bioquimica

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS 1

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOSFACULTAD DE MEDICINA


TEMA: INFORME DE PRÁCTICA Nº1 – FOTOCOLORIMETRÍA

CURSO: BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN

ALUMNOS:

15010453 GAMARRA YURIVILCA, JOSÉ ANTONIO 15010454 GIL RODRIGUEZ, SILVANA MERCEDES

LIMA-PERÚ2015

INTRODUCCIÓN

La fotocolorimetría es un método óptico de análisis que mide la cantidad de luz

absorbida o transmitida por una sustancia coloreada, ya sea que se trate de

sustancias naturalmente coloreadas o que se han hecho de tal calidad

mediante reacciones químicas adecuadas.

Si consideramos que cada molécula absorbe una determinada cantidad de luz,

la intensidad de la luz transmitida por una solución disminuirá en relación con el

a aumento del número de moléculas que se interpongan entre la fuente

luminosa y el observador. Este número varía de acuerdo a la concentración del

soluto y al espesor del recipiente que contiene la solución.

Se fundamenta en las leyes de Lambert y Beer:

La ley de Lambert dice: "Cuando un rayo de luz monocromático (de una única

longitud de onda) pasa a través de un medio absorbente, su intensidad

disminuye exponencialmente al aumentar la longitud del medio absorbente:

La ley de Beer dice: "Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de

un medio absorbente su intensidad disminuye exponencialmente a medida que

aumenta la concentración:


I = ε.l.c

I = 2-Log %T

La unión de ambas leyes nos da la ley de Beer-Lambert:

El fotocolorímetro lo que determina es la absorbancia o densidad óptica, que

es:

OBJETIVOS

Realizar análisis cuantitativos utilizando la fotocolorimetría como

método, así como la metodología propia de esta técnica.

Entender la ley de Lambert-Beer como método para determinar la

absorbancia en función a la longitud que atraviesa el haz de luz y la

concentración de la solución coloreada.

Resaltar la importancia de esta técnica para calcular la

concentración de ciertas muestras.

Construir e interpretar la curva de calibracióny el factor de calibración

en la determinación de la concentración.

Determinar la longitud de onda de máxima absorción o lambda

máximo para soluciones coloreadas.

Representar las concentraciones y absorbancias en un papel

milimetrado y realizar la cuantificación decla concentración por


A = Log(Io/It)= ε.l.c = A = D.O. =2-Log %T

medio de dos métodos: Método de la curva estándar y el método del

factor de calibración.

PARTE EXPERIMENTAL

1.- Preparar la siguiente batería de tubos.

Solución stock: Permanganato de potasio (KMnO4) 10 mg%.

Hallamos la Concentración mg%:


C1.V1 = Cf.Vf

TUBO Nº1

C1.V1 = Cf.Vf

10mg%.0,5ml=Cf.5mlCf=1mg%

TUBO Nº2

C1.V1 = Cf.Vf

10mg%.1ml=Cf.5mlCf=2mg%

Tubos Nº 1 2 3 4

ml KMnO4 0,5 1.0 1.5 2

ml Aguanto destilada csp 5ml

4,5 4 3,5 3

Concentración mg% 1mg% 2mg% 3mg% 4mg%


TUBO Nº3

C1.V1 = Cf.Vf

10mg%.1.5ml=Cf.5mlCf=3mg%

TUBO Nº4

C1.V1 = Cf.Vf

10mg%.2ml=Cf.5mlCf=4mg%

Leeímos las absorbancias de los 4 tubos a las siguientes longitudes de

onda (λ) 410 nm, 525 nm y 650 nm en el espectrofotómetro.

TABLA EXPERIMENTAL:

Tubos Nº 1 2 3 4

ml KMnO4 0,5 1.0 1.5 2

ml Aguanto destilada csp 5ml

4,5 4 3,5 3


A410 0,03 0,055 0,058 0,097

A525 0,139 0,260 0,405 0,556

A650 0,015 0,027 0,024 0,037

Fc[ ] 7,194 7,692 7,407 7,194


2. Con los datos obtenidos: Construir en un papel milimetrado las gráficas de

absorbancias versus concentración de KMnO4 en las 3 longitudes de onda.

3. Con las gráficas elegir la longitud de onda óptima para el KMnO4


0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.50

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

KMnO4(10mg%)

Curva de calibración

350 400 450 500 550 600 650 7000

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

Tubo1Tubo2Tubo3Tubo4

4. En la gráfica para el λ optimo representar la curva de calibración.

Medir la absorbancia de la muestra problema haciendo la dilución

apropiada para la muestra.

5. Obtener el Factor de calibración (Fc) promedio de las soluciones estándares

de la curva de calibración.

a) Primero hallamos el factor de calibración de cada uno de los

tubos:

Fc1=1mg%0.139

= 7.194

Fc2=2mg%0.260

= 7.692

Fc3=3mg%0.405

= 7.407

Fc4=4mg%0.556

= 7.194

b) Luego se utilizan los datos anteriores para hallar el factor de

calibración promedio:

Fc=7.194+7.692+7.407+7.194

4

Fc= 7.375

6. Calcular la concentración de la muestra problema por los métodos:

a) Gráficamente, interpolando la absorbancia en la curva de calibración.


Tubos Nº 1 2 3 4

Fc[ ] 7,194 7,692 7,407 7,194

b) Analíticamente, multiplicando la absorbancia por el Fc promedio y el

factor de dilución.

7.

Comparar ambas medidas y analizar los resultados.

RESULTADOS

El primer resultado que obtenemos es el de la Concentración en mg%:

Se obtuvo el Factor de calibración de cada uno de los tubos:

Luego se establece el Factor de calibración promedio:

Fc=7.194+7.692+7.407+7.194

4

Fc= 7.375

De la gráfica de la curva de calibración se obtuvo la longitud de máxima

absorción o longitud de onda óptima ⋋= 525 nm.


Tubos Nº 1 2 3 4

Fc[ ] 7,194 7,692 7,407 7,194

Tubos Nº 1 2 3 4


Se determinó la concentración de la muestra problema mediante los dos

métodos:

Método Gráfico: 39 mg%

Método Analítico: 35.40 mg%

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

El conocer el adecuado uso de los instrumentos del laboratorio, como

las pipetas, permitió conocer resultados dentro de lo esperado.

Los resultados de la concentración de la muestra problema obetenidos

muestras un pequeño margen de error por defecto.

CONCLUSIONES

La fotocolorimetrìa es importante como método procedimental

para hallar concentración de soluciones coloreadas.

A mayor concentración, menor transmitancia y mayor

absorbancia; A menor concentración, mayor transmitancia y

menor absorbancia.

Se determinó la longitud de onda óptima para el KMnO4 es de

525nm.


CUESTIONARIO

1.- Hallar la longitud optima de lectura.

En la gráfica de Absorbancia vs. Concentración se observa que la longitud óptima de lectura es 525nm., ya que la curva presenta una mayor elevación en comparación con las otras.

2.- Mencione la concentración de la MP por ambos métodos (gráfico y

analítico), Porqué son diferentes, explique.


350 400 450 500 550 600 650 7000

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

Tubo1Tubo2Tubo3Tubo4

MÉTODO ANALÍTICO

1. Absorvancia de la Muestra Problema (MP): 0.048.

2. Se busca determinar el factor de calibración promedio:

a) Primero hallamos el factor de calibración de cada uno de los

tubos:

Fc1=1mg%0.139

= 7.194

Fc2=2mg%0.260

= 7.692

Fc3=3mg%0.405

= 7.407

Fc4=4mg%0.556

= 7.194

b) Luego se utilizan los datos anteriores para hallar el factor de

calibración promedio:

Fc=7.194+7.692+7.407+7.194

4

Fc= 7.375

3. Se aplica la siguiente fórmula:


[MP]=Fc.AbsMP.Fd

[MP]=Fc.AbsMP.Fd

[MP]= 7.375.0.048.100

[MP]= 35.40mg%

Tubos Nº 1 2 3 4

Fc[ ] 7,194 7,692 7,407 7,194

MÉTODO GRÁFICO

Este método consiste en utilizar varios Standares de concentraciones

conocidas y progresivas para luego construir un gráfico en un sistema de

coordenadas en el que se colocan las lecturas en las ordenadas (Eje Y)

y las concentraciones en las abscisas (Eje X).

En la recta obtenida (Función Lineal), se puede extrapolar la

Absorbancia o Densidad óptica de la muestra problema, hallando la

concentración de la misma en el eje de las abscisas.

* Ubicaremos los datos en el gráfico:


0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.50

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

KMnO4(10mg%)

Curva de calibración

A525MP= 0.048[MP]= X

Al trazar la gráfica ubicaremos a la [MP] en el punto 0.39.

Son diferentes porque siempre se habla de un margen de error, además

de que un método puede ser más preciso que otro.

3.- Hallar los %T cuando se conoce las absorbancias: A1 = 0.01 A2 = 0.1,

Hallar la Absorbancia cuando se conoce el % T siguientes: 1% T, 10 %T.

Hallar los %T:

Hallar la Absorbancia:


*Cuando %T= 1%T

*Fórmula a utilizar: A1=2-Log %T

Resolución:

A1=2-Log %T

A1=2-Log 1%

A1=-Log(0.01)

A1=2

Resolución:

A2=2-Log %T

0.1=2-Log %T

%T= 79.43282347

*Cuando A2=0.1* Fórmula a utilizar: A2=2-Log %T

*Cuando A1=0.01

* Fórmula a utilizar: A1=2-Log %T

Resolución:

A1=2-Log %T

0.01=2-Log %T

%T=97.7237221

[MP]0.39 mg%.100 [MP]= 39 mg%

4.- Una solución coloreada presenta una

Absorbancia de 0.450 en una cubeta de 2 cm, hallar la Absorbancia cuando

la sustancia se ha diluido 4 veces y se lee en una cubeta de 1 cm.


A1=0.225.1.1/4

A1= 0.05625

Entonces, para la nueva sustancia se reemplaza el coeficiente de extinción molar:

Primero hallamos el coeficiente de extinción molar:

Resolución:

Abs= ε.l.c

0.0450= ε.2.1

ε= 0.225

Fórmula: Abs= ε.l.c

*Cuando %T= 10%T

* Fórmula a utilizar: A2=2-Log %T

Resolución:

A2=2-Log %T

A2=2-Log 10%

A2=-Log(0.1)

A2=1

BIBLIOGRAFÍA

1. http://es.slideshare.net/noheding/fotocolorimetria-42075186

2. http://roble.pntic.mec.es/~mbedmar/iesao/quimica/puntodel.htm

3. http://www.optek.com/es/Lambert_Beer_Law.asp

4. http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/

08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf

5. http://www.buenastareas.com/ensayos/Practica-De-

Fotocolorimetria-Unmsm/232724.html


http://www.buenastareas.com/ensayos/Practica-De-Fotocolorimetria-Unmsm/232724.html

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