Originalno istraivanje Antifungalna aktivnost vrednovanje razliitih ekstrakata Bergenia stracheyi Vinesh Kumar * i Devendra Tyagi

UvodRod Bergenia pripada porodici SAXIFRAGACEAE. Postrojenje roda poznatije kao Paashanbheda (Paashan = Rockstone, beda = piercing) u Hindu, koji i sam ukazuje na to da biljka raste izmeu stijena i ini da se probije ili da posjeduje lithotriptic imovinu.Bergenia stracheyi je prijavljen od Afganistana do Uttarakhand (Indija) izmeu 3300-4500 m nadmorske visine u oblik ogromne fleke u subalpskim i Alpskim podrujima. Literatura predlae koje da su koriste vrste Bergenia u folklor i autohtonim sistemima Bergenia vrsta koje su prijavljene posjeduju adstrigentna, tonik, antiskorbutska, i laksativna svojstva. Vrste od roda bergenia su data za lijeenje plunih bolesti, dizenterija, ireva, dizurija, proirenja slezene, kalja i groznice.Postoji velika potranja za novim fungicidima za upotrebu u zatiti hrane, poljoprivrede i medicine. U posljednjih nekoliko godina dolo je rastueg trenda za procjenu antimikrobnih aktivnost ekstrakata i izolata od ljekovitog bilja, jer otpor razvijen od strane patogena, bruto nuspojave sintetikih droga, zbog neselektivnog koritenja i njihovog skupog reima lijeenja (Nychas, 1995. Tauxe, 1997. Cowan, 1999. Smid i Gorris 1999. godine; Sharif, 2001. i Tomoko et al., 2002).U posljednje vrijeme, biljni ekstrakti i izolati su bili podvrgnuti rigoroznim bio-hemijskim, hemijskim, klinikim, farmakolokim, toksikolokim istragama i mnogim novim terapeutskim aplikacijama koje su nastale (Pinheiro, 1987, i Takahashi, 2001). Ova studija je bio pokuaj da se istrae i procijene antifungalne aktivnost razliitih ekstrakata pripremljen od B. stracheyi.U naem prethodnom istraivanju,nisu uoene antifungalne aktivnost Bergenia stracheyi (Vinesh Kumar i Devendra Tyagi, 2013.). Stoga, sadanji istraivaki rad bio je poduzet kako bi se utvrdile antifungalne aktivnosti razliitih ekstrakata B. stracheyi.

Materijali i metode Prikupljanje biljaka i vaenjeBergenia stracheyi su prikupljeni iz nagiba Alpa Kumaun Himalaya Uttarakhand drave, Indija. Identifikacija Bergenia stracheyi je uinjena uz pomo Odjela za botaniku, D.A.V. (P.G.) College, Dehradun, Uttarakhand. Prije ekstrakcije biljna tkiva su suena pod kontrolisanim uvjetima u laboratoriju. Sueno korijenje i rizomi B. stracheyi su bili podvrgnuti smanjenju u grubi prah koristei eki za bruenje. Grubi prah je izvaen iz organskog otapala razliitih polariteta (TJ naftnih eter, kloroform, etil acetata i etanola) u Soxhlet ekstraktor. Sirovi ekstrakti su isparili do suhoe u rotator ispariva pod niskim temperaturama i smanjenim pritiskom. Antifungalna aktivnostAntifungalna aktivnost je testirana protiv est vrsta gljiva viz. Alternaria Alternativna, Aspergillus niger, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporium, Ganoderma lucidum i Rhizoctonia solani.different gljive. Antifungalna studija je provedena u dva navrata.Inhibicija koncentracije (IC50) i minimalne inhibitorne koncentracije (MIC). Inhibicija koncentracije (IC50)IC50 je koncentracija na kojoj 50 posto javlja inhibicija rasta micelija test gljiva. Studija je sprovedena po tehnici otrovane hrane pomou razliitih koncentracija ekstrakata protiv svih est test gljiva. Minimalne inhibitorne koncentracije (MIC)MIC je utvreno i da koncentracija iznad koje je rast gljivica potpuno potisnut i ispod koje je nastavljen rast gljivica. MIC na kojem je rast micelija test gljiva vien ili 100 posto inhibicija rasta gljiva je odreen. Studija je provedena od strane tehnike otrovane hrane koristei razliite koncentracije ekstrakata protiv svih est test gljiva. Postupak IC50 i MICKultura testa gljiva je narasla na krumpir dekstroznom agaru (PDA) medij za odreeni period (obino 7 dana) na optimalnoj temperaturi (25 1 C) za rast. Otapala koja se koriste za otapanje ekstrakta je odreena na temelju polariteta. PDA je dopunjen sa razliitim biljnim ekstraktima u etiri koncentracije (0,5, 1,0, 1,5, i 2,0%) koje se sipaju u Petri posude pod aseptinim uvjetima. Nakon ovravanja, mali dio (0,5 cm promjera.) od kulture gljivice je smanjen sa sterilnom builicom od pluta i prebaen aseptino naopako u sreditu Petri posude.Pogodna provjere su odravane, gdje su diskovi kulture uzgajan pod istim uvjetima na PDA bez ekstrakta. Solventi provjere su odravani na provjeri kroz inhibitorni uinak otapala na gljive u kojima je PDA pomijeana s otapalom (otapalo, koji se koristi za rastvaranja ekstrakta). Petri posude se inkubiraju na 25 1 C. Radijalnih est gljiva su odabrane za bioprocjene viz. Alternaria Alternativna, Aspergillus niger, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporium, Ganoderma lucidum i Rhizoctonia solani. Rast kolonija gljivica je izmjeren nakon svakih 24h dokada su gljivice u kontrolnoj tablici potpuno okupirane.Tri ponavljanja su odravana kod svakog tretmana. Antifungalna aktivnost je ocijenjena od strane mjerenja relativnog rasta gljiva u tretmanu spram kontrole. Da bi se odralo aseptiko stanje (rije aseptiki sredstva bez mikroorganizama) u cijelom eksperimentu je vrlo vano. Procenat inhibicije rasta oko kontrole se radi koritenjem formule: I = C-T / C x 100Gdje je , I je postotak inhibicije, C promjer je kolonija u kontroli (cm) i T je promjer kolonija u tretmanu (cm) (Janssen et al, 1986.;. i Barrata et al, 1998).

Rezultati i diskusijaAntifungalna aktivnost svih ekstrakata Bergenia stracheyi je izvren u dva koraka i shodno tome rezultati se raspravljaju kako slijedi:Inhibicija koncentracije (IC50)U etil acetat, kloroform, etanol i naftni eter ekstrakti B. Stracheyi je prikazan po tehnici otrovane hrane odabrane iz njihovih koncentracija na kriterij od vie od 50 posto inhibicija radijalnog rasta razliitih gljiva.Antifungalni skrining ekstrakta etanola Rezultati antigljivinog skrininga ekstrakta etanola Bergenia stracheyi su date u tabeli broj 1.1 i komparativna efikasnost je prikazana na slici. br. 1.1. Kada se interakcija izmeu gljivica i koncentracija studiraju, uoeno je da gljive inhibiraju vie od 50 posto na najnioj koncentraciji od0,5 posto. Rezultati pokazuju da je na 0,5 koncentraciji postotak etilalkoholnog ekstrakta imao maksimalno 40 posto inhibicije rasta protiv R. solani i najnia 10 posto protiv Fusarium oxysporium. Dvije test gljive, F. oxysporium i G. lucidium imale su manje od 50 posto inhibicije rasta u koncentracija 1,5 posto, dok su preostale etiri gljive inhibirane vie od 50 posto. Na 2,5 posto ekstrakt koncentracije je najefikasniji protiv A.niger.Na 3,5 posto koncentracije, kompletno smanjenje rasta posmatrano je protiv A. Alternativna, A. niger, G. lucidium i R. solani. Antifungalna aktivnost etanolnog ekstrakta B. Stracheyi nije bila izvanredno efikasna protiv dvije testa gljive, odnosno C. gloeosporiodes i F. oxysporium.Tabela.1.1 Utjecaj razliitih koncentracija ekstrakta etanola na radijalni rast gljivica Bergenia stracheyi

Antifungalne projekcije kloroform ekstraktaRezultati antigljivinog skrininga kloroform ekstrakt Bergenia stracheyi dati su u tabeli 1.2. i komparativna efikasnost je prikazana grafiki na sl.1.2. Rezultati su pokazali da je na 0,5 posto koncentracije kloroform ekstrakt imao smanjenje rasta protiv C. gloeosporiodes, R. solani, i G. Lucidium ali nikakva aktivnost nije uoena za A. Alternativna, A. niger i F. oxysporium. U 37,7 posto inhibicije rasta na 1,5 posto uoen je protiv G. lucidium, 36,8 posto protiv R. solani, 27.8 posto protiv C. gloeosporiodes, 12.3 posto protiv A. Alternativna, 10 posto protiv F. oxysporium, a 7,5 posto protiv A. niger.Na 2,5 posto koncentracije maksimalni rast inhibicije uoen je 57,3 posto u odnosu G. lucidium. Na 3,5 posto koncentracije inhibicije rasta su bile 45 posto, 25 posto, 79,2 posto, 49,7 posto, 83,5 posto i 72,2 posto za A. alternativni, A. niger, C. gloeosporiodes, F. oxysporium, G. lucidium i R. Solani respektivno. Stoga se moe zakljuiti da kloroform ekstrakt B. stracheyi nije bio vrlo efikasan za antifungalne aktivnosti.Antifungalni skrining etil acetata Rezultati antigljivinog skrininga etil acetata ekstrakt Bergenia stracheyi su dati u tabeli 1.3, i komparativna efikasnost je prikazana grafiki na sl.br. 1.3. Rezultati su pokazali da 0,5 posto koncentracije etil acetata ima neke antifungalne aktivnosti. Inhibicija rasta na 1,5 posto uoena 27,8 posto protiv C. gloeosporiodes, 26,2 posto protiv A. niger, 25 posto protiv A. Alternativna, 22,2 posto protiv R. solani, 13 posto protiv G. lucidium, i 9 posto u odnosu F.oxysporium. Na 2,5 posto koncentracije maksimalni rast inhibicije potovan 38,4 posto protiv C. gloeosporiodes. Na 3,5 posto koncentracije inhibicije rasta bile su 45 posto, 42,3 posto, 43,5 posto, 24 posto, 26,5 posto i 38 posto za A. Alternativna, A. niger, C. gloeosporiodes, F. oxysporium, G. lucidium i R. Solani respektivno.Kada se interakcija izmeu gljivica i koncentracija studira, uoeno je da do 3,5 posto svih testiranja gljive imale manje od 50 posto smanjenja rasta. Tako se moe zakljuiti da ekstrakt etil acetata B. stracheyi nije bio na snazi za antifungalnu aktivnost.

Antifungalni skrining eter ekstraktaRezultati etera ekstrakta B. Stracheyi dati su u tabeli br.1.4, i grafiki, zastupljenost antifungalne aktivnost od eter ekstrakta je prikazan na slici.br. 1.4. Rezultati su pokazali da 0,5 posto koncentracija eter ekstrakta ima neke antifungalne aktivnosti. Inhibicija rasta na 1,5 posto koncentracije 27.9 posto protiv C. gloeosporiodes, 24.4 posto protiv A. Alternativna, 23 posto protiv A. niger, 19,6 posto protiv R. solani, 16,4 posto u odnosu F.oxysporium i 8 posto u odnosu G. lucidium. na 2.5 posto maksimalne koncentracije inhibicije rasta posmatrano 38,3 posto protiv C. Gloeosporiodes.Na 3,5 posto koncentracije inhibicije rasta bile su 50 posto, 49,5 posto, 55,5 posto, 35,6 posto, 23,8 posto i 43 posto za A. alternata, A. niger, C. gloeosporiodes, F. oxysporium, G. lucidium i R. solani respektivno. Stoga, moe se zakljuiti da eter ekstrakt B. stracheyi nije vrlo efikasan za antifungalne aktivnosti.Tabela .1.2 Uticaj razliitih koncentracija kloroform ekstrakta Bergenia stracheyi na radijalni rast gljivica

Tabela.1.3 Utjecaj razliitih koncentracija etil acetata ekstrakta Bergenia stracheyi na radijalni rast gljivica.

Tabela.1.4 Utjecaj razliitih koncentracija etera ekstrakta Bergenia stracheyi na radijalni rast gljivica.

Mnimalna inhibicija koncentracija (MIC)MIC je utvren i da koncentracija iznad koje je rast gljivica potpuno potisnut i ispod koje je nastavljen rast gljivica. Eksperimenti su izvreni tehnikom otrovane hrane koristei razliite koncentracije etanola. MIC kod kojeg nema rasa micelije, test gljiva je viena ili 100 posto inhibicije rasta gljivica je odreen.Rezultati MIC etanol ekstrakta B. stracheyi su pokazali da na niim koncentracijama tj 0,5 posto, 1,5 posto i 2,5 posto bez gljiva ima 100 posto rast inhibicija. Samo etiri gljive, odnosno, Alternaria alternate, Aspergillus niger, Ganoderma lucidum i Rhizoctonia solani su imale ukupni rast inhibicije na 3,5 posto koncentracija etanol ekstrakta. Preostale dvije gljive, Fusarium oxysporium je imala potpuno smanjenje rasta u koncentraciji od 5,5 posto. Zbog slabe antifungalne aktivnosti ,kloroform, etil acetata i eter ekstrakt B. stracheyi, MIC nisu studirani. Rezultati testa iz etanolnog ekstrakta snano djeluju protiv raznih bolest proizvodnjom mikroorganizama.Hemijski spojevi posebno polifenoli, kao to su bergenin, arbutin, hidrokinona, -sitosterol, metil arbutin, iskazani su u razliitim vrstama Bergenia i mogu biti odgovorni za antifungalne aktivnosti (Jamal et al. 2009, i Holland et al., 1978).Dobiveni rezultati na B. Stracheyi za antifungalnu aktivnost imaju podrku folklorne za koritenje na koi za zarastanje rana. Iako nema prethodne studije prijavljene za antifungalnu aktivnost od Bergenia stracheyi i ovo je prvi izvjetaj te vrste.Iako, postoje dvije reference, gdje su etanol ekstrakt suenog korijena Bergenia schemidtii i Bergenia ciliata su testiran za antifungalnu aktivnost (Kakwaro, 1976;. Mazhar-ul-Islam et al, 2002). Stoga se moe zakljuiti da kone infekcije i biljne infekcije mogu biti provjerene primjenom ekstrakta Bergenia stracheyi ali je toksian za prirodu, stoga autentinosti tvrdnje za koritenje folklor dalje je nerijeeno pitanje za njenu primjenu.Ovaj rad se iskljuivo bavi veim obimom analiz, koriste se jo etiri otapala: etil acetat, kloroform, etanol i naftnih etar to nije bilo poduzimaju ranijih radnika za Bergenia stracheyi biljke. Rezultati antifungalnog skrininga pokazali su da etanol ekstrakt Bergenia stracheyi je vie djelotvoran protiv svih test gljivica. Kloroform, etil acetat i eter ekstrakt su pokazali antifungalnu aktivnost, ali ne dovoljno da inhibira ukupan rast gljiva na niim koncentracijama. U budunosti, daljnja istraivanja treba obaviti na antifungalnim aktivnostima izoliranih jedinjenja iz ove biljke.