valutazione della ploidia del dna in carcinomi e lesioni potenzialmente maligne del cavo orale:...
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VALUTAZIONE DELLA PLOIDIA DEL DNA IN CARCINOMI E LESIONI POTENZIALMENTE
MALIGNE DEL CAVO ORALE: CONFRONTO FRA CITOMETRIA A FLUSSO E STATICA
A. Marsico; I. Rostan; M. Pentenero; S. Gandolfo; R. Navone
La sopravvivenza del carcinoma squamoso orale non solo è più bassa di quella dei
tumori più comuni, ma, soprattutto, non è migliorata negli ultimi 25 anni, dal
momento che questo tumore è spesso diagnosticato in stadi avanzati (1)
(1) MASHBERG A et al: Appearance, site of occurrence, and physical and clinical
characteristics of oral carcinoma in Torino (Italy). Cancer 63: 2522-7, 1989
La sopravvivenza del carcinoma squamoso orale non solo è più bassa di quella dei
tumori più comuni, ma, soprattutto, non è migliorata negli ultimi 25 anni, dal
momento che questo tumore è spesso diagnosticato in stadi avanzati (1)
(1) MASHBERG A et al: Appearance, site of occurrence, and physical and clinical
characteristics of oral carcinoma in Torino (Italy). Cancer 63: 2522-7, 1989
Il ritardo diagnostico può Il ritardo diagnostico può dipendere nella difficoltà dipendere nella difficoltà
diagnostica, sicuramente la diagnostica, sicuramente la variabilità della diagnosi variabilità della diagnosi istologica nelle lesioni istologica nelle lesioni
squamose orali è più alta che squamose orali è più alta che in altre sedi in altre sedi (1(1,, 2) 2)
1.1. Karabulut A et al: Observer variability in the Karabulut A et al: Observer variability in the histologic assessment of oral premalignant histologic assessment of oral premalignant
lesions.lesions.J Oral Pathol Med 24: 198-200, 1995J Oral Pathol Med 24: 198-200, 1995
2. Pindborg JJ et al: Subjectivity in evaluating 2. Pindborg JJ et al: Subjectivity in evaluating oral epithelial dysplasia, carcinoma oral epithelial dysplasia, carcinoma in situin situ and and
initial carcinoma. J Oral Pathol 14:698-708, initial carcinoma. J Oral Pathol 14:698-708, 19851985
Il ritardo diagnostico può Il ritardo diagnostico può dipendere nella difficoltà dipendere nella difficoltà
diagnostica, sicuramente la diagnostica, sicuramente la variabilità della diagnosi variabilità della diagnosi istologica nelle lesioni istologica nelle lesioni
squamose orali è più alta che squamose orali è più alta che in altre sedi in altre sedi (1(1,, 2) 2)
1.1. Karabulut A et al: Observer variability in the Karabulut A et al: Observer variability in the histologic assessment of oral premalignant histologic assessment of oral premalignant
lesions.lesions.J Oral Pathol Med 24: 198-200, 1995J Oral Pathol Med 24: 198-200, 1995
2. Pindborg JJ et al: Subjectivity in evaluating 2. Pindborg JJ et al: Subjectivity in evaluating oral epithelial dysplasia, carcinoma oral epithelial dysplasia, carcinoma in situin situ and and
initial carcinoma. J Oral Pathol 14:698-708, initial carcinoma. J Oral Pathol 14:698-708, 19851985
Malgrado le nuove teconologie Malgrado le nuove teconologie (liquid-based and computer (liquid-based and computer
assisted cytology, AgNORs, ICC, assisted cytology, AgNORs, ICC, etc.) abbiano migliorato la etc.) abbiano migliorato la
sensibilità e specificità della sensibilità e specificità della citologia esfoliativa orale per la citologia esfoliativa orale per la diagnosi di displasia/neoplasia, diagnosi di displasia/neoplasia,
alcuni casi restano non alcuni casi restano non diagnosticati(1, 2)diagnosticati(1, 2)
1. Navone R et al: Usefulness of oral cytology for 1. Navone R et al: Usefulness of oral cytology for the diagnosis of oral squamous dysplasia and the diagnosis of oral squamous dysplasia and carcinoma. Minerva Stomatol 53: 77-86, 2004carcinoma. Minerva Stomatol 53: 77-86, 2004
2. Navone R et al: The impact of liquid-based oral 2. Navone R et al: The impact of liquid-based oral cytology on the diagnosis of oral dysplasia and cytology on the diagnosis of oral dysplasia and
carcinoma. Cytopathology in presscarcinoma. Cytopathology in press
Malgrado le nuove teconologie Malgrado le nuove teconologie (liquid-based and computer (liquid-based and computer
assisted cytology, AgNORs, ICC, assisted cytology, AgNORs, ICC, etc.) abbiano migliorato la etc.) abbiano migliorato la
sensibilità e specificità della sensibilità e specificità della citologia esfoliativa orale per la citologia esfoliativa orale per la diagnosi di displasia/neoplasia, diagnosi di displasia/neoplasia,
alcuni casi restano non alcuni casi restano non diagnosticati(1, 2)diagnosticati(1, 2)
1. Navone R et al: Usefulness of oral cytology for 1. Navone R et al: Usefulness of oral cytology for the diagnosis of oral squamous dysplasia and the diagnosis of oral squamous dysplasia and carcinoma. Minerva Stomatol 53: 77-86, 2004carcinoma. Minerva Stomatol 53: 77-86, 2004
2. Navone R et al: The impact of liquid-based oral 2. Navone R et al: The impact of liquid-based oral cytology on the diagnosis of oral dysplasia and cytology on the diagnosis of oral dysplasia and
carcinoma. Cytopathology in presscarcinoma. Cytopathology in press
““La diagnosi istocitologica di La diagnosi istocitologica di displasia indica nulla di più di una displasia indica nulla di più di una
lesione che ha un aumentato lesione che ha un aumentato rischio di trasformazione maligna, rischio di trasformazione maligna,
tuttavia questo dato non può tuttavia questo dato non può essere usato come indicatore essere usato come indicatore prognostico affidabile su ogni prognostico affidabile su ogni
singolo caso. Sono richiesti studi su singolo caso. Sono richiesti studi su potenziali biomarcatori per potenziali biomarcatori per
ottenere una maggiore ottenere una maggiore obbiettività”obbiettività”
Abbey LM et al: Intraexaminer and Abbey LM et al: Intraexaminer and interexaminer reliability in the diagnosis of oral interexaminer reliability in the diagnosis of oral
dysplasia. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 80: dysplasia. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 80: 188-191, 1995)188-191, 1995)
““La diagnosi istocitologica di La diagnosi istocitologica di displasia indica nulla di più di una displasia indica nulla di più di una
lesione che ha un aumentato lesione che ha un aumentato rischio di trasformazione maligna, rischio di trasformazione maligna,
tuttavia questo dato non può tuttavia questo dato non può essere usato come indicatore essere usato come indicatore prognostico affidabile su ogni prognostico affidabile su ogni
singolo caso. Sono richiesti studi su singolo caso. Sono richiesti studi su potenziali biomarcatori per potenziali biomarcatori per
ottenere una maggiore ottenere una maggiore obbiettività”obbiettività”
Abbey LM et al: Intraexaminer and Abbey LM et al: Intraexaminer and interexaminer reliability in the diagnosis of oral interexaminer reliability in the diagnosis of oral
dysplasia. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 80: dysplasia. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 80: 188-191, 1995)188-191, 1995)
““Tre problemi maggiori sono collegati Tre problemi maggiori sono collegati all’importanza della displasia epiteliale nel all’importanza della displasia epiteliale nel
predire l’evoluzione maligna”predire l’evoluzione maligna”
1.“Sebbene i criteri per formulare una diagnosi di displasia 1.“Sebbene i criteri per formulare una diagnosi di displasia siano ben codificati, la diagnosi finale è essenzialmente siano ben codificati, la diagnosi finale è essenzialmente
soggettiva”soggettiva”
2. “Sebbene un incremento del rischio di sviluppare una 2. “Sebbene un incremento del rischio di sviluppare una lesione maligna sia ben documentato dove è presente lesione maligna sia ben documentato dove è presente displasia epitaliale, non tutte quete lesioni diverranno displasia epitaliale, non tutte quete lesioni diverranno
maligne”maligne”
3. “Il carcinoma può svilupparsi anche da lesioni”in cui la 3. “Il carcinoma può svilupparsi anche da lesioni”in cui la displasia epiteliale non era stata diagnosticata in displasia epiteliale non era stata diagnosticata in
precedenti biopsie”precedenti biopsie”
Reibel J: Prognosis of oral pre-malignant lesions: Reibel J: Prognosis of oral pre-malignant lesions: significancesignificance
of clinical, histopathological, and molecular biological of clinical, histopathological, and molecular biological characteristics. Crit Rev Oral Biol Med 14: 47-62, 2003characteristics. Crit Rev Oral Biol Med 14: 47-62, 2003
““Tre problemi maggiori sono collegati Tre problemi maggiori sono collegati all’importanza della displasia epiteliale nel all’importanza della displasia epiteliale nel
predire l’evoluzione maligna”predire l’evoluzione maligna”
1.“Sebbene i criteri per formulare una diagnosi di displasia 1.“Sebbene i criteri per formulare una diagnosi di displasia siano ben codificati, la diagnosi finale è essenzialmente siano ben codificati, la diagnosi finale è essenzialmente
soggettiva”soggettiva”
2. “Sebbene un incremento del rischio di sviluppare una 2. “Sebbene un incremento del rischio di sviluppare una lesione maligna sia ben documentato dove è presente lesione maligna sia ben documentato dove è presente displasia epitaliale, non tutte quete lesioni diverranno displasia epitaliale, non tutte quete lesioni diverranno
maligne”maligne”
3. “Il carcinoma può svilupparsi anche da lesioni”in cui la 3. “Il carcinoma può svilupparsi anche da lesioni”in cui la displasia epiteliale non era stata diagnosticata in displasia epiteliale non era stata diagnosticata in
precedenti biopsie”precedenti biopsie”
Reibel J: Prognosis of oral pre-malignant lesions: Reibel J: Prognosis of oral pre-malignant lesions: significancesignificance
of clinical, histopathological, and molecular biological of clinical, histopathological, and molecular biological characteristics. Crit Rev Oral Biol Med 14: 47-62, 2003characteristics. Crit Rev Oral Biol Med 14: 47-62, 2003
Il contenuto di DNA cellulare Il contenuto di DNA cellulare (ploidia) (ploidia) è considerato un è considerato un
marcatore affidabile per predire marcatore affidabile per predire l’evoluzione di lesioni orali l’evoluzione di lesioni orali
potenzialmente maligne (PMLs) potenzialmente maligne (PMLs) (1, 2)(1, 2)
1.1. Greenspan DGreenspan D et al: The white lesion that kills – et al: The white lesion that kills – Aneuploid dysplastic oral leukoplakia.Aneuploid dysplastic oral leukoplakia.
N Engl J Med 350: 1382-1384, 2004N Engl J Med 350: 1382-1384, 20041.1. Pentenero M et al: Flow cytometric analysis of Pentenero M et al: Flow cytometric analysis of
DNA ploidy using oral scrapings obtained by DNA ploidy using oral scrapings obtained by curette. 11th International Congress on Oral curette. 11th International Congress on Oral
Cancer, Grado (Italy), 14-17 May 2006Cancer, Grado (Italy), 14-17 May 2006
Il contenuto di DNA cellulare Il contenuto di DNA cellulare (ploidia) (ploidia) è considerato un è considerato un
marcatore affidabile per predire marcatore affidabile per predire l’evoluzione di lesioni orali l’evoluzione di lesioni orali
potenzialmente maligne (PMLs) potenzialmente maligne (PMLs) (1, 2)(1, 2)
1.1. Greenspan DGreenspan D et al: The white lesion that kills – et al: The white lesion that kills – Aneuploid dysplastic oral leukoplakia.Aneuploid dysplastic oral leukoplakia.
N Engl J Med 350: 1382-1384, 2004N Engl J Med 350: 1382-1384, 20041.1. Pentenero M et al: Flow cytometric analysis of Pentenero M et al: Flow cytometric analysis of
DNA ploidy using oral scrapings obtained by DNA ploidy using oral scrapings obtained by curette. 11th International Congress on Oral curette. 11th International Congress on Oral
Cancer, Grado (Italy), 14-17 May 2006Cancer, Grado (Italy), 14-17 May 2006
Scopo della ricerca comparare la ploidia studiata con citometria a flusso (FCM 211 casi) e statica
(ICM 45 casi) con le diagnosi cito istologiche nelle PMLs
Materiali e metodi Il materiale da scraping è stato conservato in liquido di Thin prep e in soluzione
salina . Per la ploidia sono stai usati un citofluorimetro FACSCalibur (Beckton Dickinson)
con un kit di reagenti Cycletest Plus DNA. Il Dna index è stato elaborato mediante il
software ModFit. I campioni sono stati considerati inadeguati se I detriti cellulari erano > 20%, le cellule acquisite
<10.000 e il coefficiente di variazione >5%.
I 45 casi studiati con ICM sono stati fissati in Thin Prep e trattati dalla Ditta Perceptronix, Vancouver
BC, Canada (Dr. A. Doudkine)
Scopo della ricerca comparare la ploidia studiata con citometria a flusso (FCM 211 casi) e statica
(ICM 45 casi) con le diagnosi cito istologiche nelle PMLs
Materiali e metodi Il materiale da scraping è stato conservato in liquido di Thin prep e in soluzione
salina . Per la ploidia sono stai usati un citofluorimetro FACSCalibur (Beckton Dickinson)
con un kit di reagenti Cycletest Plus DNA. Il Dna index è stato elaborato mediante il
software ModFit. I campioni sono stati considerati inadeguati se I detriti cellulari erano > 20%, le cellule acquisite
<10.000 e il coefficiente di variazione >5%.
I 45 casi studiati con ICM sono stati fissati in Thin Prep e trattati dalla Ditta Perceptronix, Vancouver
BC, Canada (Dr. A. Doudkine)
CITOMETRIA A FLUSSOCITOMETRIA A FLUSSO
CITOMETRIA STATICA
CITOMETRIA STATICA
Risultati della citometria a fllusso:
Percentuali di anneuploidia
Risultati della citometria a fllusso:
Percentuali di anneuploidia
16/70 (22.8%)16/70 (22.8%)Lesioni senza displasiaLesioni senza displasia
24/40 (60.0%) 24/40 (60.0%)K. Squamoso K. Squamoso
140/190 (73.7%)140/190 (73.7%)Casi adeguatiCasi adeguati
17/30 (56.7%)
17/30 (56.7%) Lesioni con
displasiaLesioni con displasia
Risulati della citometria statica (image):
Percentuali di aneuploidia
Risulati della citometria statica (image):
Percentuali di aneuploidia
4/16 (25.0%) 4/16 (25.0%)Lesioni senza displasiaLesioni senza displasia
7/9 (77.7%)7/9 (77.7%)K . squamosoK . squamoso
37/45 (82.2%)37/45 (82.2%)Casi adeguatiCasi adeguati
8/12 (66.7%)
8/12 (66.7%)
Lesioni con displasiaLesioni con displasia
CONCLUSIONI CONCLUSIONI
L’ICM ha dimostrato una sensibilità lievemente superiore alla FCM in carcinomi e displasie orali, mentre i risultati per le PML senza displasia sono
sovrapponibili, per cui si può affermare che lo studio del DNA con ICM e/o FCM può dare utili informazioni. In particolare, la presenza di aneuploidia in lesioni orali senza evidenza morfologica (istologica o citologica) di displasia può avere impor-tanza prognostica, sia che si
tratti di leuco-eritroplachie, che dei marginidi una resezione per carcinoma
L’ICM ha dimostrato una sensibilità lievemente superiore alla FCM in carcinomi e displasie orali, mentre i risultati per le PML senza displasia sono
sovrapponibili, per cui si può affermare che lo studio del DNA con ICM e/o FCM può dare utili informazioni. In particolare, la presenza di aneuploidia in lesioni orali senza evidenza morfologica (istologica o citologica) di displasia può avere impor-tanza prognostica, sia che si
tratti di leuco-eritroplachie, che dei marginidi una resezione per carcinoma