wl check - wiener-lab.com.ar

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Ensayo inmunocromatográfico para la detección cualitativa de antígenos de la nucleocápside del virus del SARS-CoV-2 en muestras de hisopados nasofaríngeos o nasales

WL CheckSARS-CoV-2 Ag

SIGNIFICACION CLINICACOVID-19 es una enfermedad infecciosa respiratoria aguda, causada por el virus SARS-CoV-2, un nuevo coronavirus que pertenece al género beta de los coronavirus. Después de la infección, hay un período de incubación de 1 a 14 días (típicamente de 3 a 7 días) antes del inicio de la enfermedad. Los síntomas de la enfermedad incluyen fatiga, tos seca, pérdida del gusto y el olfato, congestión nasal, secreción nasal, dolor de garganta, mialgia y/o diarrea. Algunas per-sonas infectadas pueden presentar síntomas leves o nulos (asintomáticos).Esta prueba rápida fue diseñada para detectar antígenos virales en muestras de las vías respiratorias superiores recolectadas durante la fase aguda de la infección.

FUNDAMENTOS DEL METODOWL Check SARS-CoV-2 Ag es un ensayo inmunocromato-gráfico que utiliza anticuerpos monoclonales de alta sensi-bilidad para detectar proteínas virales del SARS-CoV-2 en muestras de hisopados nasofaríngeos o nasales anteriores o de cornete medio.La tira reactiva que se encuentra inmovilizada dentro de undispositivo plástico (cassette) se compone de las siguientespartes: pad de muestra, pad de reactivos, membrana dereacción y pad absorbente. El pad reactivo contiene micro-partículas conjugadas con anticuerpos monoclonales contrala proteína N del SARS-CoV-2; la membrana de reaccióncontiene anticuerpos contra los antígenos del SARS-CoV-2.Cuando la muestra se agrega al pocillo de muestra, losconjugados inmovilizados en el pad de reactivos se disuel-ven y migran junto con la muestra. Si los antígenos delSARS-CoV-2 están presentes en la muestra, los anticuerposmonoclonales específicos anti-SARS-Cov-2 inmovilizadosen la región de la línea de prueba (T) capturan el complejoformado entre el conjugado anti-SARS-Cov-2 y la proteínaviral. La ausencia de la línea T indica un resultado negativo.Como control de procedimiento, siempre aparecerá una línearoja en la región de la línea de control (C) para indicar quese ha agregado un volumen adecuado de muestra y que seha producido la absorción en la membrana.

REACTIVOS PROVISTOSA. Reactivo A: sobres sellados con desecante contenien-do un cassette plástico compuesto por una membrana denitrocelulosa sensibilizada con anticuerpos monoclonalescontra la proteína N del SARS-CoV-2 y anticuerpos contralos antígenos del SARS-CoV-2.B. Reactivo B: buffer de extracción.

INSTRUCCIONES PARA SU USOReactivos Provistos: listos para usar.

MATERIAL REQUERIDO1- Provisto- Tubos de extracción (en cantidad suficiente según el nº de

determinaciones)- Hisopos para toma de muestra (en cantidad suficiente

según el nº de determinaciones)

2- No Provisto- Cronómetro o timer

PRECAUCIONES- Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".- Leer la información contenida en este manual de instruc-

ciones por completo antes de realizar la prueba.- No utilizar pasada la fecha de vencimiento indicada en

el envase.- El cassette debe permanecer en la bolsa sellada hasta el

momento de usar. Una vez abiertos, los cassettes debenusarse dentro de las 2 horas.

- Ensayar sólo una muestra por cassette. No combinarmuestras.

- Permitir que los reactivos alcancen temperatura ambiente(15-30ºC) antes de usar.

- No mezclar reactivos de diferentes lotes.- No utilizar reactivos y materiales de otro origen.- Utilizar guantes, guardapolvo y protección ocular al mani-

pular los reactivos del kit y las muestras clínicas.- Lavar bien las manos después de realizar la prueba.- No fumar, beber ni comer en áreas donde se manipulen

muestras o reactivos del kit.- Los resultados de la prueba deben leerse entre 15 y 20 mi-

nutos después de aplicar una muestra al pocillo de muestradel dispositivo. La lectura del resultado de la prueba des-pués de 20 minutos puede conducir a resultados erróneos.

- No realizar la prueba en una habitación con fuerte flujo deaire como ventilador o aire acondicionado fuerte.

- Todas las muestras deben considerarse potencialmentepeligrosas y manipularse de la misma manera que unagente infeccioso.

- Los reactivos y las muestras deben ser descartados deacuerdo con la normativa local vigente.

ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTOEl kit es estable a 2-30ºC hasta la fecha de vencimiento

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indicada en la caja. No congelar ni someter a temperaturas superiores a 30ºC. En caso de almacenar a 2-10ºC, ase-gurarse que el dispositivo alcance temperatura ambiente antes de ser utilizado.El cassette debe permanecer en su sobre original sellado y con el desecante. No abrir el envoltorio hasta el momento de usar.

MUESTRAHisopado nasofaríngeo o nasala) Recolección:Las muestras deben ser recolectadas y transportadas según las recomendaciones de las autoridades sanitarias locales (https://www.argentina.gob.ar/salud/coronavirus-COVID-19/laboratorio).Antes de recolectar la muestra, preparar el tubo de extracción de muestra de la siguiente manera:- Etiquetar el tubo de extracción.- Agregar 10 gotas (aproximadamente 0,25 ml) de Reactivo

B (buffer de extracción) en el tubo de extracción.

a1) Recolección de muestras de hisopado nasofaríngeo1. Insertar con cuidado un hisopo en la fosa nasal del pa-ciente, hasta llegar a la superficie de la nasofaringe posterior.2. Girar el hisopo varias veces.3. Retirar el hisopo de la cavidad nasal.4. Si un tabique desviado o una obstrucción crea dificultades para obtener la muestra de la fosa nasal, utilizar el mismo hisopo para obtener la muestra de la otra fosa nasal.5. Seguir las indicaciones de "Extracción" para extraer la muestra del hisopo.

a2) Recolección de muestras de fosa nasal anterior1. Inclinar la cabeza del paciente hacia atrás aproxima-damente 70 grados. Insertar el hisopo en la fosa nasal girándolo suavemente (hasta encontrar resistencia en aproximadamente 2,5 centímetros). Girar el hisopo 5 veces contra la pared nasal.2. Con el mismo hisopo, repetir el proceso en la otra fosa nasal. Retirar el hisopo.3. Seguir las indicaciones de "Extracción" para extraer la muestra del hisopo.

b) Extracción: 1. Insertar el hisopo en el tubo de extracción que contiene aproximadamente 0,25 ml de Reactivo B.

2. Girar el hisopo por lo menos 6 veces presionando la punta de este contra la parte inferior y lateral del tubo de extracción.4. Dejar el hisopo en el tubo de extracción durante 1 minuto.5. Retirar el hisopo mientras se frota contra la pared y des-echar correctamente el hisopo.6. La muestra así extraída se utiliza para realizar la prueba.

PROCEDIMIENTODejar que el dispositivo de prueba (cassette), la muestra y el buffer (Reactivo B) alcancen la temperatura ambiente (15-30ºC) antes de realizar la prueba.1. Retirar el cassette de la bolsa sellada inmediatamente antes de realizar la prueba y colocarlo sobre una super-ficie plana.2. Tapar firmemente el tubo de extracción conteniendo la muestra.3. Invertir el tubo de extracción y agregar 4 gotas (aproxi-madamente 100 μl) de la muestra extraída en el pocillo de muestra apretando el tubo de extracción.4. Iniciar el timer.5. Esperar a que aparezcan las bandas de colores. El resultado debe leerse en 15 minutos. No interpretar el resultado después de 20 minutos.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOSVálido:1. La prueba es válida cuando desarrolla línea C.2. Cuando solo se desarrolla la línea C, el resultado de la prueba indica la ausencia del antígeno del virus del SARS-CoV-2 en la muestra y, por lo tanto, es probable que no haya infección (Negativo).

Negativo

3. Cuando se desarrollan tanto la línea C como la T, el resul-tado de la prueba indica la presencia del antígeno del virus del SARS-CoV-2 en la muestra y, por lo tanto, una posible infección (Positivo).

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Positivo débil

Positivo fuerte

Inválido:Si la línea C no se desarrolla, el ensayo no es válido inde-pendientemente de si el color de la línea T está presente. Debe repetirse el ensayo con un dispositivo nuevo.

Inválido

Inválido

CONTROL DE CALIDADEsta prueba contiene una función de control incorporada, la línea C. Esta línea se desarrolla después de la adición de la muestra indicando que se ha agregado el volumen adecuado de muestra, que su migración fue apropiada y que la realización del procedimiento fue correcta. Si la línea C no se desarrolla, la prueba no es válida. Se debe revisar el procedimiento y repetir la prueba con un dispositivo nuevo.Se recomienda realizar controles positivos y negativos para garantizar el rendimiento adecuado del ensayo, especial-mente en las siguientes circunstancias:- Nuevo operador.- Nuevo lote de kit.- Temperatura de conservación del kit fuera de 2-30ºC.- Temperatura del área de prueba fuera de 15-30ºC.- Frecuencia mayor a la esperada de resultados positivos

o negativos.- Obtención de repetidos resultados inválidos.

PERFORMANCEa) Evaluación clínica:Se determina la concordancia entre los resultados del kit WL Check SARS-CoV-2 Ag y un método de detección por RT-PCR tomado como referencia. Se analizaron 191 mues-tras de hisopado nasofaríngeo obteniéndose los siguientes resultados:

Método RT-PCR (referencia)

WL Check SARS-CoV-2 AgMuestras

Reactiva 78 70

No Reactiva 113 121

Total 191 191

Los resultados mostraron 95.81% de concordancia entre RT-PCR y WL Check SARS-CoV-2 Ag. Se obtuvo una sensibilidad de 89.7% y una especificidad de 100%

b) Sensibilidad analítica (Límite de detección):Los estudios de límite de detección (LoD) determinaron la concentración más baja detectable de virus SARS-CoV-2 in-activado por calor a la que aproximadamente el 95% de todas las réplicas (verdaderas positivas) dieron positivo. El LoD confirmado es 2,3 x 102 TCID50/mL con 100% de positividad.

c) Especificidad analítica:- Reactividad cruzadaSe estudió la posible aparición de reactividades cruzadas ensayando muestras provenientes de individuos con dife-rentes condiciones clínicas que pueden ser causantes de reacciones inespecíficas para el ensayo WL Check SARS-CoV-2 Ag. Estas condiciones incluyen: infecciones a otros coronavirus humanos, virus de la parainfluenza humana, virus de la influenza A, Haemophilus influenzae, Strepto-coccus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Candida albicans, Bordetella pertussis, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, Legionella. No se observaron resultados falsos positivos.

- Sustancias potencialmente interferentesNo se encontraron interferencias por las sustancias enu-meradas a continuación en las concentraciones indicadas:

Sustancia ConcentraciónSangre entera 4% (v/v)

Mucina 0.5%

Mentol 1.5 mg/ml

Fenilefrina 15% v/v

Oximetazolina 15% (v/v)

Fenol 15% v/v

Tobramicina 4 µg/mL

Oseltamivir 5 mg/mL

d) Reproducibilidad:Se determinó la reproducibilidad utilizando 3 lotes del kit WL Check SARS-CoV-2 Ag de acuerdo con el protocolo EP5-A2 recomendado por CLSI. Los ensayos fueron realizados por 3 operadores distintos no capacitados, con 5 muestras de hisopados nasales positivas débiles y 5 muestras negativas. Se realizó 1 ensayo diario evaluando cada muestra por quintuplicado por el transcurso de 5 días. Los resultados fueron leídos a los 15 minutos en forma visual. Las muestras positivas siempre dieron un resultado reactivo y la muestra negativa siempre dio un resultado no reactivo.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO- Esta prueba no determina la etiología de la infección

respiratoria causada por microorganismos distintos del SARS-CoV-2. El kit WL Check SARS-CoV-2 Ag es capaz de detectar SARS-CoV-2 viable y no viable. La performance del kit depende de la carga de antígeno.

- No seguir el Procedimiento indicado puede afectar nega-

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2000 Rosario - Argentina

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba 29442000 - Rosario - Argentinahttp://www.wiener-lab.com.arDir. Téc.: Viviana E. CétolaBioquímicaProducto Autorizado A.N.M.A.T. PM-1102-218

UR211022

Wiener lab.

Producto autorizado en el contexto a la emergencia sanitaria por COVID-19

tivamente el desempeño del kit y/o invalidar el resultado de la prueba.

- Si el resultado de la prueba es negativo y los síntomas clínicos persisten, se recomienda realizar pruebas adicio-nales con otros métodos clínicos. Un resultado negativo no descarta la presencia de antígenos del SARS-CoV-2 en la muestra, ya que los mismos pueden estar presentes por debajo del nivel mínimo de detección de la prueba. También se puede obtener un resultado negativo si la muestra fue recolectada o transportada incorrectamente.

- Al igual que con todas las pruebas de diagnóstico, sólo debe confirmarse el diagnóstico luego de haber evaluado todos los hallazgos clínicos y de laboratorio.

- Los resultados positivos de las pruebas no descartan coinfecciones con otros patógenos.

- Los resultados positivos de las pruebas no diferencian entre el SARS-CoV y el SARS-CoV-2.

- Los resultados negativos deben tratarse como presuntivos y confirmarse con un ensayo molecular.

PRESENTACION- 25 determinaciones (Cód. 1690091).

BIBLIOGRAFIA- Cascella M, Rajnik M, Cuomo A, et al. Features, Evaluation,

and Treatment of Coronavirus (COVID-19) [Updated 2020 Aug 10]. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; January 2020

- Evaluation of Precision Performance of Quantitative Mea-surement Methods; Approved Guideline-Second Edition, EP5-A2 Vol. 19 Nº 2, CLSI.

- Salata C, Calistri A, Parolin C, Palù G, Coronaviruses: a paradigm of new emerging zoonotic diseases, Pathogens and Disease, Volume 77, Issue 9, December 2019, https://doi.org/10.1093/femspd/ftaa006.

- Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Symp-toms of coronavirus; 13 May 2020. [Accessed 4 Septem-ber 2020]. https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/symptoms-testing/symptoms.html.

- Centers for Disease Control and Prevention (CDC). In-terim Clinical Guidance for Management of Patients with Confirmed Coronavirus Disease (COVID-19) 30 June 2020. [Accessed 4 September 2020]. https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/hcp/clinical-guidance-mana-gement-patients.html.

- European Centre for Disease Prevention and Control (ECDC). Last evidence: Transmision of COVID-19; 30 June 2020. [Accessed 4 September 2020] https://www.ecdc.europa.eu/en/covid-19/latest-evidence/transmission.

- Vabret N, Britton G J, Gruber C, et al, 2020. Immunology of COVID-19: Current State of the Science, Immunity, Volume 52, Issue 6, June 2020, https://doi.org/10.1016/j.immuni.2020.05.002.

SIMBOLOSLos siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

CEste producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"

P Representante autorizado en la Comunidad Europea

V Uso diagnóstico "in vitro"

X Contenido suficiente para <n> ensayos

H Fecha de caducidad

l Límite de temperatura (conservar a)

No congelar

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

Contenido

g Número de lote

M Elaborado por:

Nocivo

Corrosivo / Cáustico

Irritante

i Consultar instrucciones de uso

Calibrador

Controlbb Control Positivo

c Control Negativo

h Número de catálogo

Calibr.

Cont.

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Immunochromatographic assay for the qualitative detection of nucleocapsid antigens of the SARS-CoV-2 virus in nasopharyngeal or nasal swab samples


SUMMARYCOVID-19 is an acute respiratory infectious disease, caused by the SARS-CoV-2 virus, a new coronavirus that belongs to the beta genus of coronaviruses. After infection, there is an incubation period of 1 to 14 days (typically 3 to 7 days) before the onset of the disease. Symptoms of the disease include fatigue, dry cough, loss of taste and smell, nasal congestion, runny nose, sore throat, myalgia, and / or diarr-hea. Some infected people may have little or no symptoms (asymptomatic).This rapid test was designed to detect viral antigens in upper respiratory samples collected during the acute phase of infection. PRINCIPLEWL Check SARS-CoV-2 Ag is an immunochromatographic assay that uses highly sensitive monoclonal antibodies to detect SARS-CoV-2 viral proteins in nasopharyngeal or anterior nasal or middle turbinate swab samples.The test strip that is immobilized inside a plastic device (cassette) is made up of the following parts: sample pad, reagent pad, reaction membrane and absorbent pad. The reagent pad contains microparticles conjugated with mono-clonal antibodies against SARS-CoV-2 protein N; the reac-tion membrane contains antibodies against SARS-CoV-2 antigens. When the sample is added to the sample well, the immobilized conjugates on the reagent pad dissolve and migrate along with the sample. If SARS-CoV-2 antigens are present in the sample, the anti-SARS-Cov-2 specific monoclonal antibodies immobilized in the test line region (T) capture the complex formed between the anti-SARS-Cov-2 conjugate and the viral protein. The absence of the T line indicates a negative result.As a procedural control, a red line will always appear in the control line region (C) to indicate that an adequate volume of sample has been added and membrane absorption has occurred. PROVIDED REAGENTSA. Reagent A: desiccant-sealed envelopes containing a plastic cassette composed of a nitrocellulose membrane sensitized with monoclonal antibodies against SARS-CoV-2 protein N and antibodies against SARS-CoV-2 antigens.B. Reagent B: extraction buffer. INSTRUCTIONS FOR USEProvided Reagents: ready to use.

REQUIRED MATERIAL1- Provided- Extraction tubes (in sufficient quantity according to the

number of determinations)- Swabs for sampling (in sufficient quantity according to the

number of determinations) 2- Non-provided- Stopwatch or timer WARNINGS- The reagents are for "in vitro" diagnostic use.- Read the information contained in this instruction manual

completely before performing the test.- Do not use after the expiration date indicated on the

package.- The cassette must remain in the sealed bag until ready to use.

Once opened, the cassettes must be used within 2 hours.- Assay only one sample per cassette. Do not combine

samples.- Allow the reagents to reach room temperature (15-30ºC)

before using.- Do not mix reagents from different lots.- Do not use reagents and materials of other origin.- Wear gloves, dust cover and eye protection when handling

kit reagents and clinical samples.- Wash your hands well after performing the test.- Do not smoke, drink or eat in areas where samples or kit

reagents are handled.- Test results should be read 15-20 minutes after applying a

sample to the device's sample well. Reading the test result after 20 minutes can lead to erroneous results.

- Do not perform the test in a room with strong air flow such as a strong fan or air conditioner.

- All patient samples should be handled as if capable of transmitting infection.

- Reagents and samples must be discarded in accordance with current local regulations.

STABILITY AND STORAGE INSTRUCTIONSThe kit is stable at 2-30ºC until the expiration date indicated on the box. Do not freeze or expose to temperatures above 30ºC. In case of storing at 2-10ºC, make sure the device reaches room temperature before being used.The cassette should remain in its original sealed envelope with the desiccant. Do not open the package until you are ready to use it.

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SAMPLENasopharyngeal or nasal swaba) Collection:The samples must be collected and transported according to the recommendations of the local health authorities (https://www.argentina.gob.ar/salud/coronavirus-COVID-19/laboratorio).Before collecting the sample, prepare the sample collection tube as follows:- Label the extraction tube.- Add 10 drops (approximately 0.25 ml) of Reagent B (ex-

traction buffer) to the extraction tube.

a1) Collection of nasopharyngeal swab samples1. Gently insert a swab into the patient's nostril, up to the posterior nasopharyngeal surface.2. Turn the swab several times.3. Remove the swab from the nasal cavity.4. If a deviated septum or obstruction creates difficulties in obtaining the sample from the nostril, use the same swab to obtain the sample from the other nostril.5. Follow the "Extraction" instructions to extract the sample from the swab.

a2) Collection of samples from the anterior nostril1. Tilt the patient's head back approximately 70 degrees. Insert the swab into the nostril by turning it gently (until re-sistance is approximately 2.5 centimeters). Rotate the swab 5 times against the nasal wall.2. Using the same swab, repeat the process in the other nostril. Remove the swab.3. Follow the "Extraction" instructions to extract the sample from the swab. b) Extraction:1. Insert the swab into the extraction tube containing approxi-mately 0.25 ml of Reagent B.2. Rotate the swab at least 6 times by pressing the tip of the swab against the bottom and side of the collection tube.4. Leave the swab in the extraction tube for 1 minute.5. Remove the swab while rubbing against the wall and properly discard of the swab.6. he extracted sample is now ready to perform the test.

PROCEDUREAllow the test device (cassette), sample and buffer (Re-agent B) to reach room temperature (15-30ºC) before performing the test.1. Remove the cassette from the sealed pouch immedia-tely prior to testing and place it on a flat surface.2. Tightly cap the extraction tube containing the sample.3. Invert the extraction tube and add 4 drops (approxima-tely 100 µl) of the extracted sample to the sample well by squeezing the extraction tube.4. Start the timer.5. Wait for the colored bands to appear. The result should be read in 15 minutes. Do not interpret the result after 20 minutes.

RESULTS INTERPRETATIONValid:1. The test is valid when the C line develops.2. When only the C line develops, the test result indicates the absence of the SARS-CoV-2 virus antigen in the sample and therefore, it is likely that there is no infection (Negative).

Negative

3. When both the C and T lines develop, the test result indi-cates the presence of the SARS-CoV-2 virus antigen in the sample and therefore a possible infection (Positive).

Weak positive

Strong positive

Invalid:If the C line does not develop, the test is invalid regardless of whether the T line color is present. The test should be repeated with a new device.

4gts (~ 11001-1L)

( �e -=r-

ó

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Invalid

Invalid

QUALITY CONTROL METHOD This test contains an internal control, the C line. This line develops after sample addition indicating that the appropriate volume of sample has been added, that its migration was appropriate, and that the procedure was performed correctly. If C line does not develop, the test is invalid. eview the pro-cedure and repeat the test with a new device.Positive and negative controls are recommended to ensure proper assay performance, especially under the following circumstances:- New operator.- New batch of kit.- Kit storage temperature outside 2-30ºC.- Temperature of the test area outside 15-30ºC.- Greater than expected frequency of positive or negative

results.- Obtaining repeated invalid results. PERFORMANCEa) Clinical evaluation:The concordance between the results of the WL Check SARS-CoV-2 Ag kit and a reference RT-PCR detection method is determined. 191 nasopharyngeal swab samples were analyzed, obtaining the following results:

Method RT-PCR (reference)

WL Check SARS-CoV-2 AgSamples

Reactive 78 70

Non-Reactive 113 121

Total 191 191 The results showed 95.81% concordance between RT-PCR and WL Check SARS-CoV-2 Ag. A sensitivity of 89.7% and a specificity of 100% were obtained.

b) Analytical Sensitivity (Limit of Detection):Limit of detection (LoD) studies determined the lowest de-tectable concentration of heat-inactivated SARS-CoV-2 virus at which approximately 95% of all replicates (true positives) were positive. The confirmed LoD is 2.3 x 102 TCID50/mL with 100% positivity.

c) Analytical specificity:- Cross reactivityThe possible occurrence of cross-reactivities was studied by testing samples from individuals with different clinical conditions that may cause nonspecific reactions for the WL Check SARS-CoV-2 Ag assay. These conditions include: infections to other human coronaviruses, parainfluenza

viruses human, influenza A virus, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogene , Candi-da albicans, Bordetella pertussis, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, Legionella. No false positive results were observed.

- Potentially interfering substancesNo interference was found for the substances listed below at the indicated concentrations:

Substance ConcentrationWhole blood 4% (v/v)

Mucin 0.5%

Menthol 1.5 mg/ml

Phenylephrine 15% v/v

Oxymetazoline 15% (v/v)

Phenol 15% v/v

Tobramycin 4 µg/mL

Oseltamivir 5 mg/mL

d) Reproducibility:Reproducibility was determined using 3 lots of the WL Check SARS-CoV-2 Ag kit according to the EP5-A2 proto-col recommended by CLSI. The tests were performed by 3 different untrained operators, with 5 weak positive nasal swab samples and 5 negative samples. 1 daily test was performed testing each sample five times over the course of 5 days. The results were visually read after 15 minutes. Positive samples always yielded a reactive result and negative sample always yealded a non-reactive result. PROCEDURE LIMITATIONS - The etiology of respiratory infection caused by microorga-

nisms other than SARS-CoV-2 will not be established with this test. The WL Check SARS-CoV-2 Ag kit is capable of detecting both viable and non-viable SARS-CoV-2. The performance of the kit depends on the antigen load.

- Failure to follow the indicated Procedure may adversely affect the performance of the kit and/or invalidate the test result.

- If the test result is negative and clinical symptoms persist, further testing with other clinical methods is recommended. A negative result does not rule out the presence of SARS-CoV-2 antigens in the sample, since they may be present below the minimum detection level of the test. A negative result can also be obtained if the sample was collected or transported incorrectly.

- As with all diagnostic tests, the diagnosis should only be confirmed after all clinical and laboratory findings have been evaluated.

- Positive test results do not rule out coinfections with other pathogens.

- Positive test results do not differentiate between SARS-CoV and SARS-CoV-2.

- Negative results should be treated as presumptive and confirmed with a molecular assay.

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2000 Rosario - ArgentinaUR211022

Wiener lab.M Wiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba 29442000 - Rosario - Argentinahttp://www.wiener-lab.com.arTech. Dir.: Viviana E. CétolaBiochemistA.N.M.A.T. registered productPM-1102-218

Product authorized in the context of the health emergency due to COVID-19

SYMBOLSThe following symbols are used in the packaging for Wiener lab. diagnostic reagents kits.

CThis product fulfills the requirements of the European Directive 98/79 EC for "in vitro" diagnostic medical devices

Authorized representative in the European Community

"In vitro" diagnostic medical device

Contains sufficient for <n> tests

Use by

Temperature limitation (store at)

Do not freeze

Biological risks

Volume after reconstitution

Contents

Batch code

Manufactured by:

Harmful

Corrosive / Caustic

Irritant

Consult instructions for use

Calibrator

Control

Positive Control

Negative Control

Catalog number

P

V

X

H

l

F

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c

h

Calibr.

Cont.

WIENER LAB PROVIDES - 25 tests (Cat. Nº 1690091) REFERENCES- Cascella M, Rajnik M, Cuomo A, et al. Features, Evaluation,

and Treatment of Coronavirus (COVID-19) [Updated 2020 Aug 10]. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; January 2020







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Ensaio imunocromatográfico para a detecção qualitativa de antígenos do nucleocapsídeo do vírus SARS-CoV-2 em amostras nasofaríngeas ou de esfregaço nasal


SIGNIFICADO CLÍNICOCOVID-19 é uma doença infecciosa respiratória aguda, causada pelo vírus SARS-CoV-2, um novo coronavírus que pertence ao gênero beta dos coronavírus. Após a infecção, há um período de incubação de 1 a 14 dias (normalmente 3 a 7 dias) antes do início da doença. Os sintomas da doença incluem fadiga, tosse seca, perda do paladar e do olfato, congestão nasal, coriza, dor de garganta, mialgia e/ou diarreia. Algumas pessoas infectadas podem ter poucos ou nenhum sintoma (assintomáticas).Este teste rápido foi projetado para detectar antígenos virais em amostras do trato respiratório superior coletadas durante a fase aguda da infecção.

FUNDAMENTOS DO MÉTODOWL Check SARS-CoV-2 Ag é um ensaio imunocromatográ-fico que usa anticorpos monoclonais altamente sensíveis para detectar proteínas virais SARS-CoV-2 em swabs nasofaríngeos anteriores ou nasais ou amostras de concha nasal média.A tira teste que é imobilizada dentro de um dispositivo de plástico (cassete) é composta pelas seguintes partes: al-mofada de amostra, almofada de reagente, membrana de reação e almofada absorvente. A almofada de reagente con-tém micropartículas conjugadas com anticorpos monoclonais contra a proteína N SARS-CoV-2; a membrana de reação contém anticorpos contra antígenos SARS-CoV-2. Quando a amostra é adicionada ao poço de amostra, os conjuga-dos imobilizados na almofada de reagente se dissolvem e migram junto com a amostra. Se os antígenos SARS-CoV-2 estiverem presentes na amostra, os anticorpos monoclonais anti-SARS-Cov-2 específicos imobilizados na região da linha de teste (T) capturam o complexo formado entre o conjugado anti-SARS-Cov-2 e proteína viral. A ausência da linha T indi-ca um resultado negativo. Como controle do procedimento, uma linha vermelha sempre aparecerá na região da linha de controle (C) para indicar que um volume adequado de amostra foi adicionado e a absorção da membrana ocorreu.

REAGENTES FORNECIDOSA. Reagente A: envelopes selados com dessecante con-tendo um cassete de plástico composto por uma membrana de nitrocelulose sensibilizada com anticorpos monoclonais contra a proteína N do SARS-CoV-2 e anticorpos contra os antígenos SARS-CoV-2.B. Reagente B: tampão de extração.

INSTRUÇÕES PARA USOReagentes Fornecidos: prontos para uso.

MATERIAL NECESSÁRIO1- Fornecido- Tubos de extração (em quantidade suficiente de acordo

com o número de determinações)- Swabs para a coleta de amostra (em quantidade suficiente

de acordo com o número de determinações)- Suporte para tubo de extração de amostra (de acordo com

a apresentação)

2- Não Fornecido- Cronômetro ou relógio

PRECAUÇÕES- Os reativos são para uso diagnóstico in vitro.- Ler a toda a informação contida nestas instruções de uso

antes de realizar a prova.- Não utilizar após a data de vencimento indicada na em-

balagem.- O cassete deve permanecer na bolsa selada até o momento

de usar. Uma vez abertos, os cassetes devem usados dentro de 2 horas.

- Ensaiar somente uma amostra por cassete. Não combinar amostras.

- Permitir que os reativos alcancem a temperatura ambiente (15-30ºC) antes de usar.

- Não misturar reativos de diferentes lotes.- Não utilizar reativos e materiais de outra origem.- Utilizar luvas, avental e Proteção ocular ao manipular os

reativos do kit e as amostras clínicas. - Lavar bem as mãos depois de realizar a prova. - Não fumar, beber nem comer nas áreas onde as amostras

e os reativos do kit são manipulados.- Os resultados da prova devem ser lidos entre 15 e 20 mi-

nutos depois de aplicar uma amostra ao poço de amostra no dispositivo. A leitura do resultado da prova depois de 20 minutos pode conduzir à resultados errôneos.

- Não realizar a prova em um local com forte fluxo de ar, como ventilador ou ar condicionado forte.

- Todas as amostras devem ser consideradas potencialmente perigosas e devem ser manipuladas da mesma maneira que um agente infeccioso.

- Os reativos e as amostras devem ser descartados de acordo com a legislação local vigente.

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ESTABILIDADE E INSTRUÇÕES DE ARMAZENAMENTOO kit é estável a 2-30ºC até a data de vencimento indicada no kit. Não congelar nem submeter a temperaturas superiores a 30ºC. Caso seja armazenado entre 2-10ºC, assegurar que o dispositivo alcance a temperatura ambiente antes de ser utilizado.O cassete deve permanecer em sua embalagem original selada e com o dessecante. Não abrir a embalagem até o momento do uso.

AMOSTRASwab nasofaríngeo ou nasala) Coleta:As amostras devem ser coletadas e transportadas de acordo com as recomendações das autoridades sanitárias locais (https://www.argentina.gob.ar/salud/coronavirus-COVID-19/laboratorio).Antes de coletar a amostra, preparar o tubo de extração da amostra da seguinte maneira:- Etiquetar o tubo de extração.- Agregar 10 gotas (aproximadamente 0,25 ml) de Reagente

B (tampão de extração) no tubo de extração.

a1) Coleta de amostras de swab nasofaríngeo1. Inserir com cuidado um swab na fossa nasal do paciente, até chegar à superfície da nasofaringe posterior.2. Girar o swab várias vezes.3. Retirar o swab da cavidade nasal.4. Se um desvio de septo ou obstrução criar dificuldades na obtenção da amostra da narina, use o mesmo swab para obter a amostra da outra narina.5. Seguir as indicações de "Extração" para extrair a amostra do swab.

a2) Coleta de amostras da fossa nasal anterior1. Inclinar a cabeça do paciente para trás aproximadamente 70 graus. Inserir o swab na fossa nasal girando-o suave-mente (até encontrar resistência, em aproximadamente 2,5 centímetros). Girar o swab 5 vezes contra a parede nasal.2. Com o mesmo swab, repetir o processo na outra fossa nasal. Retirar o swab.3. Seguir as indicações de "Extração" para extrair a amostra do swab.

b) Extração: 1. Inserir o swab no tubo de extração que contém aproxima-damente 0,25 ml de Reativo B.2. Girar o swab por ao menos 6 vezes, pressionando a sua ponta contra a parede inferior e lateral do tubo de extração. 4. Deixar o swab no tubo de extração durante 1 minuto.5. Retirar o swab enquanto o esfrega contra a parede. Des-carte corretamente o swab.6. A amostra assim extraída é utilizada para realizar a prova.

PROCEDIMENTODeixar que o dispositivo de prova (cassete), a amostra e o tampão (reativo B) alcancem a temperatura ambiente (15-30ºC) antes de realizar a prova.1. Retirar o cassete da bolsa selada imediatamente antes de realizar a prova e o coloque sobre una superfície plana.2. Tampar firmemente o tubo de extração contendo a amostra.3. Inverter o tubo de extração e acrescentar 4 gotas (aproximadamente 100 μl) da amostra extraída no poço de amostra, apertando o tubo de extração.4. Iniciar o cronômetro.5. Esperar até que apareçam linhas de cores. O resultado deve ser lido em 15 minutos. Não interpretar o resultado depois de 20 minutos.

INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOSVálido:1. A prova é válida quando a linha C é desenvolvida. 2. Quando somente é desenvolvida a linha C, o resultado da prova indica a ausência do antígeno do vírus do SARS-CoV-2 na amostra e, portanto, é provável que não haja a infecção (Negativo).

Negativo

3. Quando são desenvolvidas a linha C e a linha T, o resul-tado da prova indica a presença do antígeno do vírus do SARS-CoV-2 na amostra e, portanto, uma possível infecção (Positivo).

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Positivo fraco

Positivo forte

Inválido:Caso a linha C não apareça, o ensaio não é válido, inde-pendentemente da linha T estar ou não presente. O ensaio deve ser repetido com um novo dispositivo.

Inválido

Inválido

CONTROLE DE QUALIDADEEsta prova contém uma função de controle incorporada, a linha C. Esta linha é desenvolvida depois da adição da amos-tra, indicando que foi agregado um volume adequado de amostra, que sua migração foi apropriada e que a realização do procedimento foi correta. Caso a linha C não apareça, a prova é inválida. O procedimento deve ser realizado e a prova repetida com um dispositivo novo. É recomendável realizar controles positivos e negativos para garantir o rendimento adequado do ensaio, especialmente nas seguintes circunstâncias: - Novo operador.- Novo lote de kit.- Temperatura de conservação do kit fora de 2-30ºC.- Temperatura da área de prova fora de 15-30ºC.- Frequência maior à esperada de resultados positivos ou

negativos.- Obtenção de repetidos resultados inválidos.

DESEMPENHOa) Avaliação clínica:Foi determinada a concordância entre os resultados do kit WL Check SARS-CoV-2 Ag e um método de detecção por RT-PCR, utilizado como referência. Foram analisadas 191 amostras de swab nasofaríngeo obtendo-se os seguintes resultados:

Método RT-PCR (referência)

WL Check SARS-CoV-2 AgAmostras

Reativa 78 70

Não Reativa 113 121

Total 191 191

Os resultados mostraram 95.81% de concordância entre RT-PCR e WL Check SARS-CoV-2 Ag. Foi obtida uma sensibilidade de 89.7% e uma especificidade de 100%.

b) Sensibilidade analítica (Limite de detecção):Os estudos de limite de detecção (LoD) determinaram a me-nor concentração detectável do vírus SARS-CoV-2 inativado por calor em que aproximadamente 95% de todas as réplicas (verdadeiros positivos) foram positivas. O LoD confirmado é de 2,3 x 102 TCID50/mL com 100% de positividade.

c) Especificidade analítica: - Reatividade cruzadaFoi estudada a possível aparição de reatividades cruza-das ensaiando amostras provenientes de indivíduos com diferentes condições clínicas que podem ser causas de reações inespecíficas para o ensaio WL Check SARS-CoV-2 Ag. Estas condições incluem: infecções a outros coronavírus humanos, vírus da parainfluenza humana, vírus da influenza A, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Candida albicans, Bordetella pertussis, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, Legionella. Não foram observados resultados falsos positivos.- Substâncias potencialmente interferentesNão foram encontradas interferências pelas substâncias enumeradas na continuação, nas concentrações indicadas:

Substância ConcentraçãoSangue total 4% (v/v)

Mucina 0.5%

Mentol 1.5 mg/ml

Fenilefrina 15% v/v

Oximetazolina 15% (v/v)

Fenol 15% v/v

Tobramicina 4 µg/mL

Oseltamivir 5 mg/mL

d) Reprodutibilidade:A reprodutibilidade foi determinada utilizando 3 lotes do kit WL Check SARS-CoV-2 Ag de acordo com o protocolo EP5-A2 recomendado pelo CLSI. Os ensaios foram realizados por 3 operadores distintos e não treinados, com 5 amostras de swabs nasais positivos fraco e 5 amostras negativas. Foi realizado 1 ensaio diário avaliando cada amostra por quintuplicata por 5 dias. Os resultados foram lidos aos 15 minutos de forma visual. As amostras positivas sempre deram um resultado reativo e a amostra negativa sempre seu um resultado negativo.

LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO- Esta prova não determina a etiologia da infecção respira-

tória causada por micro-organismos distintos do SARS-CoV-2. O kit WL Check SARS-CoV-2 Ag é capaz de detectar SARS-CoV-2 viável e não viável. O desempenho do kit depende da carga de antígeno.

- Não seguir o Procedimento indicado pode afetar negati-vamente o desempenho do kit e/ou invalidar o resultado da prova.

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- Se o resultado da prova for negativo e os sintomas clínicos persistirem, é recomendável realizar provas adicionais com outros métodos clínicos. Um resultado negativo não descarta a presença de antígenos do SARS-CoV-2 na amostra, já que eles podem estar presentes abaixo do nível mínimo de detecção da prova. Também pode ser obtido resultado negativo caso a amostra tenha sido coletada ou transportada incorretamente.

- Tal qual todas as provas de diagnóstico, somente deve ser confirmado o diagnóstico após haver avaliado todo os achados clínicos e de laboratório.

- Os resultados positivos das provas não descartam coinfe-cções com outros patógenos.

- Os resultados positivos das provas não diferenciam entre o SARS-CoV e o SARS-CoV-2.

- Os resultados negativos devem ser tratados como provável e confirmados com um ensaio molecular.

APRESENTAÇÃO- 25 determinações (Cód. 1690091).

REFERÊNCIAS- Cascella M, Rajnik M, Cuomo A, et al. Features, Evaluation,

and Treatment of Coronavirus (COVID-19) [Updated 2020 Aug 10]. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; January 2020.







2000 Rosario - Argentina

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba 29442000 - Rosario - Argentinahttp://www.wiener-lab.com.arDir. Téc.: Viviana E. CétolaBioquímicaProducto Autorizado A.N.M.A.T. PM-1102-218

Wiener lab.

SÍMBOLOSOs seguintes símbolos são utilizados nos kits de reagentes para diagnóstico da Wiener lab.

CEste produto preenche os requisitos da Diretiva Europeia 98/79 CE para dispositivos médicos de diagnóstico "in vitro"

Representante autorizado na Comunidade Europeia

Uso médico-diagnóstico "in vitro"

Conteúdo suficiente para <n> testes

Data de validade

Limite de temperatura (conservar a)

Não congelar

Risco biológico

Volume após a reconstituição

Conteúdo

Número de lote

Elaborado por:

Nocivo

Corrosivo / Caústico

Irritante

Consultar as instruções de uso

Calibrador

Controle

Controle Positivo

Controle Negativo

Número de catálogo

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Calibr.

Cont.

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