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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS Programa de Pós-Graduação em Veterinária Dissertação Produção e quantificação de biofilme por Candida albicans em resinas acrílicas tratadas com extratos vegetais Maria Elvira Sica Cruzeiro Pelotas, 2013

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  • UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS

    Programa de Ps-Graduao em Veterinria

    Dissertao

    Produo e quantificao de biofilme por Candida albicans em resinas acrlicas tratadas com extratos vegetais

    Maria Elvira Sica Cruzeiro

    Pelotas, 2013

  • Produo e quantificao de biofilme por Candida albicans em resinas

    acrlicas tratadas com extratos vegetais.

    Orientador: Mario Carlos Arajo Meireles

    Co-Orientador: Marlete Brum Cleff

    Pelotas, 2013

    Dissertao apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Veterinria da Universidade Federal de Pelotas, como requisito parcial obteno do ttulo de Mestre em Cincias (rea do conhecimento: Sanidade Animal Veterinria Preventiva).

  • Banca examinadora:

    Prof. Dra. Luciana de Rezende Pinto

    Prof. Dra. Ana Raquel Mano Meinerz

    Prof.a Dra. Renata Osrio de Faria

    Prof. Dr. Mario Carlos Arajo Meireles (orientador)

  • Ao meu marido Mario e aos nossos filhos

    Ana Carolina, Ana Laura e Pedro dedico este trabalho com carinho.

  • Agradecimentos

    Primeiramente Deus por ter permitido a realizao deste sonho, ter me

    dado foras para transpor todas as barreiras que apareceram no caminho e,

    coragem para continuar;

    minha famlia que me apoiou nesta jornada com palavras de incentivo

    entendendo minhas ausncias;

    Aos que me orientaram, Prof. Dr. Mario Carlos de Araujo Meireles, Prof. Dra.

    Marlete Brum Cleff e Prof. Dra. Luciana Rezense de Pinto por toda disponibilidade e

    conhecimento transmitido durante este trabalho;

    Aos meus colegas de Ps - graduao Angela Cabana, Angelita dos Reis

    Gomes, Caroline Matos, Cludia Giordani, Fabiana Moreira, Flvia Arajo, Franklin

    Vaz, Luiza Osrio, Isabel Madri, Rosema Santim, Eduardo Muller, Daniel Svio, por

    todo auxlio prestado, pelas crticas construtivas, experincias compartilhadas e

    alegre convivncia.

    s estagirias Anna Luiza Silva, Camila Amaral Dvila, Dbora Reckziegel,

    Emanoele Serra, Gisele Seberino, Jenifer Hauschildt Dias, Lais Foresti, Marcelle

    Senhorinho Batista e Maryane Araujo da Silva, por todas as horas gastas com boa

    vontade auxiliando no meu experimento;

    Gabriela Hrnke Alves do Centro de Cincias Qumicas, Farmacuticas e

    de Alimentos, por toda a parte qumica,

    Tatiane Barbosa pela disposio em ajudar;

    Carmem Figueiredo Alves pelo auxlio incondicional;

    Aos meus colegas do Departamento de Fisiologia e Farmacologia que me

    incentivaram;

    Magali Midon da Faculdade de Odontologia pelo emprstimo da prensa

    hidrulica;

    Ao Departamento de Materiais Dentrios da Faculdade de Odontologia, pelo

    emprstimo da politriz;

    http://iqg.ufpel.edu.br/http://iqg.ufpel.edu.br/http://iqg.ufpel.edu.br/

  • Ao Centro Integrado de Pesquisas da Faculdade de Odontologia de Bauru

    da Universidade de So Paulo pelas cepas de Candida albicans

    Aos professores da Disciplina de Prtese Total da Faculdade de

    Odontologia pelo uso de suas dependncias para realizao da parte prtica em

    resinas;

    Ao Professor Dr. Schuch pelo emprstimo do shaker;

    Professora Carine Corcine pelo uso do espectrofotmetro;

    Ao Professor Dr. Geferson Fischer pelo uso do freezer;

    Lifemed na pessoa de seu Coordenador de produo Sr. Egberto Dutra

    pela esterilizao dos corpos de prova,

    Ao Prof. Dr. Willian Silva Barros, Vice-Diretor do Instituto de Fsica e

    Matemtica / Departamento de Matemtica e Estatstica, pela estatstica.

    MUITO OBRIGADA!

  • A longa caminhada faz-se mais ligeira,

    Tudo volta mais valioso, quando um amigo vai ao nosso lado

    alegre, a passos largos... Autor desconhecido

  • Resumo

    CRUZEIRO, Maria Elvira Sica. Produo e quantificao do biofilme de Candida albicans em resinas acrlicas tratadas com extratos vegetais. 2013. 91f. Dissertao (Mestrado) - Programa de Ps-Graduao em Veterinria. Universidade Federal de Pelotas, Pelotas. Os biofilmes so estruturas biolgicas organizadas, onde os microrganismos formam comunidades estruturadas, coordenadas e funcionais. Os biofilmes fngicos tem se destacado devido a capacidade patognica, com nfase nos biofilmes por Candida albicans, desta forma, o tratamento da estomatite prottica e eliminao do biofilme fngico tem sido intensificado devido a importncia deste para a sade bucal. Os microrganismos que constituem os biofilmes, em geral, apresentam caractersticas fenotpicas diferentes, tais como diferenas de sensibilidade aos antifngicos e maior resistncia frente s defesas do hospedeiro, sendo responsveis por diferentes quadros clnicos. Comercialmente tem-se disponvel vrios antifngicos, enxaguatrios bucais e desinfetantes, para o controle do biofilme, entretanto, tem havido interesse na busca por produtos vegetais, como plantas condimentares, a exemplo do Rosmarinus officinalis. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a ao de extratos vegetais de R. officinalis em biofilmes por C. albicans, formado sobre superfcie de acrlico. Os corpos de prova confeccionados em resina acrlica foram esterilizados e inoculados com C. albicans (1x107 clulas/ ml). A induo de biofilme foi realizada em corpos de prova, que foram tratados previamente no expermento 1 e ps-inoculao no experimento 2 conforme os grupos de tratamentos. Utilizaram-se seis tratamentos: nistatina, leo essencial de R. officinalis em carbopol, carbopol, extrato hidroalcolico de R. officinalis, loo 24% de R. officinalis, e o controle no tratados. Aps 48 horas da inoculao e aps 48 horas de tratamento foi realizada a quantificao do biofilme em espectrofotmetro com comprimento de ondas de 570nm. Os resultados dos trabalhos foram analisados estatsticamente, pelos testes ANOVA e TUKEY. Das diferentes formulaes dos extratos usados, a loo 24% de R. officinalis mostrou- se a mais eficaz tanto na inibio da formao do biofilme como no tratamento ps formao do biofilme. Conclui-se portanto, que, os extratos de R. officinalis foram eficientes no controle de biofilme e podem tornar-se uma alternativa na profilaxia e eliminao do biofilme por C. albicans. Palavras-chave: Biofilme, Candida albicans, Rosmarinus officinalis.

  • Abstract

    CRUZEIRO, Maria Elvira Sica. Produo e quantificao de biofilme de Candida albicans em superfcies de resinas acrlicas tratadas com extratos vegetais. 2013. 91f. Dissertao (Mestrado) - Programa de Ps-Graduao em Veterinria. Universidade Federal de Pelotas, Pelotas. Biofilms are organized biological structures, where microorganisms form structured, coordinated and functional communities. The fungal biofilms has emerged due to pathogenic capacity, with emphasis on biofilms by Candida albicans, thereby treating of prothetic stomatitis and eliminating of fungal biofilm has been intensified because of the importance of oral health. The microorganisms that form the biofilm, in general, have different phenotypic characteristics such as differences in sensitivity to antifungal agents and greater resistance against host defenses, being responsible for different clinical manifestations. Commercially there are several antifungals available, such as mouth rinses and sanitizers, aiming to control biofilm, however, there has been interest in the search for plant products, as in the case of herbs, such as the Rosmarinus officinalis. The objective of the study was to evaluate the extracts of Rosmarinus officinalis action in the biofilm formation of C. albicans on the surfaces of acrylic resins. The specimens made of acrylic resin were sterilized and inoculated with C. albicans (1x107 cells / ml). Induction of biofilm was performed on evidence blocks that were treated before in the first experiment and after inoculation in second experiment according to the experimental groups. Six treatments were used being them a control group,non treated (G1) nystatin 0,5%, (G2), lotion 24% of R. officinalis essential oil,(G3) , essential oil of R. officinalis 24% in carbopol,(G4), hydroalcoholic extract of R. officinalis 20% in carbopol,(G5) and carbopol 3%(G6). After 48 hours of inoculation and after 48 hours of treatment biofilm were quantified using spectrophotometer with wavelength of 570nm. The results of the studies were analyzed statistically by ANOVA and Tukey tests. From all the different formulations of extract used, the 24% essential oil lotion of Rosmarinus officinalis proved to be much more effective in inhibiting biofilm formation and in the elimination of post formed biofilm. It is therefore concluded that the extracts of R. officinalis were efficient in controlling biofilm and may become an alternative in the profilaxy and elimination of the C. albicans biofilm.

    Key - words: Biofim. Candida albicans. Rosmarinus offcinalis.

  • Lista de Figuras

    ARTIGO 2 Desenvolvimento e quantificao de biofilme fngico em resinas acrlicas de prteses dentrias pr-tratadas com Rosmarinus

    officinalis

    Figura 1 Demonstrao dos resultados dos tratamentos na preveno de

    formao do biofilme por Candida albicans nos corpos de prova..........................................................................................52

    ARTIGO 3 Aplicao de extratos vegetais na eliminao do biofilme por Candida albicans em resinas acrlicas

    Figura 1 Representao grfica dos resultados dos diferentes tratamentos e

    grupos controle, utilizados na eliminao do biofilme por Candida albicans em material de prtese..........................................................68

  • Lista de Tabelas

    ARTIGO 2 Desenvolvimento e quantificao de biofilme fngico em resinas acrlicas de prteses dentrias pr-tratadas com Rosmarinus

    officinalis

    Tabela 1 Demonstrativo da distribuio dos grupos experimentais conforme tratamento utilizado para controle do biofilme nos corpos de prova..............................................................................................49

    Tabela 2 Demonstrativo da mdia da leitura espectrofotomtrica da inibio da formao do biofilme por Candida albicans, de acordo com os diferentes grupos de tratamento...........................................................51

    ARTIGO 3 Aplicao de extratos vegetais na eliminao do biofilme por Candida albicans em resinas acrlicas

    Tabela 1 Demonstrativo da distribuio dos grupos experimentais conforme

    tratamento utilizado para tratamento do biofilme nos corpos de prova.....................................................................................................65

    Tabela 2 Leitura espectrofotomtrica da produo do biofilme por Candida albicans, aps a utilizao dos diferentes gupos de tratamento e percentual da reduo do biofilme..................................................................................................66

  • Sumrio

    1 Introduo...............................................................................................13

    2 Objetivos............................................................................................................15

    3 Reviso Bibliogrfica.....................16

    3.1 Biofilme...........................................................................................................16

    3.2 Biofilme por Candida albicans e Candidose ..................................................18

    3.3 Preveno e tratamento do biofilme por Candida albicans................................20

    3.4 Uso de Plantas Medicinais em Biofilme e Candidose....................................24

    3.5 Alecrim (Rosmarinus officinalis)................................................................................26

    4 Artigos...............................................................................................................30

    4.1 Artigo 1 - Controle de biofilme por Candida albicans em pacientes usurios

    de prtese dentrias: reviso bibliogrfica...........................................................30

    4.2 Artigo 2 Desenvolvimento e quantificao de biofilme fngico em resinas

    acrlicas de prteses dentrias pr-tratadas com Rosmarinnus officinalis...........43

    4.3 Artigo 3 - Aplicao de extratos vegetais na eliminao do biofilme por

    Candida albicans em resinas dentrias................................................................58

    5 Concluso geral.................................................................................................74

    6 Referncias Bibliogrficas.................................................................................75

    7 Anexos...............................................................................................................92

  • 1 INTRODUO

    Biofilmes so massas diferenciadas de microrganismos formadas em

    superfcies circundadas por uma matriz extracelular que apresentam alto grau de

    organizao (BLANKENSHIP, 2006). O biofilme dental apresenta relao com m

    higiene oral e com a colonizao por leveduras do gnero Candida, apresentando

    grande importncia na etiologia das doenas periodontais (PEREIRA, 1999; SILVA

    et al., 2006; ALVES, 2009). Essas leveduras so componentes da microbiota de

    humanos clinicamente sadios e so descritos como agentes oportunistas causadores

    de micoses (LACAZ et al., 2002). As espcies de Candida esto amplamente

    distribudas no ambiente e fazem parte da microbiota humana e de animais,

    colonizando, frequentemente pele e mucosas como da cavidade oral, trato

    gastrointestinal e genital de mamferos (LACAZ et al., 2002; CLEFF et al., 2005).

    Segundo a literatura, a Candida albicans, que comensal da microbiana oral

    humana, a principal espcie envolvida na formao do biofilme, devido, entre

    outros fatores, capacidade de adeso s superfcies, sendo reconhecida como um

    dos principais agentes envolvidos em micoses orais. Tal situao conduz a quadros

    graves de estomatite, gengivites, periodontites, incluindo pacientes

    imunocompetentes, usurios de prtese (ARENDORF; WALKER, 1980;

    SAMARANAYAKE; MACFARLANE, 1980; WEBB et al., 1998; CHANDRA et al.,

    2001; ALVES, 2009). O tipo de material utilizado nas prteses dentrias influencia

    na adeso de Candida spp e na formao do biofilme, no entanto, mtodos qumicos e

    mecnicos podem diminuir ou eliminar temporariamente a sua formao. (MIYAKE

    et al.,1996; WATERS et al., 1997; PANAGODA; ELLEPOLA ; SAMARANAYKE,

    1998; NEVZATOGLU, 2007; PEREIRA-CENCI et al., 2007; FERREIRA et al., 2009;

    YOUNG et al, 2009).

    Tem sido observado que os microrganismos que constituem os biofilmes, em

    geral, apresentam caractersticas fenotpicas diferentes das clulas em suspenso,

  • 14

    tais como diferenas de sensibilidade aos antifngicos e maior resistncia frente s

    defesas do hospedeiro. (CARDOSO, 2004).

    O biofilme vem sendo tratado com os antifngicos tradicionais, sendo as

    alilaminas e os azis os frmacos de eleio, apesar de, muitas vezes, ocorrer

    resistncia a estes medicamentos (DONLAN, 2001; DONLAN; COSTERTON, 2002;

    KUHN et al., 2003; CARDOSO, 2004; PERCIVAL et al.; 2011). Por outro lado,

    tratamentos alternativos vm sendo estudados como; desinfeco por micro - ondas

    (Silva et al., 2006), uso de substncias higenizadoras (Jardim et al.,1998; Vieira et

    al., 2010), solues desinfetantes (Ferreira et al., 2009) e, mais modernamente, a

    chamada terapia fotodinmica (BEVILACQUA; BRUGNERA; NICOLAU, 2007;

    RIBEIRO et al., 2011). Todavia, segundo a literatura, no tem sido avaliada a

    capacidade de extratos vegetais, como de Rosmarinnus officinalis, o alecrim, quanto

    capacidade de impedir a formao do biofilme.

    O Rosmarinnus officinalis, (alecrim) pertence famlia Lamiaceae; possui

    propriedades como antissptico para as vias areas e cavidade bucal; cicatrizante,

    antifngico e antibacteriano, agindo nos sistemas nervoso, circulatrio e digestrio

    sendo que, grande parte dos trabalhos tem utilizado o leo essencial de alecrim

    devido a atividade antimicrobiana demonstrada (PORTE; GODOY, 2001; LORENZI;

    MATOS, 2002; ANGIONI et al., 2004; SANTOYO et al., 2005; CELIKTAS et al.,

    2007; LUQMAN et al., 2007; BERNARDES et al., 2010; HUSSAIN et al., 2010).

    Contudo, estudos utilizando outras formas de extratos so escassos, sendo

    encontradas poucas informaes acerca da atividade anticandida dos extratos

    aquosos e etanlicos. Assim como, em relao ao tratamento do biofilme, que no

    foi encontrado na literatura nenhum trabalho avaliando extratos de alecrim no

    biofilme prottico, sendo portanto o estudo pioneiro neste sentido.

    Em sntese, a diminuio da colonizao por Candida spp. bem como a

    inibio da formao do biofilme, continua sendo um desafio, sendo necessrio

    intensificar as pesquisas atravs de substncias com capacidade de inibir ou impedir

    a formao do biofilme, sem prejudicar a sade do paciente.

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=search&db=PubMed&term=%20Donlan%20RM%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=search&db=PubMed&term=%20Costerton%20JW%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Percival%20SL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=22985037http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Silva%20MM%22%5BAuthor%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Vieira%20AP%22%5BAuthor%5D

  • 2 Objetivos

    2.1 Objetivo geral

    Avaliar a ao de extratos vegetais de Rosmarinus officinalis em biofilmes por C.

    albicans, formado sobre superfcie de acrlico.

    2.2 Objetivos especficos

    - Quantificar o biofilme por C. albicans em resina acrlica termopolimerizvel utilizada

    para confeco de prteses dentrias;

    - Avaliar a capacidade de extratos vegetais de R. officinallis em inibir a formao de

    biofilme por C. albicans;.

    - Avaliar a capacidade de extratos vegetais de R. officinallis na remoo do biofilme

    por Candida albicans.

  • 3 REVISO BIBLIOGRFICA

    3.1 Biofilme

    Antonie van Leeuwenhoekv descreveu pela primeira vez o biofilme no sculo

    XVII, mas at 1978 a teoria que descreveria o processo de formao deste no

    havia sido desenvolvida (DONLAN; COSTERTON, 2002). Atualmente, biofilmes so

    definidos como uma comunidade sssil, caracterizada por clulas que formam

    microcolnias, irreversivelmente aderidas a um substrato, a uma interface, ou ainda,

    umas s outras, embebidas numa complexa matriz extracelular de substncias

    polimricas, exibindo um fentipo alterado no que diz respeito taxa de crescimento

    microbiano e transcrio gentica (DONLAN; COSTERTON, 2002; COSTERTON;

    WILSON, 2003; BLANKENSHIP; MITCHELL, 2006; KIEDROWSKI; HORSWILL,

    2011). Ainda, segundo Blankenship e Mitchell (2006), biofilmes so massas

    diferenciadas de microrganismos formadas em superfcies circundadas por uma

    matriz extracelular.

    A formao do biofilme ocorre em trs distintas fases de desenvolvimento,

    onde blastsporos transformam-se em comunidades aderentes embebidas numa

    matriz polissacardica (CHANDRA et al., 2001). Sabe-se que os biofilmes

    representam o tipo de crescimento microbiano predominante na natureza e so

    cruciais no desenvolvimento de infeces, uma vez que servem de nicho aos

    agentes patognicos (DONLAN, 2001; KUHN et al., 2003). Os microrganismos so

    ubiquitrios, logo, virtualmente, os biofilmes podem se formar em qualquer superfcie

    e qualquer ambiente. Observam-se biofilmes em condutas de gua, permutadores

    de calor, sanitas, cascos de navio, pele e mucosas de animais, incluindo o homem,

    nos dentes, em prteses e nas indstrias, desde a qumica e farmacutica

    alimentar (ARAJO, 2007).

    Recentemente, as caractersticas do biofilme esto sendo reconhecidas na

    histria da medicina, tornando evidente que o desenvolvimento de algumas

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kiedrowski%20MR%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=22191529http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Horswill%20AR%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=22191529

  • 17

    infeces bacterianas depende da formao do biofilme. As infeces relacionadas

    com os dispositivos mdicos so um dos mais claros exemplos desse tipo de

    infeco. Qualquer dispositivo mdico pode ser colonizado, porm os catteres

    intravenosos o so mais comumente. (BROOKS; JEFFERSON, 2012).

    Inmeros micro-organismos so capazes de provocar a formao de

    biofilme, sendo que mais de 80% das infeces bacterianas humanas so

    associadas biofilme por Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa,

    Staphylococcus aureus e Enterobacterias como a Escherichia coli. (GOMES;

    OLIVEIRA, 1952; TEIXEIRA, 2010; RMLING; BALSALOBRE, 2012; BROOKS e

    JEFFERSON, 2012).

    Os biofilmes microbianos, tambm, esto implicados tanto em feridas de

    pele, agudas como crnicas, comprometendo a cicatrizao e cura dessas feridas.

    Estudos demonstram que o biofilme reside na ferida crnica e isto representa um

    importante mecanismo, que retarda a cicatrizao e propicia a continuidade da

    infeco, estando relacionado com a atividade protesica e supresso imunolgica

    (PERCIVAL et al., 2011).

    O biofilme dental, por outro lado, o fator de maior importncia na etiologia

    das doenas periodontais, apresentando relao com a colonizao por leveduras

    do gnero Candida (NEPPELENBROEK et al., 2008; ALVES, 2009; RIBEIRO et al.,

    2011). Os biofilmes por C. albicans so causas de infeces hospitalares e vm

    sendo associados colonizao de intrumentais e fmites utilizados na rea mdica,

    servindo de nicho para o desenvolvimento dos agentes patognicos. So

    particularmente muito preocupantes, em funo das clulas serem relativamente

    resistentes a antifngicos (DONLAN, 2001; DONLAN; COSTERTON, 2002; KUHN

    et al., 2002; PATEL, 2005). Fluorescncia e microscopia de varredura tem revelado

    que o biofilme por Candida albicans possui uma arquitetura altamente heterognea

    formada de elementos celulares e no celulares (CHANDRA et al., 2001).

    A formao do biofilme ocorre de forma diferente sobre os diversos tipos de

    materiais usados em odontologia (NEVZATOGLU, 2007). O biofilme de prteses

    dentrias est intimamente relacionado processos inflamatrios do tipo estomatite,

    causada principalmente pela presena de leveduras do gnero Candida, sendo que

    sua presena no biofilme o principal fator para o aparecimento da doena, o que

    ocorre devido ao seu poder de adeso s superfcies (CHANDRA et al., 2001;

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=R%C3%B6mling%20U%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23025745http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Balsalobre%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23025745http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Percival%20SL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=22985037http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Neppelenbroek%20KH%22%5BAuthor%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Ribeiro%20DG%22%5BAuthor%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=search&db=PubMed&term=%20Donlan%20RM%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=search&db=PubMed&term=%20Costerton%20JW%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Patel%20R%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16056024

  • 18

    PIRES et al., 2002; BARBEAU et al., 2003; LYON e RESENDE, 2006, FIGUEIRAL

    et al., 2007; SESMA e MORIMOTO, 2011 ).

    3.2 Biofilme por Candida albicans e Candidose

    Na classe dos fungos, o gnero Candida tem se apresentado como principal

    causador de biofilme dentrio (BUDTZ JRGENSEN, 1970; OLSEN, 1974;

    CEBALLOS et al.; 1990; PIRES et al., 2002; BARBEAU et al., 2003; LYON;

    RESENDE, 2006; FIGUEIRAL et al., 2007; SESMA; MORIMOTO, 2011). Assim

    como, Candida spp. reconhecida como um dos principais agentes envolvidos em

    micoses orais, levando a quadros graves de estomatite, gengivites, periodontites,

    tanto em humanos, incluindo pacientes imunocompetentes usurios de prtese,

    como nos animais (BUDTZ-JORGENSEN, 1990; FETTER, 1993; NIKAWA et al.,

    1998; RAMOS et al., 1999; AKPAN; MORGAN, 2002; JADHAV; MAHENDRA,

    2006; ALVES, 2009; MARTINS et al., 2011).

    Dentro do gnero Candida, h aproximadamente 150 espcies, mas somente

    20 so consideradas patognicas, destacando-se a C. albicans como a mais

    patognica das espcies, estando frequentemente envolvida em candidases em

    animais (VELASCO, 2000; SELITRENNIKOF, 2001; CHANG et al.; 2003; KUHN et

    al., 2003; MORETTI et al., 2004; JIN; LIN, 2005; JADHAV; PAL, 2006; BAGG et al.,

    2006).

    As espcies de Candida diferem na capacidade de formar biofilmes, que

    variam na sua morfologia, composio das substncias polimricas extracelulares

    (PEC) e resistncia antifngica (SENEVIRATNE et al., 2008; HASAN et al., 2009).

    Entretanto alm da C.albicans, outras espcies do gnero tambm so relacionadas,

    tais como C. tropicalis, C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. guilliermondii, C

    dubliniensis, C. lipolytica, C. famata, C. pulcherrima, C. sake e C. pseudotropicalis

    (FIGUEIRAL et al., 2007; FERREIRA et al., 2009; ZOMORODIAN et al., 2011;

    MARCOS - ARIAS et al., 2009; GASPAROTO et al., 2009). Segundo a literatura o

    alto ndice e maior percentagem de produo de biofilme por leveduras no albicans,

    ocorre nos pacientes portadores de prtese, que apresentavam leses na cavidade

    oral (GASPARETTO, 2005; LYON ; RESENDE, 2006).

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Budtz-J%C3%B6rgensen%20E%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=4598186http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Ceballos%20A%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=2203365http://pmj.bmj.com/search?author1=A+Akpan&sortspec=date&submit=Submithttp://pmj.bmj.com/search?author1=R+Morgan&sortspec=date&submit=Submit

  • 19

    A habilidade da C. albicans de formar o biofilme, contrasta, nitidamente, com

    o biofilme de Saccharomyces cerevisiae que tem capacidade de aderncia a

    materiais, mas falha em formar o biofilme maduro (CHANDRA et al., 2001). No

    processo de infeco a C. albicans, que encontra - se primeiramente na forma de

    levedura, inicia a leso, mas variaes nutricionais e ambientais modulam com o

    tempo sua converso para a fase de hifa, aumentando a capacidade de invaso e

    assim, sua virulncia (UREA, 1995; BILHAN, 2009).

    Fatores de patogenicidade fazem com que C. albicans desenvolva doenas

    com maior frequncia do que outras espcies, sendo reconhecida a capacidade de

    aderncia s membranas celulares do hospedeiro, secreo de enzimas hidrolticas

    como fosfolipases e proteinases que degradam as membranas celulares, fator

    importante para o processo de infeco e produo de manoprotenas extracelulares

    que aumentam, significativamente, a capacidade de adeso a clulas epiteliais e ao

    acrlico (SCHERER; MAGEE, 1990; ODDS, 1991; BEIGHTON et al., 1995; KULAK et

    al., 1997; WEBB et al, 1998; SULLIVAN; COLEMAN, 1998; CANNON; CHAFFIN,

    1999; SULLIVAN et al., 1999; FARAH et al., 2000; CALDERONE; FONZI, 2001;

    HAYNES, 2001; ODDS et al., 2004; BAGG et al., 2006; HENRIQUES et al., 2006;

    JAYATILAKE et al., 2006; KOGA-ITO et al., 2006; PARAHITIYAWA et al., 2006;

    THEIN et al, 2006; URZA et al., 2007; BILHAN et al, 2009). C. albicans, alm de

    possuir a habilidade de se aderir s clulas do hospedeiro, tambm apresenta a

    habilidade em aderir-se s resinas de prteses, quer seja direta ou atravs de

    camada intermediria formada por placa bacteriana (CALDERONE; BRAUN, 1991;

    ATIQUE, 2006; RODRIGUES et al., 2007).

    O biofilme tem sido relacionado e considerado como um dos fatores para

    candidose, conhecida como estomatite por dentaduras ou estomatite prottica,em

    portadores de prtese total, que outra forma de manifestao clnica da

    colonizao por Candida spp. na cavidade oral. Esta infeco caracteriza - se por

    ser superficial ou sistmica, primria ou secundria, oportunista, comum na

    cavidade oral, decorrente da multiplicao de leveduras do gnero Candida.

    Algumas espcies so comensais da cavidade oral e, geralmente no causam

    problemas sade das pessoas, contudo podem levar ao desconforto local,

    sensao de paladar alterado e disfagia esofagiana. No entanto, quando a

    Candidose oral se manifesta, pode se apresentar na forma aguda

    (pseudomembranosa e atrfica) ou crnica (atrfica, hipertrfica e ou hiperplsica)

  • 20

    (BUDTZ- JRGENSEN, 1974). Este tipo de infeco mais comum em indivduos

    imunocomprometidos e sua incidncia tem sido crescente nos ltimos anos

    (FETTER et al.,1993; RODRIGUES et al., 2007; COCO et al., 2008). Nestes

    indivduos, a doena pode se dsseminar para outros rgos levando-os a uma

    severa infeco com alta morbidade e mortalidade. A incidncia da candidose varia

    de acordo com a idade e vrios outros fatores predisponentes como; funo da

    glndula salivar comprometida, uso de drogas, de dentaduras, dieta rica em

    carbohidratos, tabagismo, diabetes, Sndrome de Cushing, tumores malignos e

    condies imunossupressivas ( AKPAN ; MORGAN, 2002).

    A estomatite prottica por Candida, mesmo assintomtica deve ser tratada,

    j que pode atuar como reservatrio para infeces mais extensas e propiciar a

    reabsoro ssea alveolar. A estratgia teraputica ainda adotada inclui o uso de

    antifngicos tpicos e sistmicos, nistatina, anfotericina B, miconazol e fluconazol,

    desinfetantes, irradiao por microondas e remoo e controle da placa bacteriana

    presente na dentadura e na mucosa oral. Tanto na terapia como na preveno, o

    mais efetivo tratamento a erradicao e controle da placa microbiana (SALERNO

    et al., 2011).

    Os biofilmes fngicos, especialmente os de Candida albicans so causa de

    infeces associadas a dispositivos mdicos. Um fator preocupante que estes se

    comportam como nichos protegidos de microrganismos, no respondendo ao

    tratamento com antibiticos e antifngicos, podendo criar uma fonte de infeco

    persistente (CHANDRA et al., 2001). A formao de biofilme desencadeia resistncia

    antifngica e proteo contra a defesa do hospedeiro levando a uma importante

    repercusso clnica (TOBUDIC et al., 2012).

    3.3 Preveno e tratamento do biofilme por Candida albicans

    A preveno do biofilme por leveduras, pode ser realizada com uma higiene

    efetiva da prtese (Arendorf e Walker, 1987; Cross et al., 1998), promovendo a

    desinfeco de dentaduras. Alm disso, a remoo mecnica constitui o mtodo

    mais aceito para o controle do biofilme dentrio por estas leveduras, entretanto o uso

    de coadjuvantes qumicos bastante valioso. Jardim et al. (1998) e Vieira et al.

    (2010), avaliaram a eficcia de substncias higienizadoras como perxido alcalino

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Budtz-J%C3%B6rgensen%20E%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=4598186http://pmj.bmj.com/search?author1=A+Akpan&sortspec=date&submit=Submithttp://pmj.bmj.com/search?author1=A+Akpan&sortspec=date&submit=Submithttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Vieira%20AP%22%5BAuthor%5D

  • 21

    contendo enzima, hipoclorito de sdio a 0.5% ou gua destilada, a fim de impedir a

    recolonizao por Candida spp. em revestimentos de superfcies de dentaduras e

    verificaram que no houve diferena significativa com relao s condies de

    recolonizao das espcies de Candida, no entanto, o hipoclorito de sdio foi o nico

    tratamento que removeu o biofilme de forma eficiente. Com relao ao tratamento

    aps adaptao e formao do biofilme, o mesmo deve ser realizado utilizando-se

    frmacos, antisspticos, antibacterianos ou antifngicos. O biofilme por leveduras

    vem sendo tratado com os antifngicos tradicionais apesar de muitas vezes ocorrer

    resistncia estes medicamentos (DONLAN; COSTERTON, 2002; DONLAN, 2001;

    KUHN et al., 2002; PERCIVAL et al., 2011). Cross et al. (1998), avaliaram o uso de

    fluconazol (50 mg dirias por 14 dias) e o itraconazol (100 mg dirias por 15 dias)

    para tratar candidase prottica concluindo que os dois medicamentos tem eficcia

    comparvel.

    Boucherit - Atmani et al. (2011) testaram as propriedades antifngicas da

    anfotericina B, demonstrando que as clulas ssseis de C. albicans foram mais

    resistentes que as planquitnicas, principalmente quando a resistncia era

    aumentada durante as diferentes fases de crescimento at o biofilme alcanar a

    maturidade. De acordo com os trabalhos, a resistncia s drogas pode ser adquirida

    no incio da formao e parece ser regida por diferentes mecanismos, tanto no

    biofilme precoce como no tardio. (BOUCHERIT - ATMANI et al., 2011).

    Combinaes de drogas antifngicas, como anfotericina B mais

    caspofungina e anfotericina B mais posaconazol, tem sido testadas in vitro em

    clulas planctnicas e biofilme por C. albicans, sendo demonstrado que a

    combinao dos antifngicos mais eficaz do que o tratamento com uma nica

    droga (TOBUDIC et al., 2010). A caspofungina foi avaliada no desenvolvimento do

    biofilme ps 48hs, demonstrando-se que mesmo na presena de altas

    concentraes de caspofungina no houve a inibio do biofilme (FERREIRA et al.,

    2009). Por outro lado, outras alternativas vem sendo estudadas como, desinfeco

    por microondas (Silva et al., 2006; Sanit, 2009); substncias higienizadoras,

    (Jardim et al.,1998; Vieira et al., 2010,) solues desinfetantes (Ferreira et al.,

    2009) das prteses e mais modernamente a chamada terapia fotodinmica

    (BEVILACQUA; BRUGNERA ; NICOLAU, 2007; RIBEIRO et al., 2011).

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=search&db=PubMed&term=%20Donlan%20RM%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=search&db=PubMed&term=%20Costerton%20JW%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Percival%20SL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=22985037http://jac.oxfordjournals.org/search?author1=Selma+Tobudic&sortspec=date&submit=Submithttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Silva%20MM%22%5BAuthor%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Sanit%C3%A1%20PV%22%5BAuthor%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Vieira%20AP%22%5BAuthor%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Ribeiro%20DG%22%5BAuthor%5D

  • 22

    No tratamento para candidase oral, em pacientes usurios de prteses,

    inicialmente preconizado que seja feita a retirada da prtese para o

    restabelecimento da sade bucal (Chow et al., 1999), enquanto Cross et al.(1998)

    recomendam como alternativas o uso de antisspticos entre eles a clorexidina, alm

    da higiene efetiva da prtese e a remoo noturna. A clorexidina foi totalmente

    efetiva na preveno da adeso e crescimento de Candida albicans em discos de

    resina acrlica, assim como o pr-tratamento com nistatina mostrou-se protetor e

    similar a ao da clorexidina (SPIECHOWICZ et al., 1990; EGUSA et al., 2000).

    Ao avaliar a eficcia do fluconazol e nistatina no tratamento da candidase

    oral, foi observado que nos dois grupos houve melhora da candidase, entretanto, o

    grupo do fluconazol demonstrou melhores resultados na eliminao de leveduras e

    na reduo dos sinais clnicos (BLOMGREN et al., 1998). Porm, 40 dias aps a

    suspenso do tratamento, a colonizao por leveduras, e o aspecto edemaciado,

    atingiram ndices semelhantes aos encontrados no incio da doena (BLOMGREN

    et al., 1998).

    Em vista dos efeitos colaterais que possam ocorrer, a medicao sistmica

    somente indicada em infeces bucais quando no h resposta medicao

    tpica (CHOW et al., 1999). De acordo com a literatura, o uso de fluconazol pode

    estar associado hepatotoxicidade e nefrotoxicidade principalmente nos pacientes

    com doenas pr - existentes, embora o mecanismo ainda seja desconhecido.

    (CHOW et al., 1999; CROSS et al.,1998; SOMCHIT et al., 2006). Entretanto para

    Rodriguez e Acosta Jr. (1995) o cetoconazol mais citotxico do que o fluconazol,

    efeito dose e tempo de aplicao dependente em modelos experimentais.

    Mais recentemente, tem sido descrito a ocorrerncia de resistncia natural

    aos frmacos antifngicos (CANUTO; GUTIERREZ, 2002; SOMCHIT et al., 2012).

    Existe tambm a preocupao do aumento da patogenicidade de espcies menos

    virulentas que Candida albicans, mas que so resistentes ao fluconazol, como por

    exemplo, Candida krusei (CROSS et al.,1998; SILVA, 2005). Novos antifngicos

    tem sido avaliados no tratamento infeces por Candida fluconazol resistente.

    Somchit et al. (2012), ao estudar o uso de voriconazol, demonstraram que o

    antifngico no induz significantemente hepatotoxicidade e nefrotoxicidade at

    mesmo em altas doses. Enquanto Coskun et al.(2012), detectaram em seu estudo

    severa toxicidade com o ornidazol aps uso prolongado.

    http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0300483X9402911Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Coskun%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=22691836

  • 23

    Em relao ao biofilme, Brooks e Jefferson (2012) enfatizam a necessidade

    de novas estratgias no tratamento uma vez que o biofilme se mostra tolerante aos

    quimioterpicos e torna-se muito difcil o tratamento das infeces a ele

    relacionadas, que podem ser muitas vezes crnicas e recorrentes (PERCIVAL et al.,

    2011).

    Alm dos frmacos, muitos produtos qumicos so apontados na literatura

    para controlar a formao do biofilme nas bases de acrlico das prteses, sendo

    preconizado o uso de solues higienizantes para diminuir a quantidade de micro-

    organismos (GHALICHEBAF, GRASER; ZANDER, 1982; MOORE, SMITH, KENNY,

    1984; MINAGI et al., 1987; CHAN et al., 1991; BASSON, QUICK; THOMAS,1992;

    GORNITSKY et al., 2002; GLASS, 2004). Outros autores consideram suficiente o

    uso de solues desinfetantes, para eliminar os micro-organismos que invadem o

    interior do acrlico. (CHAU et al.,1995 e LI et al., 1999 ).

    O diagnstico preciso de infeces associadas a biofilme frequentemente

    dificultoso, sendo complicada a escolha apropriada do tratamento. Como estas

    infeces contribuem, significantemente, com a morbidade de pacientes e altos

    custos dos programas de sade, novas estratgias para trat-las devem ser

    desenvolvidas de forma urgente ( ALVES, 2006).

    Nesse sentido, estudos recentes tem tentado definir o controle gentico do

    biofilme (BLANKENSHIP, 2006). A resistncia s drogas adquirida no incio e

    parece ser regida por diferentes mecanismos em precoce e tardio biofilme. Segundo

    Blankenship (2006), h emergncia de estratgias genmicas para descobrir os

    eventos especficos relacionados, tais como a formao de hifas na definio da

    fixao do biofilme. De acordo com Pinto (2010), a determinao do quanto certos

    genes esto envolvidos na formao do biofilme, primordial para o

    desenvolvimento de estratgias de controle da patogenicidade destes. Rouabhia et

    al.(2012), demonstraram que um mutante (Caecm33) de Candida albicans, reduz a

    formao do biofilme e causa menos danos na mucosa oral, propondo que seja um

    novo objetivo para prevenir e tratar infeces por candida. Sugerindo ainda que o

    gen ECM33 da Candida desempenha ativo papel na interao candida / hospedeiro

    e responsvel pelos danos nos tecidos que leva candase. (ROUABHIA et al.,

    2012).

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Moore%20TC%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=6381698http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Smith%20DE%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=6381698http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Smith%20DE%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=6381698http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Smith%20DE%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=6381698http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Smith%20DE%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=6381698http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Glass%20RT%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15119677

  • 24

    Tendo-se em vista as dificuldades e os vrios fatores que interferem no

    tratamento do biofilme e da candidose com agentes antifngicos polinicos ou azis

    Donlan, (2001); Donlan; Costerton, (2002); Kuhn et al., (2002), faz-se necessrio

    estudar outras terapias mais eficazes, e com menores efeitos colaterais ao paciente.

    Nesse sentido, nas ltimas dcadas, tem-se aumentado o uso de produtos naturais

    para a preveno de doenas bucais. Relatos na literatura tm demonstrado que

    muitos extratos apresentam atividade antimicrobiana sobre patgenos bucais entre

    eles, Candida albicans. (KOO et al., 2000a).

    3.4 USO DE PLANTAS MEDICINAIS EM BIOFILME E CANDIDOSE

    O Brasil um pas privilegiado em relao ao emprego da

    fitoterapia, pois possui 25% da flora mundial e um patrimnio

    gentico de grande potencial para o desenvolvimento de novos

    medicamentos (FRANCISCO, 2010; CASTILHO, MURATA;

    PARDIC, 2006).

    A terapia atravs das plantas ou fitoterapia data de pocas remotas, sendo

    que a mais antiga referncia conhecida existe h mais de sessenta mil anos. Desde

    que o homem na sua marcha evolutiva, sentiu a primeira indisposio no organismo,

    ele teve a intuio ou a inspirao de que nas plantas poderia encontrar os meios de

    cura ou alvio (Lucas, 1937). Estudos arqueolgicos em runas do Ir foram

    determinantes para as primeiras descobertas. Farmacopeias que compilavam as

    ervas e suas indicaes teraputicas tambm existiam na China 3.000 a.C.

    demonstrando que a utilizao das plantas medicinais sempre fez parte da histria

    da humanidade, tendo grande importncia tanto no que se refere aos aspectos

    medicinais, como culturais.

    No Brasil, os ndios foram os responsveis pela medicina popular atravs

    das plantas, assim como europeus e negros, ainda na poca que o pas era colnia

    de Portugal. Os mdicos ficavam restritos s metrpoles e na zona rural e ou

    suburbana, a populao recorria s ervas medicinais. Essa forma de terapia em

    nosso pas surgiu de uma ao conjunta entre os conhecimentos de indgenas,

    jesutas e fazendeiros, sobrevivendo at os dias de hoje. (ARAJO, 1979).

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=search&db=PubMed&term=%20Donlan%20RM%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=search&db=PubMed&term=%20Costerton%20JW%5Bauth%5D

  • 25

    Mais recentemente, tem havido movimentos mundiais favorveis ao uso de

    plantas medicinais e fitoterpicos, entretanto h necessidade de regulamentao,

    de produo, utilizao e comercializao (Brasil,1995). O Brasil tem sido pioneiro

    neste sentido tendo lanado um Programa Nacional de Plantas Medicinais e

    Fitoterpicos por meio do Decreto Presidencial N. 5.813, de 22 de junho de 2006,

    que constituiu parte essencial das polticas pblicas de sade, meio ambiente,

    desenvolvimento econmico e social, tornando-se, assim, elemento fundamental na

    implementao de aes capazes de promover melhorias na qualidade de vida da

    populao brasileira (2006). A nvel estadual tambm tem sido criadas comisses

    com finalidade de implementar a Poltica Intersetorial de Plantas Medicinais,

    Aromticas e Condimentares e de Medicamentos Fitoterpicos no estado do Rio

    Grande do Sul, visando o desenvolvimento socioeconmico sustentvel do estado

    (2011).

    Com relao a microrganismos da cavidade oral, Francisco, (2010) ressalta

    a importncia de novas alternativas para tratamento das afeces orais com

    fitoterpicos. O autor chama a ateno para as atividades antisspticas,

    antimicrobianas e anti-inflamatrias com menores efeitos colaterais de vrias

    plantas como aroeira, prpolis e rom, pelo fato de possurem uso bastante

    difundido na medicina popular para o tratamento de diversas afeces bucais.

    Salienta-se a necessidade de desenvolver novas terapias contra fungos oportunistas

    como Candida spp., que tem habilidade de adquirir resistncia aos antifngicos

    durante tratamento prolongado, sendo promissor a pesquisa de novos agentes com

    uso de plantas (ANIBAL et al., 2010; LIMA et al., 2006).

    Nesta linha de pesquisa, Taweechaisupapong et al. (2006) avaliaram o

    efeito do extrato etanlico das folhas de Streblus asper na aderncia de Candida

    albicans em superfcies de resina acrlicas, demonstrando diminuio da habilidade

    da levedura de aderir-se s resinas acrlicas possibilitando a preveno de

    estomatite prottica.

    Alves et al.(2009) obtiveram resultados promissores quando avaliaram in

    vitro, a atividade antimicrobiana, antifngica e antiaderente da aroeira-do-serto,

    malva e goiabeira sobre microrganismos do biofilme dental e candidose oral. Os

    extratos mostraram-se eficazes, inibindo o crescimento das bactrias e fungos do

    biofilme dental e da candidose oral, sugerindo a utilizao dessas plantas como

    meio alternativo na teraputica odontolgica. Entretanto, Reis et al., (2011), testaram

  • 26

    as atividades inibitrias do extrato da folha de jabuticabeira (Myrciaria cauliflora) e da

    folha de goiabeira (Psidium guajava L ) em Candida albicans, sendo que nenhum

    destes inibiu a formao do biofilme nas concentraes utilizadas.

    Com relao s bactrias cariognicas, Freires et al. (2010), avaliaram, in

    vitro, as atividades antibacteriana e antiaderente das tinturas de Schinus

    terebinthinfolius (Aroeira) e Solidago microglossa (Arnica) frente Streptococcus

    mutans e Lactobacillus casei, concluindo que as tinturas apresentaram, in vitro,

    atividades antibacteriana e antiaderente frente aos microrganismos testados.

    Fosquiera et al. (2008), estudaram solues alcolica e aquosa de prpolis

    marrom e verde e clorexidina, detectando ao antimicrobiana da prpolis sobre P.

    aeruginosa e S. aureus semelhantes clorexidina. Com relao C. albicans, o

    poder antifngico da prpolis, apesar de inferior ao da clorexidina, no deve ser

    desconsiderado, sendo que a prpolis verde apresentou ao antimicrobiana maior

    que a prpolis marrom, indicando que a prpolis pode ser usada como coadjuvante

    no controle do biofilme dental em pacientes HIV-positivo, evitando se os efeitos

    adversos da clorexidina. Enquanto Koo et al. (2000) estudaram a ao

    antimicrobiana dos extratos de prpolis e arnica contra micro-organismos comuns na

    cavidade oral inclusive a Candida albicans, demonstrando melhor atividade para os

    extratos de prpolis comparado aos de arnica.

    Diante dos benefcios da fitoterapia, fica evidente a necessidade da

    avaliao e procura por meios alternativos e, economicamente viveis, sugerindo a

    utilizao da mesma como um recurso de baixo custo dentro de programas

    preventivos e curativos na odontologia (FRANCISCO, 2010).

    3.5 Alecrim (Rosmarinus officinalis)

    O alecrim pertence ao Reino Plantae , Filo Magnoliophyta, Classe

    Magnoliopsida, Ordem Lamiales, Famlia Lamiaceae, Gnero Rosmarinus e Espcie:

    officinalis. Apresenta como nomenclatura binominal Rosmarinus officinalis L.

    (Labiatae) e sinonmia botnica de Rosmarinus latifolius Mill. (LORENZI ; MATOS,

    2002.)

    Rosmarinus officinalis L., conhecido popularmente como alecrim, originrio

    do Mediterrneo, e cultivado em quase todos os pases de clima temperado, e na

    indstria valorizado devido possibilidade de destilao de leo essencial. Al-

  • 27

    Sereitia et al.(1998), citam as propriedades farmacolgicas e aplicaes teraputicas

    do alecrim. Na medicina popular usado como antiespasmdico em clicas renais,

    dismenorria, e alvio dos sintomas nas doenas respiratrias; de acordo com a

    literatura, os extratos de Rosmarinus officinalis relaxam msculo liso da traquia e

    intestino. A planta tem potencial teraputico no tratamento ou preveno da asma

    brnquica, doenas espasmognicas, lceras ppticas, inflamaes, arteriosclerose,

    doenas isqumicas do corao, catarata, cncer (AL-SEREITIA; ABU-AMERB;

    SENA, 1998; SILVA et al., 2007).

    A composio dos extratos varivel, sendo o cido carnsico o

    componente de maior concentrao na frao diterpenide do R. officinalis

    (Okamura et al., (1994), alm de, tambm, exibir a mais alta atividade antioxidante

    (ARUOMA et al., 1992; FRANKEL et al., 1996).

    Outros constituintes importantes so o cido cafeico e rosmarnico que

    tambm tm atividade antioxidante. O cido rosmarnico bem absorvido no trato

    gastrointestinal e na pele; aumenta a produo de prostaglandina E2 e reduz a

    produo de leucotrienos B4 em leuccitos polimorfonucleares (CHEN et al., 1992).

    O cido carnsico propenso a degradao, particularmente em solventes polares

    (OKAMURA et al., 1994; TERNES; SCHWARZ, 1995). Alm disso, sua estabilidade

    fortemente afetada pelo ph e sua ao antioxidante expressivamente maior em

    meio cido (FRANKEL et al., 1996).

    Conforme alguns autores, os extratos aquosos do alecrim, macela, erva-

    mate e malva apresentaram maior atividade antioxidante em torno de 97%, quando

    comparado com outras plantas estudadas como: arruda (Ruta graveolens),

    camomila (Matricaria chamomilla), macela (Achyrocline satureioides), alcachofra

    (Cynara scolymus), erva-mate (Ilex paraguariensis), tanchagem (Plantago major),

    malva (Malva silvestris), slvia (Salvia officinalis), capim-limo (Cymbopogon

    citratus) e alecrim (Rosmarinus officinalis), alm do que os extratos alcolicos de

    todos os chs apresentarem atividade antibacteriana contra Staphylococcus aureus.

    (ASOLINI et al., 2006).

    As partes utilizadas do alecrim so folhas e flores, sendo as folhas usadas

    no preparo de xaropes, infuso, tintura, p e tambm na obteno do leo essencial.

    Na medicina popular, os extratos do alecrim tm sido usados como estimulante

    digestivo, para a falta de apetite, azia, problemas respiratrios e debilidade cardaca.

    Por suas virtudes tnicas e estimulantes, atua sobre o sistema nervoso, contra

  • 28

    cansao mental e fsico. tambm considerado antissptico, colagogo, diurtico,

    anti-espasmdico, cicatrizante, protetor heptico, antitumoral, antidepressivo natural,

    carminativo e vasodilatador (RIDERS DIGEST,1999). Tem sido indicado para uso

    tpico, como cicatrizante, antimicrobiano (Staphylococus e Monilia) e estimulante do

    couro cabeludo. (LORENZI ; MATOS, 2006). Se utilizado em altas dosagens pode

    ser txico, podendo causar aborto, sonolncia, espasmo, gastroenterite, irritao

    nervosa e inclusive grandes doses podem ocasionar o bito (LORENZI ; MATOS,

    2006).

    Os efeitos teraputicos do Rosmarinus officinalis vm sendo comprovados

    em vrios estudos, isso devido ao seu alto potencial antimicrobiano, tanto na forma

    de extratos como de leo essencial, avaliados, principalmente, em bactrias e em

    leveduras (CELIKTAS et al., 2007; LUQMAN et al., 2007; BERNARDES et al., 2010;

    HUSSAIN et al., 2010; CAVALCANTI; ALMEIDA; PADILHA, 2011).

    Pozzatti e colaboradores (2008), avaliaram o efeito antifngico de leos

    essenciais de vrias plantas, inclusive Rosmarinus officinalis, em isolados de

    Candida albicans e no albicans resistentes ao fluconazol, sendo que o leo de R.

    officinalis no demonstrou atividade antifngica. Assim como, doses de 3200g/ml

    do leo essencial de Rosmarinus officinalis foram ineficazes na inibio da formao

    do tubo germinativo da Candida albicans e C. dubliniensis (Pozzatti et al. 2010). De

    acordo com Sivamani et al., (2010) e Castro; Lima (2011), os leos essenciais de R.

    officinalis em isolados de Candida albicans e C. tropicalis envolvidas em infeces

    da cavidade oral tiveram fraca atividade antifngica. Diferente de Soliman et

    al.(1994) que testaram duas amostras de leo essencial de R. officinalis de

    diferentes locais no Egito; a amostra contendo Canfora (14.9%), -pinene (9.3%), e

    1,8-cineole (9.0%) demonstrou uma boa atividade antimicrobiana contra Candida

    albicans, Cryptococcus neoformans e Mycobacterium intracellularae.

    Baseado no crescente aumento da resistncia de Candida spp aos

    antimicrobianos, Hfling et al. (2010), avaliaram os extratos metanlico e

    diclorometano de plantas dentre as quais Rosmarinus officinalis, e concluiram que, o

    extrato metanlico foi eficiente contra essas leveduras. Cavalcanti, Almeida e

    Padilha ( 2011) , avaliaram a atividade antiaderente do leo essencial de alecrim em

    diferentes concentraes e constataram que esse em maior concentrao

    (2,25mg/ml), apresentou atividade antiaderente num tempo de 24h. Enquanto Petran

    & Socaciu (2007), testaram extratos hidroalcolicos de trs plantas inclusive R.

    http://www.cabdirect.org/search.html?q=au%3A%22Petran%2C+M.%22http://www.cabdirect.org/search.html?q=au%3A%22Socaciu%2C+C.%22

  • 29

    officinalis na candidase farngea, concluindo que esses extratos tm ao inibitria

    na candidase em 72 horas. Com relao a atividade antiproteinase de Candida

    albicans proveniente da cavidade oral, usando diferentes extratos de R. officinalis,

    esses demonstraram boa atividade vislumbrando uma terapia alternativa na

    candidase (HFLING et al., 2011).

  • 4 Artigos

    4.1 Artigo 1

    Controle da formao de biofilme por Candida albicans em pacientes usurios

    de prteses dentrias: reviso bibliogrfica

    Maria Elvira Sica Cruzeiro, Marlete Brum Cleff, Mrio Carlos Arajo Meireles

    Submetido Revista Brasileira de Odontologia

  • 31

    CONTROLE DA FORMAO BIOFILME POR CANDIDA ALBICANS EM PACIENTES USURIOS

    DE PRTESES DENTRIAS: REVISO BIBLIOGRFICA

    BIOFIM CONTROL BY CANDIDA ALBICANS IN DENTAL PROTHESIS WEARS: LITERATURE

    REVIEW

    Maria Elvira Sica Cruzeiro1*

    , Marlete Brum Cleff2, Mrio Carlos Arajo Meireles

    3

    1Cirurgi dentista, Programa de Ps-Graduao em Veterinria, UFPel;

    2Professor Adjunto Depto. Clnicas Veterinria, Faculdade de Veterinria, UFPel;

    4Professor Associado Depto. Veterinria Preventiva, Faculdade de Veterinria, UFPel;

    *[email protected]

    RESUMO

    Candida albicans possui habilidade direta ou indireta de aderir-se s superfcies

    resinosas de prteses, iniciando a formao do biofilme. Porm, devido s respostas

    inflamatrias na mucosa bucal, decorrente do contato com as prteses totais, o

    biofilme fngico tornou-se alvo de interesse de pesquisadores. Biofilmes

    representam o crescimento microbiano predominante na natureza, sendo cruciais no

    desenvolvimento de infeces, estando associados a altos nveis de resistncia aos

    antimicrobianos. Usurios de prteses dentrias comumente apresentam

    estomatites protticas pela facilidade de formao de biofilme. O objetivo deste

    trabalho foi reunir informaes sobre controle de candidase oral e biofilme por

    Candida albicans em pacientes usurios de prtese dentrias. Concluindo que a

    diminuio da colonizao por Candida spp. e o impedimento de formao do

    biofilme, continua sendo um desafio na prtica clnica odontolgica, sendo

    necessrio intensificar as pesquisas com substncias com capacidade de inibir ou

    impedir a formao do biofilme, sem prejudicar a sade do paciente.

    Palavras chave: biofilme, Candida albicans

    mailto:*[email protected]

  • 32

    ABSTRACT

    Candida albicans possesses direct or indirect ability to adhere to the surfaces of

    resinous prosthesis, initiating the formation of biofilm. However, due to inflammatory

    responses in the oral mucosa, resulting from the contact with denture, the fungal

    biofilm has become the target of interest to researches. Biofilms represent the

    predominant microbial growth in nature and are crucial in the development of

    infections, associated with high levels of antimicrobial resistance. Prosthesis users

    commonly have stomatitis by the facility of biofilm formation. The objective of this

    study was to get information on controlling oral candidiasis and Candida albicans

    biofilms in patients using dental prosthesis. Concluding that the reduction in

    colonization by Candida spp. and the prevention of biofilm formation remains a

    challenge in clinical practice dentistry. It is necessary to intensify research with

    substances capable of preventing or inhibiting biofilm formation without impairing the

    health of the patient.

    Key words: biofilm, Candida albicans

    INTRODUO

    A Candidase oral uma infeco causada por leveduras do gnero Candida

    que so microrganismos saprbios, e na dependncia de fatores predisponentes,

    tornam-se patognicos (30). Este tipo de infeco mais comum em indivduos

    imunocomprometidos e com crescente incidncia nos ltimos anos (1). Candida

    albicans a espcie mais freqentemente identificada como sendo responsvel por

    este tipo de infeco, no entanto, infeces provocadas por outras espcies do

    gnero so cada vez mais freqentes, sendo citadas aproximadamente 150

    espcies, muitas, isoladas da cavidade oral (2).

  • 33

    A infeco oral mais comum em pacientes portadores de prtese removvel

    a estomatite prottica, associada a Candida spp., existindo porm outras

    manifestaes de Candidase oral (2). A presena de prteses dentrias aumenta a

    prevalncia e a incidncia de unidades formadoras de colnias (UFCs) de Candida,

    o que leva a maior probabilidade de ocorrncia das formas de candidase oral,

    destacando-se com grande prevalncia nos pacientes HIV- positivos e com AIDS (3,

    16, 4, 33). Segundo Perezous e colaboradores a colonizao por Candida em

    usurios de dentadura especialmente os imunodeprimidos, pode ser um empecilho

    para o tratamento e uma barreira para a sade do paciente (28). A frequncia de

    candidose eritematosa (EC), por C.albicans em pacientes com HIV e com AIDS

    usurios de prteses completas, apresenta-se alta, embora outras espcies tambm

    tenham sido encontradas e com altos nveis de produo de proteinase. As

    manifestaes de EC podem estar relacionadas com a capacidade de produo

    destas enzimas, sendo que terapias combinadas com inibidores de proteinases

    desempenham um importante papel no controle da EC. (1).

    O biofilme dental o fator de maior importncia na etiologia das doenas

    periodontais, apresentando uma relao muito grande com a m higiene oral, e a

    colonizao por Candida (27, 2, 37). Segundo Gasparetto, a produo de biofilme

    ocorre com freqncia (64%) por espcies de Candida no albicans, sendo que a

    maior porcentagem ocorreu nos pacientes portadores de prtese e com leses na

    cavidade oral; segundo o autor isto est associado ao potencial patognico destes

    isolados (15). A composio do biofilme afetada pelo tempo de formao e pelos

    materiais usados na confeco de dentaduras em portadores de dentaduras

    completas (26).

    Com relao adeso de Candida spp. s superfcies de prteses dentrias,

  • 34

    vrios trabalhos tem sido desenvolvidos (7,25). Ao avaliar a influncia da rugosidade

    superficial, bem como superfcie livres de energia e saliva na adeso das espcies

    de Candida em prteses acrlicas, foi demonstrado que as superficies rugosas

    propiciam maior adeso do que as lisas (7,25). Sendo que a adeso tambm

    depende do tipo de material empregado (24, 20). O uso do revestimento de base de

    prtese e um elastmero de silicone podem efetivamente reduzir adeso de Candida

    albicans e com isso diminuir a incidncia de estomatite prottica por esta levedura

    (42). Em seu trabalho Silva et al.(2010), avaliaram a capacidade de adsoro de C.

    albicans em quatro materiais utilizados em bases de prteses removveis, sendo

    observada maior reteno de C. albicans na resina de poliamida (37). Entretanto, ao

    correlacionar a adeso de C. glabrata e C. albicans com a rugosidade superficial de

    diferentes materiais, base de polimetilmetacrilato leve e pesado e base de silicone

    leve, no foi demonstrado correlao entre a rugosidade superficial e a adeso das

    leveduras (14).

    A desinfeco por microondas em dentaduras completas tem sido

    recomendada para tratar estomatites dentrias por Candida em pacientes

    imunocompetentes (36). Diferentes tempos de exposio de irradiao por

    microondas na desinfeco de resinas tem sido estudados sendo demonstrado que

    irradiao por 3 minutos pode ser um tratamento eficaz na desinfeco e

    esterilizao de dentaduras com biofilmes por alguns microrganismos, entre eles

    Candida albicans (22,32,23,36) . Silva, et al., (2006), em seu estudo, constataram

    que o uso de irradiao por microondas durante 6 min. 650W, produz esterilizao

    das dentaduras completas contaminadas por Staphylococcus aureus e C. albicans,

    alm de desinfeco daquelas contaminadas com Pseudomonas aeruginosa e

    Bacterides subtilis (38).

  • 35

    Entretanto, a remoo mecnica constitui um dos mtodos mais aceitos para

    o controle do biofilme dentrio por Candida spp., mas o uso de coadjuvantes

    qumicos bastante valioso. Neste sentido, Jardim Jr., et al.,(1998) e Vieira et al.

    (2010) avaliaram a eficcia de substncias higienizadoras como perxido alcalino

    contendo enzima, hipoclorito de sdio (NaOCl) 0.5% ou gua destilada a fim de

    impedir a recolonizao por Candida sp. em revestimentos de superfcies de

    dentaduras a base de metilmetacrilato, e verificaram que no houve diferena

    significativa com relao s condies de recolonizao das espcies de Candida,

    no entanto, o hipoclorito de sdio foi o nico tratamento que removeu o biofilme de

    forma eficiente (17,41) . Ferreira et al. (2009), realizaram estudos com trs solues

    desinfetantes para higienizao das prteses totais, demonstrando alta adeso de

    C. glabrata nessas, sendo que o NaOCl 0.5% foi mais eficiente no controle da

    adeso das leveduras( 14 ).

    A atividade antimicrobiana de enxaguatrios bucais a base de digluconato de

    clorexidina 0,12%, fluoreto de sdio 0,05% (Ca) e digluconato de clorexidina 0,06%,

    fluoreto de sodio 0,05% e acetato de zinco 0,34% (Or), foi comparada a

    enxaguatrio com etanol, base de gluconato de clorexidina 0,12% em isolados de

    Candida albicans demonstrando que o grupo Ca apresentou atividade fungicida

    sobre C. albicans semelhante ao controle, mas menor ao fungisttica, enquanto

    que o Or apresentou apenas ao fungisttica semelhante ao controle nos isolados

    avaliados (21).

    Com relao ao tratamento da estomatite prottica aps adaptao e

    formao do biofilme, o mesmo deve ser realizado utilizando-se frmacos

    antimicrobianos como antisspticos, antibacterianos ou antifngicos. Com vista dos

    efeitos colaterais que possam ocorrer, a medicao sistmica somente indicada

  • 36

    em infeces bucais quando no h resposta medicao tpica (9).

    Os tratamentos sistmicos tem sido realizados com antifngicos do grupo dos

    azis, mas de acordo com a literatura, o uso de fluconazol pode estar associado

    hepatotoxicidade e nefrotoxicidade principalmente nos pacientes hepatopatas e

    nefropatas (9; 11; 40). Entretanto, tem sido demonstrado que o cetoconazol mais

    citotxico do que o fluconazol, efeito dose e tempo de aplicao dependente (34).

    Tem sido descrito a ocorrncia de resistncia natural aos frmacos

    antifngicos (8). Existe tambm a preocupao do aumento da patogenicidade de

    espcies menos virulentas que Candida albicans, mas que so resistentes ao

    fluconazol, como por exemplo, Candida krusei (11). Assim, novos antifngicos tem

    sido avaliados no tratamento infeces por Candida fluconazol resistente. Somchit et

    al. (2012), estudaram o voriconazol, quanto a hepatotoxicidade e nefrotoxicidade em

    potencial. Os resultados demonstraram que o voriconazol no induz

    significantemente hepatotoxicidade e nefrotoxicidade at mesmo em altas doses.

    Coskun et al, 2012, detectaram em seu estudo severa toxicidade com o ornidazol

    aps uso prolongado.

    Mais modernamente a terapia fotodinmica tem sido avaliada para remoo

    de biofilme. Esta terapia consiste na utilizao de raio Lazer associados a

    substncias fotossensibilizadoras, sendo que os estudos demonstraram a

    efetividade deste procedimento para desinfeco de dentaduras (5, 31).

    Neste sentido, estudos recentes tem tentado definir o controle gentico do

    biofilme (6). A resistncia s drogas adquirida no incio e parece ser regida por

    diferentes mecanismos em precoce e tardio biofilme. Segundo Blankenship (2006),

    h emergncia de estratgias genmicas para descobrir os eventos especficos

    relacionados, tais como a formao de hifas na definio da fixao do biofilme.

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Coskun%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=22691836

  • 37

    Segundo Pinto (2010), a determinao do quanto certos genes esto envolvidos na

    formao do biofilme, primordial para o desenvolvimento de estratgias de controle

    da patogenicidade destes. Rouabhia et al. (2012) demonstraram que um mutante

    Caecm33 de Candida albicans reduz a formao do biofilme e causa menos

    danos na mucosa oral, propondo que seja um novo objetivo para prevenir e tratar

    infeces por Candida. Sugerindo ainda, que o gen ECM33 da Candida

    desempenha ativo papel na interao candida / hospedeiro e responsvel pelos

    danos nos tecidos que leva candidase.

    Tendo-se em vista as dificuldades e os vrios fatores que interferem no

    tratamento da candidose e do biofilme com agentes antifngicos polinicos ou azis

    (13, 12; 18), faz-se necessrio estudar outras terapias mais eficazes, e com menor

    efeito colateral ao paciente. Nesse sentido, nas ltimas dcadas, tem-se aumentado

    o uso de extratos vegetais no controle do biofilme e para a preveno de doenas

    bucais.(FRANCISCO, 2010). Relatos na literatura tm demonstrado que muitos

    extratos apresentam atividade antimicrobiana sobre patgenos bucais entre eles,

    Candida albicans (19). Alves et al.(2009) obtiveram resultados promissores quando

    avaliaram in vitro, a atividade antimicrobiana, antifngica e antiaderente da aroeira-

    do-serto, malva e goiabeira sobre microrganismos do biofilme dental e candidose

    oral. Os extratos mostraram-se eficazes, inibindo o crescimento das bactrias e

    fungos do biofilme dental e da candidose oral, sugerindo a utilizao dessas plantas

    como meio alternativo na teraputica odontolgica.

    CONSIDERAES FINAIS

    De acordo com o exposto, fica evidente a importncia de leveduras do gnero

    Candida em diversas patologias ou enfermidades da cavidade oral, destacando-se

  • 38

    C. albicans por seu potencial patognico incluindo capacidade de adeso e

    produo de proteinases entre outros. Os pacientes HIV positivos e portadores de

    prtese removveis, apresentam-se como grupos de risco, com maior prevalncia e

    incidncia destas infeces, sendo mais susceptveis a colonizao e manifestao

    de estomatite fngica induzida por Candida spp.

    O tipo de material utilizado nas prteses dentrias influencia na formao do

    biofilme, entretanto mtodos qumicos e mecnicos podem diminuir ou eliminar

    temporariamente a formao destes. Muitos fatores influenciam nestes resultados,

    sendo importantes os tipos de microrganismos que constituem os biofilmes, pois em

    geral apresentam caractersticas fenotpicas diferentes das clulas em suspenso,

    tais como um aumento de resistncia aos antifngicos, e maior resistncia frente s

    defesas do hospedeiro.

    Em sntese a diminuio da colonizao por Candida spp. e o impedimento de

    formao do biofilme, continua sendo um desafio na prtica clnica odontolgica,

    sendo necessrio intensificar as pesquisas com substncias com capacidade de

    inibir ou impedir a formao do biofilme, sem prejudicar a sade do paciente.

    REFERNCIAS

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  • 39

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