biológus bsc 2015.11.10.biochemvet.hu/wp-content/uploads/2018/10/msc_molbiol_1.pdf ·...
TRANSCRIPT
Biológus MSc
Molekuláris biológiai
alapismeretek
A nukleotidok építőkövei
A nukleotidok szerkezete
• Nukleotid = N-tartalmú szerves bázis + pentóz + foszfát
N-glikozidos kötés
(Foszfát)észter-kötés
1
2 3
4
5
A nukleotidok szerkezete
Purinszármazékok:
• Koffein (1,3,7 trimetil-xantin)
• Teofillin (1,3 dimetil-xantin)
• Teobromin (3,7 dimetil-xantin)
A DNS szerkezeti szintjei 1
Foszfodiészter kötés
A DNS szerkezeti szintjei 2
A DNS szerkezeti szintjei 3
A DNS szerkezeti szintjei 3
A DNS negyedleges szerkezete
prokariótákban
A DNS negyedleges szerkezete
eukariótákban
A kromoszóma szerkezete
https://www.youtube.com/watch?v=dKubyIRiN84
A DNS funkciója
• Genetikai információ tárolása
• Genetikai információ Utódsejtnek
átadása
• Genetikai információ kifejeződésének
biztosítása
RNS típusok• A, U, G, C, Ribose
• mRNS: messenger RNS
• tRNS: transfer RNS
• rRNS: ribosomal RNS– Pro: nagy: 5S, 23S, kis: 16S
– Eu: nagy: 5S, 5.8S, 28S, kis: 18S
• Kis RNS-ek– snRNA: small nuclear RNA
– snoRNA: small nucleolar RNA
– micRNA: mRNA inhibitory complementary RNA
– siRNA: small interfering RNA
RNS
DHU-hurok
Anticodon-
hurok
TφC-hurok
Centrális dogma
translation
replication
transcription
Centrális dogma
DNA
DNA
mRNA protein
replication
transcription
translation
A genetikai kód• DNS információt hordoz genetikai kódban
tárol
• Gén = az a DNS régió, ami fehérjét, vagy
funkcionális RNS-t kódol
• Az aminosavakat bázishármasok/tripletek
kódolják
• 4 bázis – 20 proteinogén aminosav 43 = 64
triplet szinonim kódok a genetikai kód
degenerált (redundáns)
A genetikai kód
• DNS tripletje információt tárol: kód
• Transzkripció = (m)RNS szintézis
mRNS tripletje információt szállít: kodon
• Transzláció = fehérje szintézis
tRNS tripletje aminosavat szállít: antikodon
A DNS replikációja
A DNS replikációja
• DNS replikáció = reduplikáció genetikai
információ továbbítása az utódsejtbe
• DNA kettőshélixe kitekeredik szimpla szálakká
(single strands), amik templát-ként szolgálnak
az új DNS szálnak
• A replikáció szemikonzervatív
A DNS replikációja
• 3 szakasz :
– Iniciácio (1)
– Elongácio (2)
– Terminácio (3)
A replikáció iniciációja
prokariótákban
A replikáció iniciációja
prokariótákban
• Replikációs origó (E. coli: oriC region) – a
kezdőpont
• A replikációs origó konszenzus szekvencia, azaz
evolúciósan nagyon stabil bázissorend
Replication origo of E.
coli (oriC region)
A replikáció iniciációja
prokariótákban
• dnaA fehérje felismeri a replikációs origót,
és köt a dnaA kötőhelyre
• dnaB és dnaC fehérjék:
– Kötnek a dnaA -hoz
– Helikáz aktivitásuk van: felbontják a
bázispárok közti H- kötéseket dupla
szálú DNS felnyílik, kialakul a replikációs
buborék/villa
A replikáció iniciációja
prokariótákban
• SSB fehérjék (Single Strand Binding
Proteins) – megakadályozzák hogy a
szálak visszakötődjenek
http://www.bio.miami.edu/dana/250/250S11_7.html
A replikáció iniciációja
prokariótákban
Direction of replication Direction of replication
Replication bubble
A replikáció iniciációja
prokariótákban
• Mindkét szál „templát”!
• Az új szál szintéziséhez szabad 3’-OH-
csoport kell primer kötődik a DNS
templáthoz
• Primer: rövid RNS szakasz (10-30b)
• Primer szintézise a primáz enzim által történik a
primoszómában
A replikáció iniciációja
prokariótákban
A replikáció elongciációja
prokariótákban
• DNS polimeráz III. (DNs-függő DNS
polimeráz III.): az új DNS szál szintézise
irány: 5’ 3’
• Nukleotidok beépítése az új szálba:
Dezoxiribonukleotid trifoszfát (dNTP)
Dezoxiribonukleotid monofoszfát (dNMP)
épül be + anorganikus pirofoszfát
felszabadul
A replikáció elongciációja
prokariótákban
• Vezető szál (Leading strand): folyamatos
szintézis
• Csak 1 primer kell
• Követő/késlekedő szál (Lagging strand):
szakaszos szintézis rövid fragmentumok
alakulnak ki
– Minden fragmentumhoz kell egy primer
primer + DNS = Okazaki-fragmens
A replikáció elongciációja
prokariótákban
A replikáció elongációja
prokariótákban
A replikáció terminációja
prokariótákban
• A replikáció végén a terminus szekvenciánál a DNS
polimeráz III ledisszociál
• DNS polimeráz I. :
– Primereket hidrolizálja (5’-3’ exonukleáz aktivitás)
– Kicseréli DNS dezoxiribonukleotidokra (5’-3’ polimeráz
aktivitás)
• DNS ligáz: összeköti (foszfátészerkötés) a DNS
fragmenteket (ATP kell!)
A replikáció terminációja
prokariótákban
A DNS ligáz működése
Topoizomerázok
• Replikáció során a cirkuláris DNS szál
túlcsavarodik feszültség keletkezik
– Topoizomeráz I.: csak egy szálat hasít,
nem kell ATP
– Topoizomeráz II. (DNS giráz): mindkét szálat
hasítja, ATP-t használ
Topoizomerázok
DNS polimerázok
(+fehérjék)
repliszómába állnak
össze
két szálon
párhuzamos a másolás
A replikáció
összefoglalása
https://www.youtube.com/watch?v=dKubyIRiN84
1:40-től
Replikáció Eukariótákban
• Nagyon hasonló a prokariótákhoz
• Fő különbségek:
– Több replikációs origó több repliszóma
replikáció több helyen zajlik szimultán
– DNS polimerázoknak más a neve
– Telomer szekvenciák
Eukarióta DNS polimerázok
• DNS polimeráz α: Új DNS szál szintézise –
primerhez közel
(~ prokarióta DNS polimeráz III.)
• DNS polimeráz β: Fő javító enzim (ι, η, ζ, κ is)
(~ prokarióta DNS polimeráz I.)
• DNS polimeráz γ: Mitokondriális DNS
replikációja
• DNS polimeráz δ: Új DNS szál szintézise –
primertől távol
– PCNA (proliferating cell nuclear antigen) szükséges
hozzá
Telomer szekvenciák
• 5’ végen az utolsó primert nem lehet DNS-re
kicserélni (szabad 3’ vég kell utána) kromoszóma
minden egyes replikációnál rövidül a genetikai
információ károsodhat
• Megoldás: telomer szekvenciák
• Telomer:
– G gazdag extra szekvencia a DNS 3’ végéhez csatolva
– Nem tartalmaz genetikai információt, így ha elvész nem
okoz problémát
– Telomeráz enzim szintetizálja
Telomeric sequence
http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2010/Jordan/telomerase.html
https://www.youtube.com/watch?v=AJNoTmWsE0s
Köszönöm a figyelmet!