laoratorijske Životinje anestezija, analgezija,...

LABORATORIJSKE ŽIVOTINJE - ANESTEZIJA, ANALGEZIJA, KIRURŠKI

POSTUPCI, EUTANAZIJA

Dr. sc. Natalija Filipović, dr. med. vet.

Medicinski fakultet Sveučilišta u Splitu

RUKOVANJE SA ŠTAKORIMA

• Sprječavanje ozljeda čovjeka

• Sprječavanje ozljeda životinja

• Izbjegavanje stresa = varijacija u pokusnim uvjetima!

http://www.youtube.com/watch?v=kVwtJAbik2c&feature=related

RUKOVANJE SA ŠTAKORIMA

• RESTRAINT = obuzdavanje

• “ručno” – bez primjene pomoćnih sredstava

• Mehaničko obuzdavanje

• Kemijsko obuzdavanje: sedacija, anestezija

RUKOVANJE SA ŠTAKORIMA

• Neki sojevi pogodniji, bolje podnose manipulaciju: Sprague-Dawley, Wistar

• http://www.youtube.com/watch?v=KUPpyRwKZN8&NR=1

• Drugi teži za rukovanje (Fischer 344, Long Evans)

• Divlji štakori – potpuno drugačije rukovanje (vreće, žičani konusi…)

• Pridržavanje za rep – blizu korijena (svlačenje!)

RESTRAINT

RESTRAINT

RESTRAINT

RESTRAINT

RESTRAINT

RESTRAINT

OZNAČAVANJE

• Bušenje ušnih resica

• Raznobojne životinje – Long-Evans hooded rats

• Odsijecanje prstiju (???)

• Naušnice

• Tetoviranje (rep, uške, stopala…)

• Vodootporni markeri (oznaka traje do 2 tjedna)

• Elektronički mikročipovi

PRIKUPLJANJE UZORAKA (SAMPLING)

• KRV • MOKRAĆA • FECES • METABOLIČKI KAVEZI • KOŠTANA SRŽ • TEKUĆINE IZ OKA (OČNA VODICA, STAKLASTO TIJELO) • SUZE • PERITONEALNE STANICE ASCITESA • ŽUČ • PANKREASNI SOK • VAGINALNI RAZMAZ I TEKUĆINA • MLIJEKO • REPRODUKTIVNE IZLUČEVINE MUŽJAKA • STANICE I TEKUĆINA IZ PLUĆA • LIMFA • CEREBROSPINALNA TEKUĆINA • SLINA

UZIMANJE UZORAKA KRVI

IZBOR METODE OVISI O:

• POTREBNOM PREŽIVLJAVANJU: – Max. 1,25 mL/ 100 g tjelesne mase

– = ugrubo 10-15% volumena krvi

– do 40% volumena – ako se uzima u malim uzorcima tijekom 24 h

– Ako uzmemo 7,5% volumena odjednom barem 1 tjedan do ponovnog uzorkovanja!

– /različiti podaci!/

UZIMANJE UZORAKA KRVI

IZBOR METODE OVISI O:

• POTREBNOM VOLUMENU

• UČESTALOSTI UZORKOVANJA

• DA LI SE MOŽE PRIMIJENITI ANESTEZIJA

• UČINKU UZORKOVANJA NA FIZIOLOŠKE PARAMETRE*

• DA LI JE POTREBNA VENSKA, ARTERIJSKA KRV ILI SE MOŽE UZETI MIJEŠANI UZORAK

• JE LI POTREBNA ASEPTIČNA TEHNIKA

(hormoni-adrenalin, kortikosteron, prolaktin, GH, inzulin, renin; GUK; enzimi u

plazmi; hematološki parametri; )

UZIMANJE UZORAKA KRVI

• IZRAVNO PUNKCIJOM SRCA

• RETROORBITALNI VENSKI SPLET

• DORZALNA METATARZALNA VENA

• V. SAPHENA

• REPNE KRVNE ŽILE

• V. JUGULARIS

• A. CAROTIS – jako krvarenje, veliki gubitak krvi

• AORTE I V. CAVA

• DEKAPITACIJA

• OSTALE TEHNIKE

UZIMANJE UZORAKA KRVI

• IZRAVNO PUNKCIJOM SRCA

• Anestezirana ž.

• Leži na leđima

• Napipa se ictus cordis

• 21 g igla pod kutem 30° (u odn. na kožu) L od ksifoidnog nastavka

• Polako napredovati – naglo smanjenje otpora – znak da smo u srcu

• Aspiracija (brizgalica)

/modifikacije raznih autora/

• Vađenje krvi iz srca KOD MIŠA

• http://www.youtube.com/watch?v=cRx0E-bu95Q&NR=1

UZIMANJE UZORAKA KRVI

• RETROORBITALNI VENSKI SPLET

• Manje količine

• Anestezirati ž.

• Može češće uzorkovanje

• >CK i AST! ozljede oka

• Palcem i kažiprstom L ruke razmakne se koža oko orbite

protrudira očna jabučica

• (palcem se može pritisnuti iza čeljusti, da se pospješi nakupljanje krvi)

• Pipetom se preko medijalnog kuta ulazi u oko (splet je iza i medijalno od oka)

• Laganom rotacijom i retrakcijom pipete pospješiti izlazak krvi

• Nakon izvlačenja pipete pritisak na jabučicu preko kapaka, da bi se zaustavilo krvarenje (retroorbitalni hematom i egzoftalmus)

http://www.youtube.com/watch?v=D7aL02FhGN8

UZIMANJE UZORAKA KRVI

• DORZALNA METATARZALNA VENA

• Lakše ako jedna osoba drži ž., a druga uzorkuje

• Kaudalni dio tijela poduprt

• (brijanje, dezinfekcija!)

• Uz čvrsto držanje noge (operater) fleksija 1. zgloba falangi

lagana adukcija noge

• ~ 23 g igla

• 0,1 – 0,2 mL krvi

UZIMANJE UZORAKA KRVI

• V. SAPHENA (med. ili lat.)

• Površinski s med./lat. strane punkcija blizu tarzalnog zgloba

• (brijanje, dezinfekcija!)

• Kompresija – za med. – ingvinalno područje;

- za lat. – lat. dio bedra

• ~ 23 g igla

• 0,1 – 0,2 mL krvi

UZIMANJE UZORAKA KRVI

• REP

• VENTRALNO – ARTERIJA

• LATERALNO - VENE

• http://www.youtube.com/watch?v=QoGmUSOJSoM

• http://www.youtube.com/watch?v=xuZteOAh7Dw&feature=related

UZIMANJE UZORAKA KRVI

• Jugularna vena

• Sa ili bez anestezije

• Leži na leđima

• U kutu vrata i ramena

• Anestezija – ako se kirurški izlaže vena

UZIMANJE UZORAKA KRVI

• AORTA i V. CAVA

• Veliki volumen uzorka

• Anestezija – otvara se trbuh

• Aorta abdominalis – na mjestu ispred bifurkacije

• V. cava caudalis – u blizini bubrega (polako da ne kolabira!)

• Kateterizacija - aorta!

UZORKOVANJE MOKRAĆE

METABOLIČKI KAVEZI

METABOLIČKI KAVEZI

APLIKACIJA

• p/o

• i/v

• i/p

• s/c

• i/m

• Osmotske mini crpke

• i/v INJEKCIJA KOD MIŠA

• http://www.youtube.com/watch?v=wowjgOS8_VU&feature=related

• http://www.youtube.com/watch?v=zbqjZ2HL_-0&feature=related

• I/P INJEKCIJA

• http://www.youtube.com/watch?v=SjwWiEhAPrg&feature=related

• s/c INJEKCIJA KOD MIŠA

• http://www.youtube.com/watch?v=yeygoa25hoI&feature=related

APLIKACIJA

• Osmotske mini crpke

http://www.youtube.com/watch?v=Zolnr-bPQN0

• I/M INJEKCIJA KOD MIŠA

• http://www.youtube.com/watch?v=hk5iK9o82vU&NR=1

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - ŠTAKOR PRIPREMA:

• NE treba postiti (nemogućnost povraćanja)

• Voda – poželjno da bude dostupna do indukcije u anesteziju /dehidracija tijekom zahvata/

• Točno vaganje

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - ŠTAKOR PRIPREMA:

• Sprječavanje hipotermije:

– Tople podloge

– Omatanje u aluminijsku foliju

– Minimizirati obrijanu površinu

– Spriječiti prekomjerno vlaženje okolnog krzna

– Aplikacija tekućina – samo zagrijanih na tjelesnu temperaturu

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - ŠTAKOR

INHALACIJSKA ANESTEZIJA:

U kombinaciji s O2 ili O2:NO2 (1:1)

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - ŠTAKOR

INJEKCIJSKA ANESTEZIJA

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - ŠTAKOR

INJEKCIJSKA ANESTEZIJA

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - ŠTAKOR

SEDACIJA:

KETAMIN - 22 mg/kg i/m

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - ŠTAKOR

ANALGEZIJA

POSTOPERATIVNA NJEGA - ŠTAKOR

INHALACIJSKA ANESTEZIJA:

NADOKNADA TEKUĆINE:

5% glukoza u 0,9% NaCl (glucosaline) s/c

na tjel. T!!!

16-32 mL po životinji (NE > od 5 mL na jednom mjestu aplikacije)

SPRJEČAVANJE HIPOTERMIJE:

žarulja (zaštiti oči!)

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - MIŠ PRIPREMA:

• NE treba postiti (nemogućnost povraćanja)

• Voda – poželjno da bude dostupna do indukcije u anesteziju /dehidracija tijekom zahvata/

• Točno vaganje

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - MIŠ PRIPREMA:

• Sprječavanje hipotermije:

– Tople podloge

– Omatanje u aluminijsku foliju

– Minimizirati obrijanu površinu

– Spriječiti prekomjerno vlaženje okolnog krzna

– Aplikacija tekućina – samo zagrijanih na tjelesnu temperaturu

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - MIŠ

PREMEDIKACIJA:

ATROPIN: 40 µg/kg s/c ili i/m

– za redukciju salivacije

/atropin sulfat – može se razrijediti sterilnom vodom 1:10, da bi se omogućilo doziranje/

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - MIŠ

INHALACIJSKA ANESTEZIJA:

U kombinaciji s O2 ili O2:NO2 (1:1)

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - MIŠ

INJEKCIJSKA ANESTEZIJA

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - MIŠ

INJEKCIJSKA ANESTEZIJA

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - MIŠ

SEDACIJA:

KETAMIN - 40 mg/kg i/m

ANESTEZIJA I ANALGEZIJA - MIŠ

ANALGEZIJA

POSTOPERATIVNA NJEGA - MIŠ

INHALACIJSKA ANESTEZIJA:

NADOKNADA TEKUĆINE:

5% glukoza u 0,9% NaCl (glucosaline) s/c

na tjel. T!!!

1-2 mL po životinji (NE > od 0,5 mL na jednom mjestu aplikacije)

SPRJEČAVANJE HIPOTERMIJE:

žarulja (zaštiti oči!)

EUTANAZIJA 2010/63/EU

The killing of animals shall be completed by one of the following methods:

• (a) confirmation of permanent cessation of the circulation;

• (b) destruction of the brain;

• (c) dislocation of the neck;

• (d) exsanguination; or

• (e) confirmation of the onset of rigor mortis.

2010/63/EU

2010/63/EU

• 1. Shall, where appropriate, be used with prior sedation. • 2. Only to be used on large reptiles. • 3. Only to be used in gradual fill. Not to be used for foetal and neonate

rodents. • 4. Only to be used for birds under 1 kg. Birds over 250 g shall be sedated. • 5. Only to be used for rodents under 1 kg. Rodents over 150 g shall be

sedated. • 6. Only to be used for rabbits under 1 kg. Rabbits over 150 g shall be

sedated. • 7. Only to be used for birds under 5 kg. • 8. Only to be used for rodents under 1 kg. • 9. Only to be used for rabbits under 5 kg. • 10. Only to be used on neonates. • 11. Only to be used for birds under 250 g. • 12. Only to be used if other methods are not possible. • 13. Specialised equipment required. • 14. Only to be used on pigs. • 15. Only to be used in field conditions by experienced marksmen. • 16. Only to be used in field conditions by experienced marksmen when

other methods are not possible.

2010/63/EU

• Methods other than those listed in the table may be used:

• (a) on unconscious animals, providing the animal does not regain consciousness before death;

• (b) on animals used in agricultural research, when the aim of the project requires that the animals are kept under similar conditions to those under which commercial farm animals are kept; these animals may be killed in accordance with the requirements laid down in Annex I to Council Regulation (EC) No 1099/2009 of 24 September 2009 on the protection of animals at the time of killing ( 1 ).

EUTANAZIJA

• http://www.youtube.com/watch?v=XqdKwsIpxWI&feature=related

Marinović Guić, M., (2011): KARAKTERIZACIJA SPINALNIH AFERENTNIH NEURONA KOJI SE PROJICIRAJU U RAZLIČITE KOMORE SRCA MLADIH I STARIH ŠTAKORA Medicinski fakultet Split (disertacija)