rezan demİralay
Post on 05-Feb-2016
50 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
SEPSİS SONRASI ERDOSTEİN VE ASETİLSİSTEİN
TEDAVİSİNİN PULMONER EPİTEL HÜCRELERDE APOPİTOTİK VE ANTİAPOPİTOTİK
GÖSTERGELER ÜZERİNE ETKİLERİ
Rezan DEMİRALAY
Sepsis, multipl organ disfonksiyonu ve yüksek mortaliteye neden olabilen
bir hastalıktır. Sepsisli hastaların lenfoid organlarında önemli apopitozisin
(programlı hücre ölümü) geliştiği ve bu organlardaki apopitozis
inhibisyonunun yaşam süresi ile ilişkili olduğu tespit edilmiştir. Sepsiste
başlıca hasar gören organ akciğerdir ve akut solunum sıkıntısı sendromu
(ARDS)’a öncülük eden akut akciğer hasarı (ALI) sıklıkla sepsisin bir
komplikasyonu olarak ortaya çıkmaktadır.
GİRİŞ
Apopitozis sinyal yolları; Ölüm reseptörü (dış) veya mitokondrial ve/veya endoplazmik retikulum (iç) yolları ile oluşan apopitotik cevabın bazı ana noktaları.
Ölüm reseptör aracılıklı kaspaz aktivasyonu
AIF
AIF
AIF
AIF
AIF
AIFAIF
AIF
Mitokondri (iç) yolu; sitokrom c ve apopitozis indükleyici faktör gibi apoptojenik faktörlerin mitokondriden salınımını içerir.
AIF
AIFAIF
AIF
AIFAIF
AIF
AIF
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
Cytchrome c
mitokondri
Bcl-2 ailesi
Anti-apoptotik(Bcl-2)
Pro-apoptotik (Bax)
Mitokondri
Bcl-2
Dış mitokondri membranında bulunurMitokondri dış zarının geçirgenliğini ↓ Sitokrom c ve AFI’ün salgılanmasını engeller
Bax
Sitoplazmada bulunur.Dış mitokondri zarının geçirgenliğini ↑Sitokrom c ve AIF’ün sitoplazmayageçişini sağlar
Apoptozom kompleksi oluşumu ve aktivasyonu
Apopitozis sinyal yollarında kaspaz aktivasyonu
Sepsisteki akciğer hasarında serbest oksijen radikalleri
önemli bir rol oynamaktadır.
Mitokondri
ROS
Bax
Sitokrom c salınımı
Hücre ölümü
Mitokondride bax aktivasyonu, sitokrom c salınımı ve hücre ölümü için serbest radikal oluşumu gereklidir.
Bu nedenle, hücresel antioksidan savunma sistemini artıran ve
serbest oksijen radikal oluşumunu nötralize eden tedavi ajanları ile
apopitozis regülasyonu, sepsis gidişatını ve akut akciğer hasarı (ALI)
gelişimini kontrol altına alabilir gibi görünmektedir.
AMAÇ
• İntraperitoneal LPS uygulanmasından sonra
pulmoner epitel hücrelerdeki apopitozis
sıklığını,
• Akciğer hasarında apopitotik ve antiapopitotik
göstergeler (bax, kaspaz-3 ve bcl-2) üzerine LPS’in
etkilerini,
• Erdostein ve asetilsisteinin koruyucu
etkilerini araştırmak
MATERYAL VE METOD
DENEYSEL PROTOKOL
Sıçanlar, her biri 9 hayvandan oluşan 6 gruba ayrıldı. Bunlar:
■ Negatif kontrol grubu; intraperitoneal salin ve oral distile su verilen grup■ Negatif kontrol grubu; intraperitoneal salin ve oral sodyum bikarbonat verilen grup■ Pozitif kontrol grubu; intraperitoneal LPS ve oral distile su verilen grup■ Pozitif kontrol grubu; intraperitoneal LPS ve oral sodyum bikarbonat verilen grup■ İntraperitoneal LPS ve erdostein (150mg/kg) verilen grup■ İntraperitoneal LPS ve asetilsistein (150mg/kg) verilen grup
İLAÇLAR
Erdostein, eş molar miktarda sodyum bikarbonat içeren distile suda çözülerek ve asetilsistein ise distile suda çözülerek oral olarak günde tek doz verildi.
DENEYSEL PROTOKOL
LPS (E.coli 055:B5; Sigma) 20 mg/kg vücut ağırlığı dozunda 1 ml salin içerisinde seyreltilerek intraperitoneal olarak uygulandı. Sıçanlar, LPS enjeksiyonundan 24 saat sonra öldürüldü ve torakotomi yapılıp akciğerler çıkarıldı. Akciğer dokusu, apopitozis, bcl-2, bax ve kaspaz 3 analizi için hazırlandı.
KONTROL GRUBU
İzotonik salin solüsyonu (LPS ile aynı hacimde) intraperitoneal olarak enjekte edildi. Ayrıca sodyum bikarbonat (erdostein dozu ile aynı molar miktarda) içeren distile su veya distile su (asetilsistein ile aynı miktarda) oral olarak tek doz verildi.
APOPİTOZİS ANALİZİ
Bronşiol ve alveol epitelindeki apopitozis düzeyi, In Situ Cell Death Detection kiti (Roche, Germany) kullanılarak TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick endlabelling) yöntemi ile belirlendi. Aynı kesitte sayılan 1000 hücre içerisindeki TUNEL-pozitif boyanan hücrelerin yüzdesi apopitozis indeksi (AI) olarak ifade edildi.
İMMÜNHİSTOKİMYASAL ANALİZ
Bronşiol ve alveol epitel hücrelerindeki lokal bcl-2 oluşum seviyesi anti-bcl-2 kiti (SantaCruz, USA), lokal bax oluşum seviyesi anti-bax kiti (Abcam, USA) ve endotel hücrelerindeki lokal kaspaz 3 oluşum seviyesi anti-kaspaz 3 kiti (Neomarkers, USA) kullanılarak immünhistokimyasal olarak değerlendirildi. Sonuçlar, aynı kesitte sayılan 1000 hücre içerisindeki pozitif sitoplazmik boyanma gösteren hücrelerinin yüzdesi olarak ifade edildi.
(A). APOPİTOZİS ANALİZİ BULGULARI
______________________________________Tedavi grubu Apopitozis indeksi (%) ortalamaSD_________________________________________________________Negatif kontrol 10.6 8.5 Pozitif kontrol 85.6 6.2
______________________________________İstatistiksel analiz: Negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı (p=0.000)
LPS’İN AKCİĞER EPİTEL HÜCRE APOPİTOZİSİ ÜZERİNE ETKİSİ
BULGULAR
TUNEL yöntemi ile apopitozis analizi (X200)
Negatif kontrol grubu Pozitif kontrol grubu
TEDAVİ GRUPLARININ AKCİĞER EPİTEL HÜCRE APOPİTOZİSİ ÜZERİNE ETKİSİ
________________________________________________________Tedavi grubu Apopitozis indeksi (%) ortalamaSD________________________________________________________Negatif kontrol 10.6 8.5 Pozitif kontrol 84.1 7.0Erdostein (150mg/kg) 19.4 9.8Asetilsistein (150mg/kg) 36.1 4.2¶________________________________________________________İstatistiksel analiz: negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı (¶ p<0.05) pozitif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı (p=0.000)
(B). BCL-2 ANALİZİ BULGULARI
LPS’İN LOKAL BCL-2 OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ
______________________________________________Tedavi grubu Lokal bcl-2 oluşum seviyesi (%) OrtalamaSD__________________________________________________________Negatif kontrol 21.1 3.3 Pozitif kontrol 8.8 3.5
______________________________________________İstatistiksel analiz: Negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı( p=0.000)
LPS’in lokal bcl-2 oluşum seviyesi üzerine etkisi (x400)
Negatif kontrol grubu Pozitif kontrol grubu
TEDAVİ GRUPLARININ LOKAL BCL-2 OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ
________________________________________________________
Tedavi grubu Lokal bcl-2 oluşum seviyesi (%)
ortalamaSD
________________________________________________________
Pozitif kontrol 8.8 3.5
Erdostein (150mg/kg) 43.8 12.2Asetilsistein (150mg/kg) 45.6 5.3
________________________________________________________İstatistiksel analiz: pozitif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı ( p=0.000)
(D). BAX ANALİZİ BULGULARI
LPS’İN LOKAL BAX OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ
__________________________________________________Tedavi grubu Lokal bax oluşum seviyesi (%) ortalamaSD________________________________________________________Negatif kontrol 10.8 5.3 Pozitif kontrol 77.5 5.5
_____________________________________________İstatistiksel analiz: Negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı(p=0.000)
Lps’in lokal bax oluşum seviyesi üzerine etkisi (x400)
Negatif kontrol grubu Pozitif kontrol grubu
TEDAVİ GRUPLARININ LOKAL BAX OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ
______________________________Tedavi grubu Lokal bax oluşum seviyesi (%)
ortalamaSD
_____________________________________________________
Pozitif kontrol 77.5 5.5
Erdostein (150mg/kg) 48.8 7.9 Asetilsistein (150mg/kg) 42.8 2.6
_________________________________İstatistiksel analiz: pozitif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı ( p=0.000)
(D). KASPAZ 3 ANALİZİ BULGULARI
LPS’İN LOKAL KASPAZ 3 OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ
________________________________________________________Tedavi grubu Lokal kaspaz 3 oluşum seviyesi (%) ortalamaSD_______________________________________________________________Negatif kontrol 10.8 5.3 Pozitif kontrol 80.0 8.01 ________________________________________________________İstatistiksel analiz: Negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı(p=0.000)
Lps’in lokal kaspaz 3 oluşum seviyesi üzerine etkisi (x400)
Negatif kontrol grubu Pozitif kontrol grubu
TEDAVİ GRUPLARININ LOKAL KASPAZ 3 OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ
__________________________________________________Tedavi grubu Lokal kaspaz 3 oluşum seviyesi (%) ortalamaSD________________________________________________________Pozitif kontrol 80.0 8.01 Erdostein (150mg/kg) 51.3 6.9 Asetilsistein (150mg/kg) 43.9 3.3 ________________________________________________________
İstatistiksel analiz: pozitif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı ( p=0.000)
SONUÇ Sonuç olarak,
Erdostein ve asetilsistein tedavisi, sepsisin neden olduğu
akciğer epitel hücre apopitozisi oranını önemli ölçüde azalttı.
Asetilsisteinin apopitozis regülasyonu üzerine etkisinin
erdosteinden daha zayıf olduğu bulundu.
Erdostein ve asetilsistein, lokal bax ve kaspaz-3 oluşum
seviyelerindeki artışı istatistiksel olarak önemli ölçüde azalttı
ve lokal bcl-2 seviyesindeki azalışı önemli ölçüde artırdı.
top related