tÉcnicas citoquÍmicas utilizadas no estudo das glÂndulas acessÓrias masculinas de chiroptera...

TÉCNICAS CITOQUÍMICAS UTILIZADAS NO ESTUDO DAS

GLÂNDULAS ACESSÓRIAS MASCULINAS DE CHIROPTERA

(MAMMALIA)Disciplina: Microscopia e Microanálise Docente: Profa. Dra. Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira Discente: Cíntia Cristina Isicawa Puga

SUMÁRIO Projeto de Pesquisa

Técnicas Citoquímicas

Resultados Preliminares

PROJETO DE PESQUISA

Morfofisiologia da Próstata de Morcegos: Estudosnas espécies Artibeus planirostris e Platyrrhinus

lineatus (Phyllostomidae: Chiroptera)

Cíntia Cristina Isicawa Puga Prof. Dr. Sebastião Roberto Taboga (Orientador) – IBILCE/UNESP Profa. Dra. Patricia Simone Leite Vilamaior (Co-orientadora) - UNIRP

INTRODUÇÃO Ordem Chiroptera 2ª maior dos Mammalia

200 gêneros e 1000 espécies;

Regiões tropicais e temperadas, com exceção de algumas ilhas oceânicas remotas e a Antártica (REIS et al., 2006)

Ampla radiação + avanços nos estudos com enfoques evolutivos Aspectos relativos à biologia reprodutiva pouco

explorados glândulas acessórias do sistema genital e às relações

funcionais dessas glândulas com as variações sazonais

Ampla distribuição geográfica influência de fatores abióticos estratégias reprodutivas Detectadas através de comportamento ou

da avaliação funcional das gônadas e das glândulas anexas (SWAMI & LALL ,1982)

Morcegos hibernantes de zonas temperadas reprodutores sazonais

Zonas tropicais padrão reprodutivo complexo Influências Variações da temperatura, Pluviosidade, Disponibilidade de recursos alimentares -FLEMING et al., 1972;-FLEMING et al., 1972;

-TADDEI, 1976.-TADDEI, 1976.

OBJETIVO

Avaliar as glândulas sexuais acessórias masculinas, com ênfase à próstata de morcegos representantes da família Phyllostomidae (Artibeus planirostris e Platyrrhinus lineatus).

Platyrrhinus lineatus

http://www.flickr.com/photos/11412389@N05/2676572439/

Artibeus planirostris

http://www.morcegolivre.vet.br/artibeusplanirostris.html10

Método de Coleta Redes de Neblina Coletas seriadas

Hematoxilina-Eosina: estrutura glandular, quantificações celulares, reconstrução tridimensional e densidade de volume dos componentes prostáticos (avaliação estereológica);

Método do P.A.S: atividade secretora geral da glândula;

Método da Reticulina de Gömöri: elementos do estroma glandular.

Análise Imunocitoquímica para Receptor Androgênico (AR): expressão de receptores androgênicos (AR) durante os meses do ano.

Fosfatase ácida: Para a detecção da atividade de fosfatase ácida prostática

MICROSCOPIA DE LUZ

Microscopia Eletrônica de Transmissão e de Varredura

Dosagens hormonais: punção endocárdica Testosterona

FixaçãoRetirada do material

Inclusão em Resina/ParafinaSecções no Micrótomo

TÉCNICAS CITOQUÍMICAS Hematoxilina & Eosina

Hematoxilina (basófila) → substratos básicos → fosfato do DNA e RNA → núcleo e o Retículo Endoplasmático Rugoso, locais onde há grande quantidade de proteínas (básicas pelo seu grupamento amina)

Eosina (acidófila) → cora citoplasma tonalidade rósea, atua sobre citoplasma, fibras colágenas e outras substâncias ácidas das células.

5’ 10’

1’5’

8’ 1’

1’

1’ 1’ 1’

ÁGUA ÁGUA ÁL 80%

ABS III

5.0 µm

5.0 µm

REAÇÃO DO PAS (ÁCIDO PERIÓDICO/REATIVO DE SCHIFF)

Um pré tratamento determina a especificidade da coloração quando se utiliza o Reativo de Schiff

Reação de Feulgen → hidrolise acida com HCl Reação do PAS → oxidação com o ácido periódico

Reação do PAS Secreção Epitélio

ETAPAS 1. Oxidação do material com ácido periódico

produção de radicais aldeídos nas moléculas de carboidrato

2. Estes radicais aldeído vão se ligar ao leucoderivado da Fucsina básica restaurando o grupo cromoforico e produzindo um composto corado

5’ 40’

1’

8’ 60’

1’

1’ 1’ 1’

ÁGUA ÁGUA

ABS III

3x 5’

Metabissulfito de Sódio

10’

ÁGUA

2’ 10’ÁGUA