n -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (hpma)
Post on 19-Jan-2016
36 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
Využití “Fluorescence Lifetime Microscopy” pro analýzu intracelulární lokalizace polymerních terapeutik nesoucích doxorubicin
Hovorka Ondřeja, Šubr Vladimírb, Větvička David a, Kovář Lubomíra, Strohalm Jiříb, Strohalm Martina , Benda Aleš c,Hof Martinc, Ulbrich Karelb, Říhová Blankaa
a Mikrobiologický ústav, AVČR v.v.i, Vídeňská 1083, 142 20, Praha 4b Ústav Makromolekulární Chemie, AVČR v.v.i, Heyrovského nám. 2, 162 06, Praha6c Ústav Fyzikální Chemie J. Heyrovského, AVČR, v.v.i., Dolejškova 2155/3, 182 23 Praha 8
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]CH3
CH2-CCO[ ]
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]
SPACER
N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA)
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]CH3
CH2-CCO[ ]
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]
SPACER
N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA)
doxorubicinλex = 540nm, λem 612
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]CH3
CH2-CCO[ ]
CH3CH2-C
CONHCH2CH-OHCH3
[ ]
SPACER
N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA)
doxorubicinλex = 510nm, λem 590
MW = 20kDa
Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem
jaderná membrána
Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem
jaderná membrána
membrána andozómů
Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem
jaderná membrána
membrána andozómů
Golgiho aparát
7,8-dehydro-9,10-desacetyldoxorubicinone
7,8-dehydro-9,10-desacetyldoxorubicinone
Emisní spektra doxorubicinu a D* při 488nm excitaci ve vodě
kvantový výtěžek D* je 10-20 vyšší v závislosti na prostředí……
doxorubicin
D*
spektrální unmixing směsi Dox + D* (5:1) založený na naměřených spektrech
spektrální analýza polymerního konjugátu
spektrální unmixing založený na naměřených spektrech
Doxorubicin
D*
stanovené hodnoty „fluorescence lifetime“ pro Dox, D* a polymerní konjugát v roztoku bez buněk a v médiu zbaveném buněk
conjugate dox D* HPMA-Dox
average Lifetime
(ns)
cell-free system
1,1 3,9 1,2 / 4,1 *
average Lifetime
(ns)cellular system
1,5 4,1 2,3 / 4,4 *
distribuce hodnot „fluorescence lifetime“ pro Dox, D* a polymerní konjugát v buněčné kultuře
[ns]
doxorubicin D* Dox+D* (5:1) HPMA-Dox
ZÁVĚR
FLIM je technika která umožní oddělit i fluorochromy, jejichž emisní spektrální charakteristika se výrazně překrývá a algorytmy pro spektrální unmixing v takových případech selhávají
Stanovili jsme lifetime pro Dox, D* a polymerní konjugát a podařilo se nám upřesnit a potvrdit jeho intracelulární distribuci.
Šubr V.Strohalm J.Ulbrich K.
Mikrobiologický ústav, AVČR v.v.i,
Ústav Makromolekulární
Chemie, AVČR v.v.i, Ústav Fyzikální Chemie J.
Heyrovského , AVČR, v.v.i.,
Hovorka O.Cimburek Z.Větvička D.
Kovář L.Strohalm M.Říhová B.
Benda A.
Hof M.
top related