4rod mycobacterium medicina

Opšte osobine bakterija roda Mycobacterium

ACIDOALKOHOLOREZISTENTNEGram pozitivni bacili (teško i rijetko se boje po Gramu)ćelijski zid sadrži veliku količinu lipida i voskovanajčešće pojedinačno raspoređenenepokretneasporogeneaerobne

vrijeme jedne generacije se kreće od 2 do>20 h i zavisno od vrste formiraju uočljive kolonije za 2 dana do 8 nedelja inkubacije pod optimalnim uslovima

Osnovna podjela bakterija roda Mycobacterium

Patogene: M. tuberculosisM. bovisM. africanumM. leprae

Uslovno patogene: M. avium kompleksoportunističke M. kansasii

M. fortuitum kompleksM. marinum

Saprofitne mikobakterije

Oboljenja koja izazivaju bakterije roda Mycobacterium

Tuberkuloza - Mycobacterium tuberculosisMycobacterium bovisMycobacterium africanum

Lepra - Mycobacterium leprae

Mikobakterioze - oportunističke mikobakterije

Oportunističke mikobakterije- opšte osobine -

acido-alkoholo rezistentni bacili

teško se boje po Gramu (Gram pozitivni)

sporo rastu na specijalnim podlogama

Podela:

spororastuće (kolonije > 7 dana; i do 4-8 nedjelja)

brzorastuće (kolonije < 7 dana)

Oportunističke mikobakterije- opšte osobine -

Najznačajnije spororastuće:

Mycobacterium avium kompleks

(M. avium, M. intracellulare)

Mycobacterium kansasii

Mycobacterium marinum

Najznačajnije brzorastuće:

Mycobacterium fortuitum

Mycobacterium chelonae

Oportunističke mikobakterije- epidemiologija -

ubikvitarne bakterije (voda, biljke, zemlja, neke vrste se nalaze i kod životinja)

infekcija spororastućim oportunističkim mikobakterijama: ingestija, inhalacija i preko kože

infekcija brzorastućim oportunističkim mikobakterijama: inokulacija u potkožno tkivo (trauma ili jatrogeno - injekcije, kateteri, implantati)

nema transmisije sa čovjeka na čovjeka

Oportunističke mikobakterije - bolesti -

oboljenja: mikobakterioze

spororastuće oportunističke mikobakterije najčešće izazivaju oboljenja kod imunokompromitovanih osoba (AIDS) diseminovana bolest;

rijetko kod imunokompetentnih osobalokalizovane infekcije (pneumonija, infekcije kože...)

brzorastuće oportunističke mikobakterije

lokalizovane infekcije (na mjestu ulaska kroz kožu): ulceracije, apscesi, infekcije povezane sa implantatima; sistemske infekcije

Oportunističke mikobakterije- bakteriološka dijagnostika -

Uzorci: sputum, krv, bioptat, bris...

Direktni preparat: bojenje po Ziehl-Neelsen-u

Specijalne hranljive podloge (Löwenstein-Jensen-ova podloga,...) - duga inkubacija

Oportunističke mikobakterije- bakteriološka dijagnostika -

Identifikacija na osnovu mikroskopskih, kulturelnih, biohemijskih i genskih karakteristika

Brze metode (kultivisanje, hibridizacija, PCR) !!!

MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

• G+, AARB (ZN bojenje), 1-10 μm x 0.2-0.6 μm, raspoređen u vidu X,Z,Y slova, nepokretan, asporogen, raste u atmosferi sa 3-10% CO2 na 37°C.

• Preparat iz kulture- mikrokolonije liče na užad-kordove.

• Striktni parazit čovjeka. Osjetljiv na sunčevu svjetlost, toplotu, UV i X zrake

GRAĐA ZIDA

• LIPIDI – 60% zida, mikolična kiselina (CMN), voskovi A,B,C i D

• POLISAHARIDI

• TUBERKULOPROTEINI – PPD

• Peptidoglikan

FAKTORI VIRULENCIJE

• CORD faktor

• Tuberkuloproteini

• Mikolična kiselina

• Arabinogalaktan

• Sulfatidi

Tuberkuloza

Tuberkuloza pluća Tuberkuloza bubrega Tuberkuloza kože

KULTURELNE OSOBINE

• usporen rast, striktan aerob• Selektivne hranljive podloge (malahit zeleno,

antibiotici)

Tečne hranljive podloge

Middlebrook (7H9, 7H12) (2 ned.)

Polučvrste sa agarom

Middlebrook (7H10, 7H11)

• Specijalne hranljive podloge

Löwenstein–Jensenova podloga (3-6 ned.)

Laboratorijska dijagnoza tuberkuloze

Materijal koji se najčešće uzima:sputum

bronhoalveolarni lavat

ispirak želuca

urin

likvor

tkivo dobijeno biopsijom

krv

Dijagnostički postupci i metode

• ALGORITMI ZA BAKTERIOLOŠKU PRETRAGU

• PRIJE POČETKA LIJEČENJA 3 –6 UZORAKA• MIKROSKOPSKI +: • 2 UZORKA, SVAKE 2 SEDMICE

• MIKROSKOPSKI -/ KULTURA +• 2 UZORKA, SVAKA 2 MJESECA

• NAKON LIJEČENJA• Tokom 6 MJESECI:• 2 UZORKA -SVAKA 3 MJESECA


Obrada materijala

dekontaminacija i digestija

koncentracija


Direktni preparat

bojenje po Ziehl-Neelsen-u

bojenje fluorohromima (auramin ili auramin-rodamin)

Bojenje po Ziehl-Neelsen-u


Pozitivan direktan preparat:

Acidoalkoholorezistentne bakterije – CRVENE

M. tuberculosis – tanki crveni bacili, pojedinačnoraspoređeni, neravnomjerno obojeni (granuliran izgled)

IZVEŠTAJ:

Acidoalkoholorezistentni bacili

Bojenje fluorohromima


IzolacijaBrzorastuće oportunističke mikobakterije formiraju kolonije za 2-3 dana, dok je za većinu drugih, uključujući i M. tuberculosis potrebno prosječno 3-4 nedelje, pa do 8 nedelja

različite specijalne podlogeLöwenstein-Jensen-ova podloga

sistemi za brzo kultivisanje: BACTEC1, MGIT

MGIT –Mycobacteria Growth Indicator Tube

• Middlebrook7H9 bujon sadrži na kisik osjetljiv fluorescirajući indikator na svom dnu.Tokom respiracije mikobakterije troši se kisik što omogućuje emitiranje naranđaste fluorescencije na dnu i pripovršini bujona ukoliko se kultura izloži UV zračenju(365nm).

• BACTEC 9000MB Sadrži MYCO/F medij(modificirani Middlebrook7H12)+silikonski disk impregniran s rutenij–metalnim kompleksom koji služi kao indikator promjene koncentracije kisika u podlozi prilikom rasta mikobakterija

MGIT

Kultivacija na tekućem hranilištu:rezultati za 2-3 sedmice


Identifikacija:

Ispitivanje mikroskopskih osobina

Ispitivanje kulturelnih osobina

Ispitivanje biohemijskih osobina

Molekularne tehnike


Ispitivanje mikroskopskih osobinapreparat sa kulture: cord


Ispitivanje kulturelnih osobina

BIOHEMIJSKE OSOBINE

• Katalaza –

• Redukuje nitrate

• Ureaza +• Niacin + (niacinski test po Konno-u)

• Pirazinamidazna aktivnost


Ispitivanje biohemijskih osobinaniacinski test1

Molekularna dijagnostika tuberkuloze

Amplifikacijski testovi (PCR)

BRZE METODE ZA DETEKCIJU MIKOBAKTERIJA

Dokaz nukleinskih kiselina amplifikacijske metode

Lančana reakcija polimeraze–PCR (IS 6110)

Novije metode u dijagnostici

• QuantiFERON®-TB/ ELISA

• Screening test za latentne infekcije

• Određivanje IFN-γ iz pune krvi nakon stimulacije T limfocita sa specifičnim antigenom


Ispitivanje osjetljivosti na antituberkulotike

Lijek u podlozi


Brze metode dijagnostike u mikobakteriološkoj laboratoriji

Konvencionalna dijagnostika

direktni preparat direktni preparat

izolacija BACTEC, MGIT

identifikacija

antibiogram

genske probe

3 - 4 meseca 4 nedelje

+

+

+

+

++

antibiogram


postaviti preparate na držač preparate preliti karbol fuksinom


pločice zagrejati do pojave pare; bez ključanja boje

ponoviti 5 puta


pločice isprati vodom

odliti vodu


preparate odbojiti alkoholnim

rastvorom HCl (20s)



preparate preliti metil plavim

(1–2 min)



sušenje preparata

na preparate sipati kap

imerzionog ulja

mikroskopiranje

Mycobacteriumleprae

Mycobacteriumleprae

Gerhard Henrik Armauer Hansen1841-1912

1873., u 32. godini života otkrio

Mycobacterium leprae- osobine -

acido-alkoholo rezistentan bacil

teško se boji po Gramu (Gram pozitivan)

ne može da se kultiviše na vještačkim hranljivim podlogama

Mycobacterium leprae - faktori virulencije -

nisu dovoljno poznati (bakteriju je nemoguće in vitro uzgajati)

fakultativno intracelularna bakterija

Mycobacterium leprae- epidemiologija -

čovjek i armadilo su jedine vrste na kojima M. leprae može da živi

prenosi se sa čovjeka na čovjeka direktnim kontaktom ili inhalacijom

Mycobacterium leprae- bolesti -

Lepra (guba) se može manifestovati kao:

Tuberkuloidna lepra (dominantan Th1 odgovor praćen snažnim ćelijskim imunskim odgovorom; u tkivu se vide brojni limfociti, granulomi i rijetke bakterije): – makule (plake) na koži trupa, lica i udova (suhe

promjene, bez dlaka u centru, mogu biti hipopigmentisane)

– difuzna zahvaćenost perifernih senzitivnih nerava (usljed zahvaćenosti Shwann-ovih ćelija oko perifernih neurona) uz gubitak funkcije (lokalizovana anestezija)

Tuberkuloidna lepra

Mycobacterium leprae- bolesti -

Lepromatozna lepra (dominantan Th2 odgovor praćen slabim ili odsustvom ćelijskog imunskog odgovora; masa bakterija prisutna u makrofagima kože i Shwann-ovim ćelijama oko perifernih neurona):

– brojne eritematozne makule na koži

– destrukcija tkiva (hrskavice nosa, kostiju šake i stopala, ušiju)

– difuzna zahvaćenost senzitivnih perifernih nerava uz gubitak funkcije (lokalizovana anestezija)

Međuoblici lepre

Lepra nije visoko kontagiozna - lepromatozni oblik je značajno kontagiozniji od tuberkuloidnog oblika lepre.

Lepromatozna lepra

Facies leonina

Mycobacterium leprae- bakteriološka dijagnostika -

Uzorci: bioptat i skreping promjena na koži

Ne može se kultivisati in vitro

Bojenje histo-patološkog preparata po Ziehl-Neelsen-u + klinička slika

Kožna proba sa leprominom (pozitivna samo kod tuberkuloidnog oblika lepre)

Mycobacterium leprae- prevencija i kontrola -

Vakcina protiv lepre ne postoji

BCG vakcina (živi atenuisani soj Mycobacterium bovis) zbog unakrsne reakcije djelimično štiti i od M. leprae.

Eksperimentalno se koristi kombinacija ubijenog M. leprae (umnožen u armadilu) + BCG vakcina

...KRAJ

4rod mycobacterium medicina

Documents