Белянкина Е.Ю. , Родина И.А., Шевченко Т.В., Тихонов В.П

Возможности применения метода Возможности применения метода высокочастотной ультразвуковой высокочастотной ультразвуковой

допплерографии на модели допплерографии на модели сосудов куриного эмбриона сосудов куриного эмбриона

ex vivoex vivo в доклинических в доклинических исследованияхисследованиях

Белянкина Е.Ю., Родина И.А., Шевченко Т.В., Тихонов В.П. ОАО Завод экологической техники и экопитания «ДИОД»

«Минимакс-Допплер-К»«Минимакс-Допплер-К»

10-дневный куриный эмбрион10-дневный куриный эмбрион

1- сосуд венозного типа; 2 – сосуд артериального типа

1 2

Допплерограммы сосудовДопплерограммы сосудов

Допплерограмма сосуда венозного типа

Допплерограмма сосуда артериального типа

Исследуемые биологические Исследуемые биологические эффектыэффекты

Местнораздражающее действие

Антиаритмическое действие

Гипо- или гипертензивная активность

Местнораздражающее действиеМестнораздражающее действие

Cтандартный раздражающий агентРаствор калия гидроксида / Kalium hydroxidum (KOH)

Схема эксперимента 0 мин 80 сек

Раствор сравнения – физиологический раствор

Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)2. Изменение скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%, кровотока (%) = (Vs)о

измерение скорости измерение скорости кровотока в кровотока в

интактных сосудахинтактных сосудах

измерение скорости измерение скорости кровотока после кровотока после

воздействиявоздействия

нанесение нанесение KOHKOH

Раздражающее действие Раздражающее действие KOHKOH на на сосуды ХАО куриных эмбрионовсосуды ХАО куриных эмбрионов

Концент-рация

KOH, %

Изменение скорости

кровотока, %

Визуальная оценка состояния сосудов

(ХЕТ-КAM-тест)

Выраженность эффекта

Физ. раствор

-2,6±1,2 без измененийотсутствие действия

1,0 -12,8 ±2,2мелкие кровоизлияния в отдельных капиллярах

слабое

1,5 -20,3 ±1,8кровоизлияния в

капиллярах, слабая гиперемия

умеренное

2,5 -38,7 ±2,2точечные кровоизлияния

по всей поверхности, выраженная гиперемия

выраженное

Оценка антиаритмического действия Оценка антиаритмического действия Исследуемые препараты1. Аритмогенный препарат 2. Антиаритмический препарат Строфантин УнитиолStrophanthidin (кат. № 66-28-4, Sigma) Dimercaptopropansulfonate sodium

Схема эксперимента нанесение нанесение унитиола строфантина

0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин

измерение скорости измерение скорости кровотока кровотока в сосудах в сосудах после воздействия

Оцениваемые показателиЧастота возникновения аритмии (%).Выживаемость эмбрионов (%).

Допплерограммы сосудовДопплерограммы сосудов после после воздействия строфантинавоздействия строфантина

до последо посленанесения строфантинананесения строфантина

Оценка действия Оценка действия антиаритмического препаратаантиаритмического препарата

0

20

40

60

80

100

5 10 30 60

Время наблюдения, мин

Возникновение аритмии

Строфантин Унитиол +Строфантин

0

20

40

60

80

100

5 10 30 60

Время наблюдения, мин

Выживаемость эмбрионов

Строфантин Унитиол +Строфантин

Гипо- и гипертензивное действиеГипо- и гипертензивное действиеИсследуемые стандартные препараты

Схема эксперимента 0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин

измерение скорости нанесение измерение скорости кровотока в кровотока в исследуемого сосудах после воздействия интактных сосудах препарата

Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)2. Изменение скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%, кровотока (%) = (Vs)о

Вазоконстриктор Вазодилятатор

Noradrenaline (кат. № 51-41-2, Sigma) Atenolol (кат. № 29122-68-7, Sigma)

Допплерограммы сосудов после Допплерограммы сосудов после воздействия норадреналинавоздействия норадреналина

Допплерограмма сосуда венозного типа

Допплерограмма сосуда артериального типа

до после нанесения норадреналина

Оценка действия Оценка действия гипо-/гипертензивных препаратов на гипо-/гипертензивных препаратов на скорость кровотока в сосудах ХАОскорость кровотока в сосудах ХАО

-20

0

20

40

60

0 5 10 30 60

Время наблюдения, минИзм

енен

ие

скор

ости

кро

вото

ка,

%

Атенолол 10-5М Атенолол 10-4М Атенолол 10-3М

Норадреналин 3х10-5М Норадреналин 10-5М Норадреналин 3х10-4М

Оценка гипотензивного действия Оценка гипотензивного действия растительных экстрактоврастительных экстрактов

Исследуемые препараты1.Экстракт сушеницы 2. Экстракт листа оливы

(Gnaphalii uliginosi extract siccum) (Olive leaf powder extract)

Схема эксперимента 0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин

измерение скорости нанесение нанесение измерение скорости кровотока

кровотока в норадреналина экстракта в сосудах после воздействия

интактных сосудах

Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)

2. Изменение

скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%,

кровотока (%) = (Vs)о

Оценка гипотензивного действия Оценка гипотензивного действия растительных экстрактоврастительных экстрактов

0

10

20

30

40

50

0 5 10 30 60Время наблюдения, мин

Изм

енен

ие

скор

ости

кро

вото

ка,

%

Норадреналин + Физ. раствор Норадреналин + Атенолол

Норадреналин +Экстракт сушеницы Норадреналин + Экстракт оливы

Характеристика аналитических Характеристика аналитических показателей экстракта сушеницыпоказателей экстракта сушеницы

Номер партии

Содержание дубильных веществ, %

Содержание флавоноидов, %

Содержание гидроксикорич-ных кислот, %

1 8,0 ± 0,1 0,83 ± 0,02 0,54 ± 0,05

2 8,1 ± 0,3 0,64 ± 0,01 0,65 ± 0,06

3 9,9 ± 0,5 1,15 ± 0,02 2,03 ± 0,02

4 9,5 ± 0,5 1,16 ± 0,02 1,36 ± 0,05

Сравнение действия экстрактов Сравнение действия экстрактов сушеницы разных партийсушеницы разных партий

0

10

20

30

40

50

0 5 10 30 60Время наблюдения, мин

Изм

енен

ие

скор

ости

к

ров

оток

а,%

Норадреналин + Экстракт сушеницы №1Норадреналин + Экстракт сушеницы №2Норадреналин +Экстракт сушеницы №3Норадреналин + Экстракт сушеницы №4

ЗаключениеЗаключение

Область применения:1. Оценка безопасности средств наружного применения (лекарственные, косметические и др);

2. Контроль качества субстанций и готовой продукции по некоторым видам биологической активности.3. Скрининговые исследования препаратов, обладающих потенциальным антиаритмическим, гипер- и гипотензивным действием;

СпасибоСпасибо за за

внимание!внимание!