ENUMERATION OF BACILLUS CEREUS

2

Nội dung

1. Khái niệm về B. cereus2. Phân loại vi sinh trên cách mọc3. Đếm B. cereus4. Thạch Mossel (MYP)

3

1. Khái niệm về B. cereus? Đặc tính của B. cereus:

• Trực khuẩn, dài 5-10µ , rộng 1µ, có chu mao• Gram dương khi non, Gram âm khi già• Hiếu khí tùy nghi (facultative)• Sinh nội bào tử (endospore). Bào tử chịu nhiệt cao (D value

at 100oC = 6.7-8.3)• Lecithinase +, mannitol -• VP +, khử nitrate thành nitrite, phân hũy Tyrosine, phát

triển trong môi trường có 0.001% lysozyme.• Phát triển được ở nhiệt độ 10-48oC, pH= 4.9-9.3, NaCl 18%

1. Khái niệm về B. cereus?

Spores

5

1. Khái niệm về B. cereus? Thường gặp ở đất, sữa, bề mặt của thịt... Khoảng 2-5% B. cereus có khả năng gây bệnh qua

đường thực phẩm do khả năng sinh ra endotoxin:• Loại khối lượng phân tử nhỏ:

Nôn ói khoảng 1-5 giờ sau khi ăn • Loại khối lượng phân tử to:

Đau bụng, tiêu chảy sau 8-16 giờ

6

2. Oxigen và vi khuẩnDựa trên oxigen, có 5 loại hình phát triển:1. Hiếu khí bắt buộc (obligate aerobic bacteria):

Cần oxigen để sống2. Yếm khí bắt buộc (obligate anaerobic bacteria):

Không phát triển khi có oxigen3. Hiếu khí tùy nghi (facultative bacteria):

Có hay không có oxigen cũng được4. Vi hiếu khí (microaerophiles)

Cần oxigen ở mật độ thấp5. Dung nạp oxigen (Aerotolerant bacteria)

Không bị ảnh hưởng của oxigen

7

2. Oxigen và vi khuẩn

Obligate aerobic

Obligate anaerobic

Facultative bac.

Micro- aerophiles

Aerotolerant bac.

8

3. PP đếm B. cereusSamples

Incubating(30oC/24h)

Reading

Diluting

Plating(MYP agar)

Typical colonies Counting

Atypicalcolonies

Extra incubating(30oC/24h) Typical

colonies

Uncounting Atypical

colonies

9

4. MYP agar

Agar base (g/l):Beef Extract 1.0 gPeptone 10.0 gD-mannitol 10.0 gSodium chloride 10.0 gPhenol red 0.025 gPolymyxin B sulphate 0.010 g Agar 15.0 g

AdditiveEgg yolk 50%

10

4. MYP agar Nguyên lý:

• Beef extract, pepton cung cấp nitrogen, carbon, vitamins, minerals.• D-mannitol cung cấp carbohydrate• Phenol red: chỉ thị màu (đỏ ở pH > 7.4, vàng ở pH < 6.8)• Egg yolk cung cấp lecithin• Polymyxin B: kháng sinh phổ rộng, ức chế VK phát triển nhưng

không ảnh hưởng đến B. cereus.• Acid sinh ra từ việc lên men mannitol sẽ làm khuẩn lạc có màu vàng

(phenol red đổi màu)• Vi khuẩn sinh lecithinase sẽ phân hũy lecithin tạo thành vòng trắng

đục quanh khuẩn lạc

11

4. MYP agar

Vi khuẩn Màu khuẩn lạc Vùng tủaB. cereus Đỏ +B. subtilis Vàng +Proteus mirabilis Đỏ -Staph. aureus Vàng +

Đọc kết quả:

12

4. MYP agar

B. cereus

B. subtilisThạch chưa cấy

13

4. MYP agar

Nên dùng pp cấy trải (spreading) cho B. cereus Trong trường hợp cần thiết, phải làm thêm một số

test để xác định chính xác B. cereus như:• VP• Nitrite• Tyrosine• Lysozyme