1

应用型人才培养综合改革的“六化、六制、六

转变”探索实践—以地方高校为例

研究成果应用情况

2

1.3 成果推广应用情况

1.3.1 改革经验交流

1.3.2 课程安排便利化

1.3.3 教学方法多样化

1.3.4 实验项目论证和实验周

1.3.5 顶岗实习、毕业论文双导师

1.3.6 学生科研训练平台导师制

1.3.7 考核评价方式

3

1.3.1 课程改革经验交流推广

每学期举办一次教学改革经验交流会，互学互通，改革不断改进，

改革效果较好的老师为大家做示范课。

课程改革汇报交流

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6

观摩课、示范课

7

8

9

1.3.2 课程安排便利化

教学安排时本着为师生服务的便利化。在课程安排时，充分考虑老师时间、学

生记忆规律，把学时较少的课程集中安排，不同班级同一门课任课老师分段上课，

能节省老师备课时间，留给老师更多的时间和空间外出学习交流、带领学生进行科

研训练。

10

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12

13

1.3.2 教学方法多样化、教学手段信息化

学案式教学方法

教师依据学案评价标

准评价学生的学习过

程与结果（占 60%）

教师提前 1-2 周布置学习

内容，并确定学习目标

学生依据学习目标进行

学习，并设计学案

学生分小组汇报学习成果，

并讨论学习中遇到的问题

组长记录并汇报小组成员的

学习情况及存在问题

组内不能解决的问题，可由其他组成

员解答或提出解决问题的方案

教师针对学生学习中暴露的问题进行总

结，解决共性问题，并提出改进建议

学生上交修

正后的学案

自我评价（占 20%）

小组评价（占 20%）

依据小组讨论和他人观点，学生修正并完善自己的学案

学生学习成果综合评定成绩

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学生的学案

15

课前 10min 知识共享 部分 ppt

• 树皮粗糙，深褐色，片状脱落。

• 叶具长柄，偶数羽状复叶；小叶对生或互生，纸质，

卵状披针形或卵状长椭圆形，两面均无毛，无斑点，

背面常呈粉绿色，叶脉背面略凸起

• 圆锥花序，被稀疏的锈色短柔毛或有时近无毛，小聚

伞花序生于短的小枝上，多花；

• 花具短花梗；花萼5齿裂或浅波状，外面被柔毛；花瓣

白色；雄蕊10，其中5枚能育，5枚退化；子房圆锥形，

每室有胚珠8颗，柱头盘状。蒴果狭椭圆形，深褐色。

• 喜温，适宜在平均气温8—

10℃的地区栽培，抗寒能

力随苗树龄的增加而提高。

• 香椿喜光，较耐湿，适宜生

长于河边、宅院周围肥沃湿

润的土壤中，一般以砂壤土

为好。

• 适宜的土壤酸碱度为

pH5.5—8.0。

• 产陕西、贵州和云南；生于山坡或溪旁。

观赏价值

香椿木材黄褐色而具红色环带，纹理美丽，质坚硬，有光泽，耐腐力强，丌翘，丌裂，丌易变形，易施工，为家具、室内装饰品及造船的优良木材，素有“中国桃花心木”之美誉。

为华北华中华东等地低山丘陵或平原地区的重要用材树种，又为观赏及行道树种。园林中配置于疏林，作上层滑干树种，其下栽以耐阴花木。

香椿是华北、华东、华中低山丘陵或平原地区土层肥厚的重要用材树种，“四旁”绿化树种。

1 食用价值

香椿炒鸡蛋、香椿竹笋、香椿拌豆腐、潦香椿、煎香椿饼、椿苗拌三丝、椒

盐香椿鱼、香椿鸡脯、香椿豆腐肉饼、香椿皮蛋豆腐、香椿拌花生、凉拌香

椿、腌香椿、冷拌香椿头。

食用香椿的禁忌：

一般人群都可以食用香椿。但香椿为发物，

食易诱使痼疾复发，

故慢性疾病患者应少食或丌食。

2

药用价值

香椿含钙、磷、钾、钠等成分。

有补虚壮阳固精、补肾养发生发、消炎止血止痛、行气理血健胃等作用。凡肾阳

虚衰、腰膝冷痛、遗精阳痿、脱发者宜食之。

香椿中含维生素E和性激素物质，具有抗衰老和补阳滋阴作用，对丌孕丌育症有

一定疗效，故有“助孕素”的美称。

香椿是时令名品，含香椿素等挥发性芳香族有机物，可健脾开胃，增加食欲。香

椿的挥发气味能透过蛔虫的表皮，使蛔虫丌能附着在肠壁上而被排出体外，可用

治蛔虫病。香椿含有丰富的维生素C、胡萝卜素等，有助于增强机体免疫功能，

并有润滑肌肤的作用，是保健美容的良好食品。

3

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含羞草(很容易害羞的哦)

• 2019级生物科学杨菲01

02

03

中文学名 含羞草拉丁学名 Mimosa pudica Linn.

别称 感应草、知羞草、呼喝草、怕丑草、见笑草、夫妻草、害羞草

豆科含羞草亚科含羞草族含羞草属

01

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披散、亚灌木状草本，高可达1米；茎圆柱状，具分枝，有散生、下弯的钩刺及倒生刺毛。

托叶披针形，长5-10毫米，有刚毛。羽片和小叶触之即闭合而下垂；羽片通常2对，指状排列于总叶柄之顶端，长3-8厘米；小叶10-20对，线状长圆形，长8-13毫米，宽1.5-2.5毫米，先端急尖，边缘具刚毛。

头状花序圆球形，具长总花梗，单生或2-3

个生于叶腋；花小，淡红色，多数；花萼

极小；花冠钟状，外面被短柔毛；雄蕊4枚，

伸出于花冠之外；子房有短柄，无毛；胚

珠3-4颗，花柱丝状，柱头小。

医药价值

观赏价值

还会预测哦

全草（含羞草）：甘、涩，凉。宁心安神，清热解毒。用于吐泻，失眠，小儿疳积，目赤肿痛，深部脓肿，带状泡疹。根（含羞草根）：涩、微苦。有毒。止咳化痰，利湿通络，和胃，消积。用于咳嗽痰喘，风湿关节痛，小儿消化丌良。

含羞草株形散落，羽叶纤细秀丽，其叶片一碰即闭合；含羞草花多而清秀，楚楚动人，给人以文弱清秀的印象。可地栽于庭院墙角，也可盆栽于窗口案几。赠花时，将盆栽轻轻地罩上粉红色薄纱，系扎上粉红色饰带花结。如果能再点缀上粉红色的马海毛绒球，会更加有趣。现多做家庭内观赏植物养植。

含羞草是一种能预兆天气晴雨变化的奇妙植物。如果用手触摸一下，它的叶子很快闭合起来，而张开时很缓慢，这说明天气会转晴；如果触摸含羞草时，其叶子收缩得慢，下垂迟缓，甚至稍一闭合又重新张开，这说明天气将由晴转阴或者快要下雨了。

各种价值 大概浑身是宝

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含羞草的叶子如果用手触摸、浇水或遇台风，便会蜷缩起来。就好象在向人鞠躬一样。是个彬彬有礼的植物。因此，它的花语是“礼貌”。凡是受到这种花祝福而诞生的人，是个行为规距、受年长者喜爱的人。但是却让同侪有张惧之感，所以应该偶尔放松一下自己，因为过于严肃规矩，连异性也会惧而不敢亲近。

花语：害羞（Shyness） 轻轻触碰这种植物的叶片会立刻紧闭下垂，即使一阵风吹过也会出现这种情形，就像一个害羞的少女般。因此它的花语是－害羞。 受到这种花祝福而生的人个性非常害羞胆小，而且很怕生。感受特别的敏锐，自尊心也强。不过如果和了解自己的人在一起，就会轻松自在得多，交朋友重质不重量，喜欢细水长流的感情。

含羞草 花语

THANK YOU

木棉花

2018级生物科学2班第二组

中文学名: 木棉花目: 锦葵目科: 木棉科英文名: Kapok拉丁学名:Bombax ceibaLinnaeus;Bombax malabaricum DC.别称: 红棉，斑芝树，英雄树，攀枝花分布区域:亚洲南部至大洋洲

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木棉又名红棉、攀枝花。中国关于木

棉的记载最早见于晋代葛洪的《西京杂记》，西汉时，南越王赵佗向汉帝进贡烽火树，“高一丈二尺，一本三柯，至夜光景欲燃”，据说烽火树就是木棉树。木棉通常3、4月份开花，木棉花较大

，色彩橙红，极为美丽，可供欣赏。木棉花是南方的特产，是广州市、高雄市以及攀枝花市的市花。

花单生枝顶叶腋 先花后叶

通常红色，有时橙红色

直径约10厘米，萼杯状

花瓣外面无毛，内面密被淡黄色短绢毛

木棉花的果实—

—

棉絮

树干

木棉树

掌状复叶，小叶5-7片，长圆形

至长圆状披针形，长10-16厘米，宽3.5-5.5厘米

，顶端渐尖，基部阔或渐狭，全缘，两面均无毛。

煲木棉靓汤

祛湿利水，健脾舒肝。木棉花常为广东民间祛湿的好食材，既有祛湿功效，又平和清润，最宜初春之用。

木棉陈皮粥

健脾祛湿，凉血止血，润肺止咳。

木棉虾仁豆腐

清热利湿，解郁除烦。木棉花有清热利湿之功能，豆腐能解热除烦，竹笋能润肠，与虾仁、火腿、鸡汤共煨，不但气香味美，而且更增加清热利湿和凉血之功效。豆腐中的异黄酮还有抗氧化和防衰老作用。

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主讲人：18科二杨婷婷

桃

课堂汇报交流 部分 ppt

特殊药品使用不当的危害

2017生物技术:赵娜

医药安全小常识

刘亚林

201707030026

保健食品安全知识

2017级生物技术王康鑫

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生活中的药事管理与法规

2017技术陈慧慧

精神药物及其滥用的危害

生物技术任博慧

21

现代信息技术与教学的深度融合

微信

22

对分易

23

雨课堂

24

在线开放课程

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1.3.4 实验项目论证和实验周

通过多次论证，减少验证性、演示性，重复性的实验项目，增设实用性、综合

性、设计性、创新性实验，提升以应用为驱动的创新能力。共论证了 40 余门次实验

课，目前，接近 90%的实验项目为综合型、设计型或创新型实验。部分课程综合性

实验达到 100%。一些课程老师根据自己的科研项目让学生自己设计开放性实验方

案，经过论证完善后，有学生分组进行药品配制、材料的培养、实验的实施等工作，

最后实验结果以论文形式呈现，学生的科学研究素养、科技论文撰写能力得到有效

的训练，为毕业论文工作奠定良好基础。

在大三第五、六学期开设实验周，设计型、创新性实验集中安排在实验周完成，

保证了实验项目实施的完整性和连续性。我们已经连续开设 8 个学期运行效果

良好。

26

二、2017-2018学年实验项目设置

综合实验一：不同品种的小麦种子萌发期和幼苗期抗旱性鉴定

实验安排：

1.实验班内分组，每组6人；

2.学生根据老师下达的实验题目写出实验方案；

3.实验方案通过后开始在教师指导下做实验；

4.撰写实验论文；

幼苗培养及相关生理指标测定：

1.种子生活力快速测定及幼苗培养（3学时）

2.幼苗形态指标测定及根系活力测定（3学时）

3.幼苗光合色素含量的测定（ 2学时）

4.幼苗可溶性蛋白及可溶性糖含量测定（ 2学时）

5.幼苗可溶性糖含量测定（ 2学时）

6.脯氨酸含量测定（ 3学时）

实验项目二：不同农作物光合速率与呼吸速率的测定（2学时）

实验项目三：植物组织培养（4学时）

实验项目四：开放性实验（4学时）

三、2017-2018学年实验考核改革

实验成绩由两部分组成，平时成绩加实验论文及实验

报告成绩，平时成绩由出勤成绩及实验态度、动手能力组

成，占总成绩的50%，每次实验结束后给出此实验的平时

成绩，并当堂公布。实验论文成绩占总成绩的50%，根据

撰写的态度、撰写水平给出相应成绩。

27

部分课程实验项目

植物生理学实验 实验模块化设置的说明：

1. 实验模块一为一个具体的综合型、设计型实验题目，指导教师每年按小组给

出一个具体的实验题目，例如“缺素培养对小麦幼苗生长的影响”，“植物生长调

节剂对不同程度干旱胁迫下小麦幼苗生长的影响”，“小麦（蚕豆、豌豆、油菜）

等幼苗生长和生理特性对不同逆境胁的响应”等，在给出实验题目的同时，指导学

生分组讨论，设计实验方案，实验方案通过后各个实验小组按照方案开展实验，该

实验模块考察了学生的实验基本素养与实验论文撰写的能力。

2.实验模块二为开放性试验，课程组成立实验指导小组，结合指导教师科研，并

综合植物生理学知识体系，由实验指导小组教师给出 10-20 个植物学科的科学专业问

题，让学生公开申请，然后自由结合，查阅相关文献资料，写出申请书，在授课教

师课题组与申报学生范围内开展开题报告，讨论和完善实验方案，做好分工，相互

协作，提高学生之间协作能力，培养团队精神，试验结束后，学生撰写科研论文。

实验项目及实验学时分配表

备注：实验类型（验证型、设计型、综合型、创新型）

序号 实验项目名称 学时 实验类型 人数/组 要求

实

验

模

块

一

一 种子发芽率的快速测定

24

设计型、

综合型

2 人/组 必做

二 植物溶液培养 2 人/组 必做

三 植物硝酸还原酶活性的测定 2 人/组 必做

四 根系活力的测定 2 人/组 必做

五 光合色素含量的测定 2 人/组 必做

六 光合速率的测定 2 人/组 必做

七 游离脯氨酸含量的测定 2 人/组 必做

八 可溶性蛋白含量的测定 2 人/组 必做

九 可溶性糖含量的测定 2 人/组 必做

实验模块二 开放性实验 6 创新型 6 人/组 必做

28

微生物学实验

微生物实验把原来多个独立的实验项目整合成两个大的实验，实验一是微生物

实验的基本操作技能训练。实验二每年从土壤中分离、鉴定不同功能的微生物，各

实验内容非独立的，而是相互关联，只有分离得到相关微生物才能进行下一步鉴定，

因此，每一步学生都要认真操作。从实验方案的设计、样品采集、实验操作都由小

组合作完成。学生的团队精神、发现、分析综合、逻辑思维、解决问题的能力得到

提升。最后，实验结果以论文形式呈现，文献检索、科技论文写作能力得到训练。

实验项目及学时分配表

生物技术制药实验

实验项目及学时分配表

序号 实验项目名称 学时 实验类型 人数/组 备注

实验一 环境及人体表面微生物的

检测、无菌操作技术 3 综合型 5-7 人/组 必做

实验二

消毒和灭菌、培养基的制备 3 设计型 5-7 人/组 必做

从土壤中分离和纯化功能

性微生物 5 设计型 5-7 人/组

每年筛选不同的功能

性微生物 必做

从土壤中分离的微生物的

形态学初步鉴定 10

综合型、

设计型 5-7 人/组 必做

从土壤中分离细菌的生理

生化鉴定 6 综合型 5-7 人/组

必做

根据所分离的微生物

确定相关检测项目

从土壤中分离细菌的分子

鉴定 3 综合型 5-7 人/组 必做

序号 实验项目名称 学时 实验类型 人数/组 要求

实验一 人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆

菌中的表达与纯化 18

设计型、

综合型

2 人/组 必做

实验二 植酸钙镁的制备 6 验证型 2 人/组 选做

实验三 溶菌酶结晶的制备及活力测定 12 综合型 2 人/组 选做

实验四 固定化细胞生产 L-天冬氨酸 6 验证型 2 人/组 选做

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《细胞生物学》实验

实验项目及学时分配表

备注：开设实验项目为必做项目（21学时）+选做项目（15学时），并每年更新选做项目。

序号 实验项目名称 学时 实验类型 人数/组 备注

实验一 细胞凝集反应与细胞膜通

透性探究 4 综合性 4-5 人/组 必做

实验二

细胞内部结构（叶绿体、线

粒体、液泡系、细胞核等）

制片观察

4 综合性 4-5 人/组 必做

实验三 细胞器的分离与制片观察 4 综合性 4-5 人/组 必做

实验四 PEG 诱导的鸡血细胞融合的

影响因素探讨 5 设计性 4-5 人/组 必做

实验五 不同物质诱导的植物细胞

凋亡探究 4 设计性 4-5 人/组 必做

实验六 活体洋葱单细胞稳定或瞬

时转化实验 5 设计性 4-5 人/组 选做

实验七 细胞大小的测定 3 基础性 2 人/组 选做

实验八 植物细胞骨架的制片观察 3 基础性 2 人/组 选做

实验九 细胞计数 3 基础性 2 人/组 选做

实验十 动物细胞培养 6 综合性 4-5 人/组 选做

实验十一 开放性试验 6 设计性 4-5 人/组 选做

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分子生物学实验

实验项目及学时分配表

序号 实验项目名称 学时 实验类型 人数/组 备注

实验一

分子生物学与基因工程实

验常规仪器的使用及常用

试剂的配制

3 综合型 3-5 人/组 必做

实验二 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 3 验证型 3-5 人/组 必做

实验三 绿色荧光蛋白（GFP）基因

的 PCR 扩增 3 设计型 3-5 人/组 必做

实验四 DNA 片段的乙醇沉淀纯化 3 综合型 3-5 人/组 选做

实验五 硅胶模吸附法纯化 DNA 3 综合型 3-5 人/组 选做

实验六 植物基因组 DNA 的提取 3 综合型 3-5 人/组 选做

实验七 大肠杆菌质粒的提取 3 综合型 3-5 人/组 必做

实验八 质粒的限制性内切酶消化 3 综合型 3-5 人/组 选做

实验九 黏性末端 DNA 的连接 3 设计型 3-5 人/组 选做

实验十 大肠杆菌转化 3 综合型 3-5 人/组 选做

实验十一 农杆菌感受态细胞的制备 3 综合型 3-5 人/组 选做

实验十二 农杆菌转化 3 设计型 3-5 人/组 选做

备注：实验类型（验证型、设计型、综合型、创新型）选做实验中每年从中选两个。

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发酵工程实验

实验项目及学时分配表

模块 序号 实验项目名称 学时 实验类型 人数/组 要求

功能菌

发酵生

产工艺

特性的

研究

实验一 淀粉酶（蛋白酶、脂肪

酶等）产生菌的初筛 3 综合型 2 人/组 必做

实验二 淀粉酶（蛋白酶、脂肪

酶等）产生菌的复筛 6 综合型 2 人/组 必做

实验三 功能菌生长曲线和产物

合成曲线的绘制 6 综合型 2 人/组 必做

实验四 单因素实验 3 设计型 2 人/组 必做

实验五 正交优化实验 6 设计型 2 人/组 必做

实验六 功能菌的初步分离纯化 6 设计型 2 人/组 选做

其他独

立实验

实验七 酸乳的发酵 6 设计型 2 人/组 选做

实验八 甜酒酿的制作 6 设计型 2 人/组 必做

实验九 发酵罐的使用 6 综合型 15 人/组 选做

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实验周教学进度安排

33

34

35

实验周课程表

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37

1.3.5 顶岗实习、毕业论文双导师制

与北京义翘神州细胞公司、宋河酒业、辅仁药业等企业合作实行顶

岗实习制，在实习期间，由校内、校外指导老师共同指导完成毕业论文，

实习结束通过双向选择在实习单位就业。

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39

2018 届实习生登记表

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毕业论文双导师 代表

题 目： 大肠杆菌中前胸腺 PTMA

纯化条件的研究

姓 名： 索 明 松

学 号： 201407020040

学 院： 生命科学与农学学院

专 业： 生物工程

年级班级： 2014 级生物工程（1）班

指导教师： 王红星 李慧青（北京义翘）

2018 年 6 月 10 日

41

大肠杆菌中前胸腺素 PTMA 纯化条件的研究

摘 要：本研究是在上游工作实现重组 PTMA蛋白以融合蛋白形式高效表达的

基础上，用直接处理菌体的方法进行了粗纯化和精纯化。SDS-PAGE分析结果显示，

工程菌株准确表达了重组 PTMA蛋白。所表达的蛋白分子，采用 Ni和 q柱进行了纯

化，获得蛋白的纯度达到 90%。结果表明，运用原核表达系统能够成功表达 PTMA

蛋白，通过亲和层析柱和离子交换柱的纯化获得融合蛋白的纯度较高，这些为进一

步研究重组 PTMA蛋白的蛋白结构、生物活性以及与其相关蛋白的关系等提供了基

本的方法和手段。

关键词：重组 PTMA蛋白；原核表达；融合蛋白；亲和纯化

Study on Purification of the Anterior Thymus PTMA

in Escherichia Coli

Abstract: The conditions for crude and refined purification of proteins were explored, by

the method of a direct treatment of the bacteria, this study was based on the upstream

work to realize the efficient expression of recombinant PTMA protein in the form of

fusion protein. SDS-PAGE analysis showed that the recombinant protein was accurately

expressed in the engineered strain, the expressed protein molecules purity obtained 90%,

purified by Ni column and q column. The results suggest that using prokaryotic expression

system successfully expressed PTMA protein, and high purity fusion protein can be

obtained by purification of affinity chromatography column and ion exchange column.

The recombinant protein PTMA for further research of protein structure, biological

activity and the relationship between related protein provides the basic method and means.

Key words: Recombinant PTMA Protein; Prokaryotic Expression; Fusion Protein;

Affinity Purification

引言

胸腺是机体免疫系统的中枢器官，是 T 细胞分化、发育、成熟的场所。胸腺可以分

泌胸腺素，胸腺素是一种具有生理活性的多肽类物质，含有 28 个氨基酸残基，可以促

进细胞分裂，还可以诱导造血干细胞发育为 T 淋巴细胞具有增强细胞免疫功能和调节免

疫平衡等作用，胸腺素可以分为 α 族和 β 族。胸腺素 α 族又包括前胸腺素 α 和胸腺素 α1、

α2、α5、α7。α 族胸腺素诱导促进 MIF、干扰素、淋巴细胞生长因子及淋巴细胞毒素的

形成[1]，增强机体对病毒、霉菌及肿瘤的免疫力；β 族胸腺素是一种刺激细胞运动的物

质，它可以促进细胞间的运动。

前胸腺素 α( Prothymosin α，PTMA)大多数是由动物胸腺上皮细胞分泌的，不仅是

一种活性肽物质，而且还是一种调节剂，它可以对多种生物活性物质进行调节。最近发

现胸腺素在肿瘤细胞中可以高效表达[2]，并且与肿瘤的发生、发展密切相关，它将成为

评估肿瘤的又一重要参考指标[3]。

PTMA 被认为主要是一个小分子核蛋白，编码此蛋白的基因位于 2 号染色体上由 13

个外显子和 8 个内含子组成，长约 2250bp[4]。虽然 PTMA 蛋白很小，但在细胞增殖等

功能上发挥重要作用。在一项关于宫颈癌细胞的研究中发现，PTMA 的 C-末端可以被切

开，从而产生一个截断的 PTMA（tPT-MA），PTMA（tPT-MA）导致其丧失核定位序列，

缺少核定位信号的 PTMA（tPT-MA）却可以被作为一种有效的基因治疗策略，主要作

用于胶原诱导性关节炎的治疗上，但由于缺少核定位序列使其在细胞溶质中积聚，进而

降低了 PTMA 在细胞核中核增殖的功能[5]，同时 PTMA 还缺少其他 PTM 基因同源物所

具有的典型 N-断疏水性结构域[6]，通常这种情况出现在人成熟的红细胞中，并且会与红

细胞的膜下蛋白或者膜整合蛋白相互作用，但其自身并不整合到细胞膜的脂质双层中。

此外，PTMA 还具有细胞免疫调节、抑制细胞凋亡、细胞增殖和调节氧应激有关，保护

基因表达的功能。

本研究以前胸腺素 PTMA 蛋白大肠杆菌菌体为材料，通过对上游重组 PTMA 蛋白

表达体系以及纯化方法进行研究，以期提高目的蛋白的表达量和活性，从而实现得到高

产量，高纯度，高活性，高质量的“四高目的”蛋白。为后续实验提供更好的实验材料。

1.材料与方法

1.1 实验材料

前胸腺素 PTMA 蛋白大肠杆菌菌体（由北京义翘神州公司反应器组提供）。

1.2 实验仪器

AKTA (SCG300)购自 GE 公司；流动泵（BT-200B 数显恒流泵）购自上海青浦沪西

仪器厂；核酸蛋白检测仪（HD-21-1）购自上海青浦沪西仪器厂；台式离心机；高效高

速冷冻离心机；高压均质机；超声破碎仪购自宁波新芝生物科技股份有限公司；天平。

1.3 实验试剂

Dtt 购自宏大科技；Urea 购自国药；GSH 购自宏大科技；Tris 购自北京化药；EDTA

购自北京化药；pH 8.0 的 Ni 柱平衡缓冲液；pH 8.0 的 Ni 柱洗脱缓冲液；pH 6.0 的 q 柱

平衡缓冲液；pH 6.0 的 q 柱洗脱缓冲液；pH 6.0 的 QFF 柱平衡缓冲液；pH 6.0 的 QFF

柱洗脱缓冲液；pH7.4 的 PBS 缓冲液。

1.4 实验方法

1.4.1 重组 PTMA 蛋白的培养条件优化

培养大肠杆菌中 PTMA 的基础培养基的配制。磷酸盐母液的配制，称取三水磷酸氢

二钾 125.4g，三水磷酸二氢钾 23.1g，定容至 1L，121℃灭菌 20min 备用。抗生素母液

的配制，称取氨苄霉素 5g，定容至 50mL。无菌过滤离心管中，置于-20℃冰箱备用。

将含有 PTMA 蛋白的大肠杆菌菌体悬浮液分别置于甘油浓度为 5g/L、10g/L、20g/L

及 30g/L 四个梯度培养 30h 后，用分光光度计分别检测四个梯度的 OD 值，得出最适的

表达量。

图 1 甘油浓度对重组 PTMA 蛋白的影响

根据图 1 可知，含有 PTMA 蛋白大肠杆菌菌体悬浮液培养基的最适甘油浓度为

10g/L。因此可以得到配制 TB 母液和 TB 培养基的配方。如下：

配制 1L TB 母液：称取 10g 甘油，12g 蛋白胨，24g 酵母粉，定容至 900mL，装入

1L 瓶内，置于灭菌锅中，118℃，20min 备用。

1L TB 培养基的配制。在超净工作台上，往 1L 的 TB 母液中分别加入磷酸盐母液

100mL，抗生素氨苄霉素 1mL 拧紧瓶盖混匀后备用。

1.4.2 重组 PTMA 蛋白的培养温度优化

将含有 PTMA 蛋白的大肠杆菌菌体悬浮液分别置于 18℃、25℃、30℃及 37℃四个

梯度中培养 30h 后，用分光光度计分别检测四个梯度的在 OD 值，得出最适的表达量。

根据图 2 可知，在 18℃OD 值最小，说明 PTMA 蛋白的表达量最高，且随着温度的

升高蛋白的表达量降低。因此，18℃是蛋白表达的最适宜温度。

图 2 温度对重组 PTMA 蛋白的影响

1.4.3 融合蛋白的提取

基因工程菌发酵液经离心浓缩后，在小规模且菌量较少的情况下，采用机械破碎、

超声破碎、单纯超声破碎等具有较好的破胞效果。对于大体积细胞悬液的破碎，建议采

用溶菌酶破胞与超声破碎相结合的方法，可显著提高融合蛋白的纯度和回收率。

1.4.4 融合蛋白的溶解

采用不同浓度的 Tris 和 NaCl 来溶解融合蛋白，通过离子间的相互作用，打断融合

蛋白质分子内和分子间的化学键，使目的蛋白溶解在缓冲液中。

1.4.5 融合蛋白的纯化

根据蛋白的理化学性质采用合理的层析方法对目的蛋白进行纯化。因为蛋白纯化时

离子交换层析柱中有离子交换剂的存在，所以当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析

柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，可通过改变 pH 的

办法将吸附的蛋白质洗脱下来。

1.4.6 重组 PTMA 蛋白的获取

用 1L 的离心筒通过高效高速冷冻离心机 6500rpm，4℃离心 40min，收集沉淀，2L

的菌液收获 2.56g 菌体，用 pH 8.0 的破菌悬浮液，以 1：40 的比例将沉淀悬浮并在各菌

液中加入 1：10000 的 Ben 酶，为的是使目的蛋白能完全的暴露出来。

在获得的菌液中加入 SCT1000、PMSF 各 1.25ml，用功率为 570W 超声破碎仪，超

2s 停 2s，超声波破菌 30min，使菌体完全破碎蛋白完全暴露。

取上述破壁菌液，分别用 75mL 的离心管 13000rpm 离心 30min，使其部分的杂蛋

白、核酸等物质沉淀，得上清液。为了进一步去除杂蛋白，为下面的上层析柱纯化做准

备，再用瓶口滤器用 0.45um 的滤膜过滤，得到的滤液即为 PTMA 蛋白。

1.4.7 重组 PTMA 蛋白的纯化

取已经过滤好的蛋白约 400mL 进行粗纯化，用 45mL Ni 柱层析柱进行试验。

1.4.7.1 Ni柱的粗纯化

（1）将所用到的 150mL Ni 柱正确的连接到简易系统上，先用注射器连接到柱尾上，

将超纯水从柱尾打入，排干净柱头中的空气，再把柱头与简易系统接好。

（2）把注射器从柱尾拆下，并将柱尾与检测仪接上。

（3）用超纯水将柱子中的酒精冲洗干净后便可以上硫酸镍，待柱子变为绿色的时

候，再换超纯水冲洗 1 个柱体积后，用 pH 8.0 的平衡缓冲液冲洗，等柱子冲为蓝色时，

上样。

（4）上样时，避免空气对柱子载量的影响，应注意防止柱子进气，同时，要注意

收流川，检测目的蛋白是否可以全部挂在柱子上。

（5）上完样品之后，用 pH 8.0 的平衡缓冲液再平衡 5 个柱体积，使未能挂在柱子

上的杂蛋白完全冲出柱子。

（6）用 pH 8.0 的洗脱缓冲液按照浓度为 2.5%、10%、100%洗脱缓冲液进行洗脱，

收集样品。

（7）将收集到的样品做 SDS-page 纯度检测。

（8）Ni 柱的处理，先用 0.1M EDTA 将柱子上的硫酸镍洗掉，再用 1M NaOH 将柱

子上没洗下的蛋白洗下来。然后用超纯水过度，以洗去硫酸镍和 NaOH 反应生成氢氧化

镍沉淀。最后用超纯水把柱子冲到中性的时候，再用 20%乙醇保存柱子，完成粗纯化。

1.4.7.2 q柱精纯小试

取经 Ni 柱完成的纯化效果好的蛋白约 3mg，在 AKTA 上做小样纯化。

（1）将所使用的 1mL q 柱子正确的连接到 AKTA 上，先接好柱头再接柱尾，以防

进气。

（2）先用超纯水将仪器的 A、B 泵清洗一遍，再用超纯水将保存柱子的酒精冲净。

（3）用 pH 6.0 的平衡缓冲液，pH 6.0 的洗脱缓冲液分别对应清洗 A、B 泵。

（4）用大约 5 到 10 个柱体积的 pH 6.0 的平衡缓冲液，对 q 柱进行平衡使得仪器的

电导至基线。

（5）用 25mL 稀释液将蛋白稀释。

（6）在 Inject 的模式下用 Loop 上样。

（7）上样完毕后用 pH 6.0 的平衡缓冲液，平衡使得电导恢复至原来平衡好的水平

基线。

（8）对样品进行洗脱，洗脱液浓度为 0%-30%、30%-60%的条件下，用 1mL/min

线性流速洗脱 20 个柱体积。每 0.7mL 每管收样。

（9）将收集到的样品做 SDS-page 纯度检测。

（10）q 柱的再生处理，用超纯水洗柱，用 1M NaOH 洗柱，用超纯水将碱液完全

冲出，用 20%乙醇保存柱子。

1.4.7.3 QFF柱精纯纯化的放大

（1）将 15mL/10mm 的 QFF 柱正确接到简易系统上。

（2）用超纯水将柱子内部 20%的乙醇冲出，用 pH 6.0 的平衡缓冲液平衡柱子 5 个

柱体积。

（3）用稀释液将样品稀释 8 倍上样。

（4）上样，将上述剩余纯化效果好的蛋白样品加入柱子中，注意收集流穿，防止

蛋白的损失。

（5）上样完成后用 pH 6.0 的平衡缓冲液再次平衡柱子，将未能挂在柱子上的杂蛋

白，过载的目的蛋白完全冲出柱子，使核酸蛋白检测的基线处于柱子平衡。

（6）根据小样纯化时的洗脱峰，用浓度为 0%-30%、30%-60%洗脱液洗脱。

（7）收集的样品进行电泳检测。

1.4.7.4重组 PTMA蛋白的脱盐处理（样品 15mL）

（1）用 pH 7.4 的 PBS 平衡缓冲液以 8mL/min 平衡层析柱 3 个柱体积。

（2）上样 15mL，上样流速 10mL/min。

（3）上样结束后用 pH 7.4 的 PBS 平衡缓冲液洗脱收峰，流速 10mL/min。

（4）柱再生，收完峰后用 1M NaOH 清洗层析柱 3 个柱体积。

（5）用超纯水冲洗柱子至中性。

（6）用 20%乙醇保存层析介质。

1.5 蛋白含量的测定

用 UV 检测仪器检测 260nm 与 280nm 的紫外光吸收值，测定蛋白质的量。

用以下公式计算蛋白质的浓度：C=（280-320）/1.06。1.06 为消光系数。

2.结果与分析

2.1 重组 PTMA 蛋白 Ni 柱的粗纯

图 3 重组 PTMA 蛋白 Ni 柱的粗纯化的层析图谱

由图 3 层析图谱可知，在洗脱液浓度为 2.5%的洗脱条件下，出现了明显的峰，因

为我们上游部分构建重组 PTMA 蛋白的时候是带了 10 个 his 标签，所以会与亲和 Ni 柱

亲和的很好，不会洗下来。接着是洗脱液浓度为 10%、100%的洗脱条件，随着洗脱浓

度梯度的提高，没有大峰出现，由此我们初步推断杂蛋白基本在洗脱液浓度为 2.5%就

洗脱下来了。最后是 10%和 100%的锋面积不大，所以推测目的蛋白可能会在这两个阶

段出现。

2.2 重组 PTMA 蛋白 Ni 柱的粗纯化的电泳图

由琼脂糖凝胶电泳图上可以清楚的看出 P1 条带很宽且清晰，由此得出 Ni 柱的纯化

效果还算理想，纯化后样品纯度再 80%左右，可以进一步纯化（见图 4）。

图 4 重组 PTMA 蛋白 Ni 柱的粗纯的洗脱峰的电泳图

注：L 表示样品、FT 表示流川、PT 表示沉淀、P1 表示 2.5%的洗脱液浓度、P2 表示 10%的洗脱液浓度、P3 表

示 100%的洗脱液浓度

2.3 重组 PTMA 蛋白 q 柱精纯小试

由层析图谱可知第一个小峰是洗脱液浓度为 0%-30%左右洗脱下蛋白，大部分是杂

蛋白，小部分有目的蛋白的可能。洗脱液浓度为 30%-60%左右的峰型比较拖，有目的蛋

白存在的可能（见图 5）。 Manual Run 7:10_UV Manual Run 7:10_Cond Manual Run 7:10_Conc Manual Run 7:10_Inject Manual Run 7:10_Logbook

0.0

10.0

20.0

30.0

40.0

50.0

mAu

210.0 220.0 230.0 240.0 250.0 ml

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B

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Pause 0.0 2012-2-7, 14:25:26 中国标准时间

(M

anual)

20120207 GST-PTMA-Q-1ml/5mm

20120207 GST-PTPN18- Q 1ml

图 5 重组 PTMA 蛋白 q 柱精纯小试的层析图谱

2.4 重组 PTMA 蛋白 q 柱精纯小试的电泳图

由图 6 可知，上述琼脂糖凝胶电泳图 q 柱精纯小试看来，f2-f6 条件下有明显的杂带，

f8-f12 下面的杂带有明显的好转，可以说明离子交换柱（q 柱）有很好的纯化效果。可

以用于 PTMA 蛋白的纯化。

图 6 重组 PTMA 蛋白 q 柱精纯小试的洗脱峰的电泳图

注：f2-f6 为 0%-30%洗脱液浓度，f8-f12 为 30%-60%洗脱液浓度

2.5 重组 PTMA 蛋白 QFF 柱精纯纯化的放大

由层析谱图可知，因为 q 小试已经可以确定杂蛋白基本在洗脱液浓度为 0%-30%的

时候出来，目的蛋白基本在洗脱液浓度为 30%-60%左右，所以我们可以得出 QFF 柱精

纯纯化的放大效果基本和 q 小试一致（见图 7）。

图 7 重组 PTMA 蛋白 QFF 柱精纯纯化的放大的层析图谱

注：P1 为洗脱液浓度为 0%-30%，P2/P3 为洗脱液浓度为 30%-60%

2.6 重组 PTMA 蛋白 QFF 柱精纯纯化的放大电泳图

由图 8 电泳图可知，p2-1 到 p2-3 中条带的杂带较多，p3-1 到 p3-3 无明显杂带且条

带清晰，由此可知纯化效果非常理想，之前的杂蛋白基本被分离干净了，达到了纯化的

最终目的。由图可基本判断此重组 PTMA 蛋白的纯度在 90%以上。

图 8 重组 PTMA 蛋白 QFF 柱精纯纯化的放大的洗脱峰的电泳图

2.7 重组 PTMA 蛋白的脱盐处理

图 9 重组 PTMA 蛋白的脱盐处理的电泳图

由图 9 可知脱盐的条带比未脱盐的条带清晰且亮，所以将蛋白质脱盐到 PBS 的缓冲

液里，对其进行保存。

2.8 UV 定量检测结果

通过 OD 值计算得到纯化出的重组 PTMA 蛋白的浓度是 0.70mg/mL。即可以使用重

组 PTMA 蛋白进行后续工作的研究。

3.讨论与结论

随着人们对前胸腺素 PTMA 蛋白研究的深入，前胸腺素 PTMA 蛋白[7]对人体的重

要性越来越明显。因此选择一个适当的表达系统，实现其自身的高效表达，并能够获得

高活性，高纯度，高质量的蛋白显得十分必要。由于大肠杆菌是许多蛋白的表达的首选，

大肠杆菌表达系统在生物技术领域已经相对比较成熟，为上游的工作降低了许多难度。

另外，大肠杆菌培养所需要的原料、条件，相对与真核细胞的表达来说，都比较低，但

是它的表达量却远高于真核细胞，而且纯化也相对比较容易。但是，它的抗原特异性相

对较高，并且成为有活性的目的蛋白又有许多困难。

近来，有许多研究表明前胸腺素 α 可以检测许多癌症的存在，如乳腺癌[8]、肝癌[9]、

卵巢癌[10]、胃癌[11]、肺癌[12]、甲状腺癌[13]等。研究表明卵巢癌中的癌细胞与前胸腺素 α

的表达有直接的关系，在卵巢发生病变时，前胸腺素 α 与癌组织均会呈现增加的趋势，

只是前胸腺素 α 没有癌组织增加的明显。前胸腺素 α 与肝癌组织的表达也有关系，二者

成正相关，前胸腺素 α 的高效表达表明失控细胞增殖的出现,表达水平的高低可以用来判

断肝硬化和肝炎是否恶变。卵巢癌作为妇科疾病中最常见的死亡癌症之一，引起了相当

高的重视，而且卵巢癌早期体征及症状并不明显，重组前胸腺素 α 将成为检测早期卵巢

癌的有效办法[14]。

配缓冲液的时候，首先要计算好要加入各成分的浓度，如果称量不准确，那么就会

影响目的蛋白的溶解环境，蛋白就会受到影响，如果蛋白变性，我们便得不到目的蛋白。

同时在实验过程中仍有许多后续的工作需要继续进行。因为在用 q 柱精纯过程中发现大

部分的目的蛋白难以洗脱下来，大部分被碱液或者 8M Urea 洗脱下来。至于其中的原因，

目前还不得而知。可能是蛋白局部浓度过高导致蛋白直接沉在柱子上了。也可能是缓冲

液不够理想。这些问题还需要我们进一步的研究和探索。

本研究通过在洗脱液浓度为 30%-60%的纯化条件中得到了较高纯度的前胸腺素

PTMA 蛋白。通过纯化获得纯度为 90%以上的高活性，高质量的目的蛋白。

参考文献

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军医大学学报, 2002, 23(6): 639-642.

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国内外公开发行的国家级医学学[J]. 2002, 23(6): 639-642.

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中国生物制品学杂志, 2012, 25(7): 888-891.

致谢 本论文是在导师王红星和李慧青导师指导下完成的，王老师和李老师的善良、学识

渊博、果断的工作作风、一丝不苟的严谨治学态、因材施教的教育方法，将使学生终生

受益。在此论文完成之际，谨向我的两位指导老师表示深深的敬意。感谢王红星老师和

李慧青老师对我的精心指导，让我能够很好的完成论文，并不辞辛苦的帮我一次又一次

的修改论文，给予我很大的帮助，另外，王老师和李老师的学识，修养也使我受益匪浅。

在此，我向王老师和李老师表示真心的感谢。

感谢周口师范学院为我提供宝贵的学习机会，感谢学校能为我们创造如此的论文写

作机会，感谢各位老师及同学在学习和生活中给予我的指导、关心和教诲。

感谢义翘神州生物科技有限公司的分子组以及反应器组惠赠重组 PTMA 蛋白的基

因以及提供正常表达菌种。

本论文的大部分工作在北京义翘神州生物技术有限公司 508 纯化组完成，感谢生化

所这个大家庭给予我学业和生活上的关心、支持和鼓励。在此向所有这四年来在学习和

生活上关心、关注和帮助过我的老师和同学们表示深深的谢意。

题 目：噬菌体展示技术筛选 CD19 单克隆抗体

姓 名： 刘 彩 霞

学 号： 201407020060

学 院： 生命科学与农学学院

专 业： 生 物 工 程

年级班级： 2014 级生物工程（1）班

指导教师： 王红星 贺建望（北京义翘）

2018 年 6 月 10 日

噬菌体展示技术筛选 CD19 单克隆抗体

摘 要：CD19分子主要存在于 B淋巴细胞表面，是一种跨膜蛋白。与 B淋巴细胞

的生长调节、增殖有关。是用来诊断 B 细胞系肿瘤和鉴定 B 淋巴细胞的标记物。随着

诊断分型技术不断的提高、联合化治疗的应用，急性淋巴细胞白血病的生存率得到了提

高，但是 B 系急性淋巴细胞白血病仍是儿童白血病死亡率的重要原因。近年来，CD19

作为免疫治疗 B细胞恶性肿瘤的分子靶点受到极大的关注。因此，此课题研究对人类治

疗肿瘤具有重要意义。本实验用 ELISA方法检测 CD19蛋白单克隆抗体，通过噬菌体展

示技术筛选 CD19的单克隆抗体，目的是筛选到 CD19蛋白结合阳性的多株鼠单克隆抗

体。

关键词：CD19蛋白；噬菌体展示技术；酶联免疫吸附法；单克隆抗体

Screening of Monoclonal Antibodies Against CD19

by Phage Display

Abstract: CD19 molecules mainly exist on the surface of B lymphocytes and are a

transmembrane protein. It is related to the growth regulation and proliferation of B

lymphocytes. It is a marker for the diagnosis of B cell line tumors and the identification of B

lymphocytes. The survival rate of acute lymphoblastic leukemia (ALL) was improved by the

improvement of diagnostic typing technique and the application of combined therapy, but the

mortality rate of acute lymphoblastic leukemia (ALL) in line B is still an important cause of

children leukemia mortality. In recent years, CD19 has attracted much attention as a

molecular target for immunotherapy of B cell malignant tumors. In this experiment, ELISA

method was used to detect the monoclonal antibody against CD19 protein, and phage display

technique was used to screen the monoclonal antibody against CD19. The purpose of this

study was to screen several mouse monoclonal antibodies with positive binding to CD19

protein.

Key words: Protein CD19; Phage Display; ELISA; Monoclonal Antibodies

引言

CD19，别名为 B4，其化学性质为跨膜蛋白，是 B 淋巴细胞表面的一种受体[1]。其

主要表达在急性白血病细胞[2]，在恶性 B 细胞肿瘤细胞上和滤泡状树突状细胞上也有表

达，在 B 淋巴系统恶性肿瘤如急性淋巴白血病、淋巴瘤中广泛表达[3]。主要功能是调节

B 细胞活化、增殖和生长调节[4]。CD19 分子在大多数淋巴瘤和白血病上高表达，包括

急性淋巴细胞白血病细胞和慢性淋巴细胞白血病细胞，现在已经成为免疫治疗的重要靶

点[5-6]。目前针对 B 系恶性肿瘤的治疗[7-8]，已经有一些 CD19 特异性抗体治疗，包括非

结合抗体，药物共轭抗体以及双特异性的抗体，在体外实验、动物模型、以及早期的临

床实验中取得了较为理想的结果[9]。但是这些研究还没能满足临床治疗的需要，技术上

也存在一些问题，因此，需要研究更多的 CD19 抗体。CD19 作为 B 淋巴细胞表面的标

记物，主要对病情监测有重要意义。通过监测 CD19 在 B 淋巴细胞上的表达，可间接反

映病情发展[10]。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay 简称 ELISA)是七

十年代发展起来的一项新技术。它具有敏感、特异、简便、安全、宜于自动化操作和适

于大量标本的特点，因此，在多方面得到了广泛的应用[11]。ELISA 已广泛应用于临床医

学、动物检疫、食品科学、植物病毒、药物残留等分析领域[12]。噬菌体展示技术是一种

生物技术，主要将外源多肽或蛋白的序列与特定噬菌体衣壳蛋白发生融合，并将表达后

的蛋白展示于噬菌体表面，展示在噬菌体表面的蛋白有独立的结构和生物活性，插入的

外源基因将随噬菌体的外壳蛋白基因的表达而表达[13-14]。

1.材料与方法

1.1 实验仪器

洗板机，摇床，酶标仪，离心机，电子天平，移液枪，移液器，漩涡混合器。培养箱，微波炉，

高压蒸汽灭菌锅，紫外分光光度计，水浴锅，移液工作站，超净工作台。

1.2 实验材料

CD19 蛋白，牛血清白蛋白（BSA），CD19 蛋白原库，二抗(M13)，DMSO，96 孔

酶标板，96 孔深孔板，酒精灯，300mL 三角瓶，镊子。

1.3 实验试剂

CBS 包被液，1×TBST 洗涤液，封闭液（2%BSA)，含 3%脱脂奶封闭液，样品稀释

剂 PBS，显色液（A+B），终止液（98%的浓硫酸），顶层琼脂糖凝胶，PEG8000，20x

WashingBuffer，1×PBS 样品稀释剂，Elution Buffer 缓冲液。

1.4 实验方法

1.4.1 CD19 噬菌体库的提取

①在 ATK 培养基培养菌液 15h。将培养好的菌液移入离心管中 10000rpm 心 10min

除去细菌沉淀，将上清液转移到三角瓶中。

②向离心好的上清液中加入 PEG8000、NaCl 溶液混匀，静置冰上孵育 1.5h。③取

上清液移入到离心管中，11000rpm4°C 离心 40min，收集离心的沉淀。

④将 4mL2YT 培养基分别加入各个库中，将噬菌体沉淀与培养基充分混合，6000

rpm 离心 40s，除去剩余的细菌残余。

⑤将得到的上清液用 0.45um 滤器过滤，向滤液中加入 DMSO 后混合均匀，保存于

-20°C 冰箱中，备用。

⑥滴度滴定测定。将得到的噬菌体库进行稀释，扩增的培养上清（108-1011），没有

扩增的筛选洗脱液（101-104），在XL1-Blue生长至对数生长期，取 10µL稀释液侵染 100µL

XL1-Blue 混合均匀后，将融化 45℃顶层琼脂 3mL 加入到侵染好的 EP 管中，混合均匀

倒入平板，待冷却后 37℃下倒置培养过夜。记录噬菌体斑的个数，获得噬菌体的效价。

1.4.2 CD19 噬菌体库的淘洗

图 1 噬菌体库的淘洗过程

①包被淘洗条。将 CD19 抗原用 CBS 包被液稀释后，混合均匀，每孔 100µL 加入

可拆卸 96 孔板中，包上保鲜膜，放入 4℃冰箱过夜培养。次日，取出孵育好的 96 孔板，

弃去孔中的包被液，用洗液洗 1 遍，并用吸水纸拍干 96 孔板。加入含 3%脱脂奶 270µL

封闭液，加完封闭液包上保鲜膜，室温孵育 1h。封闭完成后，洗液洗 2 遍，用吸水纸拍

干，即可用于淘洗。

②洗涤。取生长好的噬菌体库 4mL，离心之后取 100µL 菌液加入到事先包被好的蛋

白孔，在摇床中，37°C 培养 2h 后进行淘洗。用 1×TBST 洗涤液分别洗涤不同的次数，放

到振荡器上摇动 2min。淘洗完成后用 1×TBST 洗涤 2 遍，用吸水纸拍干 96 孔板。

③洗脱。一次洗脱：向洗涤完的孔里加入 100µL Elution Buffer 缓冲液，25℃培养

15min，洗脱与 CD19 发生特异性结合的噬菌体。收集洗脱下来的噬菌体，加入 10µL 2M

Tris-HCL。吸出洗脱液，将洗脱液加入分装了 4mL 对数生长期 XL1-Blue 的离心管中，37°C

孵育 30min；二次洗脱：将洗脱完的孔加入 100µL XL1-Blue 菌液孵育 30min,将第一次与

第二次洗脱的菌液合并。三次洗脱：将二次洗脱完的孔中加入 100µL TEA 洗脱液,室温

70rpm 孵育 10min，加入 900µL XL1-Blue 孵育 30min。收集洗脱下来的菌液。将三次洗

脱下来的菌液合并进行铺板。

1.4.3 CD19 噬菌体库的扩增

①将三次洗脱下来的菌液合并加入 Amp，摇床中，37°C 225rpm 培养 1h。

②将培养好的菌液加入辅助噬菌体 150µL VCSM13，37°C 孵育 25min。

③向上述培养液中加入 15mL 2YT 生长培养基，37°C 225rpm 摇床中培养 1h。

④将培养的菌液 4000rpm 离心 10min，弃去上清液，用 5mL 2YT 培养基将沉淀重悬

起来，用封口膜封口，放入摇床中 30°C 过夜培养。

⑤将过夜培养的菌液吸入到 EP 管中，离心 6000g 3min，弃去沉淀，转移到新的 EP

管中，一个管中加入 120µL DMSO 用于下一轮的淘洗，另一管放入-20°C 冰箱备用。

1.4.4 CD19 噬菌体库 ELISA 检测

①在冰箱中取出包被好的检测条，按每个库取好对应的检测条和对照条。

②稀释样品，每个库做 2个稀释梯度，吸取 900µL PBS 稀释剂于 EP管中，加入 100µL

样品，完成 10x稀释，再将 10x稀释好的样品吸取 100µL 加入到 900µL PBS 稀释剂，完

成 100x稀释。

③将稀释好的样品加入检测条和对照条中（先向对照孔中加样），先加 100x稀释的

样品，再加 10x稀释的样品，加完样品后，用保鲜膜包好，室温孵育 1h。

④加入 4000倍稀释的 M13二抗，孵育 1h后，弃去孔中的样品，用 1×TBST 洗液洗

3遍，用吸水纸拍干。

⑤弃去孔中的溶液，1×TBST 洗液洗 3遍，加入 200µL 显色液，显色 20min。

⑥显色完成后，终止显色，放入酶标仪中，在 450nm处读取 OD值。

1.4.5 ELISA 检测的一次表达

①从冰箱 4℃取出淘洗涂好 XL1-Blue平板；②向一个灭菌的 96孔深孔板里加入

200µL ATG-2YT培养基，从平板中挑取单克隆放入 96孔深孔板里，封上封口膜，摇床中

37℃ 225rpm过夜培养；③将过夜培养的菌转接 10µL 至加 ATG-2YT培养基的 96孔深孔

板，37℃摇床孵育 3h左右，将剩下的菌液放置 4℃冰箱；④向转接好的菌液中加入 20µL

稀释后的辅助噬菌体，充分混匀，静置 30min，摇床中 37℃ 200rpm 1h；⑤将培养好的

菌液加入 200µL ATK-2YT 培养基，摇床 37℃ 250rpm 过夜培养；⑥将培养好的菌液拿出

来 4000rpm离心 5min，取上清液做 ELISA检测。

1.4.6 一次表达后的 ELISA 检测

①包被检测条。先将 CD19蛋白用包被液 CBS 进行稀释，放在漩涡混合器上混匀，

还要包被阳性对照 mTNFRSF19 和 CBS无关对照，将 CD19蛋白稀释好后，依次加入 96酶

标板板中。室温孵育 3h 左右。孵育完成后，弃去孔中的包被液，在洗板机用洗液满孔

洗一遍，洗完之后，加入 2%BSA的封闭液进行封闭。室温孵育 1h。封闭完成后用洗板机

洗两遍，用保鲜膜包好，放到-20°C 冰箱用于检测。

②ELISA检测。加样，将表达好的 96孔深孔板的菌液和包被好的检测板放入超净工

作台中，首先，在检测板和无关对照板中加入 90µL×PBS，用排枪从 96 孔深孔板吸取

12µL 菌液加入到加好样品稀释剂的检测板和无关对照板中。要及时更换枪头，避免交叉

污染。加完样品，包上保鲜膜，室温孵育 1h。孵育结束后，弃去孔中的样品，在洗板机

上用洗液满孔洗 3遍，用吸水纸拍干，加入 50µL M13 二抗，用保鲜膜包好，室温孵育

1h。孵育结束后，在洗板机上满孔洗 3遍，用吸水纸拍干，将显色液按 200µL/w 加入到

检测板和对照板中。进行显色，显色 20min左右。显色完成后，用 98%的浓硫酸终止显

色，先终止对照板，终止完成后，在 450nm处读取 OD值。

1.4.7 二次表达

根据结果分析，分析出二次表达的克隆，从对应的位置吸出 10µL 转移到深孔板里，

深孔板里事先加入 400µL ATG-2YT，放入摇床过夜培养。从培养好的菌液里转接出 10µL

加入到 100µL ATG-2YT，在摇床中，37℃ 250rpm 培养 3h.将辅助噬菌体 VCSM13进行稀

释，稀释完之后加入 10µl 到培养好的菌液中，辅助培养物的生长。放入摇床培养 1.5h，

培养完之后加入 200µL ATK-2YT，30℃ 250rpm培养过夜。第二天，4000rpm 离心 10min，

取上清液做 ELISA检测。

1.4.8 二次表达后的 ELISA 检测

①包被检测条。先将 CD19蛋白、CD19（D1+LOOP）蛋白用包被液 CBS 进行稀释，放

在漩涡混合器上混匀，还要包被 mTNFRSF19、293 裂解液和 CBS作对照，将 CD19蛋白、

CD19（D1+LOOP）稀释好后，依次加入 96孔板中。包被相同数量的对照条，加入 96孔

板的时候要充分混匀，室温孵育 3h左右后，弃去孔中的包被液，在洗板机上满孔洗一

遍，加入 2%BSA的封闭液进行封闭。室温孵育 1h。封闭完成后用洗板机洗两遍，用保鲜

膜包好，放到-20°C 冰箱用于检测。

②ELISA检测。加样，将表达好的 96孔深孔板的菌液和包被好的检测板放入超净工

作台中，首先，在检测板和无关对照板中加入 95µL 1×PBS(PBS 中加入 BSA，按千分之

一加入)，从 96孔深孔板吸取 5µL 菌液加入到 96 孔板中，293裂解液的板中加入 2µL

菌液。加完样品室温孵育 1h。孵育结束后，弃去孔中的样品，在洗板机上满孔洗 3遍，

用吸水纸拍干，加入 50µL 12000 倍稀释 M13 二抗，用保鲜膜包好，室温孵育 1h。孵育

结束后，在洗板机上满孔洗 3遍，用吸水纸拍干，将显色液按 200µL 加入到检测板和对

照板中。进行显色，显色 20min左右。显色完成后，用 98%的浓硫酸终止显色，终止时

先终止对照板，终止完成后，在 450nm处读取 OD 值。

2.结果与分析

2.1 CD19 噬菌体库的提取结果

构建好的 CD19 噬菌体库，按计算公式计算效价。获得噬菌体的 CFU 效价，扩增培

养以后，噬菌体 CFU 的效价要达到 1011-1012 之间，或者可以参考大肠杆菌 OD 值>2，

可以用于检测，否则继续培养或者少量溶解。本实验构建的 CD19 噬菌体的 PFU 效价为

1012，可以用扩增后的库进行 ELISA检测，扩增后的库比未扩增的库效价高。

2.2 CD19 噬菌体库的淘洗结果

将构建好的 CD19噬菌体库进行第一轮的淘洗，由表 1检测结果显示，十倍稀释时，

噬菌体库 CD19在 450nm处的 OD值是 3.511>2.2，说明 CD19抗原与噬菌体库发生了结合，

但是 mTNFRSF19的数值基本上很低，说明没有与阳性对照 mTNFRSF19发生结合。由表 2

检测结果显示，当淘洗到第三轮时出现了阳性，十倍稀释时，噬菌体库 CD19在 450nm

处的 OD值是 3.458>2.2，说明淘洗到第三轮时 CD19 抗原与噬菌体库发生了结合，没有

与阳性对照 mTNFRSF19 发生结合。表 1和表 2说明噬菌体库中存在 CD19 的抗体。通过

抗原与抗体的特异性反应，将噬菌体库中的 CD19 单克隆抗体筛选出来。

表 1 CD19 噬菌体库的检测结果

CD19 mTNFRSF19

2nd

M13

lib

CD19(1)-2nd mµs

稀释倍数

100x

10x

OD450

1.555

3.511

OD450

0.052

0.093

表 2 CD19 噬菌体库的检测结果

2.3 CD19 噬菌体淘洗库一次表达结果

一次表达目的是筛选阳性克隆，由表 3 可以看出，在 450nm 处，一次表达后 CD19

的 OD 值均在 1 左右，说明包被的 CD19 抗原与表达后的抗体发生特异性结合，出现了

OD 值，从表中可以看出 CBS 的数值基本都在 0.05 这个范围，说明抗体没有与无关对

照 CBS 发生非特异性的结合，说明一次表达后筛选出了特异性的阳性克隆。

表 3 一次表达结果

CD19(1)-2nd mus phage 0.03375μg/mL

Coating

Sample:10 倍

A09

CD19

OD450

1.222

CBS

OD450

0.053

差值

1.169

CD19 mTNFRSF19

2nd

M13

lib

CD19(2)-3nd mµs

稀释倍数

100x

10x

OD450

1.437

3.458

OD450

0.043

0.056

H03

A10

G08

D01

A01

B01

E05

E03

D02

A05

A06

B02

D09

F04

1.198

1.197

1.166

1.25

1.143

1.138

1.116

1.112

1.106

1.105

1.095

1.087

1.077

1.129

0.047

0.051

0.072

0.159

0.055

0.056

0.05

0.049

0.045

0.054

0.052

0.051

0.045

0.105

1.151

1.146

1.094

1.091

1.088

1.082

1.066

1.063

1.061

1.051

1.041

1.036

1.032

1.024

2.4 CD19 噬菌体淘洗库二次表达结果

对二次表达后的克隆进行 ELISA，二次表达后 ELISA 检测结果如表 4 所示，在 450nm

处，二次表达后 OD 值在 1 左右，而空白对照 mTNFRSF19、293 裂解液和 CBS 的数值低，

再次确认一次表达所筛选的阳性克隆。最终经过两次表达和 ELISA 检测验证，确认获得

的单克隆为特异性针对 CD19 的阳性克隆，下一步可通过测序获得单克隆的 DNA 序列，

将序列插入表达载体，获得完整抗体。

3.结论与讨论

通过对本实验数据的分析可以看出，CD19 噬菌体库的检测结果显示，噬菌体与抗

原特异性结合，没有与阳性对照 mTNFRSF19 结合，说明筛选出了 CD19 的抗体片段。又

通过一次表达后的 ELISA 检测结果显示筛选出了阳性克隆，因为空白对照 CBS 的数值很

低，说明没有与非特异性蛋白结合，而是与特异性蛋白 CD19 发生了结合。对二次表达

的抗体进行 ELISA 检测，检测结果显示一次表达筛选出来的克隆就是阳性克隆。本实验

的目的主要就是用 ELISA 法筛选得到 CD19 的单克隆抗体。本实验要求提取的 CD19 噬菌

体库的效价要达到 1012，否则效价达不到，不能进行检测，要继续进行培养，不能进行

扩增。淘洗过程中，淘洗次数要求非常严格，洗涤次数过多会将所需的蛋白淘洗掉。此

过程还有可能会出现假阳性的可能，通过不断的实验，确定筛选出来的克隆即为阳性克

隆。筛选出来的阳性克隆通过测序得到 DNA 序列，将得到的 DNA 序列插入到可以表达

的载体中，可以得到完整的 CD19 抗体。筛选出 CD19 单克隆抗体对研究 B 细胞系肿瘤，

急性白血病的研究非常重要。可以通过 CD19 在 B 淋巴细胞上的表达，来监测白血病的

发生、B 细胞系肿瘤在 B 淋巴细胞上的表达，对以后研究肿瘤，控制疾病的恶化起到非

常大的作用。

表 4 二次表达结果

CD19(1)-2nd mus phage 0.03375μg/mL

Coating:

Sample:10 倍

稀释

CD19

5μg/mL

OD450

10 倍稀释

CD19(D1+loop)

5μg/mL

OD450

10 倍稀释

mTNFRSF19

5μg/ mL

OD450

10 倍稀释

293 裂解液

OD450

10 倍稀释

CBS

OD450

10 倍稀释

302

303

305

308

309

314

321

323

325

326

1.516

1.378

1.528

1.366

1.574

1.54

1.211

1.728

0.96

1.006

0.059

1.006

1.374

0.053

1.217

1.234

1.005

1.559

0.73

0.058

0.075

0.054

0.127

0.066

0.069

0.063

0.052

0.232

0.059

0.063

0.076

0.039

0.038

0.041

0.042

0.04

0.04

0.038

0.029

0.03

0.079

0.068

0.23

0.066

0.068

0.069

0.061

0.422

0.068

0.076

参考文献

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Antigens Detected by Two Mµrine Monoclonal Antibodies[M] Leµcocyte Typing.

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antigen-specific human monoclonal antibody by in vitro immunization and the phage

display method.[J]. Journal of Immunological Methods, 2008, 332(1): 2-9.

致谢

我首先要感谢我的校内论文指导老师王红星老师和校外指导老师贺建望。在改论

文的过程中，我的指导老师给了我很大的帮助。经过了三个月的努力，最终完成了论

文的终稿。从开始接到论文题目到系统的实现，再到论文文章的完成，每一步对我来

说都是一种新的尝试与挑战，这也是我在大学期间独立完成的最大的项目。在这段时

间里，我学到了很多知识。从一无所知，我开始了独立的学习和试验，查阅相关的资

料和书籍，让自己头脑中模糊的概念逐渐清晰，使自己十分稚嫩作品一步步完善起来，

每一次改善都是我学习的收获，每一次试验的成功都会让我兴奋好长一段时间。我的

论文作品不是很成熟，还有很多不足之处。但是这次做论文的经历使我终身受益。是

真正的自己学习的过程和研究的过程，没有学习就不可能有研究的潜力，没有自己的

研究，就不会有所突破，那也就不叫论文了。期望这次的经历能让我在以后学习中激

励我继续进步。最后要感谢学校给我提供了这么好的实习机会。我一定会继续努力，

在工作上好好表现！

1.3.6 学生科研训练平台导师制

依托我院的一个国家级实践教学基地、四个省级重点实验室以及省级创

新团队、校企联合实验室等科研平台，在大一新生入学初期由平台老师介

绍研究方向，学生根据自己的兴趣加入研究平台进行创新培养，每年在各

平台参与老师科研的学生保持在 150 余人次，并呈逐年递增的趋势。通过

系统的科研训练，一方面学生获得创新实践学分，另一方面，考研竞争力

明显增强，参加学科竞赛的人数逐年增加，获奖等级逐年提高。

近两年参加科研训练学生名单（部分）

河南省作物分子育种与生物反应器重点实验室

序号 姓名 学号 专业 指导教师

1 徐 平 201807020057 生物工程 张 菊

2 何炫锦 201807020060 生物工程 张 菊

3 付一凡 201807020030 生物工程 张 菊

4 陈仁炫 201807020004 生物工程 张 菊

5 武江涛 201807020052 生物工程 张 菊

6 张湘豫 201707010023 生物科学 张 菊

7 靳亚茹 201707010050 生物科学 张 菊

8 代玉珍 201707010026 生物科学 张 菊

9 曾美端 201607030053 生物技术 张 菊

10 王庭怡 201607030058 生物技术 张 菊

11 谷 红 201607030013 生物技术 张 菊

12 陈佳敏 201607030047 生物技术 徐克东

13 耿梦珠 201607030038 生物技术 徐克东

14 杨舒晶 201607080040 食品工程 徐克东

15 贾会杰 201607080033 食品工程 徐克东

16 刘鑫鑫 201707030003 生物技术 徐克东

17 向 慧 201707010063 生物科学 徐克东

18 王雅静 201707020021 生物工程 徐克东

19 陈心怡 201707030032 生物技术 徐克东

20 化梦柯 201807010050 生物科学 徐克东

21 顾湘凤 201807020003 生物工程 徐克东

22 赵亚文 201607020048 生物工程 徐克东

23 陶 翀 201607030014 生物技术 徐克东

24 曹海婷 201607030050 生物技术 徐克东

25 杜怡静 201707010041 生物科学 徐克东

26 黄梦杰 201707010024 生物科学 徐克东

27 平亚旭 201707010038 生物科学 徐克东

28 陈舒悦 201807020043 生物工程 徐克东

29 习嘉欣 201807010036 生物科学 徐克东

30 李蕙彤 201807010002 生物科学 徐克东

31 王翠丽 201607030041 生物技术 徐克东

32 付朋旭 201607010077 生物科学 徐克东

33 姚梦祎 201607030036 生物技术 徐克东

34 孙康康 201607030010 生物技术 徐克东

35 张渴鑫 201707010067 生物科学 徐克东

36 樊征悦 201707020034 生物工程 徐克东

37 冯华林 201807010065 生物科学 徐克东

38 刘丹丹 201807010020 生物科学 徐克东

39 程梦佳 201607010087 生物科学 徐克东

40 刘书曼 201607030048 生物技术 徐克东

41 夏 玉 201707010070 生物科学 徐克东

42 张 谩 201707010037 生物科学 徐克东

43 朱慧林 201807010029 生物科学 徐克东

44 段子辉 201807020009 生物工程 徐克东

45 冯博瑾 201607010019 生物科学 徐克东

46 潘 阳 201607010080 生物科学 徐克东

47 张静文 201608130034 生物科学 徐克东

48 杨明洁 201707020046 生物工程 徐克东

49 薛雪芳 201707010025 生物科学 徐克东

50 闫新淼 201707010028 生物科学 徐克东

51 赵 苑 201707010022 生物科学 徐克东

52 王 莹 201807020001 生物工程 徐克东

53 王治英 201807030038 生物技术 徐克东

54 肖凯芝 201807050038 生物制药 齐静

55 倪天风 201807050064 生物制药 齐静

56 赵 珂 201807050022 生物制药 齐静

57 卢俊豪 201807030021 生物技术 齐静

58 王锦锦 201807020045 生物工程 齐静

59 柴 进 201507010096 生物科学 齐静

60 赵亚乐 201507010076 生物科学 齐静

61 陈书瑞 201507010069 生物科学 齐静

62 于 茜 201507030059 生物科学 齐静

63 魏婷婷 201507010058 生物科学 齐静

64 王 芬 201507030054 生物科学 齐静

65 张亚平 201507030014 生物科学 齐静

66 赵昕岚 201507010080 生物科学 齐静

67 陆晶宇 201507010084 生物科学 齐静

68 赵亚乐 201507010076 生物科学 齐静

69 王依泽 201707030020 生物技术 齐静

70 郭 鹏 201707050021 生物制药 齐静

71 谢秋贤 201707050029 生物制药 齐静

72 蔡曼婷 201707010083 生科 1 班 王健

73 包雨莹 201707010084 生科 1 班 王健

74 杨 歌 201707010060 生科 2 班 王健

75 孙家丽 201707030042 生技 1 班 王健

76 拜 欣 201707010077 生科 1 班 王健

77 祝晨琳 201707010082 生科 2 班 王健

78 胡荣根 201707030010 生技 1 班 王健

79 刘翠涵 201707030019 生技 1 班 王健

80 张伟丽 201707020011 生物工程 王健

81 吕乐娇 201707010071 生科 1 班 王健

82 黄燕飞 201707010030 生科 2 班 王健

83 张思馨 201507010001 生科 1 班 王健

84 胡小玉 201507020008 生物工程 王健

85 何梦慧 201607080014 食品质量与安全 王健

86 秦艾嘉 201607080029 食品质量与安全 王健

87 赵津津 201407020008 生物工程 于徳水

88 余宁树 201407020011 生物工程 于徳水

89 何 勇 201407020037 生物工程 于徳水

90 徐昌玲 201407020039 生物工程 于徳水

91 梁盼盼 201407020044 生物工程 于徳水

92 王雨露 201407070020 食品质量与安全 于徳水

93 陈 冉 201407070021 食品质量与安全 于徳水

94 郑炬瑞 201407070032 食品质量与安全 于徳水

95 晁颖慧 201507010074 生物科学 于徳水

96 冯 坤 201507020024 生物工程 于徳水

97 张庭丽 201507020048 生物工程 于徳水

98 段齐齐 201507020053 生物工程 于徳水

99 刘 霞 201507030002 生物技术 于徳水

100 石珍珠 201507030002 生物技术 于徳水

101 王秋月 201507030068 生物技术 于徳水

102 毛 洁 201507080006 食品质量与安全 于徳水

103 漆 欣 201507080044 食品质量与安全 于徳水

104 位张坤 201607020006 生物工程 于徳水

105 张 一 201607020033 生物工程 于徳水

106 万丹亚 201607020052 生物工程 于徳水

107 李志强 201607030003 生物技术 于徳水

108 张 璇 201607030020 生物技术 于徳水

109 韩晓萌 201607030037 生物技术 于徳水

110 付贝贝 201607030043 生物技术 于徳水

111 谢家星 201607080019 食品质量与安全 于徳水

112 张婧钰 201707010004 生物科学 于徳水

113 杨 璐 201707010039 生物科学 于徳水

114 金慧茹 201707010040 生物科学 于徳水

115 段克雷 201707010058 生物科学 于徳水

116 程明姣 201707020015 生物科学 于徳水

117 许艳霞 201707020045 生物工程 于徳水

118 阮王争 201707020047 生物工程 于徳水

119 闫春雪 201707030001 生物技术 于徳水

120 李颖珂 201707030034 生物技术 于徳水

121 孙 洁 201807020007 生物工程 于徳水

122 李雯静 201807020058 生物工程 于徳水

123 曾钰成 201807020061 生物工程 于徳水

124 李玉玺 201807030063 生物技术 于徳水

125 刘智慧 201607030015 生物技术 张怡

126 陈 果 201607030022 生物技术 张怡

127 周文洁 201607030017 生物技术 张怡

128 田 盼 201607020047 生物工程 张怡

129 董英慧 201607030035 生物技术 张怡

130 陈 安 201707010015 生物科学 张怡

131 王黛娜 201707010011 生物科学 张怡

132 彭春凤 201707010069 生物科学 张怡

133 韩真真 201707020012 生物工程 张怡

134 行孟洁 201707050014 生物制药 张怡

135 张亚真 201707020005 生物工程 张怡

136 薛雨晨 201807020038 生物工程 张怡

137 苗小倩 201807020039 生物工程 张怡

138 王松帅 201807010091 生物科学 张怡

139 李小雨 201807050050 生物制药 张怡

140 刘肖丽 201807030051 生物技术 张怡

141 李 淼 201807030045 生物技术 张怡

142 王忆凡 201807030050 生物技术 张怡

143 秦双营 201607030018 生物技术 李晓丽

144 杨玉杰 201607030025 生物技术 李晓丽

145 徐丽娟 201607030016 生物技术 李晓丽

146 韩皓梅 201707020009 生物工程 李晓丽

147 赵 娜 201707030038 生物技术 李晓丽

148 王颖慧 201707010043 生物科学 1 班 李晓丽

149 轩 宇 201704020016 生物科学 2 班 李晓丽

150 武慧华 201706060032 生物科学 2 班 李晓丽

151 刘 杨 201807020023 生物工程 李晓丽

152 张 毅 201807050052 生物制药 李晓丽

153 高瑞晗 201807050063 生物制药 李晓丽

154 林 莉 201807010005 生物科学 1 班 李晓丽

155 郑 彧 201807010038 生物科学 2 班 李晓丽

156 孙美艳 201807020024 生物科学 2 班 李晓丽

157 鲁婷婷 201807020048 生物科学 2 班 李晓丽

158 方春芳 201807030046 生物科学 2 班 李晓丽

159 冯荆城 ‘201607030054 级生物技术 唐跃辉

160 闫 浩 201607030007 生物技术 唐跃辉

161 娄慧敏 201607030034 生物技术 唐跃辉

162 林罗肖 201607030057 生物技术 唐跃辉

163 王阳阳 201607030029 生物技术 唐跃辉

164 冯友威 201607030040 生物技术 唐跃辉

165 职玉岭 201607030006 生物技术 唐跃辉

166 王 双 201607030055 生物技术 唐跃辉

167 张 梦 201607080020 食品质量与安全 唐跃辉

168 乔 蓉 201607080054 食品质量与安全 唐跃辉

169 梁 静 201607080059 食品质量与安全 唐跃辉

170 王文霞 201607010033 生物科学一班 唐跃辉

171 贺文龙 201707030009 生物技术 唐跃辉

172 刘伟浩 201707030036 生物技术 唐跃辉

173 王清伟 201707030044 生物技术 唐跃辉

174 谭 结 201707030047 生物技术 唐跃辉

175 梁梦瑜 201707030025 生物技术 唐跃辉

176 刘 燕 201707020042 生物工程 唐跃辉

177 张梦园 201707020024 生物工程 唐跃辉

178 阴旭辉 201707020016 生物工程 唐跃辉

179 杨梦霞 201707020048 生物工程 唐跃辉

180 邱雅慧 201707080056 食品质量与安全 唐跃辉

181 张伟萍 201707080057 食品质量与安全 唐跃辉

182 李 佳 201707080060 食品质量与安全 唐跃辉

183 曾丽琴 201707080058 食品质量与安全 唐跃辉

184 靳丽莎 201707050020 生物制药 唐跃辉

185 张 静 201707050052 生物制药 唐跃辉

186 贾凯程 201707010078 生物科学二班 唐跃辉

187 吴 倩 201707010033 生物科学一班 唐跃辉

188 荀春菲 201807030052 生物技术 唐跃辉

189 董艳阳 201807030041 生物技术 唐跃辉

190 管雅鑫 201807030001 生物技术 唐跃辉

191 裴恩情 201807030034 生物技术 唐跃辉

192 沈婧苗 201807030049 生物技术 唐跃辉

193 胡 梅 201807030058 生物技术 唐跃辉

194 解彦杰 201807030027 生物技术 唐跃辉

195 白楠楠 201807030028 生物技术 唐跃辉

196 霍 瑞 201807030043 生物技术 唐跃辉

197 周 荷 201807030039 生物技术 唐跃辉

198 李 珅 201807030057 生物技术 唐跃辉

199 廖晶晶 201807030008 生物技术 唐跃辉

200 张艺珍 201807030070 生物技术 唐跃辉

201 牛一如 201807030029 生物科学一班 唐跃辉

202 刘妙杨 201807030013 生物科学一班 唐跃辉

203 李 涵 201807030064 生物科学二班 唐跃辉

204 代佳西 201807030056 生物科学二班 唐跃辉

205 于欣荣 201807050025 生物制药 唐跃辉

206 戴蓉蓉 201807050069 生物制药 唐跃辉

转化医学平台

序号 姓名 学号 专业 指导

教师 参与项目名称

1 李 凤 201707010010 生物科学 刘晓萌

槲皮素激活棕色脂

肪的作用及机制 2 韩学阳 201707010031 生物科学 刘晓萌

3 宋铭慧 201707050006 生物制药 刘晓萌

4 段亚敏 201807010037 生物科学 刘晓萌

红酒多酚化合物的

分离与抗高脂血症

功能研究

5 刘 洋 201807030011 生物技术 刘晓萌

6 杨珂歆 201807020056 生物工程 刘晓萌

7 李普森 201807020047 生物工程 刘晓萌

8 王慧慧 201707050033 生物制药 张云霞 FHL3 调控 MyHC

9 李 姣 201807010071 生物科学 张云霞 2b 基因表达的分子

机制的研究

10 郭珍妮 201807050021 生物制药 张云霞

11 朱文帅 201707010055 生物科学 樊淑华 BALB/c 和

C57BL/6N 小鼠

MHCⅠ分子结合微

小隐孢子虫 CTL 表

位特性研究 12 高明慧 201807010092 生物科学 樊淑华

13 陈 西 201807010077 生物科学 黄丽 转录组研究土鳖抗

菌肽及其生物活性

测定转录组研究土

鳖抗菌肽及其生物

活性测定 14 张 淼 201807010018 生物科学 黄丽

15 童丙华 201807050019 生物制药 李国印 HER2/Sp1 信号通

路通过沉默

NEDD4L 促进

TGFβ 信号介导的

乳腺癌 EMT 16 董亚彬 201807020032 生物工程 李国印

17 杨若言 201807080031 生物科学 彭威风

基于肠道菌群探讨

黄连素调控小鼠肥

胖症的研究

18 梁欢欢 201807050010 生物制药 吴长景 海洋来源土曲霉

terremide 类生物碱

抗肥胖作用及机理

研究

19 逯佳佳 201807050003 生物制药 吴长景

20 孙露珍 201807050016 生物制药 吴长景

21 石玉霞 201707010057 生物科学 杨明生 基因形态和分子数

据的中国大豆食心

虫种群分化研究

22 宋 璐 201707010023 生物科学 杨明生

23 李俊豪 201807010022 生物科学 杨明生

其他平台部分学生

序号 学号 姓名 专业 指导

老师 项目名称

1 201507030043 上官春雨 生物技术 葛红莲

产嗜铁素恶臭假单胞菌的

分离鉴定及其对盐胁迫下

番茄生长的影响

2 201507020060 朱怡铃 生物技术 葛红莲 光合细菌的分离鉴定及其

促生特征的研究

3 201507020017 张晓一 生物工程 葛红莲 沼泽红假单胞菌产吲哚乙

酸条件的研究

4 201407020030 孟凡增 生物工程 葛红莲 沼泽红假单胞菌对盐胁迫

下番茄

5 201407020015 李文娟 生物工程 葛红莲 沼泽红假单胞菌 G12 产 5-

氨基乙酰丙酸条件的研究

6 201707010025 李明龙 生物科学 常云霞 IAA 对盐胁迫下小麦幼苗

渗透调节物质的影响

7

李 健 生物科学 常云霞 IBA 对盐胁迫下小麦幼苗

渗透调节物质的影响

8

王文霞 生物科学 常云霞 NAA 对盐胁迫下小麦幼苗

渗透调节物质的影响

9

王优优 生物科学 常云霞 2,4-D 对盐胁迫下小麦幼

苗渗透调节物质的影响

10

张宇莹 生物科学 常云霞 IAA 对盐胁迫下小麦幼苗

渗透调节物质的影响

11

朱英男 生物科学 常云霞 IBA 对盐胁迫下小麦幼苗

渗透调节物质的影响

12

王洪娟 生物科学 常云霞 NAA 对盐胁迫下小麦幼苗

渗透调节物质的影响

13

宋旭萌 生物科学 常云霞 2,4-D 对铅胁迫下小麦幼

苗渗透调节物质的影响

14 201407070063