y 4000 ppm
y entre el grupo control y los demás grupos. (Tabla 10, figura 10a, 10b y
10c)
Análisis de tamaño y peso para tiempo de exposición:
El peso de glándula parótida y el ancho de glándula parótida no
presentaron diferencias significativas. Las diferencias significativas
encontradas fueron en peso de glándula submaxilar respecto del grupo
control con los demás grupos. (Tabla 11, figura 11a, 11b y 11c)
El largo de glándula parótida no presentó diferencias significativas. Las
diferencias significativas encontradas fueron en largo de glándula
submaxilar respecto del grupo control con los demás grupos y en ancho
de glándula submaxilar respecto del grupo control con los demás grupos.
(Tabla 12, figura 12a, 12b y 12c)
Análisis de tamaño y peso para la combinación concentración-
tiempo de exposición:
La diferencia significativa se observó para el indicador peso de glándula
submaxilar, hubo una diferencia significativa entre 15 minutos- 2000 ppm
y 30 minutos-4000 ppm, entre 15 minutos-2000ppm y 15 minutos-4000
ppm, entre 30 minutos-2000 ppm y 15 minutos-4000 ppm, entre 30
71
minutos-2000 ppm y 30 minutos-4000 ppm, entre el grupo control y 30
minutos- 4000 ppm y entre el control y 15 minutos-4000 ppm. (Tabla 13)
Las diferencias significativas se observaron para el indicador largo de
glándula submaxilar, hubo diferencia significativa entre el grupo control y
todas exceptuando 15 minutos-2000 ppm. Para el indicador ancho de
glándula submaxilar se observó una diferencia significativa entre el grupo
control y todas las combinaciones exceptuando la combinación 15
minutos-2000 ppm. (Tabla 14)
Tablas y Figuras
1. Análisis no paramétrico de U de Mann-Whitney considerando
sólo concentración
p<0.01**
p<0.05* Son valores significativos
Se observó que los únicos indicadores no significativos fueron cantidad de
acinos de glándula parótida y cantidad de acinos de glándula submaxilar.
Grosor acinos de glándula parótida 9 0.00 **Cantidad de acinos de glándula parótida 36.5 0.18Grosor de conducto estriado de g. parótida 15 0.00 **Grosor conducto granuloso de g. parótida 15 0.00 **Grosor acinos de g. submaxilar 7 0.00 **Cantidad de acinos de g. submaxilar 36.5 0.18Grosor de conducto estriado g. submaxilar 17.5 0.01 **Grosor conducto granuloso de g. submaxilar 10 0.00 **
Estadísticos de contraste(b) U de Mann-Whitney Sig. asintót. (bilateral)
72
Tabla1.- Frecuencia de grado de lesión analizando sólo para concentración para grosor de acinos y cantidad de acinos de g. parótida.
Figura 1a.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de acinos de g. parótida.
Figura 1b.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para cantidad de acinos de g. parótida.
80%
20%
90%
10%
0102030405060708090
100
2000 ppm 4000 ppm
PORC
ENTA
JE
CONCENTRACIÓN
GROSOR DE ACINOS DE GLÁNDULA PARÓTIDA
Leve
Moderada
Severo
Leve Moderada Severo Leve Moderada Severo2000 ppm 8 2 0 1 8 14000 ppm 0 9 1 0 7 3
ConcentraciónGrosor de acinos
Glándula ParótidaCantidad de acinos
10%
80%70%
10%
30%
0102030405060708090
2000 ppm 4000 ppm
PORC
ENTA
JE
CONCENTRACIÓN
CANTIDAD DE ACINOS DE GLÁNDULA PARÓTIDA
Leve
Moderada
Severo
73
Tabla 2.- Frecuencia de grado de lesión analizando sólo para concentración para grosor de conducto estriado y grosor de conducto granuloso de g.
parótida.
Figura 2a.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de
conducto estriado de g. parótida
Figura 2b.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de conducto granuloso de g. parótida
Leve Moderada Severo Leve Moderada Severo2000 ppm 5 5 0 6 3 14000 ppm 0 6 4 0 5 5
Concentración
Glándula ParótidaGrosor de conducto estriado Grosor de conducto granuloso
50% 50%
60%
40%
0
10
20
30
40
50
60
70
2000 ppm 4000 ppm
PORC
ENTA
JE
CONCENTRACIÓN
GROSOR DE CONDUCTO ESTRIADO DE GLÁNDULA PARÓTIDA
Leve
Moderada
Severo
60%
30%
50%
10%
50%
0
10
20
30
40
50
60
70
2000 ppm 4000 ppm
PORC
ENTA
JE
CONCENTRACIÓN
GROSOR DE CONDUCTO GRANULOSO DE PARÓTIDA
Leve
Moderada
Severo
74
Tabla 3.- Frecuencia de grado de lesión analizando sólo para concentración para grosor de acinos y cantidad de acinos de g. submaxilar.
Figura 3a.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de
acinos de glándula submaxilar.
Figura 3b.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para cantidad de acinos de glándula submaxilar.
80%
20%
70%
30%
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
2000 ppm 4000 ppm
PORC
ENTA
JE
CONCENTRACIÓN
GROSOR DE ACINOS DE GLÁNDULA SUBMAXILAR
Leve
Moderada
Severo
10%
80%70%
10%
30%
0102030405060708090
2000 ppm 4000 ppm
PORC
ENTA
JE
CONCENTRACIÓN
CANTIDAD DE ACINOS DE GLÁNDULA SUBMAXILAR
Leve
Moderada
Severo
Leve Moderada Severo Leve Moderada Severo2000 ppm 8 2 0 1 8 14000 ppm 0 7 3 0 7 3
ConcentraciónGrosor de acinos Cantidad de acinos
Glándula Submaxilar
75
Tabla 4.- Frecuencia de grado de lesión analizando sólo para concentración para grosor de conducto estriado y conducto granuloso de g. submaxilar.
Figura 4a.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de conducto estriado de glándula submaxilar.
Figura 4b.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de conducto granuloso de glándula submaxilar.
Leve Moderada Severo Leve Moderada Severo2000 ppm 5 5 0 6 4 04000 ppm 0 7 3 0 5 5
Concentración
Glándula SubmaxilarGrosor de conducto estriado Grosor de conducto granuloso
50% 50%
70%
30%
01020304050607080
2000 ppm 4000 ppm
PORC
ENTA
JE
CONCENTRACIÓN
GROSOR DE CONDUCTO ESTRIADO DE GLÁNDULA SUBMAXILAR
Leve
Moderada
Severo
60%
40%
50% 50%
0
10
20
30
40
50
60
70
2000 ppm 4000 ppm
PORC
ENTA
JE
CONCENTRACIÓN
GROSOR DE CONDUCTO GRANULOSO DE GLÁNDULA SUBMAXILAR
Leve
Moderada
Severo
76
1. Análisis no paramétrico de U de Mann-Whitney considerando sólo tiempo de exposición
p<0.01**
p<0.05* Son valores significativos
Se observó que los únicos significativos son grosor de conducto
granuloso de glándula parótida, grosor de conducto estriado de glándula
submaxilar y grosor de conducto granuloso de glándula submaxilar.
Grosor acinos de glándula parótida 37.5 0.28Cantidad de acinos de glándula parótida 36.5 0.18Grosor de conducto estriado de g. parótida 30.5 0.10Grosor de conducto granuloso de g. parótida 22 0.02 *Grosor de acinos de g. submaxilar 38.5 0.34Cantidad de acinos de g. submaxilar 36.5 0.18Grosor de conducto estriado de g. submaxilar 26 0.04 *Grosor de conducto granuloso de g. submaxilar 24.5 0.04 *
Estadísticos de contraste(b) U de Mann-Whitney Sig. asintót. (bilateral)
77
Tabla 5.- Frecuencia de grado de lesión analizando sólo para exposición para grosor de acinos y cantidad de acinos de glándula parótida
Figura 5a.- Porcentaje de lesión de acuerdo al grado encontrado para grosor de acinos de glándula parótida.
Figura 5b.- Porcentaje de lesión de acuerdo al grado encontrado para cantidad de acinos de glándula parótida.
50%
30%
50%
60%
10%
0
10
20
30
40
50
60
70
15 min 30 min
PORC
ENTA
JE
TIEMPO DE EXPOSICIÓN
GROSOR DE ACINOS DE GLÁNDULA PARÓTIDA
Leve
Moderada
Severo
10%
80%70%
10%
30%
0102030405060708090
15 min 30 min
PORC
ENTA
JE
TIEMPO DE EXPOSICIÓN
CANTIDAD DE ACINOS DE GLÁNDULA PARÓTIDA
Leve
Moderada
Severa
Leve Moderada Severo Leve Moderada Severo15 min 5 5 0 1 8 130 min 3 6 1 0 7 3
Tiempo de exposiciónCantidad de acinos
Glándula ParótidaGrosor de acinos
78
Tabla 6.- Frecuencia de grado de lesión analizando sólo para exposición para grosor de conducto estriado y grosor de conducto granuloso de glándula parótida
Figura 6a.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de conducto estriado de glándula parótida.
Figura 6b.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de conducto granuloso de glándula parótida.
Leve Moderada Severo Leve Moderada Severo15 min 4 5 1 5 4 130 min 1 6 3 1 4 5
Grosor de conducto estriado Grosor de conducto granulosoGlándula Parótida
Tiempo de exposición
40%
10%
50%
60%
10%
30%
0
10
20
30
40
50
60
70
15 min 30 min
PORC
ENTA
JE
TIEMPO DE EXPOSICIÓN
GROSOR DE CONDUCTO ESTRIADO DE GLÁNDULA PARÓTIDA
Leve
Moderada
Severo
50%
10%
40% 40%
10%
50%
0
10
20
30
40
50
60
15 min 30 min
PORC
ENTA
JE
TIEMPO DE EXPOSICIÓN
GROSOR DE CONDUCTO GRANULOSO DE GLÁNDULA PARÓTIDA
Leve
Moderada
Severo
79
Tabla 7.- Frecuencia de grado de lesión analizando solo para exposición para grosor de acinos y cantidad de acinos de glándula submaxilar.
Figura 7a.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de acinos de glándula submaxilar.
Figura 7b.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para cantidad de acinos de glándula submaxilar.
Leve Moderada Severo Leve Moderada Severo15 min 5 4 1 1 8 130 min 3 5 2 0 7 3
Glándula Submaxilar
Tiempo de exposiciónGrosor de acinos Cantidad de acinos
50%
30%
40%
50%
10%
20%
0
10
20
30
40
50
60
15 min 30 min
PORC
ENTA
JE
TIEMPO DE EXPOSICIÓN
GROSOR DE ACINOS DE GLÁNDULA SUBMAXILAR
Leve
Moderada
Severo
10%
80%70%
10%
30%
0102030405060708090
15 min 30 min
PORC
ENTA
JE
TIEMPO DE EXPOSICIÓN
CANTIDAD DE ACINOS DE GLÁNDULA SUBMAXILAR
Leve
Moderada
Severo
80
Tabla 8.- Frecuencia de grado de lesión analizando solo para exposición para grosor de conducto estriado y grosor de conducto granuloso de
glándula submaxilar.
Figura 8a.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de conducto estriado de glándula submaxilar.
Figura 8b.- Porcentaje de grado de lesión encontrado para grosor de conducto granuloso de glándula submaxilar.
Leve Moderada Severo Leve Moderada Severo15 min 4 6 0 5 4 130 min 1 6 3 1 5 4
Glándula Submaxilar
Tiempo de exposiciónGrosor de conducto estriado Grosor de conducto granuloso
40%
10%
60% 60%
30%
0
10
20
30
40
50
60
70
15 min 30 min
PORC
ENTA
JE
TIEMPO DE EXPOSICIÓN
GROSOR DE CONDUCTO ESTRIADO DE GLÁNDULA SUBMAXILAR
Leve
Moderada
Severo
50%
10%
40%
50%
10%
40%
0
10
20
30
40
50
60
15 min 30 min
PORC
ENTA
JE
TIEMPO DE EXPOSICIÓN
GROSOR DE CONDUCTO GRANULOSO DE GLÁNDULA SUBMAXILAR
Leve
Moderada
Severo
81
3. Análisis de Kruskall Wallis para la combinación: Concentración-
Tiempo de Exposición
Chi-cuadrado gl
Sig. asintót.
Grosor acinos de glándula parótida 13.92 3 0.00
**
Cantidad de acinos de glándula parótida 3.81 3 0.28
Grosor de conducto estriado de g. parótida 11.44 3 0.01
*
Grosor conducto granuloso de parótida 13.30 3 0.00
**
Grosor acinos de g. submaxilar 13.63 3 0.00
**
Cantidad de acinos de g. submaxilar 3.81 3 0.28
Grosor de conducto estriado g. submaxilar 12.18 3 0.01
*
Grosor conducto granuloso de g. submaxilar 14.94 3 0.00
**
p<0.01**
p<0.05* Son valores significativos
Los únicos no significativos son cantidad de acinos de glándula parótida y
cantidad de acinos de glándula submaxilar.
82
4. Análisis para las dimensiones físicas: tamaño y peso para concentración.
Tabla 9.- Promedios de peso y tamaño teniendo en cuenta sólo concentración
Figura 9a.-Promedio de glándula parótida sólo para concentración.
Concentración
Peso de g. parótida
(grs.)
Peso de g. submaxilar
(grs.)
Ancho de g. parótida
(mm)2000 ppm 0.724±0.04 1.193±0.04 ** 5.2±0.634000 ppm 0.704±0.04 1.053±0.05 ** 4.7±0.67 **Control 0.73±0.06 1.264±0.03 ** 5.6±0.55
Control4000 ppm2000 ppm
Concentración
0,80
0,75
0,70
0,65
0,60
Peso
de
g. p
arót
ida
(grs
.)
* p<0.05** p<0.01Análisis de varianza con Test post hoc de Tukey
83
Figura 9b.-Peso de glándula submaxilar sólo para concentración.
Figura 9c.-Ancho de glándula parótida sólo para concentración.
Control4000 ppm2000 ppm
Concentración
1,30
1,20
1,10
1,00
0,90
Peso
de g
lánd
ula
subm
axila
r (g
rs)
Control4000 ppm2000 ppm
Concentración
6
5,5
5
4,5
4
Anc
ho d
e g.
par
ótid
a (m
m)
84
Tabla 10.- Promedios de tamaño teniendo en cuenta sólo concentración
Figura 10a.-Largo de glándula parótida sólo para concentración.
Concentración
Largo de g. parótida
(mm)
Largo g. submaxilar
(mm)
Ancho g. submaxilar
(mm)2000 ppm 14.6±0.70 20.1±1.29 ** 10.6±1.17 *4000 ppm 14.8±0.63 19±0.82 ** 9.4±0.84 **Control 15±0.71 22±0.71 12±0.71 **
Control4000 ppm2000 ppm
Concentración
16
15,5
15
14,5
14
13,5
13
Larg
o de
g. p
arót
ida
(mm
)
21
22
* p<0.05** p<0.01Análisis de varianza con Test post hoc de Tukey
85
Figura 10b.- Largo de glándula submaxilar para sólo concentración.
Figura 10c.- Ancho de glándula submaxilar para sólo concentración.
Control4000 ppm2000 ppm
Concentración
13
12
11
10
9
8
Anch
o g.
sub
max
ilar(
mm
)
21
24
Control4000 ppm2000 ppm
Concentración
23
22
21
20
19
18
Larg
o g.
sub
max
ilar (
mm
)
21
24
86
5. Análisis para las dimensiones físicas: tamaño y peso para tiempo de exposición.
Tabla 11.- Promedios de peso y tamaño teniendo en cuenta sólo tiempo de exposición
Figura 11a.- Peso de glándula parótida para tiempo de exposición.
15 min 0.72±0.04 1.13±0.09** 5.00±0.8230 min 0.71±0.05 1.12±0.08** 4.90±0.57Control 0.73±0.06 1.26±0.03 5.60±0.55
Tiempo de exposición
Peso de g. parótida (grs.)
Peso de g. submaxilar (grs)
Ancho de g. parótida (mm)
Control30 min15 ´min
Tiempo de exposición
0,80
0,75
0,70
0,65
0,60
Peso
de
g. p
arót
ida
(grs
.)
* p<0.05** p<0.01Análisis de varianza con Test post hoc de Tukey
87
Figura 11b.- Peso de glándula submaxilar para tiempo de exposición.
Figura 11c.- Ancho de glándula parótida para tiempo de exposición.
Control30 min15 min
Tiempo de exposición
1,30
1,20
1,10
1,00
0,90
Peso
de
g. s
ubm
axila
r (gr
s)
Control30 min15 min
Tiempo de exposición
6
5,5
5
4,5
4
Anc
ho d
e g.
par
otid
a (m
m)
13
12
88
Tabla 12.- Promedios de tamaño teniendo en cuenta sólo tiempo de exposición.
Figura 12a.- Largo de glándula parótida para tiempo de exposición.
15 min 14.80±0.63 19.50±1.35** 10.20±1.23**30 min 14.60±0.70 19.60±1.07** 9.80±1.14**Control 15.00±0.71 22.00±0.71 12.00±0.71
Tiempo de exposición
Largo de g. parótida (mm)
Largo g. submaxilar (mm)
Ancho g. submaxilar (mm)
* p<0.05** p<0.01Análisis de varianza con Test post hoc de Tukey
Control30 min15 min
Tiempo de exposición
16
15,5
15
14,5
14
13,5
13
Larg
o de
g. p
arót
ida
(mm
)
21
22
89
Figura 12b.- Largo de glándula submaxilar para tiempo de exposición.
Figura 12c.- Ancho de glándula submaxilar para tiempo de exposición.
Control30 min15 min
Tiempo de exposición
23
22
21
20
19
18
Larg
o g.
sub
max
ilar (
mm
) 6
21
24
Control30 min15 min
Tiempo de exposición
13
12
11
10
9
8
Anc
ho g
. sub
max
ilar(
mm
)
6
18
21
24
90
6. Análisis para las dimensiones físicas: tamaño y peso para la combinación concentración-tiempo de exposición.
Tabla 13.- Promedios de peso y tamaño teniendo en cuenta la combinación concentración-tiempo de exposición.
Tabla 14.- Promedios de peso y tamaño teniendo en cuenta la combinación concentración- tiempo de exposición.
15 min t 2000 ppm 0.74±0.03 1.20±0.04** 5.40±0.8915 min y 4000 ppm0.70±0.04 1.05±0.06** 4.60±0.5530 min y 2000 ppm0.71±0.05 1.19±0.04** 5.00±0.0030 min y 4000 ppm0.71±0.05 1.05±0.05** 4.80±0.84Control 0.73±0.06 1.26±0.03** 5.60±0.55
Concentración y tiempo
Peso de g. parótida (grs.)
Peso de g. submaxilar (grs)
Ancho de g. parótida (mm)
* p<0.05** p<0.01Análisis de varianza con Test post hoc de Tukey
15 min t 2000 ppm 14.80±0.45 20.20±1.48 11.00±1.0015 min y 4000 ppm14.80±0.84 18.80±0.84** 9.40±0.89**30 min y 2000 ppm14.40±0.89 20.00±1.22** 10.20±1.30**30 min y 4000 ppm14.80±0.45 19.20±0.84** 9.40±0.89**Control 15.00±0.71 22.00±0.71** 12.00±0.71
Concentración y tiempo
Largo de g. parótida (mm)
Largo de g. submaxilar (mm)
Ancho de g. submaxilar (mm)
* p<0.05** p<0.01Análisis de varianza con Test post hoc de Tukey
91
VI. DISCUSIÓN
Para analizar la citotoxicidad del cloruro de metileno se utilizó el método
de exposición por inhalación, en la que se trabajó con dos
concentraciones (2000 ppm y 4000 ppm) y en dos tiempos de exposición
(15 minutos y 30 minutos) por un período de 22 días.
Se utilizó el método de exposición por inhalación basados en el trabajo de
Amsel, J. (2001), que probó que los niveles de carboxihemoglobina, así
como la formación de metabolitos en el hígado, son paralelas a la
concentración de diclorometano, es decir es la vía más rápida de ingreso
a la sangre de éste compuesto así como la vía a la que están expuestos
los obreros en su mayoría.
Los resultados en este estudio luego de analizar sólo concentración,
muestran para 2000 ppm una tendencia de leve a moderado mientras que
para 4000 ppm una tendencia de moderado a severo tanto en las
muestras de láminas de glándula parótida como en la glándula
submaxilar. Siendo congruente con lo encontrado por Laboratorios
Hazelton de América (1983), que reportó daño hepatocelular: nódulos
neoplásicos y carcinoma hepatocelular sólo en las dosis más altas.
Asimismo Burek & cols (1984), reportó un aumento estadísticamente
significativo se sarcomas de glándulas salivales en los grupo de 1500
ppm y 3500 ppm, que fueron las dosis más altas.
92
Los resultados de la presente investigación analizando sólo para tiempo
de exposición, mostraron a 15 minutos de exposición una tendencia de
leve a moderado, mientras que a 30 minutos de exposición mostraron una
tendencia de moderado a severo, lo que es congruente con lo reportado
por el Programa Nacional de Toxicología (1986), reportó luego de una
exposición a DCM de 2 años cuyas concentraciones de exposición
fueron 0, 1000, 2000 y 4000 ppm que se observó un aumento significativo
de tumores mamarios, incidencia de adenomas y carcinomas
hepatocelulares, así como el estudio de Foster, J. & cols. (1992), que
encontraron daño celular agudo de células claras de pulmón a nivel
estructural luego de la exposición a cloruro de metileno (4000 ppm) por un
período de 90 días. Así como con el estudio de Kim, S. (2007), reportó
que luego de una exposición a DCM de 15 minutos, se encontró actividad
sérica enzimática elevada. Demostrando que el grado de lesión reportado
en este estudio es directamente proporcional al tiempo de exposición.
Al analizar las combinaciones concentración- tiempo de exposición se
observó que hubo una diferencia significativa en todos los indicadores de
lesión celular, excepto cantidad de acinos de glándula parótida y cantidad
de acinos de glándula submaxilar, lo que es congruente con el estudio de
Foster, J. & cols. (1992), que reportó daño agudo de células claras de
pulmón luego de la exposición a DCM (4000 ppm) por un período de 90
días y con el estudio de Kim, S. (2007), que reportó actividad sérica
enzimática elevada. Demostrando que los resultados encontrados en este
93
estudio, que indican que a mayor dosis y mayor tiempo de exposición,
mayor daño celular, han sido comprobados.
Los resultados del análisis del tamaño y peso de las glándulas salivales
mostraron que hubo diferencias significativas analizando sólo para
concentración, sólo para tiempo de exposición así como para la
combinación concentración-tiempo de exposición los indicadores
significativos fueron: peso de glándula submaxilar, largo de glándula
submaxilar así como ancho de glándula submaxilar. La glándula parótida
sólo presenta diferencia significativa para el análisis de concentración con
el indicador ancho de glándula parótida, en los demás indicadores no
presentó diferencias significativas. Estos cambios en la morfología son
congruentes con Kobayashi & cols. (2008), que reportó una diferencia en
la morfología del nervio óptico tras la exposición a DCM, este cambio fue
una excavación profunda en dicho nervio de manera que se asemejaba al
de un glaucoma, siendo irreversible en dicho caso.
94
VII. CONCLUSIONES
• Se comprobó que el cloruro de metileno produce daño sobre las
glándulas salivales: parótida y submaxilar, a nivel celular como en
la morfología de éstas.
• En el análisis del tamaño y peso de las glándulas, se observó que
la glándula más afectada fue la submaxilar presentando diferencias
significativas en su morfología en contraste con la glándula
parótida.
• La combinación concentración- tiempo de exposición se observa
un mayor daño celular en la combinación con la concentración más
alta (4000 ppm) y con el tiempo de exposición más prolongado (30
minutos).
• Se observó que la cantidad de acinos no presentó diferencias
significativas en ninguna de las glándulas, lo que indica no hubo
muerte celular sino lesión estructural.
95
VIII. RECOMENDACIONES
• Se recomienda la realización de un estudio con una mayor
cantidad de combinaciones concentración-tiempos de exposición
permitiendo un estudio más variado y observar las diferencias que
presentan.
• Se recomienda hacer un estudio comparativo entre el cloruro de
metileno con otro dihalogenuro y observar cuál es más citotóxico a
nivel de cavidad oral.
• Se recomienda el estudio de niveles séricos de inmunoglobulinas,
enzimas y otros compuestos de la saliva, luego de la exposición a
cloruro de metileno.
96
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Agencia de Protección Ambiental (EPA) (2001). Sistema Integrado
de Información de Riesgo (IRIS) para cloruro de metileno. Centro
Nacional para la valoración ambiental, Oficina de Investigación y
desarrollo, Washington, DC, U.S. En www.atsdr.gov.com. Leído el
15 de marzo del 2009.
2. Agencia para Sustancias Tóxicas y Registro de Daños (ATSDR)
(1998). Información Toxicológica para Cloruro de Metileno. Servicio
Público de Salud. Departamento de Salud y Servicios Humanos,
Atlanta, GA, U.S. En www.atsdr.gov.com. Leído el 16 de marzo del
2009.
3. Amoore J. & Hautala, E. (1983). Olor como ayuda para seguridad
química: Niveles de olor comparados con los valores límites y
volátiles para 214 químicos industriales en el aire y dilución de
agua. Journal of Applied Toxicology 3: 272-290.
4. Amsel, J.; Sielken, R.; Soden, K. & Valdez-Flora, C. (2001) Niveles
observados versus valores predichos de carboxihemoglobina en
trabajadores de celulosa triacetato expuestos a cloruro de metileno.
American Journal of Industrial Medicine 40: 180-191.
5. Ballantyne, M.; Guzard, F. & Swanson, D. (1976). Toxicología
oftálmica causada por el diclorometano. J. Toxicology 6, 173-187.
97
6. Bang, K. (1984) Efectos en la salud de disolventes orgánicos
comunes en las zonas de trabajo. Health Hazards Occtip. Environ.
7, 15-29.
7. Barrowcliff, D. F. (1978) Intoxicación crónica monóxido de carbono
causados por cloruro de metileno de removedor de pintura. Med.
Sci. 18, 238-240.
8. Boventre, J.; Bastos, L.; Brennan, O.; Henderson, A. & Jason, D.
(1977) Dos muertes seguidas a la inhalación de diclorometano y
tricloroetano. J. Anal Toxicol. 1, 158-160.
9. Boyd, D. & Weinstein, S. (1972). Efectos Morfológicos y funcionales
observados en ratones, tras la inhalación de DCM. Toxicol. Appl.
Pharmacol. 23, 660-679.
10. Brown, T.; Burdge, J.; Bursten, E. & Lemay, H. (2004) Química. La
ciencia central. México: Pearson Prentice Hall.
11. Burek, J.; Bell, T. & Nitschke, K. (1984). Cloruro de metileno:
estudio en ratas y hámsters de dos años sobre la toxicidad y
oncogenicidad por inhalación. Fundam. Appl. Toxicol. 4, 30-47.
12. Cherry, N. & Venable, H. (1983) Los efectos agudos de la conducta
por exposición a un disolvente de pintura. J. SOC. Occup. Med.
33, 13-18.
13. Clayton, E. & Clayton, F. (1981). Higiene Industrial. Journal Toxicol.
Vol, 28. 23-25.
98
14. Conferencia Americana de la Asociación Gubernamental de
Higienistas Industriales (ACGIH). (1999). Niveles de valores límites
para sustancias químicas y agentes físicos, índices de exposición
biológica. Cincinnati, U.S. En www.astdr.com Leído el 20 de marzo
del 2009.
15. Cordes, D.; Brown W. & Quinn, K. (1988) Casos clínicos:
Hepatitis químicamente inducida después de la inhalación de
disolventes orgánicos. J. Oeste. Med. 148, 458-460.
16. Cormack, D. (1999) Histología de Ham. México: Harla.
17. Davidson, R. & Memon, N. (1981) Transtorno multisistémico
después de la exposición a removedor de pintura (Nitromors). Br.
Med. J. [Clin. Res.] 282, 1033 - 1034.
18. De Nevers, N. (1998). Ingienería de Control de la Contaminación
del Aire. México. Mc Graw- Hill Interamericana Editores S.A.
19. Departamento de Salud y Servicios Humanos (1993). Programa
Nacional de Información Toxicológica, Biblioteca Nacional de
Medicina, Bethesda, MD, U.S. En www.iris.com . Leído el 20 de
marzo del 2009.
20. Djuric, D.; Grandjean, P. & Trump, B. (2009) Toxicología. En: E.
Silbergeld (ed.) Enciclopedia de salud y seguridad en el trabajo.
(pp. 33.3-33.76). España. Ministerio de trabajo y asuntos sociales.
21. Dodd, H. & Stewart R. (1964) Absorción de tetracloruro de carbono,
tricloroetileno, tetracloroetileno, cloruro de metileno y tricloroetano
a través de la piel humana. Am. Ind. Hyg. Assoc. J. 25,439-446.
99
22. Foster, J.; Green, T.; Hext, P.; Lewis, l.; Smith, l.; & Wyatt, I. (1992)
Cloruro de metileno: Un estudio de inhalación para investigar
efectos patológicos y bioquímicos ocurridos en el pulmón de ratón
sobre un período de exposición de 90 días. Toxicol. Sci., April 18:
376 – 388.
23. Instituto Nacional para la seguridad y Salud Ocupacional (NIOSH)
(1997). Guía para Químicos Peligrosos. Departamento de Salud y
Servicios Humanos. Servicio de Salud Pública, Centro para el
control y prevención de enfermedades. Cincinnati, U.S. En
www.niosh.com Leído el 20 de marzo del 2009.
24. Jacubovich, R.; Goldstein, R.; Landau, Y. & Zilberberg, M. (2005)
Parálisis del nervio facial después de la exposición aguda a
diclorometano. Am. J. Ind. Med. 48, 389-392.
25. Kelly, M. (1988) Casos clínicos de personas expuestas de cloruro
de metileno con oligospermia. Reprod. Toxicol. 2, 13-17.
26. Kim, S.; Jung, Y.; Kim, Y. & Yoon, M. (2007) Efectos comparativos
de dimetilsulfóxido en el metabolismo y toxicidad de tetracloruro de
carbono y diclorometano. Journal of Applied Toxicology, 27: 25-31.
27. Kobayashi, A.; Akioka, M.; Akira, A.; Kawai, E. & Kitagawa, M.
(2008) Neuropatía óptica severa causada por el cloruro de metileno
por inhalación. Reporte de caso. J. Ocular Pharmacology and
Therapeutics Vol. (24) 6, 29-54.
28. Laboratorios Hazelton de América (1982) Estudio de 24 meses
sobre toxicidad crónica y oncogenicidad del cloruro de metileno en
100
ratas. Estudio encargado por la Asociación Nacional del Café
(NCA). Journal of Applied Toxicology, Vol.15 (4), 329-335.
29. Laboratorios Hazelton de América (1983) Estudio de 24 meses
sobre oncogenicidad del cloruro de metileno en ratones. Estudio
encargado por Asociación Nacional del Café (NCA). Journal of
Applied Toxicology, Vol.15 (4), 329-335.
30. Leikin, J.; Burda, A.; Hryborzub, D.; Kaufman, D. & Lipscomb, J.
(1990) Cloruro de metileno: Reporte de cinco exposiciones y dos
muertes. Am. J. Emerg. Med. 8, 534-537.
31. Leong, P. & Schwetz B. (1975) El efecto de tricloroetileno,
percloroetileno, metilcloroformo y cloruro de metileno inhalado
durante el desarrollo fetal en ratones y ratas preñadas. Toxicol.
Appl. Pharmacol. 32, 84-96.
32. Lewis, R. & Sax, I. (1989). Propiedades Peligrosas de los
Materiales Industriales. Journal of Applied Toxicology, Vol.15 (4),
329-335
33. Mc Kenna, M & Zempel, J. (1981) Dosis dependiente del
metabolismo del cloruro de metileno seguida de la administración
oral a ratas. Fed. Cosmet. Toxicol. 19,73-78.
34. Miller, L.; Friederici, H. & Panteras, V. (1985) Necrosis tubular
aguda luego de la exposición por inhalación de DCM. Reporte de
un caso. Arch. Intern. Med. Vol 14, 145- 146.
35. Moody. D.; Jacqueline, L.; Gary A. & Smuckler E. (1981)
Correlaciones entre las variaciones de los microsomas hepáticos
101
después de la intoxicación con halogenuros de alquilo y otros. Mol.
Pharmacology 20, 685-693.
36. Morris, B.; Garman R. & Smith F. (1979) Estudios de metileno
inducida por el cloruro de hígado graso. Exp. Mol. Pathol. 30, 386-
393.
37. Nitschke, K.; Bell, T. & Bured, J. (1988a) Cloruro de metileno:
Estudio sobre la toxicidad y oncogenicidad en ratas Fisher 344 a
dos años de inhalación. Fund. Appl. Toxicol. 11: 48-59. 1988.
38. Nitschke, K.; Eisen, L. & Lomax, L. (1983) Cloruro de metileno:
Estudio de reproducción en dos generaciones de ratas Fisher 344.
J. Physiol. 8, 429-439.
39. Nitschke, K.; Eisenbrandt, D. & Lomax, L. (1988b) Cloruro de
Metileno: Estudio de reproductividad en ratas hasta la segunda
generación. Fund. Appl. Toxicol. 11: 60-67.
40. Pankow, D.; Gutewort, R. & Ponsold, A. (1979) Efecto del
diclorometano en la velocidad de conducción motora de ratas.
Experientia 35, 373-374.
41. Programa Nacional de Toxicología (1986), Estudios de toxicología
y carcinogénesis de inhalación de cloruro de metileno en F344 / N
ratas y ratones B6C3F1. Journal of Applied Toxicology, Vol.15 (4),
329-335.
42. Richard, D.; Carl, L.; Hake, N. & Stewart, C. (1976) Peligros de los
Removedores de pintura. Reporte de casos. JAMA 235: 398-401.
102
43. Rosengren, L.; Kjellstrand, P. & Aurell, A. (1986) Efectos
irreversibles en el cerebro luego de la exposición prolongada a
Diclorometano: estudio del DNA y células gliales mediante
marcadores de proteínas S-100 y GFA. Br. J. Ind. Med. 43, 291-
299.
44. Seguridad Ocupacional y Administración en Salud (OSHA) (1998).
Seguridad Ocupacional y Estándares de Salud. Sustancias Tóxicas
y Peligrosas. Código de regulación Federal 29 CFR 1910.1052.
U.S. En www.osha.com. Leído el 20 de marzo del 2009.
45. Simonsen, N. & Wilcosky, T. (1991) Exposición al solvente
diclorometano y el daño cardiovascular causado. Ah. J. Ind. Med.
19, 569-586.
46. Snyder, R.; Christensen, C. & Mishel, H. (1992) Toxicidad pulmonar
seguida a la exposición de cloruro de metileno y su producto de
combustión fosgene. J. Med. Chest. Vol. 31, 860-861.
47. Tariot, B. (1983) Delirio resultante de la exposición a cloruro de
metileno: reporte de un caso. J. Clinic. Psychiatry 44, 340-342.
48. Warbrick, E.; Dearman, R.; Dugard, P.; Kilgour, J. & Kimber, I.
(2003) La exposición inhalatoria a cloruro de metileno no induce
inmunotoxicidad sistémica en ratones. Journal of Toxicology and
Environmental Health, Part A, 66: 1207- 1219.
49. Weiss, G. (1992) Encefalosis tóxica como peligro ocupacional con
cloruro de metileno. Zentralbl. Arbeitsmed. 17, 87-90.
103
50. Welch, L. (1987) Informes de la enfermedad clínica secundaria a
cloruro de metileno exposurea colección de 141 casos. Journal of
Applied Toxicology, Vol.15 (4), 329-335.
51. Westbrook, B.; Allen, J.; Campbell, J. & Sharief, Y. (1990) Más
evidencia que el diclorometano no induce daño chromosomal.
Journal of Applied Toxicology, vol. 10(2), 79- 81.
52. Wiley, J. (1995) Información Toxicológica del Cloruro de Metileno.
Journal of Applied Toxicology,Vol.15(4) , 329-335.
53. Winneke, G. (1974) Efectos del comportamiento de cloruro de
metileno y el monóxido de carbono según la evaluación de los
sentidos y desempeño psicomotor. Journal of Applied Toxicology,
Vol.15 (4), 329-335.
54. Withey, J.; Collins, B. & Collins, P. (1983) Efecto del vehículo en la
farmacocinética y absorción de cuatro hidrocarburos halogenados
en el tracto gastrointestinal de las ratas. Journal of Applied
Toxicology, Vol.3, Nº5, 249- 253.
104
X. ANEXOS
105
ANEXO Nº1
FICHA DE RECOLECCIÓN DE DATOS Nº1 1.-ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN CÓDIGO 4000C-1 Peso (grs.)
Edad
mm
dd
Sexo
2.-CONCENTRACIÓN UTILIZADA DE CLORURO DE METILENO Fecha de inhalación: Del 10 de Agosto al 31 de Agosto Cloruro de metileno a 2000ppm ( dosis simple) Cloruro de metileno a 4000ppm (dosis simple) Cloruro de metileno a 2000ppm (doble dosis) Cloruro de metileno a 4000ppm (doble dosis) 3.-TIEMPO DE EVALUACIÓN HISTOLÓGICA Fecha de sacrificio: Tiempo total de exposición : 4.-EVALUACIÓN HISTOLÓGICA (1000X) Fecha de evaluación histológica: Ausencia de lesión celular (0)
Lesión celular leve (1)
Lesión celular moderada (2)
Lesión celular severa (3)
5.-GLÁNDULA PESO TAMAÑO
Parótida
Submaxilar
106
ANEXO Nº2
FICHA DE RECOLECCION DE DATOS DE LA EXPOSICION DIARIA A DCM POR GRUPOS Nº2
FECHA:
1er GRUPO CONCENTRACIÓN 4000 PPM A)TODAS: CUELLO Y PATA(10)
HORA:
B)PATITAS
HORA:
2doGRUPO CONCENTRACIÓN 2000PPM A)TODAS: CABEZA Y LOMO(10)
HORA:
B)CABEZAS(5)
HORA:
107
ANEXO Nº3
Fase de diseño de grupos experimentales y Fase experimental
108
Exposición de las ratas Holtzman al cloruro de metileno
Grupo Control con los cuidados necesarios
109
ANEXO Nº4
Fotografías de láminas histológicas de las glándulas salivales
Fotografía Nº 1: lámina histológica de del grupo 2000 L-2
Fotografía Nº2: lámina histológica del grupo 2000 C-4
110
Fotografía Nº3: lámina histológica del grupo 4000 C-4
Fotografía Nº4: lámina histológica del grupo 4000 P-1
111
ANEXO Nº5
August 2009
112
ANEXO Nº 6
HOLTZMAN,
113
ANEXO Nº 7
HOLTZMAN,
114
ANEXO Nº 8
HOLTZMAN,
115
ANEXO Nº 9
Declaración Universal de los Derechos del Animal
Adoptada por la Liga Internacional de los Derechos del Animal y las Ligas
Nacionales afiliadas en la tercera reunión sobre los derechos del animal,
celebrada en Londres del 21 al 23 de septiembre de 1977. Proclamada el
15 de octubre de 1978 por la Liga Internacional, las Ligas Nacionales y las
personas físicas que se asocien a ellas. Aprobada por la Organización de
las Naciones Unidas para la Educación la Ciencia y la Cultura (UNESCO),
y posteriormente por la Organización de las Naciones Unidas (ONU).
Preámbulo
Considerando que todo animal tiene derechos. Considerando que el
desconocimiento y desprecio de dichos derechos han conducido y siguen
conduciendo al hombre a cometer crímenes contra la naturaleza y contra
los animales. Considerando que el reconocimiento por parte de la especie
humana de los derechos a la existencia de las otras especies animales,
constituye el fundamento de la coexistencia de las especies en el mundo.
Considerando que el hombre comete genocidio y existe la amenaza de
que siga cometiéndolo. Considerando que el respeto hacia los animales
por el hombre está ligado al respeto de los hombres entre ellos mismos.
Considerando que la educación debe enseñar, desde la infancia, a
observar, comprender, respetar y amar a los animales.
SE PROCLAMA LO SIGUIENTE:
Artículo 1: Todos los animales nacen iguales ante la vida y tienen los mismos
derechos de existencia.
116
Artículo 2:
a. Todo animal tiene derecho al respeto.
b. El hombre, en tanto especie animal, no puede atribuirse el derecho
de exterminar a los otros animales o de explotarlos violando ese
derecho. Tiene la obligación de poner sus conocimientos al servicio
de los animales.
c. Todos los animales tiene derecho a la atención, a los cuidados y a
la protección del hombre.
Artículo 3:
a. Ningún animal será sometido a malos tratos ni a actos crueles.
b. Si es necesaria la muerte de un animal, ésta debe ser instantánea,
indolora y no generadora de angustia.
Artículo 4:
a. Todo animal perteneciente a una especie salvaje, tiene derecho a
vivir libre en su propio medio ambiente natural, terrestre, aéreo o
acuático y a reproducirse.
b. Toda privación de libertad, incluso aquella que tenga fines
educativos, es contraria a éste derecho.
Artículo 5:
a. Todo animal perteneciente a una especie que viva tradicionalmente
en el entorno del hombre, tiene derecho a vivir y crecer al ritmo y
en las condiciones de vida y de libertad que sean propias de su
especie.
117
b. Toda modificación de dicho ritmo o dichas condiciones que fuera
impuesta por el hombre con fines mercantiles, es contraria a dicho
derecho.
Artículo 6:
a. Todo animal que el hombre ha escogido como compañero tiene
derecho a que la duración de su vida sea conforme a su longevidad
natural.
b. El abandono de un animal es un acto cruel y degradante.
Artículo 7: Todo animal de trabajo tiene derecho a una limitación razonable del
tiempo e intensidad del trabajo, a una alimentación reparadora y al
reposo.
Artículo 8:
a. La experimentación animal que implique un sufrimiento físico o
psicológico es incompatible con los derechos del animal, tanto si se
trata de experimentos médicos, científicos, comerciales, como toda
otra forma de experimentación.
b. Las técnicas alternativas deben ser utilizadas y desarrolladas.
Artículo 9: Cuando un animal es criado para la alimentación, debe ser nutrido,
instalado y transportado, así como sacrificado, sin que de ello resulte para
él motivo de ansiedad o dolor.
Artículo 10:
a. Ningún animal debe ser explotado para el esparcimiento del
hombre.
118
b. Las exhibiciones de animales y los espectáculos que se sirvan de
animales son incompatibles con la dignidad del animal.
Artículo 11: Todo acto que implique la muerte de un animal sin necesidad es un
genocidio, es decir, un crimen contra la vida.
Artículo 12:
a. Todo acto que implique la muerte de un gran número de animales
salvajes es un genocidio, un crimen contra la especie.
b. La contaminación y la destrucción del ambiente natural conducen
al genocidio.
Artículo 13:
a. Un animal muerto debe ser tratado con respeto.
b. Las escenas de violencia en las cuales los animales son víctimas,
deben ser prohibidas en el cine y en la televisión, salvo si ellas
tienen como fin el dar muestra de los atentados contra los
derechos del animal.
Artículo 14:
a. Los organismos de protección y salvaguarda de los animales
deben ser representados a nivel gubernamental.
b. Los derechos del animal deben ser defendidos por la Ley, como
son los derechos del hombre.
119
ANEXO Nº 10 LEGISLACIÓN SOBRE PRODUCTOS QUÍMICOS MARCO LEGAL INTERNACIONAL
• Agenda 21
• Convenio de Estocolmo sobre Contaminantes Orgánicos
Persistentes, ratificado mediante Decreto Supremo Nº 067-2005-
RE, del 12.08.2005
MARCO LEGAL NACIONAL LEGISLACIÓN PERUANA
Según Decreto Supremo Nº 015-2005-SA se establece que conforme a
los artículos 2º inciso 22º y 7º de la Constitución política del Perú, toda
persona tiene derecho a gozar de un ambiente equilibrado y adecuado al
desarrollo de la vida y que todos tienen derecho a la protección de su
salud, como condición indispensable para el desarrollo humano y medio
fundamental para alcanzar el bienestar individual y colectivo.
Conceptos técnicos:
Zona de respiración.- El espacio alrededor de la cara del trabajador del
que éste toma el aire que respira, debe ser una semiesfera de 0.3m de
radio que se extiende por delante de la cara del trabajador, cuyo dentro se
localiza en el punto medio del segmento imaginario que une ambos oídos
y cuya base está constituida por el plano que contiene dicho segmento, la
parte más alta de la cabeza y la laringe.
120
Período de referencia.- Período especificado de tiempo, establecido para
el valor límite de un determinado agente químico. El período de referencia
para el límite de larga duración es habitualmente de 8 horas, y para el de
corta duración 15 minutos.
Exposición ocupacional.- Se define como la presencia de un agente
químico en el aire de la zona de respiración del trabajador. Cuando este
término se emplea sin calificativos hace siempre referencia la vía
respiratoria, es decir a la exposición por inhalación.
Se cuantifican en términos de la concentración del agente obtenida de las
mediciones de exposición, referida al mismo período de referencia que el
utilizado para el valor límite aplicable. En consecuencia pueden definirse
dos tipos de exposición:
-Media ponderada en el tiempo (TWA)- Valor límite permisible, es la
concentración media del agente químico en la zona de respiración del
trabajador medida o calculada de forma ponderada con respecto al
tiempo, para la jornada estándar de 8 horas diarias.
-Exposición de corta duración (STEL), es la concentración media del
agente químico en la zona de respiración del trabajador, medida o
calculada para cualquier período de 15 minutos a lo largo de la jornada
laboral, excepto para aquellos agentes químicos para los que se
especifique un período de referencia inferior en la lista de valores límite.
Para el cloruro de metileno:
Nº CAS 75-09-2: Cloruro de metileno
TWA: 50 ppm