vitrifikacija oocita i sekundarni icsi – doprinos kumulativnom uspjehu liječenja
DESCRIPTION
Vitrifikacija oocita i sekundarni ICSI – doprinos kumulativnom uspjehu liječenja. 1 Patrik Stanić, 1 Višnja Hlavati, 2 Sanda Koprivc Varga i 2 Danko Dobec. 1 Klinika za ženske bolesti i porode Kliničkog bolničkog centra Zagreb 2 Poliklinika IVF Zagreb. Priprema hranilišta i otopina. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Vitrifikacija oocita i sekundarni ICSI – Vitrifikacija oocita i sekundarni ICSI –
doprinos kumulativnom uspjehu liječenjadoprinos kumulativnom uspjehu liječenja
11Patrik Stanić, Patrik Stanić, 11Višnja Hlavati, Višnja Hlavati, 22Sanda Koprivc Varga i Sanda Koprivc Varga i 22Danko DobecDanko Dobec
11Klinika za ženske bolesti i porodeKlinika za ženske bolesti i porode Kliničkog bolničkog centra ZagrebKliničkog bolničkog centra Zagreb22Poliklinika IVF ZagrebPoliklinika IVF Zagreb
Priprema hranilištai otopina
IVF/ICSIIzdvajanjeoocita
Aspiracijafolikula
Izdvajanje i koncentriranje
spermija
Prikupljanjeejakulata
Kultivacija 18-20 h
Potvrda oplodnje (2PRN)
Promjena hranilišta
Kultivacija 24 h
Broj i morfologijazametaka
Kultivacija 24 h
Transfer embrija 2/3 dan
Promjena hranilišta
Kultivacija 24-48 h Transfer morula/blastocista
Kriopohrana
Kultivacija gameta i zametaka
Stimulacijajajnika
Kriopohrana
KriopohranaSekundarni ICSI
Kumulativno povećanje stupnja trudnoća po aspiriranim oocitama
ZAMRZAVANJEOOCITA
ZAMRZAVANJEEMBRIJA
IVF/ICSI
KUMULATIVNO TRUDNOĆE(najrelevantniji indeks uspjeha)
Indikacije za Indikacije za zazamrzavanje mrzavanje humanih embrijahumanih embrija
smanjenje broja transferiranih embrija
smanjenje višeplodnih trudnoća
odgoda ET (OHSS, endometralni polip)
zakonske odredbe o zabrani ET više od jednog embrija
Indikacije za Indikacije za zazamrzavanje mrzavanje humanih oocitahumanih oocita
kemoterapija ili radijacijska terapija
kirurške operacije na spolnom sustavu
donorska banka oocita
odgađanje majčinstva
zakonske odredbe o ograničenju broja oplođenih oocita
Procesi zamrzavanja i odmrzavanja
toplinski šok
unutarstanično stvaranje kristala leda
dehidracija i rehidracija
početna kvaliteta gameta i zametaka
sastav medija za zamrzavanje
postupak zamrzavanja i odmrzavanja
Moguća oštećenja oocita tijekom kriopohraneMoguća oštećenja oocita tijekom kriopohrane
Depolimerizacija diobenog vretena
Oštećenja citoplazme i citoskeleta
Stvrdnuće zone pellucide
Degeneracija polarnog tjelešca
Utjecaj na fiziologiju i starenje oocite
Propusnost membrane
Kriopohrana oocita –Kriopohrana oocita –odabir metode, medija i nosačaodabir metode, medija i nosača
Sporo zamrzavanjeSporo zamrzavanje COOK, MediCult, VitrolifeCOOK, MediCult, Vitrolife
VitrifikacijaVitrifikacija Kitazato, MediCult, Irvine ScientificKitazato, MediCult, Irvine Scientific
cryotopcryotop
cryoleafcryoleaf
cryoloopcryoloop
cryotipcryotip
KrioprotektoriKrioprotektori
Permeabilni krioprotektoriPermeabilni krioprotektori glicerol, etilenglikol (EG), 1,2-propandiol (PROH), glicerol, etilenglikol (EG), 1,2-propandiol (PROH),
dimetilsulfoksid (DMSO)dimetilsulfoksid (DMSO)dehidracijadehidracija
smanjenje točke ledištasmanjenje točke ledišta
ne toksičnine toksični
Ne permeabilni krioprotektoriNe permeabilni krioprotektori saharozasaharoza
osmotski puferosmotski pufer
Postupci zamrzavanja
Kontrolirano sporo zamrzavanjeKontrolirano sporo zamrzavanje(Whittingham et al., 1972)(Whittingham et al., 1972)
Vitrifikacija - ultra brzo zamrzavanjeVitrifikacija - ultra brzo zamrzavanje(Rall (Rall && Fahy, 1985 Fahy, 1985))
Kontrolirano sporo zamrzavanjeKontrolirano sporo zamrzavanje VitrifikacijaVitrifikacija
Konc. krioprotektoraKonc. krioprotektora 1,5 M1,5 M 3,0-5,0 M3,0-5,0 M
VolumenVolumen 0,3-1,0 ml0,3-1,0 ml <<1 1 μμll
Kontakt NKontakt N22 i stanice i stanice Ne Ne DaDa
Stupanj hlađenjaStupanj hlađenja ~~ 0,5 0,5°°C/minC/min 15.000 – 50.00015.000 – 50.000°°C/minC/min
ZamrzavanjeZamrzavanje SporoSporo UltrabrzoUltrabrzo
OdmrzavanjeOdmrzavanje SporoSporo BrzoBrzo
Vrijeme postupkaVrijeme postupka ≥ ≥ 180 min.180 min. 2 sec.2 sec.
DehidracijaDehidracija Nije kontroliranaNije kontrolirana KontroliranaKontrolirana
Lomovi zone pelucideLomovi zone pelucide MogućeMoguće NeNe
Stvaranje kristala ledaStvaranje kristala leda DaDa NeNe
Smanjenje osmotskog stresaSmanjenje osmotskog stresa NeNe DaDa
Sporo zamrzavanje vs vitrifikacijaSporo zamrzavanje vs vitrifikacija
sporo zamrzavanjesporo zamrzavanje 50-76% stupanj preživljenja50-76% stupanj preživljenja 13-38% stupanj trudnoća/ET 13-38% stupanj trudnoća/ET (Porcu 2000, Boldt 2006, Borini 2007)(Porcu 2000, Boldt 2006, Borini 2007)
91% stupanj preživljenja 91% stupanj preživljenja (La (La et alet al., 2010)., 2010)
vitrifikacijavitrifikacija 63-100% stupanj preživljenja63-100% stupanj preživljenja 6,4-61% stupanj implantacije 6,4-61% stupanj implantacije (Cobo, 2009)(Cobo, 2009)
Sporo zamrzavanje vs vitrifikacijaSporo zamrzavanje vs vitrifikacija
mnoge studije su retrospektivne, ne komparativnemnoge studije su retrospektivne, ne komparativne
podaci o trudnoćama nedostatni za analizepodaci o trudnoćama nedostatni za analize
preživljenje embrija/blastocista favorizira vitrifikaciju preživljenje embrija/blastocista favorizira vitrifikaciju (Loutradi, 2008)(Loutradi, 2008)
razvoj do stadija blastociste iz zamrznutih embrija u stadiju diobe razvoj do stadija blastociste iz zamrznutih embrija u stadiju diobe favorizira vitrifikacijufavorizira vitrifikaciju
nema statistički značajne razlike u stupnju kliničkih trudnoća/ETnema statistički značajne razlike u stupnju kliničkih trudnoća/ET
Vitrifikacija oocita: rezultati Cryotop metodeVitrifikacija oocita: rezultati Cryotop metode
Kuwayama M. Theriogenology 2007.
broj vitrificiranih oocita (MII) 111
stupanj preživljenja 95%
stupanj oplodnje (ICSI) 91%
razvoj blastociste 50%
stupanj trudnoća/ET (2,2 zametka/ET)
41%
Cryotop metoda
EG / DMSO + saharoza
Vitrifikacija oocita: rezultati Cryotop metode
Vitrificirane oocite Svježe oocite
Stupanj preživljenja (%) 96,7%
Stupanj oplodnje (%) 76,3% 82,2%
Dioba na dan 2 94,2% 97,8%
Dioba na dan 3 80,8% 80,5%
Razvoj blastociste (%) 48,7% 47,5%
Cobo et al., Fertil Steril 2007.
Vitrifikacija oocita - McGill Reproductive CenterVitrifikacija oocita - McGill Reproductive Center
Chian et al. (2005) ASRM Annual Meeting
Pacijentice (ciklusa) 25 (25)
Dob pacijentica 31.8 ± 3.6
Broj odmrznutih oocita 283 (11.3 ± 5.9)
Broj preživjelih oocita (%) 253 (89.4)
Broj oplođenih oocita (%) 179 (72.7)
Broj oocita u diobi (%) 155 (80.0)
Broj transferiranih embrija 92 (3.7 ± 1.1)
Broj kliničkih trudnoća (%) 11 (44.0)
Broj implantiranih embrija (%) 15 (20.7)
Nove strategije u kliničkoj primjeni –Nove strategije u kliničkoj primjeni –IVM + vitrifikacija oocitaIVM + vitrifikacija oocita
pacijentice oboljele od malignih bolestipacijentice oboljele od malignih bolesti IVM postupak nezrelih oocita + vitrifikacijaIVM postupak nezrelih oocita + vitrifikacija izbjegnuta hormonska stimulacijaizbjegnuta hormonska stimulacija
odgoda majčinstvaodgoda majčinstva IVM postupak nezrelih oocita + vitrifikacijaIVM postupak nezrelih oocita + vitrifikacija čuvanje plodne sposobnostičuvanje plodne sposobnosti
program donacije oocitaprogram donacije oocita potencijalna donorica izbjegava hormonsku stimulacijupotencijalna donorica izbjegava hormonsku stimulaciju
Trudnoće nakon vitrifikacije oocita u Trudnoće nakon vitrifikacije oocita u mladih plodnih pacijenticamladih plodnih pacijentica
Kim TJ et al., Fertil Steril 2010Kim TJ et al., Fertil Steril 2010
(n) odmrznutih oocita 395
(n) stupanj preživljenja oocita (%) 320 (81,0%)
2 PRN 72,3%
(n) embrija / (n) ET 53/19
(n) kliničke trudnoće/ET (%) 16/19 (80%)
(n) implantiranih embrija (%) 24 (45,3%)
živorođena djeca/odmrznuta oocita 5,1 %
Klinički ishod – sporo zamrzavanje Klinički ishod – sporo zamrzavanje oocita neplodnih pacijenticaoocita neplodnih pacijentica
Borini et al., Fertil Steril 2010Borini et al., Fertil Steril 2010
(n) ciklusa s odmrzavanjem oocita 940
stupanj preživljenja oocita 55,8%
2 PRN 72,5%
kliničke trudnoće/ciklus 13,7%
kliničke trudnoće/ET 17,0%
implantacija 10,1%
Kumulativni rezultati – trudnoće prije i nakon Kumulativni rezultati – trudnoće prije i nakon uvođenja ograničenja oplodnjeuvođenja ograničenja oplodnje
Borini et al., 2008.Borini et al., 2008.
Kumulativne trudnoće sa Kumulativne trudnoće sa zamrznutim embrijima zamrznutim embrijima
(1992-2004)(1992-2004)
Kumulativne trudnoće sa Kumulativne trudnoće sa zamrznutim oocitama zamrznutim oocitama
(2004-2008)(2004-2008)
sve pacijentice 50% 49%
≤34 54% 53%
35-38 50% 52%
39-40 34% 47%
41-43 25%
>=43 15%26%
Klinički ishod – vitrifikacija oocita Klinički ishod – vitrifikacija oocita neplodnih pacijenticaneplodnih pacijentica
Rienzi et al., Human Reproduction 2009Rienzi et al., Human Reproduction 2009
Pacijentice (N=40)Pacijentice (N=40)
(n) odmrznutih oocita 3,1
(n) transferiranih zametaka 2,3
(n) ET 39/40 (97,5%)
kliničke trudnoće/ciklus 15/40 (37,5%)
kliničke trudnoće/ET 15/39 (38,5%)
implantacija 19/93 (20,4%)
Kumulativni rezultati – trudnoće nakon Kumulativni rezultati – trudnoće nakon svježeg ciklusa te vitrifikacije oocita u svježeg ciklusa te vitrifikacije oocita u
neplodnih pacijenticaneplodnih pacijentica
Rienzi Laura. Oral Presentation ESHRE Campus 2010 “The search for excellence in Rienzi Laura. Oral Presentation ESHRE Campus 2010 “The search for excellence in
IVF: a practical approach”IVF: a practical approach”
Svježi ciklusSvježi ciklus I ciklus odmrzavanjaI ciklus odmrzavanja II ciklus odmrzavanjaII ciklus odmrzavanja
sve pacijentice
66/182 (37,4%) 94/182 (51,6%) 97/182 (53,3%)
≤34 29/72 (40,2%) 45/72 (62,5%) 45/72 (62,5%)
35-37 20/48 (41,7%) 23/48 (47,9%) 24/48 (50,0%)
38-40 15/41 (36,6%) 20/41 (48,8%) 21/41 (51,2%)
41-43 4/21 (19,0%) 6/21 (28,6%) 7/21 (33,3%)
KLINIČKI BOLNIČKI CENTAR ZAGREB KLINIČKI BOLNIČKI CENTAR ZAGREB Kumulativni rezultati za 2010 godinuKumulativni rezultati za 2010 godinu– trudnoće po stimuliranom ciklusu u neplodnih pacijentica sa – trudnoće po stimuliranom ciklusu u neplodnih pacijentica sa zamrznutim oocitamazamrznutim oocitama
Svježi ciklusSvježi ciklus I ciklus odmrzavanjaI ciklus odmrzavanja
Broj pacijentica 79 29
Dob pacijentica 32 33,2
Broj oocita 9,7 (770/79) 3,2 (94/29)
Stupanj preživljenja oocita 65% (61/94)
Stupanj oplodnje 79% 69%
Stupanj implantacije 20,4% 12,2%
Stupanj trudnoća/ET 44% (34/77) 17,8% (5/28)
Kumulativno trudnoće/ stimulirani ciklus
49,4% (39/79)
POLIKLINIKA IVF ZAGREB POLIKLINIKA IVF ZAGREB Kumulativni rezultati za 2010 godinuKumulativni rezultati za 2010 godinu– trudnoće po stimuliranom ciklusu u neplodnih pacijentica sa – trudnoće po stimuliranom ciklusu u neplodnih pacijentica sa zamrznutim oocitamazamrznutim oocitama
Svježi ciklusSvježi ciklus I ciklus odmrzavanjaI ciklus odmrzavanja
Broj pacijentica 45 20
Dob pacijentica 35 36
Broj oocita 7,8 (351/45) 2,6 (52/20)
Stupanj preživljenja oocita 76,9% (40/52)
Stupanj oplodnje 78% 72%
Stupanj implantacije 14% 17,2%
Stupanj trudnoća/ET 34,8% (15/43) 29,4% (5/17)
Kumulativno trudnoće/ stimulirani ciklus
44,4% (20/45)