2012.02.24.

1

VÉRCSOPORTSZEROLÓGIAVÉRCSOPORTSZEROLÓGIAImmunológiai alapfogalmakVércsoport antigének,antitestekAlloimmunizáció mechanizmusaAgglutináció

Dr. Nemes Nagy ZsuzsaSzakképzés 2011.

Immunrendszer

Immunrendszer védi a szervezetintegritását, önazonosságátFelismeri és eltávolítja a számáraidegen anyagokat.Antigén:minden olyan struktúra,amelyet az immunrendszer idegenként ismer fel

Immunrendszer

Immunszervek:� Thymus(T limfociták)� Bursa ekvivalens szervek( nyirok

csomók, tonsillák, bél, bőr nyirokszervei, B limfociták)

2012.02.24.

2

Immunválasz

� Celluláris( sejtes védekezés)főként T limfocitákhoz kötött

� Humorálisfőként B limfocitákhoz, immungobulinokhoz kötött

Immunválasz

� Celluláris( sejtes védekezés)főként T limfocitákhoz kötött

� Humorálisfőként B limfocitákhoz, immungobulinokhoz kötött

Az immunválasz részei

� Kognitív szakasz� Centrális szakasz� Efferens szakasz

2012.02.24.

3

Az transzfúzióhoz kapcsolódó alloimmunizáció

Humorális immunitás� A bejutó antigének • Minősége• Mennyisége• Gyakorisága� Recipiens immunrendszere

A vér antigén rendszerei

Sejtek:� Vörösvérsejtek� Fehérvérsejtek� Trombociták

Szolubilis antigének( proteinek,szénhidrátok, zsírok, nukleinsavak)

Vércsoportszerológia kezdetei

Karl Landsteiner

2012.02.24.

4

Vörösvérsejt antigének

Vércsoport antigének

• Örökletes tulajdonságok

• Genetikusan allélrendszerek és/ vagy kapcsolt gének határozzák meg

• Az egyedfejlődés során különböző időben jelennek meg

Vércsoportrendszerek

• A vörösvérsejtek felületén található antigéneket vércsoportrendszerekbe sorolták

• Jelenlegi rendszerezés: genetikai alapú

• ISBT( International Sociaty for Blood Transfusion)

• 30 vércsoport rendszer- több száz antigén

2012.02.24.

5

A vörösvérsejt antigének szerkezete

A vörösvérsejtmembrán alkotói

Kémiai tulajdonságukszerint:

� szénhidrátok � proteinek � glikoproteinek � glikolipidek

Az epitópok

Egy antigén több epitópbólvagy antigén determinánsbólépül fel.

Az immunválasz során akülönböző epitópok más ésmás effektor sejtek ésantitestek képződését váltják

ki (poliklonális immunválasz)

Vércsoport antitestek

2012.02.24.

6

Az antitestek osztályozása

• ALLOANTITESTEKidegen, de saját fajon belüli antigénnel szemben termelődnek

• AUTOANTITESTEKsaját antigénnel szemben termelődnek

• XENOANTITESTEKmás fajon belüli antigénnel szemben termelődnek

Vércsoport specifikus antitestek

A specificitást az antitest képződését kiváltó antigénhatározza meg.A vércsoport specifikus antitest mindig csak a kiváltóantigénnel lép reakcióba.

Az antitestek hőoptimumaAntitestek: Meleg HidegReakciók: +37oC 0; +4oC Immunglobulin típus:

IgG IgM

2012.02.24.

7

Az antitestek IN VITRO reakció mód szerint

Komplett vagy direktagglutinálók IgM

Inkomplett antitestek IgG

Az IgG típusú ellenanyag

• Az ellenanyagok 75%-a• 2 nehéz, 2 könnyű lánc• A placentán átjut

• Inkomplett, meleg típusú, immunantitest

Az IgG alosztályok

IgG1 és IgG3 jelentősége:• Transzfúziós szövődmény• Újszülöttkori hemolitikus betegség (ÚHB)

2012.02.24.

8

Az IgM immunglobulin

• Az immunglobulin készlet 10% -a• Makromolekula: pentamer szerkezetű• A korai immunválaszra jellemző• Komplex, szénhidrát antigénekkel reagál• Természetes, hideg típusú antitest

A komplement rendszer

• 21 szérum fehérje• Enzimek inaktív formái • Aktivizálódás: klasszikus és alternatív úton• Az antigén-antitest reakciók a klasszikus utat aktiválják

A vörösvérsejt antigénekkel szemben kialakuló alloimmunizáció mechanizmusa

vörösvérsejt antigén → APC → specifikus B sejt aktiváció→ specifikus alloantitest → immunkomplex →komplement, fagocita rendszer aktiváció → antigén eliminálása

2012.02.24.

9

Az immunválasz lefolyása1.lag fázis: az antitestmég nem mutathatóki2.log fázis: az antitesttitere logaritmusosannő3.plateau fázis: azantitest titere magasés állandó4.leszálló fázis: azantitest titer csökken,vagy az antitest márnem mutatható kiIDŐ: változó!FÜGG: antigéntől, egyéntől

Az elsődleges és másodlagos immunválasz

Az elsődleges immunválasz � első találkozás az

antigénnel� időben késik� IgM típusú ellenanyagok

dominálnak

A másodlagos immunválasz� ismételt találkozás az

antigénnel� az ellenanyagok hamarabb

jelennek meg� titerük magas� IgG típusú ellenanyagok

dominálnak

Vércsoport szerológiai vizsgálatok

• Ismeretlen vörösvérsejt antigénkimutatása ismert antitest tartalmú reagenssel

• Ismeretlen antitest kimutatásaa savóból/ plazmából ismert antigenitású teszt vörösvérsejtekkel

2012.02.24.

10

Vérminta(24 órán belüli)

• Natív• Citrátos• EDTA- s

Heparinos nem megfelelő!

Az antigén- antitest reakciókIN VITRO formái

• Precipitáció• Hemolízis • Agglutináció• Abszorbció• Elúció

Az agglutináció Specifikus fázis

Specifikus antigén-antitest kötődés

2012.02.24.

11

Az agglutináció Aspecifikus fázis

Az immunkomplexek összekapcsolódnak, térrács alakul ki.

Az agglutinációt befolyásoló tényezők 1.Reakcióhő

• hideg (0-4oC) típusú antitestek• meleg (37oC) típusú antitestek2.Reakció időAz antigén-antitest kötődéshez szükségesidőFügg:• vércsoport rendszertől• módszertől• vizsgálati technikától 3.Antigén- antitest arányAz antitest túlsúly az optimális

Az agglutinációt befolyásoló tényezők

4.Reakció közegKomplett agglutininek: fiz.sóInkomplett agglutininek:• LISS (alacsony ionerősségű közeg)• albumin és egyéb makromolekulák• proteolitikus enzimek (papain, bromelin)• AHG (Coombs) technikák

2012.02.24.

12

Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közegFiziológiás sós közeg

I.

Az IgM típusú antitestekagglutinálnak, az IgGtípusúak kötődnek azantigénhez, de nem agglutinálnak

Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg

Fiziológiás sós közeg II.Alkalmazás:• ABO rendszer vizsgálata

• Hideg típusú antitestek kimutatása

• Szalin típusú reagensek alkalmazása

Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/LISS

LISS= low ionic strengh solution

Hatása:• növeli a sejt felszínt (a sejtmegduzzad)

• csökkenti az elektromos kettős réteget• közelebb hozza a sejteket• szabaddá tesz antigéneket• gyorsítja az antitestek kötődését

2012.02.24.

13

Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/Enzim

Proteolitikus enzimek• papain• bromelin• ficinHatás:• csökkentik a felszín negatív töltését• szabaddá tesznekantigéneket (Rh, Kidd)• Elroncsolnakantigéneket (Duffy, MNS)

ELLENANYAGSZŰRÉS

Az agglutinációt befolyásoló tényezők/Reakció közeg/ AHG (Coombs) technikák

Direkt Coombs tesztA vörösvérsejtek antitest fedettségének kimutatása• alloantitestek • autoantitestek• gyógyszer elleni antitestek

Indirekt Coombs teszt• A savó inkomplett antitestjeinekkimutatása(ellenanyagszűrés és azonosítás, kompatibilitási vizsgálatok)• Antigén vizsgálatok (Kell,Fy,Jk stb)

A direkt Coombs teszt (DAT)

A sejtek immunglobulin és/ vagy komplement fedettségének

vizsgálata ( ÚHB, AIHA, transzfúziós szövődmény)

2012.02.24.

14

A direkt Coombs teszt (DAT)

Mosás: a kötetlen immunglobulinok eltávolítása

A direkt Coombs teszt (DAT)

Coombs reagens (AHG) hozzáadása

A direkt Coombs teszt(DAT)

Az antihuman globulin hidat képez az antitesttel fedett sejtek között

2012.02.24.

15

A direkt Coombs teszt(DAT)

Agglutináció jön létre

Az indirekt Coombs teszt

• A savó inkomplett antitestjeinek kimutatása (ellenanyagszűrés és azonosítás,vérválasztás )

• Antigének kimutatására(Kell, Duffy, Kidd)

Ismert antigenitású teszt vörösvérsejtek

Az indirekt Coombs teszt

A savóból antitestek kötődnek a vörösvérsejtekre

2012.02.24.

16

Az indirekt Coombs teszt

Coombs reagens (AHG) hozzáadása

Az indirekt Coombs teszt

Az antihuman globulin hidat képez az antitesttel fedett sejtek között

Az agglutinációt befolyásoló tényezők

5.A vizsgált vérminta koraA vvs-ek agglutinabilitása idővel csökken• a szobahőmérsékleten tárolt vérminta 24

óráig• hűtőben tárolt natív vérminta 48-72 óráig• CPD-A- s vérminta 35 napig• fagyasztott vvs 1 (több) évig vizsgálható

6.A vizsgált egyén kora, állapota• Idős korban az agglutinabilitás csökken• Bizonyos betegségekben csökken vagy nő

2012.02.24.

17

Az agglutinációt befolyásoló tényezők

7.A diagnosztikum

• fajta• kor• tárolási mód

Az agglutinációs reakciók értékelése

1. Pozitív reakcióagglutináció jelenléte

(++++ → +,+/-)1. Negatív reakció

agglutináció hiánya

1. Kevert mező pozitív és negatív reakció egyidejű jelenléte

Az agglutinációs reakciók értékelése

Kevert mező● nem csoport azonos vér transzfúzióját követően-szerológiai okok/ vérkészlet miatt a beteg nem csoport azonos vért kapott-transzfúziós szövődmény

• csontvelő transzplantációt követően • haematológiai betegség esetén • chimerizmus

2012.02.24.

18

Autoagglutinációs kontroll 1.A vérminta sejtjének és savójának vizsgálata

reagens nélkül2. A vérminta sejtjének vizsgálata hatóanyag

nélküli közegbenÉrtékelhető vizsgálat= autokontroll negatív

Az autokontroll pozitív,ha• a vörösvérsejtek fedettek• autoantitesttel• alloantitesttel • gyógyszerellenes antitesttel • sympexis képző savó

Sympexis = pénztekercs képződésNem antigén- antitest reakció!

Az agglutinációtól elkülönítendő!OKA: a vvs-ek lapszerinti összetapadása

o A vizsgált csepp széli beszáradásao A savó viszkozitása nő: • albumin/globulin arány eltolódik• kóros fehérjék (myeloma, cirrhosis, tumor)• makromolekulák (dextrán, kontrasztanyag)

FIZIOLÓGIÁS SÓ → SYMPEXIS ↓

Poliagglutinabilitás

vörösvérsejt tulajdonságT antigénhez kötött

� VELESZÜLETETT � SZERZETT � infekció � hematológiai betegség

2012.02.24.

19

Panagglutináció� a savó tulajdonsága

� panantitestek okozzák

� a panantitesteknek nincs vércsoport specificitása

� autokontroll ált. pozitív

Hivatkozások

Immunobase oktató program 2000.Falus A.Buzás E.Rajnavölgyi É:Az immunológia

alapjai 2007.Czirják L.szerk.Klinikai immunológia 2006.J.Brostoff et al.:Clinical immunology 1992.W.H.Ouwehand et al.:Adaptive immunity and

transfusion Vox Sanguinis 2004/87 s35-s38R.M.Minchunton et al. The body as fortress…

Vox Sanguinis 2004/87 s30-s34