Білки плазми крові

Сокаль 2013

Роботу виконала

Фенчин Марія Олегівна

учениця 11 класу

Сокальської гімназії

імені Олега Романіва

1

Метою дослідження є вивчення білків плазми крові та їхніх функцій.Завдання,яке є ставлю перед собою - зрозуміти роль білків плазми крові у діагностиці різних захворювань.Об’єктом дослідження є плазма крові людини.Предметом дослідження є білки плазми крові людини.

2

Хімічний склад крові

Кількість крові в людини становить близько 1/13 маси тіла(5-5,5л. при відносній густині 1,05-1,06). Плазма крові становить 55%, еритроцити-44%, інші клітинні елементи-1%;

При електрофорезі, що здійснено на папері, у здорової людини виявляють 5 білкових фракцій(альбуміни, α1-,α2-, β-,γ-глобуліни);

Загальний вміст білка в нормі в крові( за біуретовимметодом) становить у дорослих 65-85 г/л, у дітей: новонароджених-47-65 г/л, віком до 6 років-59-79 г/л.

3

Гіпопротеїнемії - зниження вмісту загального білка в крові-виникають унаслідок:

1)гальмування синтезу білків у печінці: а)дефіциту білків у їжі, голодування,кахексії; б)порушення всмоктування; в)ураження печінки (цироз,атрофія, токсичне ураження,

метастази пухлин, первинні пухлини); 2)синдрому втрати білка: а)ниркові синдроми втрати; б)кишкові синдроми втрати білка(запальні стани слизової

оболонки кишки, хвороба Крона); в)ексудативні синдроми втрати білка(масивні набряки,

запалення плеври, легенів); г)катаболічні стани(сепсис,травми,гарячка); д)кровотечі.

4

Гіперпротеїнемії-підвищення рівня загального білка в крові-виникають унаслідок:

1.Хронічних запальних станів, ревматоїдногоартриту, колагенозів, бронхоектазів, цирозу печінки.

2.Зневоднення внаслідок втрати частини внутрішньо судинної рідини.

3.Появи патологічних білків при мієломній хворобі (білок Бенс-Джонса).

5

Альбуміни

6

Їх молекулярна маса-65 000 Да.

У складі поліпептидного ланцюга близько 5000 амінокислотних залишків. Ізоелектрична точка альбумінів-рН 4,7. Вони мають від’ємний заряд і мігрують в електричному полі до анода з великою швидкістю.

Альбуміни виконують важливу транспортну функцію, зв’язують і переносять жирн кислоти,жовчні пігменти, стероїдні гормони, іони Са2+, лікарські засоби.

У нормі вміст альбумінів у сироватці крові дорослих-35-50 г/л, новонароджених-23-46 г/л, дітей до 6 років-37-52 г/л.

Глобуліни

7

Молекулярна маса-від 180 000 Да до декількох мільйонів. Рівень рН ізоелектричної точки близький до нейтрального.

α1-глобуліни;

α2-глобуліни;

β-глобуліни(ліпопротеїди, фібриноген, трансферин та ін.);

γ-глобуліни(імуноглобуліни, складні глобулярні білки глікопротеїдної природи, здатні специфічно зв’язуватися з антигеном, який стимулює їх утворення, тобто виявляють властивості антитіл і забезпечують гуморальний імунітет.),

Гемопексин

8

(β-глобулін, молекулярна маса 57 000 Да) зв’язує і транспортує гем, запобігає його виведенню з сечею. У дуже малих кількостях у фракції β-глобулінів виявляють білок β2-мікроглобулін, що бере участь у відторгненні трансплантованих тканин. Уміст гемопексину в сироватці крові у нормі становить 0,5-1,0 г/л.

У нормі вміст β-глобулінів у сироватці крові дорослих -5,0-11,0 г/л, новонароджених-2,4-8,5 г/л, дітей віком до 6 років-6,0-12,0 г/л.

γ-Глобуліни(імуноглобуліни)

9

Імуноглобуліни G(IgG)- основний клас сироваткових імуноглобулінів. З ними пов'язаний процес гуморального захисту організму від багатьох бактерій і вірусів, їхніх токсинів.

Імуноглобуліни A(IgA) синтезуються в плазматичних клітинах слизової поверхні дихальних шляхів і травного тракту, майже в усіх ескреторних залозах.

Імуноглобуліни M(IgM)-потужний активатор системи комплементу. Імуноглобулінами цього класу є антитіла Вассермана, ревматоїдний фактор, холодові аглютиніни, ізогемаглютиніни. IgM першим з’явився в процесі формування імунної відповіді.

10

Імуноглобуліни D(IgD) у низьких концентраціях виявлено в сироватці здорових людей. Припускають, що поява цих антитіл блокує активність імуноглобулінів інших класів за конкурентним механізмом.

Імуноглобуліни E(IgE). У сироватці крові здорових людей виявляють їх сліди. До складу цієї фракції входять реагіни, які беруть участь в алергійних реакціях.

Фібриноектин

11

глікопротеїн плазми крові, який синтезується і секретується в міжклітинний простір багатьма клітинами, наявний на поверхні клітин, на базальних мембранах, у сполучній тканині та крові , виконує інтегровану функцію в міжклітинній взаємодії.

Уміст ФН у крові здорових людей-431 мкг/мл, глікозильованого ФН у крові-3,31 мкг/мл.

У хворих із злоякісними

захворюваннями ФН

крові-100-300 мкг/мл,

а ступінь глікозильованості

ФН плазми становить 1,1-1,2 мкг/мл.

Білки гострої фази запалення

12

Гаптоглобін -група білків плазми крові, які зв’язують вільний гемоглобін з утворенням комплексу, що метаболізується в ретикуло-ендотеліальній системі, це необхідно для запобігання втратам заліза й ушкодженням нирок. Норма Нр-1-1 у сироватці крові-0,8-2,1 г/л, Нр-2-1-0,1-2,1 г/л, Нр-2-2-0,7-3,4 г/л.

Церулоплазмін(мідьумісна оксидаза)-нормальний компонентфракції α-глобулінів білків сироватки. Цей білок можеобмежувати окиснення Fe2+

до Fe3+ і цим самим послаблюватипроцеси вільно радикальногоокиснення, для яких необхідні

іони негумового заліза. Норма в сироватці крові-1,52-1,98 мкмоль/л, або 150-600 мг/л.

13

С-реактивний білок(СРБ)- виявляється

в сироватці при різних запальних та

некротичних процесах і є показником їх гострого перебігу. СРБ є одним з пухлиніндуційованих маркерів. Нормальніпоказники до 6 мг/л.

α1-Антрипсин(α1-протеїназний інгібітор із молекулярною масою 55 000 Да)-глікопротеїн. Він утворює комплекси з протеїн азами, гальмуючи протеолітичну активність таких ферментів, як трипсин, хімотрипсин, плазмін,

тромбін та протеаз, які вивільняються при

руйнуванні лейкоцитів або чужорідних клітин

у вогнищах запалення.Норма в крові-2-3 г/л.

14

α2-Макроглобулін-білок α2-глобулінової фракції, універсальний сироватковий інгібітор протеаз. Біологічна роль α2-макроглобуліну полягає в регуляції систем тканинного протеолізу, які мають значення в процесах згортання крові, фібринолізу, процесах імунітету, функціонуванні систем комплементу, реакції запалення, регуляції судинного тонусу

Лактоферин(ЛФ)-залізовмісний глікопротеїн, є одним з факторів неспецифічного захисту організму, маркером гострофазних реакцій і активності запального процесу.

15

Парапротеїни-білки, які утворюються в організмі при деяких патологічних станах. Це вид імуноглобулінів, які продукуються патологічними імунокомпетентнимиклітинами(патологічні імуноглобуліни-PIg).

Кріоглобуліни відносяться до фракцій γ-глобулінів. Кількість кріоглобулінів підвищується при різних захворюваннях, особливо0при хронічних захворюваннях нирок, цирозі печінки, туберкульозі, інфаркті міокарда, малярії, злоякісних новоутвореннях, мієломній хворобі, лейкозі, хворобі Вальденстрема.

Визначення загального білка в сироватці крові за біуретовим методом

16

Принцип методу: метод заснований на взаємодії білків змідним купоросом (CuSO4*5H2O) в лужному середовищі зутворенням сполук, забарвлених в фіолетовий колір.

Реактиви: Концентрат біуретового реактиву. Робочий розчин біуретового реактиву Хід визначення: до 2 мл робочого розчину біуретового реактиву

додати 0, 04 мл сироватки крові, перемішати і через 30 хвпроколнметрувати пробу на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 540 нм, кювета 5 мм, проти робочого розчинубіуретового реактиву.

Розрахунок: концентрацію білка визначають за допомогою калібрувальної кривої.

Нормальні величини: 65 - 85 г/л

17

18

Калібрувальний графік

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0 10 20 30 40 50 60

Ех

С г/л

№ п. Р-н

альбумін

у

Фізіологі

чний

розчин

С білка мл

розчину

Ех k

1 0,4 0,6 20 0,05 2,5 0,1 200,0

2 0,6 0,4 30 0,05 2,5 0,14 214,2

3 0,8 0,2 40 0,05 2,5 0,19 210,5

4 1,0 - 50 0,05 2,5 0,24 208,3

kс=208,25

19

Відомості про особу Результати аналізів на

загальний білок та

гемоглобін (Hb)

Висновок

Хворий Бабух А.А.

58 років

Відділеня:хірургія

Hb 118 г/л

Загальний білок 49,4 г/л

Вміст загального білка

нижчий від норми

(гіпопротеїнемія), що

характерно після

оперативного втручання,

однак може свідчити про

наявність виразки.

Вміст гемоглобіну відповідає

нормам.

Хворий Колакович І.А.

47 років

Відділення:терапія

Hb 107 г/л

Загальний білок 45,3 г/л

Вміст загального білка

нижчий від

норми(гіпопротеїнемія),

що,найвірогідніше, свідчить

про ниркову недостатність.

Вміст гемоглобіну відповідає

нормам.

Хвора Д.

8 років

Відділення:педіатрія

Hb 144 г/л

Загальний білок 61,8 г/л

Отримані результати

відповідають нормам.

Вміст гемоглобіну

відповідає нормам.

Завдяки визначенню

загального вмісту

білка прописують

правильне

лікування хворих.

Визначення C-реактивного білка в сироватці крові людини

20

.

Реагенти:латексна суспензія, 2 мл (1 шт.),розчинник 14мл(1 шт.),позитивний контроль, який містить СРБ більш 6 мг/л, 0.2 мл (1 шт.),негативний контроль, який містить СРБ менш 6 мг/л, 0.2 мл (1 шт.).

Потрібно використовувати свіжу, чисту від домішок сироватку крові. Не можна використовувати мутні, хилбозніта гемолітичні зразки.

Перелік необхідного устаткування :автоматичний дозатор фіксованого або варіабельного об'єму 10-100 мкл.

Якщо припустима концентрація визначної речовини перевищує норму, можлива відсутність аглютинації в цільній сироватці. В такому випадку рекомендовано розвестисироватку в 2 рази.

21

Проведення дослідження 1.Якісне визначення

1.1На тестовий слайд потрібно послідовно нанести по 10 мкл позитивного

контролю, негативного контролю ,досліджувано матеріалу.

1.2 Додати по 10 мкл латексної суспензії в кожну краплю позитивного та

негативного контролю ,досліджуваного матеріалу.

1.3 Перемішуємо скляною паличкою.

1.4 Похитуємо пластину протягом 3 хвилин.

1.5 Проводимо оцінку результатів дослідження.

2. Кількісне визначення

2.1 За допомогою розчинника готуємо розведення

досліджуваного матеріалу - 1:2, 1:4, 1:8 і т.д.

2.2 Наносимо на тестовий слайд по 10 мкл кожного

розведення досліджуваного матеріалу.

2.3 Додаємо по 10 мкл латексної суспензії до кожного розведення проби.

2.4 Перемішуємо скляною паличкою.

2.5 Похитуємо пластину протягом 3 хвилин.

2.6 Проводимо оцінку результатів дослідження.

22

Оцінка результатів дослідження: аглютинацію, яка відбулась після 3 хвилин, розцінюють як неспецифічну. Реакцію вважають позитивною, коли спостерігається аглютинація частин латексу. Величину реакції оцінюють в плюсах:

4 плюси - всі частини аглютиновані, розчин прозорий; З плюси – 3/4 частин аглютиновані, розчин прозорий по краю; плюси – 1/2 частин аглютиновані, розчин мутнуватий; 1 плюс - слаба аглютинація, розчин мутний. При кількісному визначенні оцінку проводять згідно з останнім

титром сироватки, який дав позитивний результат. Для визначення кількості СРБ в мг/л в пробі, необхідно

найбільше розведення сироватки, що дало видиму аглютинацію, помножити на 6 мг/л. Наприклад, якщо аглютинаціяспостерігалася в титрі досліджуваної сироватки 1:16, то необхідно 16x6 мг/л = 96 мг/л СРБ.

Нормальні показники до 6 мг/л.

Висновок

23

Білки плазми крові відіграють ряд важливих функцій. Впровадження в лабораторну практику новітніх методів дослідження дає можливість удосконалювати клінічну діагностику і поліпшувати обстеження хворих. Застосування комплексних методів обстеження дає змогу у багатьох випадках розпізнати ранні та приховані ознаки деяких захворювань