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Protocolo e Informe Armonizado para la Evaluación del Desempeño del Método para la enumeración de E. coli Β-Glucuronidasa a 44°C utilizando 5-Bromo-4-Cloro-3-Indol Β-D-Glucurónido
Apéndice Normativo J, NOM-210-SSA1-2014
PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL
MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido
APÉNDICE NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
1.
1
Protocolo e Informe Armonizado para la Evaluación del Desempeño del Método para la enumeración de E. coli Β-Glucuronidasa a 44°C utilizando 5-Bromo-4-Cloro-3-Indol Β-D-Glucurónido
Apéndice Normativo J, NOM-210-SSA1-2014
Participaron en la elaboración de este protocolo.
María Esperanza Rodríguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]
Karina Guerrero ColinaLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Q. Analista de Análisis Microbiológicos229 9811390 Ext: [email protected]
Odilia Hernández HernándezLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Jefatura de Depto. de Análisis SanitariosMicrobiológicos/Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios229 9811390 Ext: [email protected]
Anastasio Palacios MarmolejoLaboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes449 [email protected]
Participaron en la revisión de este protocolo.
Evelia Nungaray JiménezLaboratorio Estatal de Salud Pública de Jalisco(33) [email protected]
Liliana Cano RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Q. Analista55 50805200 EXT. [email protected]
César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos analíticos.5550805200 ext. [email protected]
M. en C. Juan Carlos Piliado VelascoLaboratorio de Análisis de Riesgos del Distrito [email protected].: 58507923
Autorización
Imelda Rocío Guzmán CervantesComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Control AnalíticoTeléfono: 01 55 50 80 52 00 ext. [email protected]
Josefina Gutiérrez RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Innovación.01 55 50 80 52 00 ext. [email protected]
2.
2
Protocolo e Informe Armonizado para la Evaluación del Desempeño del Método para la enumeración de E. coli Β-Glucuronidasa a 44°C utilizando 5-Bromo-4-Cloro-3-Indol Β-D-Glucurónido
Apéndice Normativo J, NOM-210-SSA1-2014
1. OBJETIVO.1.1. Establecer las directrices para la evaluación del desempeño del Apéndice Normativo J. Método
para la Enumeración de E. coli β-glucuronidasa a 44ºC utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido, NOM-210-SSA1-2014 en la(s) matrices de alimentos de su interés y competencia, mediante la aplicación de este protocolo armonizado.
2. CAMPO DE APLICACIÓN.2.1. Este protocolo es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de
implementación del Apéndice Normativo J. Método para la Enumeración de E. coli β-glucuronidasa a 44ºC utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido.
3. MÉTODO DE ENSAYO.3.1. Apéndice Normativo J. Método para la Enumeración de E. coli β-glucuronidasa a 44ºC, utilizando
5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido; Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, Productos y Servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos.
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3.2. Diagrama de Flujo.El diagrama de flujo es una representación gráfica del método, en todo momento se debe tener acceso al método de prueba original.
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4. EQUIPOS E INSTRUMENTOS4.1. Los equipos listados a continuación son los requeridos por el método. En el informe de
evaluación de desempeño deberá completarse la “Tabla equipos e instrumentos empleados”
Nombre Características Estado deseado
Balanza Granataria Sensibilidad de 0.1 g Calibración vigente y verificada el día de uso.
Marco de pesas
Clase F1 o E210 ó 20 g;y 100 g ó 200 g ó 500 g
Calibrado
IncubadoraTemperatura controlada a 44°C ± 1°C.
Calificada1 44°C ± 1°C, por 24 h mínimo.Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C adecuadamente inmerso.
IncubadoraTemperatura controlada a 35°C ± 2°C
Calificada 35°C ± 2°C, por 24 h mínimo. Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C. Adecuadamente inmerso.
Baño de aguaTemperatura controlada de 44°C a 47°C.
Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura del baño durante su uso. División mínima de 0.5°C, adecuadamente inmerso.
Cuenta coloniasFuncionando, lámpara con iluminación.
Mantenimiento vigente, lámpara funcionando y lupa limpia sin ralladuras ni roturas.
Homogeneizador peristáltico o licuadora2
Funcionando.Mantenimiento vigente.Licuadora no debe presentar fugas en el momento de la operación, los vasos deben ser esterilizables.
5. MATERIALES5.1. El material de trabajo debe ser estéril, cuando no se indique otra cosa, el material esterilizado por
calor seco o calor húmedo se considera estéril hasta por un mes siempre que se mantenga la integridad del empaque; todo el material debe ser adecuadamente identificado, señalando la fecha de esterilización de material y la fecha de uso. Cuando se use material estéril desechable, éste deberá ser evaluado por lote en su recepción o documentar la esterilidad mediante
1 Se entiende que la calificación de los equipos para incubación consiste en un procedimiento interno o externo por el cual se demuestre, a través del monitoreo en diferentes puntos que la temperatura de la cámara durante un periodo determinado mantiene una homogeneidad térmica, asegurando las condiciones de incubación de la prueba.
2 El uso del homogeneizador o de la licuadora depende del tipo de muestra, deberá utilizarse el sistema de homogeneización más adecuado para preparar la muestra y este debe mencionarse en el informe.
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certificado de calidad, una vez abierto el empaque los materiales no deben ser usados después de tres días.
5.2. El material de vidrio re-usado deberá demostrar que fue lavado adecuadamente, mediante registros de supervisión y demostrar la ausencia de residuos de detergente.
5.3. Los siguientes materiales son de carácter enunciativo, el laboratorio deberá reportar los utilizados y sus características en el informe.
5.3.1.Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora de vidrio o aluminio. Cajas Petri de vidrio o desechable, diámetro de 90 mm por 15 mm de alto Cucharas, tenedores y cuchillos estériles para el manejo de la muestra Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables Gradillas para tubo de ensaye esterilizables Mecheros Bunsen o Fisher. Perillas o propipetas. Pipetas estériles de vidrio graduadas con diferentes capacidades: 10 y 5 mL con divisiones
de 0.5 mL y 1 mL y con división mínima de 0.1 mL. Micropipetas 100 a 1000 μL calibradas y/o verificadas. Matraces Erlenmeyer con tapón de rosca de 250 mL. Tubos de ensaye de 18 por 150 mm con tapón de rosca. Puntas para micropipetas estériles y desechables.
6. MEDIOS DE CULTIVO Y MATERIAL BIOLÓGICO DE REFERENCIALa preparación de los medio de cultivo se debe realizar conforme a las instrucciones del fabricante.
6.1. MEDIOS DE CULTIVO6.1.1. Medio Triptona bilis X-glucurónido (TBX) 6.1.2. Agua peptonada amortiguada
6.2. CEPAS (MATERIAL BIOLÓGICO)6.2.1.E. coli NCTC 13216 ó ATCC 25922 ó ATCC 8739
7. MUESTRAS7.1. Cada laboratorio deberá realizar la evaluación del desempeño del método con al menos una
matriz por cada grupo de alimentos indicado en la siguiente tabla.7.2. En el informe de validación se deberá reportar los criterios para la selección de la muestra
considerando lo siguiente:
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Grupo de alimentos Tipos de producto
Tipo de producto recibido en el laboratorio.
Matriz representativa mayormente recibida en el laboratorio.
Prioridad para el laboratorio. 3
Productos Cárnicos
CrudoProcesados térmicamenteCongeladosFermentadosCuradoPate
Reportar en el informe Reportar en el informe Reportar en el
informe
Pescado y Productos de la pesca
CrudosCongelados
Reportar en el informe Reportar en el informe Reportar en el
informe
Frutas y Vegetales Crudos Reportar en el
informe Reportar en el informe Reportar en el informe
Leche y lácteos
CrudosCongeladosfermentadosQueso artesanal
Reportar en el informe Reportar en el informe Reportar en el
informe
Agua
Agua potableAgua embotelladaAgua de pozoHielo
Reportar en el informe Reportar en el informe Reportar en el
informe
Otros Productos Para ser llenado por cada laboratorio
Reportar en el informe Reportar en el informe Reportar en el
informe
7.3. La selección de las muestras debe realizarse con base en las prioridades del laboratorio considerando; la frecuencia de recepción y los programas prioritarios.
7.4. Para la selección de las muestras se deberá contar con aproximadamente 1.5 kg o L de muestra y almacenar en condiciones adecuadas, dependiendo de la matriz. Se debe además contar con la trazabilidad de la muestra por ejemplo marca, número de lote, fecha de caducidad, para productos como frutas, vegetales, agua de la llave, se deben contener información de los datos de muestreo o lugar de la compra, fecha de la compra, etc.
7.5. Verificación de la muestra:7.5.1. Las muestras seleccionadas deberán ser analizadas para la búsqueda de E. coli β-
glucuronidasa a 44 °C utilizando el método en cuestión.7.5.2. Deberá realizarse por triplicado, encontrando resultados negativos en las tres repeticiones.
8. DESARROLLO EXPERIMENTAL
8.1. Ajuste del inóculo
3 Reportar numéricamente indicando 1 para el más prioritario.
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8.1.1. Previo al ensayo de evaluación se debe identificar la dilución adecuada de los microorganismos para preparar la suspensión de trabajo, en las concentraciones que se indican más adelante.
8.1.2. El protocolo de preparación del inóculo puede ser elegido a conveniencia del laboratorio, este debe describirse en el informe.
8.1.3. Para la preparación del inóculo puede consultarse la “Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para el Análisis de Alimentos” (CCAYAC-P-062).
8.1.4. Inocular aproximadamente 120,000 UFC en 250 mL de la muestra (para muestras líquidas) o 250 mL de la primera dilución, para obtener una cuenta aproximada de 480 UFC en la primera serie de placas, 48 UFC en la segunda y 5 UFC en la tercera.
Tabla 1 Preparación de muestras
Parámetro Analistas Muestra Diluciones decimales
Número de réplicas Microorganismo Tamaño de Inóculo
Repetibilidad Un analista 25 g o 250 mL
Muestras sólidas.
3 dilucionesMuestras Líquidas4
Directa y 2 diluciones
10 Escherichia coli 120,000 UFC aproximadamente
Reproducibilidad
Al menos 2 analistas, o 2 tiempos diferentes
25 g o 250 mL
10 por analista Escherichia coli 120,000 UFC
aproximadamente
8.2. Repetibilidad8.2.1. Medir 10 alícuotas de 25 g de la matriz seleccionada en 225 mL de agua peptonada
amortiguada, para muestras líquidas medir 250 mL.8.2.2. Inocular cada alícuota con aproximadamente 120,000 UFC.8.2.3. Verificar los inóculos utilizando la técnica de vaciado en placa, empleando para el cálculo 6
cajas, para obtener entre 15 y 150 UFC.8.2.4. Proceder como lo establece el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice
Normativo J. NOM-210-SSA1-2014.8.2.5. Registrar los resultados en el formato del informe.
8.3. Reproducibilidad8.3.1. Un segundo analista o el mismo en un tiempo diferente, deberá ejecutar lo descrito en
repetibilidad.8.3.2. Registrar los resultados en el formato del informe.
9. Resultados9.1. Registrar resultados en el informe de desempeño.
10. Análisis estadístico
4 Dependiendo de la matriz y la carga microbiana esperada algunas muestras liquidas deben ser diluidas, en este caso realizar la siembra de las tres primeras diluciones.
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10.1. Repetibilidad 10.1.1. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará
automáticamente el cálculo. 10.1.2. El valor de r se calcula como:
DSR= sx
r=2.8√DSR2nDónde:s=desviación estándarr= repetibilidadDSR=Desviación estándar relativan = número de réplicasx = Promedio
10.2. Reproducibilidad10.2.1. Calcular la reproducibilidad utilizando los resultados obtenidos de las 10 repeticiones de
la prueba de repetibilidad de un analista, más los resultados de un segundo analista, o el mismo analista en un segundo tiempo.
10.2.2. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.
10.2.3. El valor de R se calcula como:
R=2.8√DSR12+DSR22nDónde:R= Reproducibilidad (por analista)DSR1=Desviación estándar relativa del analista 1DSR2=Desviación estándar relativa del analista 2n= Total de réplicas considerando los dos analistas
10.3. Recuperación10.3.1. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará
automáticamente el cálculo. 10.3.2. El valor de % de recuperación se calcula como: % Recuperación= Media de la cuenta de logaritmo de las cuentas x100
Logaritmo de las UFC inoculadas10.4. Sesgo
10.4.1. El sesgo es la diferencia absoluta entre el valor conocido como verdadero y el valor obtenido experimentalmente.
10.4.2. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.
El sesgo se calcula como:
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Sesgo= [Ve-Vo]Donde Ve= valor esperado
Vo= valor obtenido
10.5. Fuentes de incertidumbre10.5.1. Identificar y mencionar las posibles fuentes de incertidumbre.10.5.2. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará
automáticamente el cálculo.10.5.3. La incertidumbre expandida U tal como se define por GUM, se deriva de la incertidumbre
estándar combinada uc(y), con un factor de cobertura k elegido en esta especificación técnica como un valor de 2 (que aproximadamente corresponde a un nivel de confianza del 95%.
U = 2 sR
Donde: U= Incertidumbre expandida. YiA= Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) ó log10 (ufc/ml) del analista A YiB= Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) ó log 10 (ufc/ml) del analista B n= 10
11. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
Parámetro Criterio de aceptación
Repetibilidad 10 Réplicas un analista,Nivel de fortificación: valor medioResultado r < 3
Reproducibilidad 10 Réplicas por cada analista,Nivel de fortificación: valor medioResultado R < 3
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Apéndice Normativo J, NOM-210-SSA1-2014
Parámetro Criterio de aceptación
Recuperación 10 Réplicas un analista,Nivel de fortificación valor medioResultado entre 90 y 110% log
Sesgo 10 réplicas un analista,Nivel de fortificación: valor medioLa diferencia absoluta de lo recuperado y lo inoculado es <0.3 log
Incertidumbre Especificar el mensurandoListar las fuentes de incertidumbrec) Realizar los cálculos de la incertidumbre expandida.
Referencia: Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-P-062. 2012.
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NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO
PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C
utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido
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NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
Participaron en la elaboración de este informe
Maria Esperanza Rodriguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]
Odilia Hernández HernándezLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Jefatura de Depto. de Análisis SanitariosMicrobiológicos/Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios229 9811390 Ext: [email protected]
Anastasio Palacios MarmolejoLaboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes449 [email protected]
César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos.5550805200 ext. [email protected]
Karina Guerrero ColinaLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Q. Analista de Análisis Microbiológicos229 9811390 Ext: [email protected]
Evelia Nungaray JiménezLaboratorio Estatal de Salud Pública de JaliscoCoordinadora de Microbiología SanitariaTel. 01 333 833 06 [email protected]
Participaron en la revisión de este informe.
Fabiola Curiel AyalaLaboratorio Estatal de Salud Pública de QuerétaroGerente Técnica Vigilancia Sanitaria(442) 2 20 72 42
Geovani Ramírez HernándezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura50805200 ext. 2026
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NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
[email protected] [email protected]
Maria Esperanza Rodriguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]
Odilia Hernández HernándezLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Jefatura de Depto. de Análisis SanitariosMicrobiológicos/Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios229 9811390 Ext: [email protected]
Anastasio Palacios MarmolejoLaboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes449 [email protected]
César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos.5550805200 ext. [email protected]
Karina Guerrero ColinaLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Q. Analista de Análisis Microbiológicos229 9811390 Ext: [email protected]
Autorización
Armida Zúñiga EstradaComisión Federal Para la Protección Contra Riesgos Sanitarios.Comisionada de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext [email protected]
Josefina Gutiérrez RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Innovación.01 55 50 80 52 00 ext [email protected]
1. OBJETIVO
Establecer los lineamientos para la elaboración del informe en la evaluación del desempeño del Método para la enumeración de E. coli, β-glucuronidasa a 44ºC utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J NOM-210-SSA1-2014 en la(s) matrices de alimentos de su competencia.
2. CAMPO DE APLICACIÓN
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NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
Este informe es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en la implementación y evaluación del desempeño del Apéndice Normativo J, Método para la enumeración de E. coli, β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido.
3. EQUIPOS E INSTRUMENTOS Equipo Descripción:
Identificación, Marca, Modelo
Estado deseado5
Evidencia del estado.6
Balanza Granataria d Verificado y Calibrado
Haga clic aquí para escribir texto.
Marco de pesas Haga clic aquí para escribir texto.
Calibrado Haga clic aquí para escribir texto.
Incubadora44°C ± 1°C
Haga clic aquí para escribir texto.
Calificada Haga clic aquí para escribir texto.
Incubadora35°C ± 2°C
Haga clic aquí para escribir texto.
Calificada Haga clic aquí para escribir texto.
Baño de agua44°C a 47°C
Haga clic aquí para escribir texto.
Con termómetro calibrado y/o
verificado a 47°C
Haga clic aquí para escribir texto.
Micropipetas 100 a 1000 μL calibradas
y verificadas
Haga clic aquí para escribir texto.
Calibrada y Verificada
Haga clic aquí para escribir texto.
Cuenta colonias Haga clic aquí para escribir texto.
Mantenimiento vigente
No aplica
Homogeneizador peristáltico, licuadora
Haga clic aquí para escribir texto.
Mantenimiento Vigente
No aplica
Instrumento de medición de temperatura
Haga clic aquí para escribir texto.
Calibrado y Verificado
Haga clic aquí para escribir texto.
Reporto SupervisoFirma Firma
Nombre Haga clic aquí para escribir Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
5 Seguir los criterios de aplicación descritos en http://www.cofepris.gob.mx/TyS/Paginas/Terceros-Autorizados.aspx6Hacer referencia al registro, número de informe de calibración/calificación. Anexar copia de las evidencias al presente informe.
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texto.Fecha Haga clic aquí para escribir una
fecha.Fecha Haga clic aquí para escribir una
fecha.
4. MATERIALES Material Marca Lote Certificado de
calidad7
Caja petri de vidrio o desechable, diámetro 90 mm x 15mm alto
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Cucharas, tenedores y cuchillos para el manejo de la muestra.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Pipetas estériles de vidrio graduadas de diferentes capacidades: 10 mL y 5 mL con divisiones de 0.5 mL y 1 mL con divisiones de 0.1mL
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Matraces Erlenmeyer con tapón de rosca de 250 mL
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para escribir
texto.Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
7 Cuando se use material esterilizado en el laboratorio, se deberá anexar evidencias de la prueba de esterilidad realizada al material.
5
INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE
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Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
5. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
Reactivo o medio de cultivo
Marca Lote y caducidad
Resultados de desempeño y
fecha de evaluación
Fecha de vida útil del medio
preparado.
Medio Triptona bilis X-glucurónido (TBX)
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Agua peptonada amortiguada
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir una fecha.
Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para escribir
texto.Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
6. CEPAS
Cepas utilizadas ATCC Certificado u hoja de identidad y aseguramiento de calidad
Escherichia coli Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para escribir
texto.Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
7. MUESTRAS7.1. Criterio de selección de la muestra
6
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NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
Criterio de selección de la muestra
Tipos de producto
Tipo de producto recibido en el laboratorio.
Matriz representativa, mayormente recibida en el laboratorio
Prioridad para el laboratorio
Productos Cárnicos
CrudoProcesados térmicamenteCongeladosFermentradosCuradoPate
Reportar en el informe
Ejemplo Cárnico crudoCárnico congelado
EjemploCarne molida congelada
2
Pescado y Productos de la pesca
CrudosCongelados
Reportar en el informeEjemplo Pescado refrigeradoCrudosCongelado
Reportar en el informe
EjemploTilapia
3
Frutas y Vegetales
CrudosMínimamente procesados
Reportar en el informe Ejemplo fruta crudaNo recibe
Reportar en el informeEjemploNo recibe
4
Leche y lácteos FrescoCrudosQueso artesanal
Reportar en el informeEjemploQueso Fresco
Reportar en el informeEjemploQueso fresco
1
Otros Productos Para ser llenado por cada laboratorio
Ejemplo No aplica
Reportar en el informeEjemploNo aplica
5
Muestra SeleccionadaHaga clic aquí para escribir texto.
Cantidad de MuestraHaga clic aquí para escribir texto.
Descripción de la muestra (cuando aplique: marca, lote, fecha de caducidad, condiciones de preservación): Haga clic aquí para escribir texto.
Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para escribir
texto.Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Fecha Haga clic aquí para escribir una Fecha Haga clic aquí para escribir una
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INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE
NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
fecha. fecha.
8. DESARROLLO EXPERIMENTAL.8.1. Preparación del Inóculo. (Ver punto 8.1 del protocolo)
8.1.1. Descripción de la preparación del inóculo:
Escriba en esta sección el protocolo empleado. por ejemplo:
Se inoculó una asada de Escherichia coli en 10 mL de Caldo Infusión Cerebro Corazón, se incubó a 35o C +/- 2o C por 22 a 24 h. A partir del cultivo se realizaron una serie de diluciones con solución salina 0.85% hasta llegar a la dilución 10-10.Se colocó 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilución 10 -7 a 10-10 y se adicionó AST, se incubó a 35o C + 2o C por 22 a 24 h. Se realizó el conteo en cada dilución y se realizó el registro de los resultados de la concentración del microorganismo en cada dilución.
Se seleccionó la dilución con cuentas aproximadamente de 12 X 104
UFC.
Las diluciones se mantuvieron en refrigeración y no son utilizadas por más 26h.
8.1.2. Preparación del Inóculo. RegistroFecha de preparación: Haga clic aquí para escribir una fecha. Fecha de lectura: Haga clic aquí para escribir una fecha.
Diluciones 10.7 10.8 10.9 Dilución seleccionada
Cuenta de colonias
>250 >250 78 102 7 10 10.5
UFC >250 90 <25 UFC 9X104
Reporto SupervisoFirma Firma
Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
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NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
8.2.Resultados de Verificación de la muestra:
Ausencia del Analito
Tamaño de la unidad de análisis:
25 g Fecha del Análisis: Haga clic aquí para escribir una fecha.
Réplica Resultado Valor esperado Cumple (sí / no / no aplica)
1 Haga clic aquí para escribir texto.
☐Muestras no contaminadas:< 10 UFC/g o <1 UFC/mL☐Muestras naturalmente contaminadas:☐No aplica
☐si☐no☐no aplica
2 Haga clic aquí para escribir texto.
☐si☐no☐no aplica
3 Haga clic aquí para escribir texto.
☐si☐no☐no aplica
Ver Registros:Haga clic aquí para escribir texto.Reporto Superviso
Firma Firma
Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
8.3. Resultados Se prepararon las muestras como se menciona el punto 8.3 del protocolo para las pruebas de repetibilidad y reproducibilidad, siguiendo el método, se colocan los resultados encontrados por cada analista.
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INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE
NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
8.3.1. Analista 1Réplica
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
UFC Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Ver Registros:Haga clic aquí para escribir texto.Reporto Superviso
Firma Firma
Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
8.3.1.1. Verificación del Inóculo.Volumen inoculado _1ml_ de la dilución 105 Aproximadamente __90000___UFC, volumen total inoculado: 250mL
Diluciones 10.1 10.2 10.3 Dilución seleccionada
Cuenta de colonias
3600
3600 360 360 30 36 10.5
UFC >250 36 <25 UFC 90X104
Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para
escribir texto.Nombre Haga clic aquí para escribir
texto.Fecha Haga clic aquí para
escribir una fecha.Fecha Haga clic aquí para escribir
una fecha.
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NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
8.3.2. Analista 2Réplica
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
UFC Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Ver Registros: Haga clic aquí para escribir texto.Reporto Superviso
Firma FirmaNombre Haga clic aquí para escribir
texto.Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.
8.3.2.1. Verificación del Inóculo.Volumen inoculado _1ml_ de la dilución 105 Aproximadamente __90000___UFC, volumen total inoculado: 250mL
Diluciones 10.1 10.2 10.3 Dilución seleccionada
Cuenta de colonias
3600
3600 360 360 30 36 10.5
UFC >250 36 <25 UFC 90X104
Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para
escribir texto.Nombre Haga clic aquí para escribir
texto.Fecha Haga clic aquí para
escribir una fecha.Fecha Haga clic aquí para escribir
una fecha.
Colocar los resultados en la hoja de cálculo del ANEXO.
9. RESULTADOS
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INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE
NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
Parámetro Resultados obtenidos
Criterio de aceptación Dictamen
Repetibilidad Analista 1Haga clic aquí para escribir texto.Analista 2Haga clic aquí para escribir texto.
r < 3☐Cumple☐No cumple
Reproducibilidad
Haga clic aquí para escribir texto.
R < 3 ☐Cumple☐No cumple
Recuperación Analista 1Haga clic aquí para escribir texto.Analista 2Haga clic aquí para escribir texto.
Entre 90 y 110 log ☐Cumple☐No cumple
Sesgo Analista 1Haga clic aquí para escribir texto.Analista 2Haga clic aquí para escribir texto.
Diferencia absoluta entre lo recuperado e inoculado < 0.3 log
❏ Cumple❏ No cumple
Incertidumbre expandida
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
Haga clic aquí para escribir texto.
10. Discusión de los resultados
12
INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE
NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
Por ejemplo: Los resultados del análisis estadístico realizado, demuestran que al aplicar el método se obtienen resultados confiables y reproducibles y por tanto se puede utilizar para el análisis de los productos descritos en este informe.
11. CONCLUSIÓN
● Al cumplirse todos los criterios de validez se concluye que el Método para la
enumeración de E. coli,β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-
Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio), al ser
aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX es adecuado para el
análisis del grupo de alimentos (matriz específica).
● Al NO cumplirse los criterios de validez (indicar cuales no se han cumplido) se
concluye que el Método para la enumeración de E. coli,β-glucuronidasa a 44º C
utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el
método del laboratorio), al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de
XXXXXXX NO es adecuado para el análisis del grupo de alimentos cárnicos o para la
matriz específica.
12. BIBLIOGRAFÍA
12.1 Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, PRODUCTOS Y SERVICIOS. MÉTODOS DE PRUEBA MICROBIOLÓGICOS. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS. APÉNDICE NORMATIVO J. Método para la enumeración de E. coli, β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido,
12.2 Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-P-062 2012.
13. ANEXOSAnexe copia de las evidencias referidas en el informe.Hoja de cálculos
13
INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014 anexo 1
1
Volumen inoculado 1ml de la dilución 10ˆ-4 aproximamente 90000 UFC Volumen inoculado
250 mL
Analista 1Réplica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
UFC/g ó UFC/mL 8000 8100 8000 7900 8000 8300 6800 8400 8200 8100
Log 3.90 3.91 3.90 3.90 3.90 3.92 3.83 3.92 3.91 3.91Promedio 3.90
Desviacion Estandar 0.03 r1= 0.0058 Criterio 3.00 CumpleDSR 0.01
Analista 2Réplica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10UFC/g 8100 8000 7900 8000 8300 6800 8400 8200 8000 8100
Log 3.91 3.90 3.90 3.90 3.92 3.83 3.92 3.91 3.90 3.91Promedio 3.90
Desviacion Estandar 0.03 r2= 0.0058 Criterio 3.00 CumpleDSR 0.01
R 0.0058 Criterio 3.00 Cumple
UFC/g o mL Log
Cuenta de Analista 1 4000 3.602059991Cuenta de Analista 2 8000 3.903089987 108.31%
VALOR ESPERADO Cumple
99.96% 90 -110 Cumple
0.3VALOR ESPERADO Cumple
0.0 < 0.3 Cumple
((logA1-LogB1)2)/2 ((logA2-LogB2)2)/2 ((logA3-LogB3)2)/2 ((logA4-LogB4)2)/2 ((logA5-LogB5)2)/2 ((logA6-LogB6)2)/2 ((logA7-LogB7)2)/2 ((logA8-LogB8)2)/2 ((logA9-LogB9)2/2) ((logA10-LogB10)2)/2
0.000015 0.000015 0.000015 0.000015 0.000128 0.003747 0.004211 0.000055 0.000058 0.000000suma 0.008257sR 0.02032U 0.04
Incertidumbre
% DE RECUPERACION 1% DE RECUPERACION 2
HOJA DE CALCULOS, INFORME ARMONIZADO E. coli
SESGO 1SESGO 2