1

MINISTERIO DE EDUCACIÓN Y CIENCIA INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACIÓN Y TECNOLOGÍA AGRARIA Y

ALIMENTARIA CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN SANIDAD ANIMAL

CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN SANIDAD ANIMAL

MEMORIA 2006 Directora Técnica: Dra. Marisa Arias Neira

Dirección: Carretera de Algete a El Casar

28130 VALDEOLMOS (MADRID)

Teléfono: + 34 91 620 23 00

Fax: + 34 620 22 47

Correo electrónico: losada@inia.es / arias@inia.es

2

PERSONAL DEL CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN SANIDAD ANIMAL

PERSONAL EN PLANTILLA

Arias Neira, Marisa Directora Técnica Bárcena del Riego, Juan Investigador A2 Brun Torres, Alejandro Investigador A2 Gómez Castilla, Jordi Investigador A2 Jiménez Clavero, Migel A. Investigador A2

Muñoz Reoyo, Mª Jesus Investigador A2 Real Soldevilla, Gustavo Investigador A2 Carballo Santaolalla, Matilde Investigados A3

Torres Trillo, Juan Mª Investigador A3 Blanco Lavilla, Esther Téc. Superior Especialista Borrego Rivero, Belén Tec. Superior Especialista Salguero Bodes, Fco. J. Téc. Superior Especialista Martínez García, Mercedes Jefe de Servicio Gest.

Pascual Alvarez, Gonzalo Jefe Servicio Mant.

Paredes Tomás, Antonio Jefe Administración Villa Díaz, Ana Téc. Esp. G. Medio Gómez Perochena, Elena Aux Tecn. Investig Llorente de Gracia, Francisco Ayudante de Investigación

Cuellar Cuellar, Mª Luisa Ayudante Técnico

González Guirado, Antonia Ayudante Tecnico

González Esguevillas, Mónica Ayudante Tecnico

Nuero García, Oscar Auxiliar Investigación Mateos Cordero, Francisco Auxiliar Investigación

Pérez Taboada, Nazaret Jefe Biblioteca Losada Carrasco, Magdalena Jefe de Negociado

Algaba Alvarez, Julia Aux. Oficina P3 González Sáez, Juan carlos Oficial Inv y lab.

Benavente Pintor, Angela Ayud. Mantenimiento

Gómez Gómez, Concepción Ayud. Mantenimiento

Sánchez Lobo, Iria, Ayud. Mantenimiento Viva Alvarez, Fco. José Ayud. Mantenimiento Viva Barroso, Emilio Ayud. Mantenimiento

PERSONAL CONTRATADO

Alejo Herberg, Alí Ramón y Cajal Mena Piñeiro, Ignacio Ramón y Cajal Ortego Alonso, Javier Ramón y Cajal Ruiz Argüello, Begoña Ramón y Cajal Martín del Burgo, Mª Angeles Tec. Sup. Investigación García Casado, Mª Ana Tec. Sup. Investigación Fernández Pacheco, Paloma Téc. Sup. Investigación Gallardo Frontaura, Mª del Carmen

Téc. Sup. Investigación

Fernández Pinero, Jovita Téc. Sup. Investigación Belliere, Nina Titulado Superior Espinosa Martín, Juan Carlos Titulado Superior Sánchez Martín, Miguel Angel Titulado Superior Sánchez Ramírez, Victor Manuel Titulado Superior Yuste Parra, María Titulado Superior Aguayo Araujo, Sonia Titulado Superior Benito, Alberto de Titulado Superior Cano Benito, Mª Jesús Titulado Superior Chamorro Pérez, Sonia Titulado Superior Esperón Fajardo, Fernando Titulado Superior Llorente Herranz, Alicia Titulado Superior Martín Pérez, José Hilario Titulado Superior Tafalla Piñeiro, Carolina Titulado Superior Vázquez Ruiz, Belén Titulado Superior Lorenzo Alguacil, Gema Titulado Superior Gómez Casado, Eduardo Titulado Superior Martín González, Sergio Titulado Superior. Madueño Amor, Encarnación Tecnico Superior Martín lluch, Mercedes Técnico Superior Estévez Fernández, Rodolfo Técnico Superior Sánchez-Arévalo Almena, Ana Téc. Grado Medio Esquinas Muñoz, M· Angeles Téc. Grado Medio Gutierrez Rivas, Monica Juan de la Cierva Soler Ramos, Alejandro Técnico Laboratorio Simón Delgado, Alicia Técnico Laboratorio González Torres, Lucía Técnico Laboratorio Cabrera Cantón, Raquel Técnico Laboratorio Espinosa Serrano, Sara Técnico Laboratorio Martín Martín, Elena Técnico Laboratorio Medina Ramos, Alejandra Técnico Laboratorio Neves Martín, Elena Técnico Laboratorio Nieto Martínez, Raquel Técnico Laboratorio Pérez Gómez, Covadonga Técnico Laboratorio Relaño Gines, Aroa Técnico Laboratorio Robles Suárez, Ana Mª Técnico Laboratorio

3

Becarios Iglesias Martín, Irene Becaria INIA Sotelo Girón, Elena Becaria INIA Rodríguez Pulido, Miguel R. Becario INIA Almanza Reyes, Horario Becario MEXICO Cámara Pelliso, Susana Becario MCYT Cubillos Zapata, Carolina Becario MCYT Díaz Sansegundo, Fayna Becario INIA Díaz Toledano, Rosa María Becario MCYT García Maceira, Patricia Becario INIA Padilla de Beer, Danielle Becario INIA Martín Folgar, Raquel Becario INIA Alamillo Gordo, Elia Becaria INIA

NOTA: SE ENTIENDE PERSONAL QUE HAYA ESTADO EN ALGÚN MOMENTO ENTRE 1-1-2006 Y EL 31-12-2006

4

OBJETIVOS DEL CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN SANIDAD ANIMAL

El Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA-INIA) está situado en Valdeolmos, a 40 km de Madrid, ubicado en una finca de 34 hectáreas, con acceso controlado y restringido. Está dotado de una instalación de “Alta Seguridad Biológica", diseñada, construida y equipada para trabajar con enfermedades infecciosas exóticas y de alto riesgo para la Sanidad Animal. En él se desarrollan diferentes actividades de investigación y desarrollo tecnológico, formación científico-técnica, y de cooperación internacional. El Centro, se inauguró el 3 de Febrero de 1993. El CISA es “Gran Instalación Científica española” desde 1995.

INSTALACIÓN DE ALTA SEGURIDAD BIOLÓGICA .: La zona de alta seguridad biológica de 10.824 m2, posee unas características arquitectónicas y funcionales reconocidas internacionalmente para la consecución de la bioseguridad. La hermeticidad del edificio se consigue gracias a su estructura de hormigón armado, sellado de sus juntas externas, aire acondicionado con diferentes niveles de presiones negativas, filtración del aire a través de filtros HEPA, descontaminación de efluentes e incineración de residuos. En el interior, todas las superficies se encuentran revestidas de resinas especiales, que les proporciona aislamiento y protección. Todas las conducciones que atraviesan las paredes, suelos y techos están selladas de forma independiente. La comunicación con el exterior se realiza a través de sistemas de descontaminación de doble puerta air-locks, autoclaves de barrera y sistemas de barrera de descontaminación superficial.

Esta Instalación, con nivel de seguridad biológica 3 y 3+ , dispone de 26 Laboratorios y 14 salas comunes de nivel 3, y 2 Laboratorios de nivel de contención 3+ habilitados para trabajar y almacenar agentes infecciosos animales que eventualmente pudieran afectar al ser humano, de acceso restringido con puerta neumática y equipado con ducha convencional y química. Los trabajos realizados en los laboratorios de nivel 3+ se realizan utilizando equipos de protección individualizada, homologados, para trabajar con zoonosis. En determinadas situaciones es posible emplear trajes especiales con respiración autónoma, que aseguran el aislamiento y seguridad del personal. La instalación dispone de un Animalario constituido por 21 estancias individuales y polivalentes de nivel 3 y 3+, diseñadas para albergar distintas especies animales, desde peces hasta ganado mayor, con medidas de bioseguridad que garantizan el trabajo in vivo incluso con patógenos transmisibles por aerosol. Sus características y el rigor en el manejo, cuidado y la ética animal, lo ha hecho merecedor, desde mediados de los 90´s de la nominación de Laboratorio de Referencia para el International Council for Laboratory Animal Science, ICLAS.

El CISA coopera con el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación como laboratorio Nacional de Referencia para algunas enfermedades de la antigua Lista A de la Oficina Internacional de Epizootías (OIE). Gracias a la labor desarrollada desde su creación en investigación y desarrollo y en la lucha contra las enfermedades de mayor impacto económico y sanitario, es Laboratorio Mundial de Referencia de la OIE para la Peste porcina africana y Peste equina africana, y Laboratorio

5

colaborador de la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO) en varias enfermedades de gran impacto económico como Peste porcina clásica y Fiebre aftosa. Desde 2002 es Laboratorio Comunitario de Referencia de Peste porcina africana. El CISA está internacionalmente reconocido como Instalación de Alta Seguridad, participando en asesorías a otros países a través de FAO y de TIAEX, Comisión Europea. Está reconocido como Laboratorio Internacional de Referencia de la FAO en materia de Bioseguridad.

6

GRUPOS DE INVESTIGACIÓN Epidemiología y Sanidad Ambiental Enfermedades Emergentes y Transfronterizas Zoonosis. Fiebre del Valle del Rift. Influenza Animal. Pestivirus Biología Molecular de Pestivirus Generación de Vectores Virales Vacunales. Estrategias Vacunales Frente A Virus Animales Estrategias Vacunales.Calicivirus. Vacunas de Fiebre Aftosa Basadas En Acidos Nucleicos Modulación del Sistema Inmune por Virus Respuesta Inmune de Fiebre Aftosa Respuesta Inmune de Peces. Biología Molecular y Celular de Priones

7

EPIDEMIOLOGÍA Y SANIDAD AMBIENTAL

Componentes Aguayo Balsas, Sonia Titulado superior. Cabrera Cantón, Raquel Técnico de laboratorio Cámara Pellisso, Susana Becaria CICYT Carballo Santaolalla, Matilde Investigador A2 Esperón Fajardo, Fernando Titulado superior Iglesias Martín, Irene Becaria INIA Neves Martín, Elena Técnico de laboratorio Martínez Avilés, Marta Titulado superior Muñoz Reoyo, Mª Jesús Investigador principal Torre Reoyo, Ana de la Investigador A2 Vázquez, Ruiz Belén Titulado superior

Correo electrónico: reoyo@inia.es (de contacto del grupo) OBJETIVOS

1. Detección y aislamiento de virus en cetáceos varados en el archipiélago Canario e

implicaciones sanitarias.

2. Estudio de elementos traza y contaminantes persistentes en tejidos de los Zifios varados en el archipiélago Canario.

3. Valoración de efectos (estrogénicos e inmunotoxicos) de contaminantes ambientales y sus mezclas, mediante ensayos “in vitro” e “in vivo”.

4. Análisis de Riesgo de entrada y difusión de la Gripe Aviar en España. 5. Diagnóstico de procesos sanitario-ambientales en piscifactorías y explotaciones

ganaderas. 6. Valoración del impacto medioambiental de medicamentos veterinarios para su registro y

autorización. 7. Determinación de la prevalencia de los agentes infecto-contagiosos más frecuentes en

las poblaciones de gaviota de audouin y de gaviota patiamarilla de la R.N.C de Islas Chafarinas.

8. Estudio de especies sinantrópicas como reservorios y portadores de enfermedades zoonóticas y de interés ganadero.

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Detección y aislamiento de virus en cetáceos varados en el archipiélago Canario e implicaciones sanitarias:

Desarrollo y puesta a punto de técnicas de diagnóstico molecular y cultivos celulares para la detección y aislamiento de los virus más frecuentes en tejidos de cetáceos, compatibles con las lesiones descritas.

Desarrollo y puesta a punto de PCRs “universales” para la detección de nuevos virus en cetáceos (enfermedades emergentes).

Establecer las relaciones moleculares de los productos amplificados con otras secuencias de virus similares publicados previamente (epidemiología molecular).

8

• Estudio de elementos traza y contaminantes persistentes en tejidos de los Zifios

varados en el archipiélago Canario: Determinación de la bioacumulación de compuestos organoclorados y bromados en

muestras del banco de tejidos de zifios del Archipiélago Canario. Valoración toxicológica.

Relación entre contaminantes y lesiones detectadas.

• Valoración de efectos (estrogénicos e inmunotoxicos) de contaminantes ambientales y sus mezclas, mediante ensayos “in vitro” e “in vivo”:

Valoración del potencial estrogénico y androgénico de los contaminantes presentes en tejidos de cetáceos, y sus mezclas, utilizando el ensayo in vitro de levadura recombinante y el modelo in vivo del pez Medaka.

Valoración de los efectos inmunotóxico de metales pesados y compuestos organoclorados en linfocitos y células mononucleares de delfín mular..

• Análisis de Riesgo de entrada y difusión de la Gripe Aviar en España:

Identificación de Peligro de la Gripe Aviar basada en las características del virus y de la enfermedad.

Análisis histórico-temporal de la situación geográfica mundial de la enfermedad y el avance de los brotes H5N1 GAAP.

Análisis y evaluación de las características y evolución del sector productivo avícola en nuestro país.

Recogida, tratamiento, análisis y evaluación de los datos existentes sobre los parámetros de riesgo considerados en el Análisis de Riesgo.

Desarrollo de un modelo epidemiológico de Análisis de Riesgo de la entrada de la Gripe Aviar en España por aves silvestres.

• Diagnóstico de procesos sanitario-ambientales en piscifactorías y explotaciones

ganaderas: Diagnóstico de procesos de mortalidad en una piscifactoría de salmónidos.

Determinación del agente causal y su origen.

• Valoración del impacto medioambiental de medicamentos veterinarios para su registro y autorización:

Realización y/o revisión de estudios de Valoración del impacto medioambiental de medicamentos veterinarios según los protocolos establecidos por la AEMPS.

Modelización del comportamiento ambiental y/o de ecotoxicidad utilizando softwares reconocidos.

Valoración experimental in vivo y/o in vitro de los efectos de medicamentos veterinarios: ensayos ecotoxicológicos en organismos de agua y suelo recomendados por las guías de evaluación de la AEMPS.

Estudios de seguimiento ambiental de medicamentos veterinarios. Repercusiones ambientales a medio, largo plazo.

• Determinación de la prevalencia de los agentes infecto-contagiosos más frecuentes en

las poblaciones de gaviota de audouin y de gaviota patiamarilla de las Islas Chafarinas: Establecer un protocolo de trabajo basado en el reconocimiento “in situ” de las

poblaciones y sus hábitats dentro del R.N.C. Estudiar la viabilidad del protocolo de captura, recogida y procesamiento de muestras y fundamentalmente el muestreo de

9

las dos poblaciones de gaviotas en sus épocas reproductoras con la menor intervención.

1. Selección de métodos (desarrollo y puesta a punto) para la detección de bacterias (Salmonella spp y Chlamydophila), virus (Newcastle e Influenza aviar), hongos (Aspergillus sp) y parásitos (parásitos intestinales) en muestras de sangre, exudados y heces de gaviotas según procedimiento anterior.

2. Determinación de la prevalencia de los agentes infecto-contagiosos más frecuentes en las poblaciones de gaviota de audouin y de gaviota patiamarilla de las Islas Chafarinas.

• Estudio de especies sinantrópicas como reservorios y portadores de enfermedades

zoonóticas y de interés ganadero: Puesta a punto de protocolos de toma de muestras no invasivas en especies de

pequeño tamaño para la determinación de agentes infecciosos. Adaptación y puesta a punto de técnicas moleculares para la detección de agentes

infecciosos con potencial zoonótico en fauna sinantrópica de Madrid. Estudio de prevalencia de los principales agentes zoonóticos en las especies

sinantrópicas de los parques y jardines de Madrid. Valoración sanitario-ambiental de los resultados obtenidos.

PROYECTOS Código y título: AGL 2005-07947/Gan. Valoración del estado sanitario de la familia Ziphiidae en el Archipiélago Canario. INIA, ULPGC, UCM. Entidad financiadora: CICYT Duración: 2005-2008 Investigador responsable: Fernández Rodríguez, A. Código y título: RTA2006-00168-00-00. Valoración del potencial toxicológico de residuos de contaminantes acumulados en tejidos de mamíferos marinos. INIA, ULPGC, CSIC. Entidad financiadora: INIA Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Carballo Santaolalla, M. Código y título: RTA2006-00167-C02-01. Desarrollo de nuevos métodos para la vigilancia y control de la gripe aviar en España. INIA, UCM. Proyecto coordinado. Entidad financiadora: INIA Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Arias Neira, ML y Muñoz Reoyo, MJ. CONVENIOS

Código y título: OT01-002. Desarrollo de metodologías para diagnóstico de peste porcina africana, diagnóstico de enfermedades exóticas y actuaciones ante emergencias sanitarias. Entidad financiadora: MAPA Duración: 2006-2007 Investigador responsable: Arias Neira, ML. CONTRATOS Código y título: Nº16060010. Estudio sanitario-ambiental de las gaviotas de Audouin (Larus audouinii) y patiamarilla (L. michahellis) en el R.N.C. Islas Chafarinas: agentes infecciosos (fase inicial):2006-2007.

10

Entidad financiadora: PPNN-MIMAN Duración: 2006-2007 Investigador responsable: Zapata Salgado, J y Muñoz Reoyo, MJ. Código y título: Nº 131/05/20637-P (MM/JP). Estudio y valoración del estado sanitario de la fauna de parques y jardines públicos. (En colaboración con UCM). Entidad financiadora: Soluciones para el Medio Ambiente Duración: 2006-2007 Investigador responsable: Sánchez-Vizcaíno, JM y Muñoz Reoyo, MJ. Principales resultados: RTA2006-00167-C02-01. Desarrollo de nuevos métodos para la vigilancia y control de la gripe aviar en España. Se ha desarrollado un modelo epidemiológico probabilístico sobre de Análisis de Riesgo de la entrada de la GA en España por aves silvestres. Para ello se han georeferenciado y analizado, mediante el programa de análisis espacial ArcGis 9.1 y el programa estadístico SPSS 14.0, los datos sobre los parámetros considerados en el análisis de riesgo: movimientos de aves silvestres invernantes en España (registros de anillamientos de la Oficina Española de Migraciones), humedales, temperaturas, brotes, stopovers (lugares de parada durante migraciones) y vida media de las especies consideradas. El riesgo de introducción fue estimado como una distribución probabilística binomial utilizando los programas EXCEL (Microsoft Corp.) y @RISK 4.0 (Palisade Corp), que permite incorporar simulaciones Monte Carlo para evaluar simultáneamente diferentes distribuciones probabilísticas. Esto ha permitido elaborar un mapa temático de riesgo de entrada de GA en España que incorpora los datos de producción avícola extensiva en el país, de forma que nos indica el nivel de riesgo existente en cada provincia española y su incidencia en el sector avícola. OT01-002. Desarrollo de metodologías para diagnóstico de peste porcina africana, diagnóstico de enfermedades exóticas y actuaciones ante emergencias sanitarias.

En relación al objetivo Análisis de Riesgo de entrada y difusión de la Gripe Aviar (GA) en España: Se ha realizado: (1) una “serie” dinámica-temporal de mapas epidemiológicos que muestran la situación geográfica mundial de la enfermedad y el avance de los brotes en doméstico y silvestre desde finales de octubre del 2005 hasta la actualidad, (2) una identificación del peligro sobre GA basada en las características del virus, su patogenia y transmisión y, las características de la enfermedad y, (3) un análisis del sector avícola en España. Además, (4) se ha colaborado a través del Scientific Panel Member-EFSA (Dr. JM Sánchez-Vizcaíno) en la discusión de los documentos: Scientific Statement y Scientific Opinion on “Migratory birds and their possible role in the spread of highly pathogenic avian influenza” de EFSA.

En relación al objetivo Análisis de Riesgo de entrada de la Fiebre Aftosa (FA) en España: Se ha realizado, en colaboración con el Dpto. de Sanidad Animal de la Facultad de Veterinaria de la UCM, un análisis cuantitativo del riesgo de entrada de la FA en España, analizando las siguientes vías de entrada: Importaciones, operación paso del estrecho, viento, fomites, material ilegal, escape biológico y bioterrorismo. Se ha desarrollado un modelo probabilístico de riesgo para el cálculo y análisis de probabilidades, empleando el software @RISK 4.0 que nos ha permitido definir y ajustar distribuciones a nuestros datos de origen y realizar una simulación final, empleando los métodos Monte Carlo y Latin

11

Hypercube. Además, se ha realizado una estimación económica de los costes directos e indirectos que puede suponer para España la entrada de esta enfermedad.

Determinación de las patologías y causas de la muerte de cetáceos varados: Se han puesto a punto PCRs “universales” para la detección de nuevos herpesvirus y morbilivirus, adaptándose al estudio en tejidos de cetáceos. Se ha observado una prevalencia de morbilivirus de 4/19 y se han descrito 2 nuevas secuencias de herpesvirus en delfines mulares.

Puntos críticos sanitarios y ambientales en explotaciones ganaderas: Se han identificado los grupos de antibióticos más habituales y más relevantes desde el punto de vista medioambiental, para realizar un estudio de su comportamiento ambiental y ecotoxicidad. Se han identificado los principales problemas y soluciones existentes en el evaluación medioambiental con fines de su registro y comercialización.

AGL 2005-07947/Gan. Valoración del estado sanitario de la familia Ziphiidae.

Se ha abordado el estudio de contaminantes tóxicos, persistentes y con capacidad de bioacumulación y biomagnificación por cadena trófica, en dos especies de zifios. Este grupo de cetáceos odontocetos oceánicos raramente varan en las costas por lo que no existe mucha información sobre ellos. A partir del análisis de muestras procedentes del banco de tejidos de mamíferos marinos de la Facultad de Veterinaria de la ULPGC, se ha establecido el nivel de bioacumulación en grasa hipodérmica de compuestos clorados y bromados y se ha realizado su valoración toxicológica. RTA2006-00168-00-00. Valoración toxicológica en mamíferos marinos.

Se ha desarrollar un ensayo in vitro que permite evaluar el potencial inmunotoxicológico de contaminantes ambientales en células del sistema inmune de cetáceos. El ensayo de blastogénesis linfoide de delfín mular se ha desarrollado a partir de células obtenidas de sangre periférica de estos delfines. Se ha realizado la valoración inmunotóxicologica de cinco metales pesados en este ensayo, estimándose las correspondientes NOEC y LOEC para cuatro parámetros de expresión de efecto.

Nº16060010. Estudio sanitario-ambiental de las gaviotas de Audouin y patiamarilla.

Se ha realizado un estudio de viabilidad del protocolo de captura, recogida y procesamiento de muestras representativas de gaviota de audouin y de gaviota patiamarilla en sus épocas reproductoras en el R.N.C. de Islas Chafarinas. Comprende: (1) selección de la zona de muestreo; (2) establecimiento del calendario de muestreo en cada especie; (3) condiciones de muestreo; (4) establecimiento y adaptación de los protocolos de trabajo en campo, y (5) establecimiento y adaptación de los protocolos de trabajo en laboratorio necesarios para el estudio de detección de los agentes etiológicos.

Nº 131/05/20637-P (MM/JP). Estado sanitario de fauna de parques y jardines (zona 5).

Se han puesto a punto protocolos específicos de muestreo no invasivo en palomas para la determinación de 6 enfermedades bacterianas y víricas y, de pruebas generales para determinar su estado sanitario (hematología y bioquímica sanguínea). Se ha detectado Salmonella spp. (PCR) en hisopos cloacales de 62 palomas domésticas con una prevalencia del 4,8% y; Haemoproteus columbae en frotis sanguíneos con una prevalencia del 100%.

12

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI Muñoz, M.J; Peris, S; Sanchez-Vizcaíno, J.M. 2006. Can High Pathogenic Avian Influenza arrive to the Iberian Peninsula from Asia by means of migratory birds?. Spanish Journal of Agricultural Research 4(2):140-145.

Martínez, M; Muñoz, M.J; de la Torre, A; Martínez, B; Iglesias, I; Sánchez-Vizcaíno, J.M. 2006. Risk assessment applied to Spain’s prevention strategy against highly pathogenic avian influenza virus H5N1. Avian diseases, 50 (en prensa). Otros artículos Martínez-López, B; de la Torre, A; Sánchez-Vizcaíno, J.M., 2006. Risk assessment model of FMD introduction into Spain. Libro de Abstract XI International Symposium on Veterinary Epidemiology and Economics. 6-11 Agosto. Cairns, Australia.

Cámara, S; Esperón, F; de la Torre, A; Carballo, M; Aguayo, S; Muñoz, MJ; Sánchez-Vizcaíno, JM. 2006. Inmunotoxicidad en cetáceos. Parte I: metales pesados. Revista Canaria de las Ciencias Veterinarias, 3:26-40.

Cámara, S; Esperón, F; Carballo, M; de la Torre, A; Aguayo, S; Muñoz, MJ; Sánchez-Vizcaíno, JM. 2006. Inmunotoxicidad en cetáceos. Parte II: contaminantes orgánicos persistentes. Revista Canaria de las Ciencias Veterinarias, 3:41-68. Libros y capítulos de libros Martínez-López, B; de la Torre, A; Sánchez-Vizcaíno, J.M (Eds.), 2006. Análisis probabilístico del riesgo de introducción de la fiebre aftosa en España. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación-ENESA. ISBN 84-690-0186-8.

De la Torre A; Carballo M; Muñoz MJ., 2006. Evaluación medioambiental. Evaluación ecotoxicológica. Repercusión ambiental. En: Toxicología Ambiental. Seguridad Química. E. De la Peña & E. Gomez. Eds. Asociación Española de Toxicología. Madrid. CD-ROM. ISBN: 84-609-4429-8. Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas Martínez-López, B; de la Torre, A; Sánchez-Vizcaíno, J.M., 2006. Risk assessment model of FMD introduction into Spain. Poster. International Veterinary Vaccines and Diagnostics Conference. 25-29 Junio. Oslo, Noruega.

Martínez-López, B; de la Torre, A; Sánchez-Vizcaíno, J.M., 2006. Risk assessment model of FMD introduction into Spain. Comunicación oral. XI International Symposium on Veterinary Epidemiology and Economics. 6-11 Agosto. Cairns, Australia.

Martínez, M; Martinez, B; Muñoz, M.J; Sánchez-Vizacíno, J.M. 2006. Spain´s prevention strategy against notifiable avian influenza. 6th International Symposium on Avian Influenza. 24 Abril. Cambridge.

Martínez, M; Sánchez-Vizcaíno, J.M; Iglesias, I; de la Torre, A; Martínez, B; Muñoz, M.J. 2006. The role of wild birds in the risk assessment of avian influenza in Spain. 7th International Congress of Veterinary Virology. 24-27 September. Lisbon

Cámara, S; Muñoz, M.J; Carballo, M; Sánchez-Vizcaino, J.M. 2006. Adaptation of a non-radioactive assay to determine the proliferation of lymphocytes of Bottlenose Dolphins and

13

Beluga Whale that permits other immunological analyses. 7th International Congress of Veterinary Virology. 24-27 September. Lisbon

Cámara, S. Evaluación inmunológica de contaminantes ambientales marinos utilizando el ensayo de blastogénesis de linfocitos. Tutores: J.M. Sánchez-Vizcaíno y M.J. Muñoz. Comunicación oral. Congreso de Estudiantes. 24 de abril de 2006. UCM Madrid. Premio a la mejor comunicación científica.

Martínez, B. 2006. Análisis cuantitativo del riesgo de entrada de la Fiebre Aftosa en España. Tutores: J.M. Sánchez-Vizcaíno y A. de la Torre. Congreso de Ciencias Veterinarias y Biomédicas. 26 Abril. Madrid.

Martínez, M. 2006. Aplicaciones del análisis de riesgo y de la educación continua al Plan de Contingencia de Gripe Aviar altamente patógena. Tutores: J.M. Sánchez-Vizcaíno y M.J. Muñoz. Comunicación oral. Congreso de Estudiantes. 24 de abril. Madrid.

OTRAS ACTIVIDADES

PRESENTACIONES A CONVOCATORIAS Presentación de la Colaboración en WP.7 Risk Assessment. Joint Research Program de de la Red Epizone, Network of Excellence for Epizootic Disease Diagnosis and Control (EPIZONE).

Presentación de Solicitud de ayuda del Programa CONSOLIDER-INGENIO 2010 CONVOCATORIA 2007: Etiología, epidemiología y control de las enfermedades bacterianas. (EEPICOBA). Proyecto coordinado: Colaboran 19 grupos de investigación. Duración: 5 años. Lidera: Prof. Lucas Domínguez. UCM. Presentado en Enero 2006. En evaluación.

Presentación del Proyecto: Valoración de Fertibiomerc como abono orgánico compuesto y como regenerador de suelos degradados y/o contaminados. PET 2006-0155-00 Proyecto coordinado: CISA-INIA, UCM, ETSIA. Proyectos de Investigación para la transferencia de los resultados de investigación (Proyectos PETRI). MEC. Financiación solicitada: 298.821 € IP: Dra. Ana de la Torre Presentado el 31 de marzo de 2006-10-16. En evaluación. Presentación del Proyecto: Estudio y valoración del estado sanitario de la fauna de parques y jardines del Ayuntamiento de Logroño. Proyecto no coordinado. Entidades que colaboran: CISA-INIA y Equipamientos medioambientales. Ayuntamiento de Logroño IP: Dr. Fernando Esperón. Presentado: Agosto de 2006.

Presentación del Proyecto: Desarrollo de un modelo epidemiológico para Centros de Recuperación de aves. FAU 2006-00009-00-00. Proyecto no coordinado. Entidades que colaboran: CISA-INIA y UCM. Programa Nacional de Recursos y Tecnologías Agroalimentarias. Acción movilizadora de interacción sanitaria entre fauna silvestre y ganadería extensiva. MEC-INIA.

14

Financiación solicitada: 62.131 E IP: Dra. Mª Jesús Muñoz Presentado el 21 de agosto de 2006.

Presentación del Proyecto: Evaluación epidemiológica de las principales enfermedades transmisibles de las aves acuáticas. Análisis de Riesgo y Enfermedades víricas. Proyecto Coordinado: CISA-INIA y UCM MMA- Organismo Autónomo Parques Nacionales. Financiación solicitada para CISA-INIA: 31.625 € IP: Dra. Mª Jesús Muñoz Presentado: Abril 2006. Valorado positivamente sin financiación: Octubre de 2006.

ESTANCIAS Mancha, F.B. Estancia de 100 horas. Asignatura de estancias. F. Veterinaria. UCM. Tutora:

M. J. Muñoz.

INFORMES TÉCNICOS Informe sobre las causas de la mortalidad de salmónidos ocurrida en la Piscifactoría del Río Xestosa (Lugo). Solicitado por: Sociedad Marcultura S.A. 04/2006.

Informe sobre las causas de la mortalidad de salmónidos ocurrida en la Piscifactoría de Marcultura S.A. en Octubre de 2.006. Solicitado por: VISAVET-UCM. 11/2006.

Estudio sanitario-ambiental de las gaviotas de Audouin (Larus audouinii) y patiamarilla (Larus michahellis) en el RNC Islas Chafarinas. Fase inicial: Establecer un protocolo de trabajo. Solicitado por: P.P.N.N.. MIMAN. 11/2006.

CURSOS

Coordinación:

Carballo, M. Coordinación del XV Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas Animales. Organizado por: CISA-INIA. 3-30/11//2006.

Muñoz, MJ. Coordinación módulo: “Ensayos de evaluación de la ecotoxicidad”. Máster Internacional “Experto Universitario en Toxicología”. Organizado por: U. Sevilla, Área de Toxicología. 01-10/2006.

Participación: Curso de doctorado: Bioseguridad integral. Dpto. Sanidad Animal. F.Veterinaria. UCM. 6/03/2006:

Muñoz, MJ. Problemática ambiental de los residuos ganaderos.

De la Torre, A. Puntos críticos sanitario-ambientales en explotaciones ganaderas.

Curso de doctorado: Química del medio ambiente y toxicopatología veterinaria. Sanidad en Cetáceos. Facultad de Veterinaria. ULPGC. 03/2006:

Cámara, S. Exposición a largo plazo a contaminantes: Inmunotoxicidad. Carballo, M. Exposición a largo plazo a contaminantes: Disrupción endocrina y

carcinogénesis. Carballo, M; Esperón, F. Residuos de contaminantes en tejidos de cetáceos de las

Islas Canarias. Esperón, F. Varamiento, necropsia y patología de cetáceos varados en Canarias:

virus.

15

Muñoz, MJ. Valoración de los focos emisores de contaminación ambiental que afectan a la salud de los cetáceos en las Islas Canarias.

Muñoz, MJ. Puntos críticos en la Sanidad Ambiental. Problemas sanitarios-ambientales. Especial atención a la actividad agropecuaria en las Islas Canarias.

Curso de doctorado: Edafología y Medio ambiente. Aguayo, A; de la Torre, A. Claves para la correcta gestión ambiental de explotaciones ganaderas. Un caso práctico. Facultad de Biología. UCM. 03/2006.

XV Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas Animales. CISA-INIA. 11/2006:

Carballo, M. Sanidad Ambiental en las explotaciones ganaderas. Principales problemas

De la Torre, A. Evaluación del impacto ambiental de explotaciones ganaderas. Aguayo, S. Valoración ambiental de medicamentos veterinarios. Muñoz, MJ. Aves migratorias y transmisión del virus de IA. Martínez, M. Simulacro de Gripe Aviar. Vázquez, B. El diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Organización de un

servicio de diagnóstico.

Curso Nacional “Técnicas de diagnóstico de laboratorio de sanidad animal. Gestión práctica de la calidad en un laboratorio de análisis” (2ª edición): Vázquez, B. Hemoaglutinación viral y su inhibición. Seroneutralización. Laboratorio Regional de Sanidad Animal. León, 23-26/10/2006.

Curso Nacional “Farmaforum 2006: El reto de la gripe aviar y las amenazas biológicas”. Muñoz, MJ. El papel de las aves silvestres en la difusión de la gripe aviar. F. Farmacia. U. Miguel de Unamuno. 14/12/2006.

Curso Nacional sobre Gripe aviar. Martínez, M. Simulacro sobre gripe aviar. Subdirección General de Sanidad Animal. 11/2006. Colaboración: MAPA-UCM-CISA.

Jornadas Nacionales sobre Cría en Cautividad y Reintroducción de Especies Silvestres y Amenazadas. Esperón, F. Control sanitario de especies en peligro de extinción. VEDEMA. Torre Guil, Murcia. 9-12/11/2006.

CURSOS RECIBIDOS Iglesias, I. Curso para formadores en materia de bioseguridad en explotaciones avícolas. Madrid, 14/03/2006. 8 horas.

Cabrera, R. Jornadas técnicas sobre bioseguridad. Telstar Industrial. Madrid, 03/2006. 10 horas.

Iglesias, I. V Jornadas de Epidemiología y Medicina Preventiva Veterinaria. Madrid, 27-28/04/2006. 8 horas.

Cabrera, R. Contaminación química. Impacto de las sustancias químicas sobre el medio ambiente y la salud humana. Aula permanente de ciencias de la salud. Mojácar, 05/2006. 40 horas.

Cabrera, R; Neves, E. Prevención de riesgos laborales en laboratorio. Grupo TRAGSA. Madrid, 05/2006. 10 horas.

Cabrera, R; Neves, E. Control de incendios. Organizado por CEDAF. Madrid, 06/2006. 5 horas.

16

Martínez, M. Internacional course in predictive modelling of epidemia diseases in the real world with interspread plus. Organizado por SAFOSO (Safe Food Solutions Inc). Suiza, 19-22/06/2006. 25 horas.

Iglesias, I. Curso sobre Sistemas de Información Geográfica: ARC/GIS. Organizado por la Escuela Complutense de Verano. Madrid, 3 -28/07/2006. 100 horas.

Iglesias, I; Martínez, M. Curso sobre Gripe aviar: La emergencia de un virus posiblemente pandémico. Organizado por la Universidad Internacional Menéndez Pelayo. Moncada (Valencia), 20-21/10/2006. 30 horas.

OTROS De la Torre, A; Muñoz, MJ. Colaboradores honoríficos del departamento de Sanidad Animal de la Facultad de Veterinaria de la UCM. 10/2003-09/2006.

De la Torre, A. Presidencia del Subcomité Técnico de Normalización de Métodos de Ensayo. AEN/CTN 77. Medioambiente y suelos. 2006.

De la Torre, A. Coordinación de la Sección de Toxicología Ambiental de la Asociación Española de Toxicología. 2001-2006.

17

GRUPO DE DESARROLLO Y CONTROL DE ENFERMEDADES EMERGENTES Y TRANSFRONTERIZAS.

Componentes

Aguilar Ana, Jefe de Sección Arias Neira, Marisa, Dirección Técnica Belliere Nina Blanco Lavilla, Esther Borrego, Belén Brun Torres, Alejandro Cuellar, Carlos Espinosa, Sara Estévez Rodolfo Fernández Pacheco, Paloma, Jefe de Unidad Fernández Pinero, Jovita , Jefe de Unidad Gallardo Frontaura, Carmina, Jefe de Unidad García Casado, María Ana Gómez, Concepción González Mónica Iglesias Hidalgo, Javier Jiménez-Clavero, Miguel Ángel, J.Servicio Coordinación Llorente Francisco Llorente, Alicia Lorenzo, Gema Martín Folgar, Raquel Martín Martín, Elena Mateos Francisco Nieto Martínez, Raquel Pelayo, Virginia Pérez Gómez, Covadonga Robles Suárez, Ana Salguero Bodes, Javier, Jefe de Sección Sánchez Martín, Miguel Ángel Sánchez-Arévalo Almena, Ana Simón, Alicia Soler, Alejandro Sotelo Girón, Elena Yuste Parra, Maria

Correo electrónico: arias@inia.es

- Laboratorios de Referencia de Peste Porcina Africana: gallardo@inia.es - Laboratorio de Referencia (OIE) de Peste Equina Africana: pacheco@inia.es - Laboratorio Nacional de Referencia de Enfermedad Vesicular Porcina y

Estomatitis Vesicular: blanco@inia.es; pacheco@inia.es; - Laboratorio Nacional de Referencia de Enfermedad Peste Porcina clásica, Lengua

Azul: pacheco@inia.es - Laboratorio Nacional de Referencia de Fiebre del Valle del Rift.: brun@inia.es - Unidad de Apoyo Cultivos y Ac. Monoclonales.: borrego@inia.es

18

OBJETIVOS 1. Actividades de investigación y desarrollo tecnológico, formación científico-técnica y de

cooperación internacional para el diagnóstico y control de enfermedades transfronterizas, emergentes y de interés económico y sanitario. Especial atención a enfermedades de la antigua lista A de la OIE, y las que suponen un mayor riesgo de introducirse o extenderse en el territorio nacional.

2. Actuaciones como Laboratorio de Referencia Nacional, Comunitario (UE) y Mundial para OIE de distintas enfermedades de la antigua Lista A.

3. Participación en Programas de la Red de Vigilancia Epidemiológica y Sanitaria del Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación (MAPA).

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Desarrollo de nuevas metodologías diagnósticas y estrategias de control y erradicación de enfermedades infecciosas de los animales de interés para el MAPA y el Ministerio de Defensa.

• Profundizar en el conocimiento de las enfermedades infecciosas animales mencionadas: caracterización clínica, patogenicidad, su patología y patogenia; y de los patógenos que las producen (su caracterización inmunológica y molecular).

• Actividades científicas y técnicas como Laboratorio Mundial de Referencia de Peste Porcina Africana para la Oficina Internacional de Epizootías (OIE), - WRL-PPA-.

• Actividades científicas y técnicas como Laboratorio Mundial de Referencia de Peste Equina Africana. para la Oficina Internacional de Epizootías (OIE), - WRL-PEA-.

• Actividades científicas y técnicas como Laboratorio Comunitario de Referencia (UE) de Peste Porcina Africana (CRL-PPA).

• Actividades de apoyo cientifico-técnico e investigación como Laboratorio Nacional de Referencia (NRL) de Peste porcina Africana, Enfermedad Vesicular porcina, Peste Porcina Clásica y Lengua Azul, Estomatitis Vesicular y Fiebre del Valle del Rift.

PROYECTOS

Código y título: OT 01-002. Desarrollo de metodologías para diagnóstico de la Peste Porcina Africana, diagnóstico de enfermedades exóticas y actuaciones ante emergencias sanitarias. Entidad financiadora: INIA Duración: 2001-2007 Coordinador: M. Arias Investigadores principales: R. Nieto, C.Gallardo; J. Fernández; R.Nieto; P. Fernandez Pacheco; E.Blanco; Reoyo,MJ; A. De la Torre, J.Salguero; G. Del Real; B. Borrego; M.Carballo; MA Jiménez, Código y título: RTA2006-00167-C02-01. Desarrollo de nuevos métodos para la vigilancia y control de la gripe aviar en España. INIA, UCM. Proyecto coordinado. Entidad financiadora: INIA Duración: 2006-2008 Coordinadores: MJ. Muñoz y M.Arias

19

Investigadores principales: J.Fernández, M.Yuste; M.A. Jiménez-Clavero. Código y título: SSPE-CT2004-513645. New and emerging technologies: improved laboratory and on-site detection of OIE List A viruses in animals and animal products. LAB-ON-SITE. Entidad financiadora: UE. Duración: 2004-2008. En colaboración científica desde 2005. Coordinador: Sandor Belák. Investigadores principales: J. Fernández; M.Arias. Código y título: SSPE-CT2006-044211- Improved Vaccines for Bluetongue Disease. BTVAC Entidad financiadora: UE Duración: 2006-2010 Coordinador: Marisa Arias. Investigadores principales: P.Fernández-Pacheco; J.Salguero, J.Férnández., R.Nieto; MA Jiménez. CONVENIOS

Código y título: Memorando de entendimiento entre el INIA y el ILRI - International Livestock Research Institute- del CGIAR (Nairobi, Kenya) para el desarrollo de nuevos ensayos de diagnóstico y control epidemiológico de patógenos víricos del ganado en África Sub-Sahariana. Entidad financiadora: CGIAR,Consultive Group for internacional Animal Research Duración: 2004-2006 Coordinador: Marisa Arias. Investigadores principales: E. Blanco; A.Brun; C. Gallardo; Código y título: Convenio entre el INIA y la Facultad de Veterinaria de la Universidad Complutense de Madrid, para la realización de prácticas Entidad financiadora: INIA Duración: 2004-2008 Coordinador: M. Arias. Participantes: Investigadores CISA CONTRATOS Código y título: UE-LR PPA/03. Laboratorio Comunitario de Referencia de Peste Porcina Africana Entidad financiadora: UE. Duración: 2003-2007 Coordinador: M. Arias Investigadores principales: C. Gallardo; R.Nieto; J. Fernández; J.Salguero. Código y título: Contrato con el Parque Tecnológico de la Marañosa para la Asistencia técnica en diagnóstico de patógenos de interés Entidad financiadora: Parque Tecnológico de la Marañosa, MD. Duración: 2006-2007 Coordinador: M. Arias Investigadores principales: A. Brun; J. Fernández; G.Lorenzo; MA Jiménez. Código y título: Programa de Acceso a Instalaciones Singulares. Entidad financiadota: INIA, MEC Coordinador: M.Arias. Investigadores participantes.: Personal investigador, Jefes de Proyectos y Jefes de Equipo del CISA.

20

REDES DE EXCELENCIA Código y título: CT2006-016236-FOOD. Network of Excellence for Epizootic Diseases, Diagnosis and Control –EPIZONE- ” Entidad financiadora: UE. Duración:2006-2011 Entidades participantes: 18 Instituciones de la UE. Coordinador general: Piet van Rijn. Miembro del Coordinating Forum.: M.Arias Investigadores participantes : Investigadores y Jefes de Equipo del grupo, otros investigadores del CISA y de INIA. Código y título: CSD00C-06-02320. CONSOLIDER. Porcivir. Investigación en enfermedades viricas porcinas Entidad financiadora: MEC Duración: 2006- 2011 Investigador responsable: Mariano Domingo Coordinador en INIA.: A. Brun Código y título: Red de Laboratorios de Alerta Biológica (RELAB). Entidad financiadora: INIA, MEC Coordinador: Instituto de Salud Carlos III. Asesores.: Presidencia de Gobierno, Ministerio de Defensa. Coordinación en INIA: M.Arias. Investigadores participantes.: A.Brun, J. Fernández, MA Jiménez, P.Fernández-Pacheco. PRINCIPALES RESULTADOS:

A. Desarrollo de nuevas metodologías para el diagnóstico de enfermedades infecciosas y/o exóticas de alto riesgo para España:

Peste Porcina Africana (PPA) .:

• Desarrollo y validación de Técnicas de ELISAs.y otros de métodos de diagnóstico serológico basados en el uso de las proteínas recombinantes. Puesta a punto de técnicas moleculares de Real-Time y validación de técnicas moleculares con aislados procedentes de países del Este de África y Cerdeña. Estudios de epidemiología molecular del VPPA, de cepas de los últimos brotes declarados en Cerdeña y Kenya. Estudios de análisis filogenéticos de aislados del VPPA procedentes de Uganda, Kenya y Cerdeña. Caracterización clínica y patológica de aislados africanos de PPA.

• Desarrollo y mantenimiento de una base de datos de secuencias del VPPA, disponible en la direccion http://webainia.inia.es/cisa/asfv/index.asp

• Diseño, Construcción y Mantenimiento de una página web de Peste Porcina Africana disponible en la dirección www.asf-referencelab.info/

Peste Equina Africana (PEA): Desarrollo de nuevos métodos de detección molecular del virus de la Peste Equina Africana (VPEA) para su empleo en diagnóstico. Se han desarrollado i) una RT-PCR convencional, ii) una RT-PCR a tiempo real empleando Sybr Green y iii) una RT-PCR a tiempo real empleando una sonda Taqman.

Enfermedad Vesicular Porcina (EVP): Desarrollo de un nuevo ensayo de ELISA, formato de competición, para realizar el diagnóstico serológico de EVP.

21

Peste Porcina Clasica (PPC): Estudios de caracterización clínica, patogenicidad, patología, patogenia y de resp. inmune frente a la infección con VPPC España 2001.

Lengua Azul (LA): Participación en el desarrollo de un nuevo método de diagnóstico diferencial para el virus de la Lengua Azul mediante RT--PCR.

West Nile Virus (WNV): Obtención de diferentes aislados y sueros de referencia del West Nile (WNV); desarrollo y puesta a punto de sistemas de detección molecular de distintos linajes de WNV.

Fiebre del Valle del Rift (RVF).: puesta a punto de un método para la detección en tiempo real del virus de RVF mediante sondas Taqman. Otros estudios de interés para el MAPA.: i) Investigación epidemiológica y estudios de evaluación sanitaria en explotaciones porcinas. ii) Estudios in vitro e in vivo de caracterización de enterovirus porcinos,Teschovirus ,en explotaciones.

B. Otras Actividades como Laboratorio de Referencia Nacional, Comunitario y7o Mundial: - Investigación epidemiológica; análisis diagnósticos, alertas, análisis de importación y

exportación, confirmación diagnóstica, caracterización molecular de aislados.

- Asesoría técnica y Asistencia a Laboratorios de las CC.AA en enfermedades para las cuales el CISA es Laboratorio Nacional de Referencia. Asistencia técnica a laboratorios de la UE; y a distintos países a nivel mundial en materia de investigación diagnóstica de PPA.

- Armonización y estandarización de metodologías de diagnóstico. Evaluación continuada y control de calidad de reactivos biológicos y técnicas diagnosticas. Validación de Kits comerciales.

- Organización de Ensayos Interlaboratoriales-ring tests- :

• EUCRL-OIEWRL–PPA: Organización del IV Ensayo colaborativo interlaboratorial como Laboratorio Comunitario de Referencia de PPA para la armonización de técnicas diagnósticas serológicas y virológicas. Preparación de un panel de reactivos de PPA y envío a los laboratorios Nacionales de referencia de distintos países: Austria, Bélgica, Chipre, Dinamarca, Finlandia, Francia (2), Alemania, Grecia, Hungría, Irlanda, Italia (2), Latvia, Lituania, Holanda, Noruega, Polonia, Rumania, Eslovaquia, Eslovenia, UK, Suiza, Senegal y EEUU. • NRL-PPC.: Organización del Ensayo colaborativo interlaboratorial como Centro Nacional de Referencia de PPC para la armonización de técnicas diagnósticas serológicas. Preparación de un panel de sueros y envío de reactivos de PPC a los laboratorios regionales participantes. Álava, Albacete, Algete, Badajoz, Barcelona, Burgos, Cáceres, Ciudad Real, Colmenar Viejo, Córdoba, Cuenca, Gerona, Gijón, Guipúzcoa, La Pobla de Segur, León, Lérida (2), Logroño, Lugo, Murcia, Navarra, Palma de Mallorca, Reus, Santander, Segovia, Soria, Talavera de la Reina, Tenerife, Tortosa, Valencia, Valladolid, VIC, Vizcaya, Zafra, Zamora y Zaragoza. • Participación en el Ensayo Colaborativo Interlaboratorial Comunitario de PPC. Coordinado por el Lab.Comunitario de Referencia (Hannover, Germany).

- Estudios de experimentación “in vivo” con aislados de Peste Porcina Africana, Peste Porcina Clásica y Enfermedad Vesicular para caracterización clínica, patogenicidad, patología, patogenia y de respuesta inmune frente a la infección. y/o para

22

la producción de reactivos biológicos y controles de referencia y material para los “ring test” de los laboratorios de referencia mencionados.

- Programas de Vigilancia epidemiológica.: Producción, y distribución de reactivos de diagnóstico a las CC.AA, para los programas Nacionales de vigilancia epidemiológica de PPA y EVP del Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación– antígenos y reactivos biológicos y kits, para distintas técnicas de diagnóstico serológico . Existen informes anuales de esta actividad detallados de los Informes correspondientes de Laboratorios de Referencia.

- Asistencia a Laboratorios de otros paises: Producción, y distribución de reactivos de diagnóstico , protocolos y procedimientos de Peste Porcina Africana a Francia, Italia , Rumanía, Benin, Ghana, Togo; y de Peste Equina Africana a Argentina, China, Kuwait, India. Más detalles en informes anuales a la OIE, y EU.

- Patología Experimental.: Actividades de experimentación “in vivo” para la reproducción de enfermedades, caracterización clínica, estudios de patogenicidad de cepas y estudios de respuesta inmune frente a la infección de patógenos de declaración obligatoria y de otros de interés económico y sanitario para España y UE.

C. Actividades de Apoyo a Los Laboratorios de Referencia y de Investigación del CISA.: Creación y Mantenimiento de una Unidad Centralizada de Cultivos celulares y Anticuerpos Monoclonales.: Mantenimiento de líneas celulares, hibridomas, y producción de anticuerpos monoclonales (Ac.Mon).2006.: Apoyo específico en Ac.Mon. a las líneas de Calicivirus y Fiebre del Valle del Rift

D. Programa de Acceso a Instalaciones Singulares.: 9 estancias – 1-2 meses de duración- de predoctorales e investigadores, de otras Instituciones Nacionales ( CreSA, Fac. Vet. Un. Córdoba, CNB, CSIC) realizando proyectos de I+D.

PUBLICACIONES

Revistas SCI

Gallardo,C; E. Blanco, JM.Rodriguez. A.L.Carrascosa and J.M. Sánchez-Vizcaíno. “Antigenic properties and diagnostic potential of African swine fever virus protein pp62 expressed in insect cells” . Journal of Clinical Microbiology, Mar. 2006, p. 950–956

Gómez-villamandos, J.C.; I. García de Leaniz, A. Núñez, F.J. Salguero, J.L. Romero-Trevejo, P.J. Sánchez-cordón. Neuropathological study of experimental Classical Swine Fever. Veterinary pathology 43/530-540/2006

Nix RJ, C. Gallardo, Hutchings G, Blanco E, Dixon LK. “Molecular epidemiology of African swine fever virus studied by analysis of four variable genome regions”. Arch Virol. 2006 Jul 3.

Fernández, J.; Agüero, M.; Romero, L.; Sánchez, C.; Belák, S.; Arias, M.; Sánchez-Vizcaíno, J.M. (2006). “Rapid and differential diagnosis of Foot-and-Mouth Disease, Swine Vesicular Disease and Vesicular Stomatitis by a new multiplex RT-PCR assay, analysing clinical samples.” Veterinary Research, ( en prensa).

Pérez-Filgueira, D. M; F. González-Camacho, C. Gallardo, P. Resino, E. Blanco, E.Gómez-Casado, C. Alonso and J. M. Escribano. “Optimization and validation of recombinant

23

serological tests for African swine fever diagnosis based on the p30 protein produced in Trichoplusia ni “ Journal of Clinical Microbiology, 2006 Sep; 44(9):3114-21.

Jiménez-Clavero, M.A., Agüero, M, San Miguel, E., Mayoral, T, López, M.C.,Ruano, M.J., Romero, E, Monaco, F., Polci, A, Savini, G., Gómez-Tejedor, C. High throughput detection of bluetongue virus by real-time fluorogenic reverse transcription-polymerase chain reaction: Application in clinical samples from current Mediterranean outbreaks . Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 18:6-16 (2006) Jiménez-Clavero, M.A. Agüero, M., Rojo, G.,Gómez-Tejedor, C. A new fluorogenic real-time RT-PCR assay for detection of lineage 1 and lineage 2 West Nile viruses. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 18:459-462 (2006) Otros artículos Sánchez, A , Agüero, M., Jiménez-Clavero, M.A., Gómez-Tejedor, C. Influenza Aviar: diagnóstico de laboratorio.Monografía XXI : Influenza aviar y gripe humana de origen aviario, pp.77-103. B. Sanz Pérez (Ed.). Editorial: Real Academia Nacional de Farmacia-Instituto de España. (2006). Figuerola, J., Soriguer, R., Jiménez-Clavero, M.A.,Tenorio, A., Ruiz, S. Enfermedades infecciosas emergentes: ¿una nueva amenaza para la conservación de la biodiversidad? La Garcilla 127: 12-17. (2006).

Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas

• Arias, M.; Gallardo,C; “Report of the general activities of CISA as Reference Laboratory for African swine fever (ASF), WRL and CRL. Annual Meeting of National African Swine fever Laboratories. Bruselas. 15- 17 de mayo, 2006.

• Arias, M.; Gallardo,C; Presentación del “Annual meeting of African Swine fever Laboratories-NRLs..: Informe, resultados conclusiones y recomendaciones Bruselas, 17 Mayo, 2006”. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Fernández-Pacheco, P; J.Fernández, Arias, M. Presentación del “Annual meeting of Classical swine fever Laboratories-NRLs..: Informe, resultados conclusiones y recomendaciones Bruselas, 15-16 Mayo, 2006”. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006

• Fernández, J. Desarrollos de métodos de detección molecular por PCR individual y múltiple para el diagnóstico de enfermedades víricas de declaración obligatoria que cursan con síntomas hemorrágicos (PPA y PPC) y enfermedades vesiculares (F.Aftosa, EVP, EV). Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Fernández, J; Gallardo, C; Sánchez-Arévalo, A; Arias, M. Presentation of the Community Reference Laboratory for African Swine Fever web page. Annual Meeting of National Swine Fever Laboratories. Bruselas, Bélgica, 15-17 mayo 2006.

• Fernández, J; Fernández-Pacheco, P; Rodríguez, B; Robles, A; Arias, M; Sánchez-Vizcaíno, J.M. Development of a rapid TaqMan real-time RT–PCR assay for the detection of African Horse Sickness Virus (AHSV). 7th International Congress of Veterinary Virology. Lisboa, Portugal, 24-27 septiembre 2006.

24

• Fernández, J; Fernández-Pacheco, P; Rodríguez, B; Robles, A; Arias, M; Sánchez-Vizcaíno, J.M. Development of a conventional and a rapid real-time RT–PCR assays for the detection of African Horse Sickness Virus (AHSV). 4th International Veterinary Vaccines and Diagnostics Conference. Oslo, Noruega, 25-29 junio 2006.

• Fernández, J; Gallardo, C; Sánchez-Arévalo, A; Arias, M. Presentation of the Community Reference Laboratory for African Swine Fever web page. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Fernández-Pacheco, P; Gallardo, C; Fernández,J.; Arias, M. “Actividades y Actuaciones del CISA como Laboratorio de Referencia”. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Fernández-Pacheco, P; Fernández, J. Arias, M.Informe de actividad del Annual Meeting for Classical Swine Fever Laboratorios, 2006” Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Gallardo C., Llorente A., Blanco E. “Diagnosis and epidemiology of African Swine fever in East African countries.” Ministry of Agriculture, Animal Industry & Fisheries. Entebbe, Uganda. Enero 2006.

• Gallardo, C.; R. Martin, R.Ademun, N. Nantima, R.Bishop and E. Blanco. “Molecular characterisation of African swine fever virus (ASFV) isolates recovered from samples collected in Uganda during 2003 reported outbreaks”. Póster. 7th International Congress of Veterinary Virology. Lisboa. 24-27 septiembre, 2006.

• Gallardo, C.; E. Blanco, A.L.Reis, R.M.E Parkhouse, A Leitão.”Validation of 4 recombinant African Swine Fever Virus proteins providing reproducible targets for serodiagnosis” Póster. 7th International Congress of Veterinary Virology. Lisboa. 24-27 septiembre, 2006.

• Gallardo, C., Arias, M. “Report of activities of the EU Reference Laboratory for African swine fever (ASF): Evaluation of Commercial kits”. Annual Meeting of National African Swine fever Laboratories. Bruselas. 17 de mayo, 2006

• Gallardo, C. Arias, M." Evaluación del Kit Comercial Ingezim PPA K3 para la detección de anticuerpos de Peste Porcina Africana”. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Gallardo, C.;"Resultados del Test Comparativo Interlaboratorial de Peste Porcina Africana”. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Gallardo, C.; “Nuevos desarrollos en el diagnóstico serológico de la Peste Porcina Africana”. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Gallardo, C., Salguero Francisco J, Martín Raquel, Ademun Rose, Nantima Noely, Blanco Esther. “Pathological and molecular characterization of ASF isolate Uganda 2003.” Annual Meeting of National African Swine fever Laboratories. Bruselas. 17 de mayo, 2006.

25

• Iglesias, J; Fernández-Pacheco, P; Blanco, E. "Resultados del Test Comparativo Interlaboratorial de Enfermedad Vesicular Porcina”. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Jimenez-Clavero, MA; Presentación del “Annual meeting of Swine Vesicular Disease Laboratories- NRLs..: Informe, resultados conclusiones y recomendaciones”. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Jimenez-Clavero, MA; Consideraciones al diagnóstico serológico de EVP. Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de PPC, PPA y EVP de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006.

• Llorente, A; .C. Gallardo, R. Bishop, E. Blanco “Detection isolation and molecular characterization of African Swine Fever Virus from ticks collected in Kenya, Uganda and Tanzania” Poster. 7th International Congress of Veterinary Virology. : Lisboa.24-27 septiembre 2006.

• Perez, E; .J.Arguilaget, C.Gallardo, J.Salguero, M.Perez-Filgueira, J.Pujols, M. Nofrarias, E. Blanco, JM Escribano, N.Fernandez-Borges, F.Rodríguez. “Development of new DNA vaccine strategies against African Swine Fever Virus”. Comunicación. 7th International Congress of Veterinary Virology. Lisboa. 24-27 septiembre, 2006.

• Perez-Filgueira, M.; F. González-Camacho, C. Gallardo, P. Resino, E. Blanco, E. Gómez-Casado, C. Alonso and J. M. Escribano. “Optimization and validation of recombinant serological tests for African swine fever diagnosis based on the p30 protein produced in Trichoplusia ni larvae”. Póster. 7th International Congress of Veterinary Virology. Lisboa.24-27 septiembre, 2006.

• Pérez-Martín, E; .J. Arguilaget, M. Pérez-Filgueira, C. Gallarrdo, J. Pujols, M. Nofrarias, I. Díaz, N. Fernández-Borges, F.J. Salguero, E. Blanco, J.M. Escribano, F. Rodríguez. Development of new DNA vaccine strategies against African swine fever virus. 7th International Congress of Veterinary Virology. Lisboa, Portugal, 2006.

• Ristoski, T; .M. Knezevic, L. Carrasco, F.J. Salguero, A. Núñez, J. Tosevski. Immunohistochemical detection and distribution of the viral gp55 antigen in pigs naturally infected with classical swine fever virus. 24th Meeting of the European Society of Veterinary Pathology. Edinburgh, Scotland. 2006

• Rodríguez, B; Fernández, J; Arias, M; Sánchez-Vizcaíno, JM. Detection of African Horse Sickness Virus serotype 4 by quantitative RT-PCR. 7th International Congress of Veterinary Virology. Lisboa, Portugal, 24-27 septiembre 2006.

• Rodríguez, B; Fernández, J; Arias, M; Sánchez-Vizcaíno, JM. Differential diagnostic of Bluetongue Virus serotype 4 by RT-PCR. 7th International Congress of Veterinary Virology. Lisboa, Portugal, 24-27 septiembre 2006.

• Salguero, F.J; . P. Fernández-Pacheco, J. Fernández, M.A. Sánchez-Martín, V. Sánchez, M. Fernández de Marco, M. Arias. Experimental inoculation with Classical swine fever virus (isolate Spain 1/2001) in pigs: a clinical pathological and laboratory diagnostic study. 24th Meeting of the European Society of Veterinary Pathology. Edinburgh, Scotland. 2006

26

OTRAS ACTIVIDADES

1. Organización de Cursos Internacionales. : 1.1 Organización del "XV Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas". Centro de Investigación en Sanidad Animal, CISA-INIA. Valdeolmos. Financia: AECI-INIA. Noviembre de 2006, 120 horas lectivas. Con la colaboración especial de las Facultades de Veterinaria de la UCM, Madrid, y de Córdoba. Este año se contó con la participación de profesionales de Chile, Costa Rica, Argentina, Venezuela, Paraguay, Colombia, Brasil, Bolivia, Perú, España. Como profesores participaron 25 ponentes de conferencias , 19 de ellos provenientes de las Facultades de Veterinaria de Madrid, UCM, Zaragoza, Córdoba, León, CreSA, UAB, MAPA, AGEMED, MSyC, Empresas del Sector, Centro de Referencia de Gripe,- Hospital clínico Universitario de Valladolid, etc. Así como 12 investigadores y técnicos de Laboratorio como personal docente en la impartición de conferencias y/o prácticas de laboratorio. Directora del Curso: M.Arias; Coordinación:Carballo, M. 3-30 noviembre 2006.

1.2 Organización del International Workshop on African Swine Fever Diagnosis. Centro de Investigación en Sanidad Animal, CISA-INIA, Valdeolmos. 11-15 Diciembre 2006. Participación de Jefes de Equipo y técnicos de los Laboratorios de Referencia. Países participantes: Eslovenia, Estonia, Rumanía, Kenya .

1.3 Coordinación y realización del curso “African Swine Fever Serodiagnostic Techniques: ELISA and Immunoblotting Tests” . Conducido por : C.Gallardo. Nairobi (Kenya), 5 al 9 de septiembre 2006. Para formación y transferencia de tecnología al personal de los servicios veterinarios de Nairobi (Kenya) dentro del marco de colaboración internacional entre el CISA-INIA y el ILRI (International Livestock Research Institute).

2. Organización de Reuniones Nacionales.: Reunión de Laboratorios de Sanidad Animal de Peste Porcina Clásica, Peste Porcina Africana y Enfermedad Vesicular Porcina de las Comunidades Autónomas. CISA Valdeolmos (Madrid). 22 junio 2006. Con la participación de CC.AA; Laboratorio Nacional de Referencia, CISA-INIA, MEC; Laboratorio central de Algete, LCV, MAPA; Subdirección General de Sanidad Animal, SGSA, MAPA.

3. Transferencia de tecnología :

i) INIA-ILRI.: de técnicas de diagnóstico serológico y molecular de PPA a laboratorios de países del Este de África, Uganda y Kenya. Estancia de C.Gallardo en la Facultad de Veterinaria de Makerere (Kampala, Uganda) para transferencia tecnológica a los responsables del diagnostico en los servicios veterinarios ugandeses de Kampala, Dra.Rose Ademun y Dra.Noelina Nantima.

ii) de técnicas de diagnóstico serológico y molecular de la Peste porcina Africana, Peste Equina Africana y Peste porcina Clásica a laboratorios e Instituciones de distintos paises Iberoamericanos a través del "XIV Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas" (CISA, 3-30 Noviembre 2006) y del Workshop on ASF diagnosis (CISA, 11-15 Diciembre 2006). realizado en el CISA-INIA para países miembros de la unión Europea y países asociados dentro del marco de actividades del CISA cómo Laboratorio de Referencia de la UE y Mundial de Referencia de PPA.

iii) Formación de expertos y asistencia técnica en el diagnóstico y control de la Peste Porcina Africana. Julio 2006. Apoyo técnico para la realización de un Training de

27

formación científico-técnica “Molecular Epidemiology on African Swine Fever” celebrado en el CISA-INIA dentro del marco de colaboración del CISA-INIA con el Istituto Sperimentale dell´Umbria e delle Marche (Perugia-Italia).

4. Informes Cientifico-Técnicos.:

Informe Anual de Actividad del Laboratorio de Referencia Mundial de Peste Porcina Africana. Organismo.: Oficina Internacional de Epizootías- OIE Informe Anual de Actividad del Laboratorio de Referencia Mundial de Peste Equina Africana. Organismo.: Oficina Internacional de Epizootías- OIE Report of the Assesement of the Ingezim PPA K3 Commertial Kit for AASF antibody detection ”. Instituciones: Laboratorios Nacionales de Referencia (NRL) de países miembros de la UE y SANCO, UE. “Report of the Annual Meeting 2006 of National African Swine Fever Laboratories”. Instituciones: Laboratorios Nacionales de Referencia de países miembros de la UE y SANCO, UE. Informe Anual de Actividad del Laboratorio de Referencia Comunitario de Peste Porcina Africana. Organismo.: SANCO, UE. Informe de Resultados del Ensayo colaborativo Interlaboratorial de Peste Porcina Africana, 2006. Instituciones.: Laboratorios de Sanidad Animal de las CC.AA y SGSA, MAPA. Informe de Resultados del Ensayo colaborativo Interlaboratorial de Enfermedad Vesicular Porcina, 2006. Instituciones.: Laboratorios de Sanidad Animal de las CC.AA y SGSA, MAPA.

- Informe Anual de Actividad para los Laboratorios Nacionales de Referencia de Peste Porcina Africana, Enfermedad Vesicular Porcina, Peste Porcina Clásica. Institución.: Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación.

- Informe Cientifico-Técnico de estudios sanitarios en explotaciones porcinas. Institución.: Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación.

- Informe Anual de actividad como Laboratorio de Referencia del Internacional Council for Laboratory Animal Science ICLAS, . Organismo.: ICLAS.

- Informe Anual del Programa de Acceso a Instalaciones Singulares,. Institución: Ministerio de Educación y Ciencia.

5. Otros Cursos, Jornadas, Conferencias - Cursos de Doctorado: Bioseguridad integral. Dpto. Sanidad Animal. F.Veterinaria.

UCM. Arias, M. marzo 2006: - Asignatura genérica de libre elección. Actuación en crisis de bioseguridad y

defensa. .: F.Veterinaria, UCM, Madrid : ponente M.Arias, Noviembre, 2006. - Tutorias.: J. Fernández: Tutora externa de la asignatura “Estancias” para 200 horas

de prácticas a alumnos de 2º ciclo de la Licenciatura en Veterinaria, UCM, Madrid; - Tutorías de Becarios: Elena Sotelo, sobre Nuevos desarrollos en Diagnóstico de West

Nile Virus. Tutores: M.Arias, y J.Fernández..

28

ZOONOSIS. FIEBRE DEL VALLE DEL RIFT

Componentes Brun Torres, Alejandro, investigador principal. Martín Folgar, Raquel Lorenzo Alguacil, Gema Correo electrónico: brun@inia.es OBJETIVOS

1. El objetivo general del grupo es la generación de conocimiento frente al virus de la Fiebre del Valle del Rift, para su aplicación en diagnóstico y en el diseño de nuevas vacunas más eficaces frente a la enfermedad empleando modelos murinos y/o pequeños rumiantes. Asimismo, se pretende profundizar en la patogenia de la infección, utilizando un modelos de ratónes transgénicos susceptible a la infección por cepas atenuadas del virus. Para ello se persiguen los siguientes objetivos específicos:

- Desarrollo de métodos para el diagnóstico serológico basados en la generación de antígenos recombinantes y anticuerpos monoclonales específicos frente a las proteínas estructurales del virus.

- Desarrollo de técnicas moleculares de detección basadas en la aplicación de PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR)

- Estudio de la respuesta inmunológica inducida por vacunas DNA en modelos murinos y ovino.

- Estudio de la patogenia del virus y de la interacción virus–célula en modelos de ratones transgénicos susceptibles (IFNAR-/-).

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Desarrollo de métodos para el diagnóstico de la Fiebre del Valle del Rift . • Estudios de inmunidad y desarrollos vacunales frente a la FVR • Estudios de patogenia viral e interacción virus-célula

PROYECTOS

Código y título: RTA05-00017: Estudios de patogenia inmunidad y control del virus de la Fiebre del Valle de Rift. Entidad financiadora: INIA Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Alejandro Brun Torres Código y título: CSD00C-06-02320. CONSOLIDER. Porcivir. Investigación en enfermedades viricas porcinas Entidad financiadora: MEC Duración: 2006- 2011 Investigador responsable: Mariano Domingo Coordinador en INIA.: A. Brun

29

REDES EUROPEAS DE EXCELENCIA. Código y título: CT2006-016236-FOOD. Network of excellence in epizootics EPIZONE Entidad financiadota: Unión europea. Duración:2006-2011 Investigador responsible: Piet van Rijn Coordinador de Workpackage “Vaccine technologies”.: A. Brun CONVENIOS Código y título: ILRI-03-001. A collaborative project between ILRI and CISA Entidad financiadora: INIA Duración: 2004-2007 Coordinador: Marisa Arias-Richard L. Bishop Investigadores Principales: A.Brun, C.Gallardo, E.Blanco Código y título: Convenio de colaboración CISA. University of Oxford Duración: 2005-2008 Investigador responsable: Alejandro Brun-Sarah Gilbert Código y título: NBQ20060321B. Asistencia técnica a Ministerio de Defensa-FNLM Entidad financiadora: Ministerio de Defensa Duración: 2006 Investigador responsable: Marisa Arias- Carmen Ybarra Principales resultados: Se han expresado las proteínas G1, G2 y N en sistemas de expresión bacteriana y fusionadas a GST para su posterior purificación mediante columnas de afinidad a glutatión. La antigenicidad de las proteínas expresadas mediante este sistema se comprobó mediante su detección por sueros procedentes de ovejas experimentalmente inoculadas con el VFVR Se han generado sueros policlonales frente al virus y se ha analizado su especificidad frente a las proteínas estructurales virales y su capacidad neutralizante de la infección in vitro. Asimismo se ha analizado su capacidad para capturar virus procedente de cultivos celulares infectados en fase sólida y su aplicación en un ensayo ELISA de captura. Este ensayo es capaz de detectar anticuerpos específicos frente al virus en sueros de ovejas experimentalmente infectadas con el RVFV.

Se han generado una serie de anticuerpos monoclonales específicos de la nucleoproteína N del virus. Se han obtenido anticuerpos capaces de reconocer tanto el virus como epítopos lineales de la misma. La capacidad de estos anticuerpos monoclonales para el diagnóstico serológico está siendo evaluada mediante la puesta a punto de ensayos de competición.

Tanto la secuencia codificante de la poliproteína precursora de las glicoproteínas del VFVR (NsmG1/G2) como la nucleoproteína (N) viral se han expresado en células eucariotas bajo control del promotores de citomegalovirus (CMV/ie). La capacidad inmunogénica de dichas construcciones genéticas se ha evaluado tanto en ratones Balb/c y en ovejas de raza castellana mediante el análisis de la respuesta humoral y celular inducida. Tanto en ratones como en ovejas la construcción pCMV-NP fue capaz de inducir una potente respuesta de anticuerpos específicos capaz de reconocer la nucleoproteína viral. Sin embargo la construcción NsmG2/G1 no indujo una respuesta de anticuerpos detectable. Para mejorar la respuesta se ha generado una nueva construcción sin la región preglicoproteina Nsm

30

(G2/G1) comprobándose que la expresión en líneas celulares BHK es más eficiente. La capacidad inmunogénica de esta nueva construcción se está evaluando en eel modelo murino..

En combinación con el grupo de la Dra. Sarah Gilbert (University of Oxford, Wellcome Trust Centre for Human Genetics), se han generado plásmidos de recombinación para la construcción de vectores vaccinia MVA recombinantes que expresan las glicoproteínas G1 y G2, así como su precursor G1/G2 y la nucleoproteína N.

Finalmente, con la participación del Dr. Dufton Mwaengo se ha comenzado la puesta a punto de un método para la detección en tiempo real de los tres segmentos virales mediante utilización de sondas Taqman.

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI Salguero, F.J., Díaz-San Segundo, F., Brun A., Cano MJ., J.M. Torres (2006) Immunohistochemical diagnosis of bovine spongiform encephalopathy (BSE) in brain stem. Comparison of three different monoclonal antibodies. J. Vet Diagnost. Investigation 18, 106-109 Fernandez-Borges, N., Brun, A., Whitton, JL., Parra B., Torres, JM., Rodriguez, F., (2006) DNA immunization breaks tolerance to PrP and induces active immunity that delays and attenuates prion disease in mice. J. Virol. 80, 9970-9976 Sergio F. Martín, Beatriz Parra, María E. Herva, Juan C. Espinosa, Joaquín Castilla, Alejandro Brun and Juan M. Torres. (2006). Cell expression of a four extra octarepeat mutated PrPC modifies cell structure and cell cycle regulation. FEBS letters. 580, 4097-4104 Díaz-San Segundo F, Salguero FJ, de Ávila A, Espinosa, JC., Torres, JM , Brun A. (2006). Distribution of the cellular prion protein (PrPC) in brains of livestock and domesticated species Acta Neuropathologica. 112, 587-595 Garcia de Viedma D, Marin M, Andres S, Lorenzo G, Ruiz-Serrano MJ, Bouza E . (2006) Complex clonal features in an mycobacterium tuberculosis infection in a two-year-old child. Pediatr Infect Dis J. May;25(5):457-9. Garcia de Viedma D, Lorenzo G, Cardona PJ, Rodriguez NA, Gordillo S, Serrano MJ, Bouza E (2006) Association between the infectivity of Mycobacterium tuberculosis strains and their efficiency for extrarespiratory infection. J Infect Dis. 15;192:2059-65. Libros y capítulos de libros Esteban Domingo, Alejandro Brun, José Ignacio Núñez, and Cristina Escarmís (2006) Virogenomics. For: Genome Analysis of Pathogenic Microbes Jörg Hacker (Editor), Ulrich Dobrindt (Editor), Werner Göbel (Foreword by) ISBN: 3-527-31265-X Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas

31

Antigenic And Immunogenic Properties Of Recombinant Rift Valley Fever Virus Structural Proteins. Gema Lorenzo1, Raquel Martín1, Andrés García3, Belén Borrego1 Fernando Rodríguez2 and Alejandro Brun1 Tesis Doctorales, Diplomas de Estudios Avanzados, Tesinas, Proyectos y Trabajos Fin de Carrera Fayna Díaz Sansegundo (2006) Título de la tesis doctoral: Estudio de la transmisibilidad de la EEB al ganado porcino. Universidad: Complutense, Facultad de Veterinaria Director de tesis: Alejandro Brun Torres y José Manuel Sánchez-Vizcaíno.

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos - Profesor en el "XV Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas". Centro de

Investigación en Sanidad Animal, CISA-INIA. Valdeolmos. Financia: AECI-INIA. 3-30 Noviembre de 2006, 120 horas lectivas. Director del curso M.Arias . Coordinador del Curso: Matilde Carballo Santaolalla. Con la colaboración especial de la Facultad de Veterinaria de la UCM y de Córdoba. Profesores del Curso: Investigadores del CISA, así como Profesores, investigadores y profesionales de otras Instituciones y Universidades de España.

Otros - Coordinador de Workpackage “Vaccine technologies”. Red europea de Excelencia

EPIZONE. Coordinación y armonización de tareas de investigación llevadas a cabo por diversos laboratorios europeos con el objeto de desarrollar futuras estrategias de vacunación frente a enfermedades de interés veterinario en las que no existen vacunas o su desarrollo puede ser mejorable.

- Miembro de la comisión directora del Proyecto CONSOLIDER-PORCIVIR en representación del grupo de enfermedades víricas porcinas del CISA.

- Participación en reuniones de la Red Española de Alerta Biológica (RELAB) en calidad de Experto Técnico y responsable de la coordinación de actividades en el laboratorio P3+ del CISA

Tutor de prácticas de Irene G. Escudero, estudiante de 5º curso de Bioquímica Universidad Complutense

32

INFLUENZA ANIMAL

Componentes

del Real Soldevilla, Gustavo. Investigador Principal Martín del Burgo, M. Ángeles Correo electrónico: real@inia.es OBJETIVOS 1. Estudio de la Prevalencia de la gripe porcina en españa

2.caracterización de los virus de influenza porcina que circulan en la actualidad en españa.

3. Estudio de la patogenia de la infección por el virus influenza en el cerdo

4. Estudio de la inmunidad Heterosubtípica y de la eficacia de las vacunas actuales frente a la gripe porcina.

PROYECTOS

Código y título: Plan Nacional I+D+i 2004-2007 (AGL 2004-2132). Epizootiología molecular de la Influenza porcina en España. Entidad financiadora: M. Educación y Ciencia Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Gustavo del Real Código y título: Epizootics Network of Excellence (EPIZONE); subproyecto: Vaccine Technologies. Entidad financiadora: Comunidad Europea Duración: 2006-2010 Investigador responsable: Alejandro Brun (CISA) Código y título: CONSOLIDER-INGENIO 2010. Patogenia de infecciones víricas del cerdo (PORCIVIR) Entidad financiadora: M. Educación y Ciencia Duración: 2006-2010 Investigador responsable: Mariano Domínguez (CRESA) COLABORACIONES: Laboratorios Hipra S.A., AMER, Gerona. Caracterización de los virus de la Influenza porcina circulantes en España. Depto. de Microbiología, Facultad de Medicina, Hospital Monte Sinaí de Nueva York, EEUU. Desarrollo de virus atenuados y clones infecciosos de Influenza porcina por genética inversa. Depto. de Biología Molecular, Centro Nacional de Biotecnología, Madrid. Desarrollo de vacunas frente a la gripe porcina y aviar basadas en VLPs. Ingenasa S.A., Madrid. Estudio de la eficacia de nuevos kits de diagnóstico de Gripe. Principales resultados:

- Estudio serológico de la prevalencia de la Influenza en la cabaña porcina española. - Caracterización y secuenciación completa del genoma de varias cepas de virus de Influenza porcina aisladas en España.

33

- Estudio de la inmunidad cruzada entre virus de los diferentes subtipos presentes en España Los resultados de estos trabajos se describen en los artículos Epizootiology of swine Influenza in Spain y Heterosubtypic immunity induced by current Swine Influenza viruses isolated in Spain enviados a publicar.

PUBLICACIONES

Libros y capítulos de libros J. Figuerola, A. García-Sastre, J. Ortín, P. Pérez-Breña, A. Portela, G. del Real, R. Soriguer.Autor (2006). La Gripe Aviaria,. ¿Una nueva amenaza pandémica?. Editado por el C.S.I.C. M-3470-2006. Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas • Conferencia inagural: Gripe Aviar. G. del Real. V Congreso de la Sociedad Espanola de

Medicina Tropical y Salud Internacional. Santa Cruz de Tenerife. 22 mayo 2006. • Epizootiology of Swine Influenza A in Spain. MA. Martín del Burgo, J. Maldonado, E.

Martínez, A. Solórzano, A. García-Sastre and G. del Real. The seventh International Congress of Veterinary Virology. Lisboa, Portugal, 24 sept. 2006.

• Antigenic and Molecular Epizootiology of Swine Influenza A in Spain. MA. Martín del Burgo, J. Maldonado, E. Martínez, A. Solórzano, A. García-Sastre and G. del Real. In Advances in Influenza Research: From birds to bench to bedside. Steamboats Springs, Colorado, EEUU, 28 Marzo 2006.

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos Gripe aviar: la emergencia de un virus posiblemente pandémico, organizado por la Universidad Internacional Menéndez Pelayo, Valencia, Octubre 2006. Otros Creación del Grupo de Trabajo sobre Gripe formado por los Laboratorios Nacionales de Referencia de la Gripe humana (ISCIII), aviar (LVC) y el CISA.

34

PESTIVIRUS

Componentes

Mena Piñeiro, Ignacio Tomé Amat, Jaime (estudiante en prácticas) Correo electrónico: gmena@inia.es OBJETIVOS

1. Estudio de los pestivirus de importancia en sanidad animal 2. desarrollo de vacunas basadas en vectores virales manipulados y capsides vacias (vlpS)

Principales líneas de I+D+I

• Obtención de un clon infeccioso a partir de un aislado procedente del último brote de peste porcina clásica en España (2001-2002) para su posterior utilización en genética reversa y en el desarrollo de vacunas experimentales.

• Desarrollo de nuevas vacunas frente al virus de la influenza porcina basadas en cápsides (VLPs) quiméricas de calicivirus. Estudios sobre la biología y tropismo de los calicivirus con el objetivo de optimizar su utilización como vectores vacunales. (en colaboración con el grupo del Dr. J. Bárcena, CISA)

• Caracterización de la actividad antiviral de una ribozima que reconoce y corta el genoma de los pestivirus y del virus de la hepatitis C. (en colaboración con el grupo del Dr. J. Gómez, CSIC-Granada).

• Estudio de las proteínas inmunomoduladoras del virus swinepox para la obtención de vectores vacunales mejorados.

PROYECTOS Código y título: AGL2006-13809-C03-02/GAN: “Caracterización del potencial inmunoestimulador de las VLPs de calicivirus: desarrollo de nuevas estrategias vacunales frente al virus de la gripe porcina”. Entidad financiadora: Ministerio de Educación y Ciencia Duración: 2006-2009 Investigador responsable: Ignacio Mena Piñeiro Código y título: CSD2006-07: “Patogenia de enfermedades víricas porcinas”. Entidad financiadora: Ministerio de Educación y Ciencia (Programa CONSOLIDER-INGENIO) Duración: 2006-2011 Investigador responsable: Mariano Domingo Código y título: FAU2006-00019-C03-02: “Estudio de la implicación de factores ambientales y de differentes especies de aves y mamíferos silvestres y de explotación extensiva en la ecología de los virus de influenza aviar en humedales españoles”. Entidad financiadora: INIA (Convocatoria: Interacción Sanitaria entre Fauna Silvestre y Ganadería Extensiva) Duración: 2007-2010 Investigador responsable: Ursula Höffle

35

Principales resultados: Obtención de clones parciales que abarcan la totalidad del genoma del virus de la peste porcina clásica. Partiendo de RNA purificado a partir de células infectadas y de partículas virales, de un aislado procedente del último brote de peste porcina clásica ocurrido en España (2001-2002) se han obtenido, mediante RT-PCR, una colección de plásmidos que contienen cDNAs correspondientes a la totalidad del genoma de este virus. Estos plásmidos se utilizarán para determinar la secuencia completa del virus y para construir un clon infeccioso que permita aplicar técnicas de genética reversa para la manipulación y estudio del virus. Además, estos cDNAs parciales se están utilizando para construir minigenomas defectivos que permitirán estudiar distintas funciones virales (traducción mediada por IRES, replicación, etc.) y evaluar estrategias antivirales en ausencia de virus infeccioso. Caracterización de la actividad antiviral de la ribozima de Synechocystis sp. sobre la replicación del virus de la peste porcina clásica en células PK-15. Como continuación del trabajo del grupo del Dr. Jordi Gómez (CSIC-Granada), que había demostrado que esta ribozima reconoce y corta in vitro una estructura tipo tRNA en el genoma del virus de la hepatitis C y de la diarrea viral bovina, hemos comprobado que el genoma del virus de la peste porcina clásica también contiene esta estructura y es cortado in vitro. A continuación hemos comprobado que la ribozima también actúa in vivo, dado que la transfección en células susceptibles (PK-15) reduce en más de 10 veces la producción de virus medida mediante RT-PCR cuantitativa. En la actualidad se están culminando una serie de controles para demostrar la especificidad del proceso. Estudios sobre tropismo de los calicivirus. En colaboración con el grupo del Dr. Juan Bárcena (CISA) estamos realizando una serie de estudios para mejorar la utilización de las cápsides vacías (VLPs) de calicivirus como vectores para la vacunación contra epítopos heterólogos. Entre estos estudios se incluyen la caracterización de los factores que influyen en el tropismo (estudios sobre distintas variantes del calicivirus felino), la optimización de los vectores utilizados para la producción de las VLPs en células de insecto (con el virus de la fiebre hemorrágica del conejo)y la producción y caracterización de nuevos anticuerpos monoclonales (frente al calicivirus felino y a calicivirus porcino).

PUBLICACIONES

Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas I. Mena: “Efecto antiviral de la ribozima de Synechocistis sp. sobre la replicación del virus de la peste porcina clásica”Comunicación oral en la 2ª reunión de la red temática RIBORED.Barcelona. Junio 2006. H. Almanza; I. Angulo; C. Cubillos; M. Morales; I. Mena; J. Bárcena.: “Tissue-culture adapted feline calicivirus variants with expanded cell tropism”.Poster en “7th International Congress of Veterinary Virology”.Lisboa (Portugal). Septiembre 2006

OTRAS ACTIVIDADES

I. Mena se ocupa de la organización de los seminarios internos del CISA.

36

Además I. Mena participa en las siguientes redes temáticas: - Red de Excelencia “EPIZONE” - RIBORED Y en las reuniones multidisciplinares del grupo de trabajo sobre la situación de la mixomatosis en España, organizadas por el INIA y la organización Intercun

37

BIOLOGÍA MOLECULAR DE PESTIVIRUS

Componentes Jordi Gomez Castilla Investigador principal Rosa Diaz Toledano Correo electrónico: jgomez@ipb.csic.es

Objetivos

1. Caracterizar las estructuras del RNA de la región 5´del virus de la Diarrea viral Bovina en comparación con la del virus de la hepatitis C humana.

2. Desarrollar un Ribozoma contra el RNA del virus de la peste porcina clasica.

Principales líneas de I+D+I Estructura del RNA vírico en la familia de los pestivirus animales y hepatitis C. Desarrollo de un ribozima terapeutico derivado de la RNasa P de sinechocistis.

Proyectos

Código y título: BIO 2004-06114. Caracterización de las señales de ARN alrededor del IRES del virus de la hepatitis C y los pestivirus animales relacionados para el diseño de un ribozima modular derivado de la ARNasa P de la cianobacteria Synechocistis.

Entidad financiadora: MEC. Duración: 2004-2007 Principales resultados: - Caracterizacion de la señal RNAsa P (Piron et al. NAR 2005) y la señal RNasa III en el

virus de la hepatitis C (Beguristain et al. NAR 2005); Caracterización de la interacción estructural entre los motivos derivados de la RNAsa P y RNasa III en el IRES de VHC: en fase final de redacción para NAR); Búsqueda de señales RNasa P en los RNAs de células hepáticas con el uso de microarrays de DNA (en fase experimental con resultados ya comprobados y forma parte del trabajo experimental y futura Tesis doctoral de la becaria asociada a proyecto Rosa Díaz Toledano. Determinación de la accesibilidad de los genomas de los pestivirus relacionados con el virus de la hepatitis C a la actividad del ribozima derivado de la RNasa P de sinechocistis sp., en el presente se está evaluando la acitivdad del ribozima sobre el virus de la Peste porcina en cultivos celulares. Por el momento podemos confirmar la actividad inhibitoria del ribozima pero estamos a la espera de analizar la especificidad de esa inhibición.

PUBLICACIONES

Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas REUNION RED NACIONAL de RNA 2006 Barcelona: TITULO: Conformaciones alternativas del IRES de HCV. 2006 ORAL: Jordi Gomez

38

JORNADA VIROLOGIA CATALANA: Aproximación a las relaciones de mimetismo para adquirir el significado biológico de elementos estructurales en el RNA vírico. Barcelona 2006. Oral Jordi gomez

39

GENERACIÓN DE VECTORES VIRALES VACUNALES.

Componentes Calvo Pinilla, Eva Ortego Alonso, Francisco Javier, investigador principal Correo electrónico: ortego@inia.es

OBJETIVOS 1. Generacion de vectores virales para el desarrollo de vacunas frente al virus de la lengua azul 2. Generacion de vectores virales vacunales basados en genomas de coronavirus

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Desarrollo de vacunas recombinantes de nueva generación frente al virus de la lengua azul.

• Generación de vectores virales vacunales

PROYECTOS Código y título: RTA06-00169-CO2-01. Generación de vectores virales para el desarrollo de vacunas frente al virus de la lengua azul. Entidad financiadora: INIA Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Francisco Javier Ortego Alonso Principales resultados: La lengua azul o fiebre catarral ovina es una enfermedad vírica infecciosa transmitida por mosquitos del género Culicoides que afecta a rumiantes domésticos y salvajes. Las vacunas juegan un papel importante en el control de esta enfermedad aunque hay cierta controversia respecto a la seguridad de las vacunas vivas atenuadas utilizadas actualmente. Por ese motivo se intentan desarrollar reactivos y estrategias de vacunación frente al virus de la lengua azul usando una cepa del virus vaccinia que es considerada segura y cDNAs desnudos. La eficacia en cuanto a protección de las vacunas que usan poxvirus como vector es bien conocida para otras enfermedades, induciendo respuesta celular mediada por linfocitos T citotóxicos y producción de anticuerpos neutralizantes frente al antígeno recombinante. En este año se han generado virus vaccinia recombinantes de la cepa atenuada Ankara (rMVA) que expresan genes del virus de la lengua azul (BTV). Los genes VP2 y VP5 de BTV serotipo 4 han sido amplificados por RT-PCR a partir de RNA viral purificado, secuenciados y clonados en el plásmido pSC11 bajo el promotor p7.5 del virus vaccinia. Los virus rMVA se generaron por recombinación homóloga en el locus de la timidina kinasa, lo que permitió su análisis usando el gen marcador LacZ. Los virus recombinantes fueron plaqueados, clonados y purificados y la expresión de los genes VP2 y VP5 de BTV confirmada por inmunofluorescencia o presencia de RNA mensajero por RT-PCR. Además, se han generado los cDNAs desnudos para ser utilizadas como vacunas DNA clonándose los genes VP2 y VP5 del serotipo 4 en el vector de expresión de mamíferos pcDNA3 bajo el control del promotor del citomegalovirus humano.

40

Respecto a la generación de vectores virales vacunales basados en genomas del coronavirus TGEV se ha generado un vector basado en el genoma de TGEV con el gen esencial E delecionado (rTGEV-∆E), eficiente en replicación y defectivo en propagación. Para su generación se ha utilizado un sistema de células empaquetadoras que suministran en trans la proteína E de TGEV. Los títulos virales alcanzados son próximos a los títulos virales del virus silvestre al igual que la estabilidad del vector viral en cultivos celulares. Se ha estudiado la bioseguridad del vector conteniendo una única deleción, la del gen E de TGEV, y se ha confirmado que es defectivo en propagación debido a un bloqueo de la morfogénesis del virus en el compartimento intermedio, impidiendo así su secreción al medio extracelular. Esto confirma que el virus TGEV-∆E es un vector bioseguro debido a su deficiencia en propagación Los estudios de infectividad, replicación viral y deficiencia en propagación del vector TGEV-∆E en lechones están pendientes de realización

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI Almazán, F., DeDiego, M.L., Galán, C., Escors, D., Alvarez, E., Ortego, J., Sola, I., Zúñiga, S., Alonso, S., Moreno, J.L., Nogales, A., Capiscol, C. y Enjuanes, L. (2006) Construction of a SARS-CoV infectious cDNA clone and a replicon to study coronavirus RNA síntesis. J. Virol. 21: 10900-10906. Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas Buesa, J., Ortego, J., Ribes, J.M., Montava, R., Ceriani, J. y Enjuanes, L. Expresión of rotavirus antigens by coronavirus-based vectors with engineered murine tropism. 9th dsRNA virus symposium, Cape Town, South Africa, 21-26 Octubre 2006

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos Participación docente en el curso de doctorado titulado ¨Terapia génica¨ del departamento de Bioquímica y Biología Molecular de la facultad de Ciencias de la Universidad autónoma de Madrid y dirigida por el Dr. Antonio Talavera el curso 2005-2006. Participación docente en el curso ¨XV curso internacional sobre enfermedades exóticas animales¨, del 3 al 30 de noviembre de 2006, impartido en el Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA-INIA) de Madrid.

41

ESTRATEGIAS VACUNALES FRENTE A VIRUS ANIMALES

Componentes Bárcena Del Riego, Juán Blanco Lavilla, Esther. Investigador principal. Cubillos Zapata, Carolina Gallardo Frontaura, Carmina Llorente Herranz, Alicia Correo electrónico: blanco@inia.es

OBJETIVOS 1. Desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico 2. Desarrollo de nuevas estrategias de vacunación frente al virus de la fiebre aftosa 3. Caracterización de mecanismos de respuesta inmune y diseño de vacunas frente al virus

de la peste porcina africana.

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico viral • Desarrollo y evaluación de vacunas frente a patógenos virales porcinos • Caracterización molecular y biologica de aislados virales del VPPA

PROYECTOS Código y título: UE SSP503603. “Improvement of Foot and Mouth disease control by ethically acceptable methods based on scientifically validated assays and new knowledge on FMD vaccines, including the impact of vaccination" Entidad financiadora: UE Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Blanco Lavilla, Esther Código y título: AGL 2004-07857-C03-02. “Caracterización de nuevos inmunógenos del virus de la Peste porcina africana: Estudio de la respuesta inmune inducida en cerdo" Entidad financiadora: MeyC (Plan Nacional ) Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Blanco Lavilla, Esther Código y título: “ Control of African Swine Fever Virus (ASFV) through improved understanding of the epidemiology of the disease and construction and testing of recombinant and attenuated virus vaccines " Entidad financiadora: Wellcome Trust Duración: 2005-2009 Investigador responsable: Martinez Escribano, Jose Angel

CONVENIOS Código y título: “Development of new diagnostic assays and epidemiological surveillance of viral pathogens of livestock in sub-saharan and north africa” Entidad financiadora: CGIAR-INIA. Duración: 2003-2007 Coordinador: M.Arias

42

Investigadores principales: Brun, Alejandro , Carmina Gallardo, Blanco, Esther Principales resultados: Optimización de un sistema de PCR para la deteción específica del virus de la peste porcina africana en garrapatas africanas. Aislamiento y caracterización fenotípica de aislados del VPPA obtenidos a partir de garrapatas del genero Ornithodorus moubata. Análisis de la seroprevalencia del VPPA en Uganda. Desarrollo de una vacuna peptídica frente al virus de la fiebre aftosa que confiere protección total en cerdo. Desarrollo de un sistema de diagnóstico serológico basado en la utilización de biosensores, que permite diferenciar animales infectados o vacunados con el VFA. Caracterización de anticuerpos monoclonales frente a la proteína p30 del VPPA. Desarrollo de una estrategia de genotipado de aislados del VPPA que permite establecer relaciones filogeneticas entre aislados próximos.

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI C.Gallardo, Blanco E, A.L.Carrascosa, JM.Rodriguez y JM.Sanchez-Vizcaino. (2006).“Antigenic Properties And Diagnostic Potential Of African Swine Fever Virus Protein PP62 Expressed In Insect Cells.”. J Clin Microbiol. 2006 Mar;44(3):950-6. R.J. Nix, C.Gallardo,G.Hutching, Blanco E y L.K.Dixon. (2006). “Identification of variable regions of the African swine fever virus genome and use of these for studying field isolates”. Arch Virol. 2006 Jul 3; [Epub ahead of print] Perez-Filgueira DM, Gonzalez-Camacho F, Gallardo C, Resino-Talavan P, Blanco E, Gomez-Casado E, Alonso C, Escribano JM. (2006). Optimization and validation of recombinant serological tests for African Swine Fever diagnosis based on detection of the p30 protein produced in Trichoplusia ni larvae. J Clin Microbiol. 2006 Sep;44(9):3114-21. Otros artículos Carolina Cubillos, Eva Borras, Beatriz. G. de la torre, Anna Jakab , Juan Bárcena, David Andreu, Francisco Sobrino and Esther Blanco “Dendrimeric peptide containing Foot-and-mouth disease virus (FMDV) specific B- and T-cell epitopes, confer full protection to pigs against challenge with FMDV”.

Report of the Research Group of the Standing Technical Committee of the European Commision for the Control of Foot-And-Mouth Disease. Paphos, Chipre. 17-19 Octubre 2006. Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) (2006). Disponible en Internet: http://www.fao.org/ag/againfo/commissions/en/documents/reports/paphos/App42Blanco.pdf Karl Johan Sørensen, Esther Blanco and K. de Stricker. 3D ELISAs as potential confirmatory principle in DIVA and type-independent assay for FMDV antibodies.Report of the Research Group of the Standing Technical Committee of the European Commision for

43

the Control of Foot-And-Mouth Disease. Paphos, Chipre. 17-19 Octubre 2006. Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) (2006). Disponible en Internet: http://www.fao.org/ag/againfo/commissions/en/documents/reports/paphos/App22Sorensen.pdf

Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas - C. Gallardo, E. Blanco, A.L.Reis, R.M.E Parkhouse, A Leitão.Validation of 4 recombinant African swine fever virus proteins providing reproducible targets for serodiagnosis. 7º Congreso Internacional de la Sociedad Española de Virologia Veterinaria. Lisboa, 23-27 septiembre 2006. - Carmina Gallardo, Raquel Martin, Ademun Rose Nantima Noely, Richard Bishop and Esther Blanco. Molecular characterisation of African swine fever virus (ASFV) isolates recovered from samples collected in uganda during 2003 reported outbreaks. 7º Congreso Internacional de la Sociedad Española de Virologia Veterinaria. Lisboa, 23-27 septiembre 2006. - A. Llorente, C. Gallardo, R. Bishop, E. Blanco. Detection, isolation and molecular characterization of African swine fever virus from ticks collected in Kenya, Uganda and Tanzania.. 7º Congreso Internacional de la Sociedad Española de Virologia Veterinaria. Lisboa, 23-27 septiembre 2006.

- - C. Cubillos, I. Avalos, E. - - Borras, B. G. De la Torre, A. Jakab, J. Bárcena, D. Andreu , F. Sobrino and E. Blanco. Dendrimeric peptide containing Foot-and-mouth disease virus (FMDV) specific B- and T-cell epitopes, confer full protection to pigs against challenge with fmdv. 7º Congreso Internacional de la Sociedad Española de Virologia Veterinaria. Lisboa, 23-27 septiembre 2006. - M. Perez-filgueira1, F. González-camacho, C. Gallardo, P. Resino, E. Blanco, E. Gómez-casado, C. Alonso1 and J.M. Escribano.Optimization and validation of recombinant serological tests for African swine fever diagnosis based on the p30 protein produced in Trichoplusia ni larvae. 7º Congreso Internacional de la Sociedad Española de Virologia Veterinaria. Lisboa, 23-27 septiembre 2006.

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos - “XV Curso Internacional de Enfermedades Exóticas Animales”. INIA Seminario impartido:“ Diagnóstico de enfermedades vesiculares” (1 hora 30 minutos). Lugar y fecha: Madrid 4-30 Noviembre 2006. - “Diagnóstico de enfermedades ganaderas de interés”. Junta de Extremadura. Seminarios impartido:“ Diagnóstico de las enfermedades vesiculares” (1 hora) y “Diagnóstico de la Peste porcina africana” (1 hora ). Práctica impartida: “Diagnóstico serológica del EVC mediante ELISA” Lugar y fecha: Badajoz 27 Septiembre 2006.

44

Servicios Análisis virológico de muestras procedentes de Laboratorios Syva, mediante técnicas de RT-PCR y PCR, para descartar presencia de los siguientes virus: Fiebre aftosa, Enfermedad vesicular del cerdo, Estomatitis vesicular y Peste porcina africana. Otros: - Patente:P527ES00 “Construcción peptídica dendrimérica para la prevención de la fiebre aftosa en animales”. Depositada en la Oficina Española de Patentes el 2 de agosto de 2006. Financiación de la extensión de la misma aprobada por la Fundación Genoma España. - Nombramiento como revisora científica (Referee) de la revista SCI “Veterinary Microbiology”.

45

ESTRATEGIAS VACUNALES.CALICIVIRUS.

Componentes Almanza Reyes, Horacio Bárcena del Riego, Juan. Investigador Principal Blanco Lavilla, Esther Cubillos Zapata, Carolina Mena Piñeiro, Ignacio Correo electrónico: _barcena@inia.es

OBJETIVOS

1. Desarrollo de nuevas estrategias vacunales basadas en péptidos sintéticos y VLPS QUIMÉRICAS de calicivirus

2. Deteccion analisis estructural y biología molecular de Calcivirus

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I Desarrollo de nuevas estrategias vacunales basadas en péptidos sintéticos y cápsidas vacías (VLPs) quiméricas frente al virus de la fiebre aftosa. Desarrollo de nuevas estrategias vacunales basadas VLPs quiméricas frente al virus de la gripe. Desarrollo de herramientas y técnicas de detección de norovirus porcinos. Análisis estructural y biología molecular de calicivirus.

PROYECTOS

Código y título: BIO2002-04091-C03-03. “Nuevas estrategias vacunales frente al virus de la fiebre aftosa y estudio de los mecanismos implicados en la patogenicidad viral”. Entidad financiadora: Plan Nacional, CICYT Duración: 2003-2006 Investigador responsable: Juan Bárcena (Responsable Subproyecto 2, CISA-INIA). Código y título: AGL2006-13809-C03-02/GAN. “Nuevas estrategias vacunales e inmunomoduladoras basadas en la estimulación de las células dendríticas porcinas empleando como modelo el virus de la gripe”. Entidad financiadora: Plan Nacional, CICYT Duración: 2006-2009 Investigador responsable: Ignacio Mena (Responsable Subproyecto 2, CISA-INIA). Código y título: EPIZONE. “Network of Excellence for Epizootic Disease Diagnosis and Control”. Entidad financiadora: UE. VI Programa Marco Duración: 2006-2011. Investigador responsable: P. A. van Rijn. Código y título: PORCIVIR. “Patogenia de infecciones víricas del cerdo”. Entidad financiadora: Plan Nacional, Programa Ingenio 2010. Duración: 2006-2011.

46

Investigador responsable: Mariano Domingo (CReSA). Principales resultados: 1.- Desarrollo de nuevas estrategias vacunales basadas en péptidos sintéticos y VLPs quiméricas frente al virus de la fiebre aftosa. Se ha desarrollado una estrategia vacunal basada en un péptido dendrimérico que contiene epítopos B y T del virus de la fiebre aftosa, que ha inducido protección total en cerdos frente a un desafío con el virus de la fiebre aftosa. Este resultado ha dado lugar a la presentación de una patente (veasé más abajo). Se han desarrollado VLPs quiméricas del Calicivirus RHDV que contienen epítopos B y T del virus de la fiebre aftosa. Se ha caracterizado la antigenicidad de las VLPs quiméricas, y su inmunogenicidad en ratón. Las VLPs quiméricas son capaces de inducir una respuesta humoral y celular significativa en ratón frente a los epítopos B y T del virus de la fiebre aftosa empleados. 2.- Desarrollo de nuevas estrategias vacunales basadas VLPs quiméricas frente al virus de la gripe. Se ha obtenido un proyecto de I+D en la convocatoria del Plan Nacional de 2005 (Proyecto AGL2006-13809-C03-02/GAN, veasé más arriba) para financiar esta línea de investigación. Se trata de un proyecto coordinado entre grupos del CReSA y el CISA-INIA para el desarrollo de nuevas estrategias vacunales basadas VLPs quiméricas frente al virus de la gripe. El proyecto comenzó en Octubre de 2006, y ya está en marcha la construcción de VLPs quiméricas del virus RHDV con epítopos inmunogénicos del virus de la gripe derivados de la nucleoproteína y la proteína M2. 3.- Desarrollo de herramientas y técnicas de detección de norovirus porcinos. A lo largo de 2006 se ha desarrollado un sistema de producción de VLPs de norovirus porcinos en el sistema de expresión de baculovirus. Las VLPs se han empleado para inocular ratones y obtener anticuerpos monoclonales que reconocen la proteína de la cápsida de los norovirus. Se han obtenido 8 anticuerpos monoclonales. Dos de ellos reconocen tanto a los norovirus porcinos como a cepas de norovirus humanos. Los otros 6 anticueros monoclonales reconocen específicamente a los norovirus porcinos. Hasta la fecha no había descritos en la literatura científica anticuerpos monoclonales específicos de norovirus porcinos. Estos anticuerpos constituyen herramientas útiles para el desarrollo de sistemas de detección de norovirus porcinos, lo que permitirá desarrollar estudios epidemiológicos sobre la prevalencia de norovirus porcinos en España, uno de los objetivos del proyecto PORCIVIR (veasé más arriba). 4.- Análisis estructural y biología molecular de calicivirus. Se ha desarrollado un estudio estructural por criomicroscopía y análisis digital de imágenes de las VLPs de RHDV (VLPs nativas y quiméricas), en colaboración con el grupo de José Ruíz Castón (CNB-CSIC). Este estudio, todavía en marcha, permitirá refinar el modelo estructural de la proteína de la cápsida de RHDV actualmente disponible, lo que a su vez

47

favorecerá el desarrollo de las estrategias vacunales basadas en VLPs quiméricas citadas más arriba. Por otro lado se trabaja en la caracterización de variantes del calicivirus felino obtenidos en el laboratorio, capaces de propagarse en líneas celulares de mamífero no felinas. Este estudio permitirá conocer las bases moleculares que determinan el tropismo de estos virus. Los resultados obtenidos hasta la fecha indican que las proteinas VPg y VP58 (proteína de la cápsida viral) están implicadas en la determinación del rango de hospedador del calicivirus felino. PUBLICACIONES Artículos en revistas SCI. “Recombinant transmissible vaccine against myxomatosis and rabbit hemorrhagic disease for wild rabbit populations”. J. Bárcena. J. Wildlife Research (En prensa). Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas. B.G. de la Torre, J. Bárcena, C. Cubillos, E. Borràs, A. Jakab1, F. Sobrino, E. Blanco and D. Andreu. “A dendrimeric peptide vaccine containing Foot-and-Mouth Disease Virus B and T-cell epitopes confers full protection to pigs against viral infection”. 29th European Peptide Symposium. Gdansk (Polonia). 3-8 Septiembre 2006

H. Almanza, I. Angulo, C. Cubillos, M. Morales, I. Mena and J. Bárcena. “Tissue-culture adapted Feline Calicivirus variants with expanded cell tropism”. 7th International Congress of the European Society for Veterinary Virology. Lisboa. 24-27 Septiembre 2006.

I. Angulo, C. Cubillos, H. Almanza, M. Morales, J.R. Castón, F. Sobrino, E. Blanco and J. Bárcena. “Chimeric Calicivirus-like particles displaying B-cell and T-cell epitopes from foot and mouth disease virus”. 7th International Congress of the European Society for Veterinary Virology. Lisboa. 24-27 Septiembre 2006. C. Cubillos, I. Avalos, E. Borras, B. G. De la Torre, A. Jakab, J. Bárcena, D. Andreu, F. Sobrino and E. Blanco. “Dendrimeric peptide containing foot-and-mouth disease virus (FMDV) specific B- and T-cell epitopes, confer full protection to pigs against challenge with FMDV”. 7th International Congress of the European Society for Veterinary Virology. Lisboa. 24-27 Septiembre 2006. M. Pérez-Filgueira, P. Resino, C. Cubillos, I. Angulo, M.G. Barderas, J. Bárcena and J.M. Escribano. “Low-cost recombinant subunit vaccine against Rabbit Haemorrhagic Disease Virus produced in insect larvae”. 7th International Congress of the European Society for Veterinary Virology. Lisboa. 24-27 Septiembre 2006.

OTRAS ACTIVIDADES

Patente Título: “Construcción peptídica dendrimérica para la prevención de la fiebre aftosa en animales”.

48

Autores: C. Cubillos, E. Borràs, B. G. de la Torre, A. Jakab, J. Bárcena, D. Andreu, F. Sobrino and E. Blanco. Solicitante: Universidad Pompeu Fabra, CBMSO-CSIC, CISA-INIA. Organismo: Oficina Española de Patentes y Marcas. Nº Solicitud: P200602142. Fecha de presentación: 2 de Agosto 2006.

49

VACUNAS FRENTE A VIRUS DE FIEBRE AFTOSA BASADAS EN ACIDOS NUCLEICOS.

Componentes

Borrego Rivero, Belén. Investigador Principal Rodríguez Pulido, Miguel Ramón Colaboradores en CSIC.: Saiz Zalabardo, Margarita (CSIC) Sobrino Castelló, Francisco (CSIC) Correo electrónico: borrego@inia.es

OBJETIVOS

1. Desarrollo de vacunas marcadoras basadas en ácidos nucleicos, empleando como modelo el virus de la fiebre aftosa .

Caracterizar los parámetros de respuesta inmune inducida por plásmidos DNA que expresan minigenes de VFA fusionados a distintos péptidos señal y su correlación con la protección conferida, en un modelo de ratón y en cerdo.

2. Estudio de las bases moleculares de la patogenia de virus animales, empleando como modelo el virus de la fiebre aftosa, con especial énfasis en la identificación de dianas y estrategias antivirales

Generación de RNAs portadores de mutaciones en las NCRs del VFA. Análisis de su capacidad replicativa en cultivos celulares, caracterización funcional , y estudio de virulencia y respuesta inmune.

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I Respuesta inmune frente al virus de la fiebre aftosa en cerdo: desarrollo de nuevas vacunas. Estudio de las bases moleculares de la patogenia del virus de la fiebre aftosa : uso vacunal de mutantes defectivos.

PROYECTOS Código y título CT2002 1304 QLK2 “Optimizing DNA based vaccination against FMDV in sheep and pigs (FMDNAVACC)” Entidad financiadora: UE Duración: 2002-2006 Investigador responsable: Francisco Sobrino Código y título: BIO2005-07592-C02-01 “Desarrollo de nuevas vacunas sintéticas y estudio de mecanismos implicados en la patogenicidad viral: el virus de la fiebre aftosa como modelo”. Entidad financiadora: Plan Nacional Duración: 2005-2008 Investigador responsable: Francisco Sobrino

50

Código y título: Patogenia de infecciones víricas del cerdo (PORCIVIR) Entidad financiadora: Programa Consolíder-Ingenio 2010 Duración: 2006-2011 Investigador responsable: Domingo Álvarez, Mariano (coordinador) Principales resultados:

Desde que en los años 90 se describió por primera vez la posibilidad de inducir una respuesta inmune inoculando con DNA desnudo, la vacunación con ácidos nucleicos se ha convertido en una prometedora alternativa a la vacunación tradicional para todo tipo de patógenos, puesto que estas vacunas presentan numerosas ventajas , entre ellas, la posibilidad de manipular el DNA, lo que permite aplicar fácilmente distintas estrategias para modular la respuesta inducida y optimizar las vacunas. Nosotros estamos interesados en emplear esta metodología para desarrollar vacunas frente al virus de la fiebre aftosa (VFA) siguiendo dos abordajes:

Por un lado, trabajamos en el desarrollo de vacunas DNA basadas en minigenes. En trabajos anteriores hemos comprobado que plásmidos que expresan sitios antigénicos B y T de VFA fusionados a un péptido señal, que introduce el antígeno en la vía secretora, son capaces de inducir una respuesta inmune que protege a los animales (tanto animales de laboratorio como huéspedes naturales de la enfermedad) frente a desafío con virus infectivo. Esta estrategia parece favorecer, entre otras cosas, la producción de anticuerpos neutralizantes, que constituyen un factor importante en protección frente a la enfermedad.

Por otro lado, en colaboración con el CBM, estudiamos el potencial de vacunas RNA derivadas de clones infecciosos. Se ha demostrado la esencialidad para la recuperación de virus infeccioso de la región 3´no codificante (3´NCR) del genoma del VFA. Mediante experimentos de mutagénesis sobre clones infecciosos se ha generado un variante viral con una deleción parcial en la 3´NCR con fenotipo de infectividad atenuado en cultivo celular, inocuo en ratones lactantes, y capaz de inducir anticuerpos neutralizantes frente a VFA en ratón adulto, lo que apoya su potencial como genotipo vacunal.

PUBLICACIONES Artículos en revistas SCI A.M. Barfoed, F. Rodriguez, D. Therrien, B. Borrego, F. Sobrino, and S. Kamstrup. “DNA immunization with 2C FMDV non-structural protein reveals the presence of an immunodominant CD8+, CTL epitope for Balb/c mice”. Antiviral Res. 2006 Dec;72(3):178-89. Epub 2006 Jul 21.

B. Borrego, P. Fernandez-Pacheco, L.Ganges, N. Domenech, N. Fernandez-Borges, F. Sobrino and F. Rodríguez. “DNA vaccines expressing B and T cell epitopes can protect mice from FMDV infection in the absence of specific humoral responses” Vaccine, 2006, May 1;24(18):3889-99. A J. I. Núñez , P. Fussi, B. Borrego, E. Brocchi, M.L. Pacciarini and F. Sobrino. “Genomic and antigenic characterization of viruses from the 1993 Italian foot-and-mouth disease outbreak”. Arch Virol. 2006 Jan;151(1):127-42. A

51

Serrano P, Pulido MR, Saiz M, Martinez-Salas E. “The 3' end of the foot-and-mouth disease virus genome establishes two distinct long-range RNA-RNA interactions with the 5' end region.”. J Gen Virol. 2006 (87): 3013-22. Otros artículos Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas “Nuevas vacunas de subunidades frente a virus animales”. F. Sobrino. E. Blanco, B. Borrego, L. Ganges, E.Borras, C. Cubillo. J.I. Núñez, F. Rodríguez y D. Andreu. Mesa sobre Genómica y Biotecnología. Congreso del Grupo Especializado de Microbiología Industrial y Biotecnología Microbiana . La Coruña , 9-10 noviembre 2006. “DNA vaccination in pigs with FMDV minigenes: from protection to disease exacerbation” L. Ganges, B. Borrego, P. Fernández-Pacheco, C. Revilla, N. Fernández-Borges, J. Domínguez, F. Sobrino & F. Rodríguez. PRESENTACIÓN ORAL. 7th International Congress of the European Society for Veterinary Virology (ESVV), Lisboa, Portugal, 24th - 27th of September 2006.

“Immunological consequences of fusing different signal peptides to FMDV epitopes” B. Borrego , M. Garcia-Briones, B. Álvarez , M. G. Esguevillas, E. Pérez, J. Marqués, F. Sobrino , A. Ezquerra & F. Rodríguez. POSTER. 7th International Congress of the European Society for Veterinary Virology (ESVV), Lisboa, Portugal, 24th - 27th of September 2006. “Inoculation with FMDV RNA as a model for genetic immunization studies in mice” M. R. Rodríguez-Pulido, B. Borrego, F. Sobrino & M. Sáiz. POSTER. 7th International Congress of the European Society for Veterinary Virology (ESVV), Lisboa, Portugal, 24th - 27th of September 2006. “PRV glycoprotein gB as a carrier of FMDV epitopes” D. Dory, V. Béven, M. Rémond, S. Zientara, B. Borrego, F. Rodriguez and A. Jestin. POSTER. 7th International Congress of the European Society for Veterinary Virology (ESVV), Lisboa, Portugal, 24th - 27th of September 2006. “The 3' end of FMDV genome established two distinct long-range RNA-RNA interactions with the IRES and the 5' end region”. P. Serrano, M. Rodríguez Pulido, M. Sáiz & E. Martínez-Salas. COMUNICACIÓN ORAL. Translational Control and non-coding RNA meeting. Nove Hrady (República Checa), 8-12 Noviembre 2006.

Tesis Doctorales, Diplomas de Estudios Avanzados, Tesinas, Proyectos y Trabajos Fin de Carrera Diplomas de Estudios Avanzados, 2006, (Dpto. Biología molecular, UAM): Miguel R. Rodríguez Pulido. "Caracterización funcional de las regiones no codificantes (NCRs) del genoma de FMDV e implicaciones del 3`NCR en el ciclo viral".

52

OTRAS ACTIVIDADES

Asistencia a reuniones internacionales (BB) Participación en la sesión abierta “La vaccination ADN, une nouvelle stratégie vaccinale contre le virus de la fièvre aphteuse”

INRA, Jouy-en-Josas, Francia, 24 de febrero 2006 Charla: “The B and T epitopes «minigene» approach: from immune response to challenge experiments in mice and pig” Otros

(BB) Tutora externa de la asignatura Estancias de la Facultad de Veterinaria de la UCM durante el verano 2006

(BB) Evaluadora de la ANEP para la convocatoria de proyectos de I+D - Plan Nacional A –2006.

53

MODULACIÓN DEL SISTEMA INMUNE POR VIRUS

Componentes

Alejo Herberg, Alí Ruiz Argüello, Mª Begoña Colaboradores CSIC: Alcamí, Antonio Fernández, Mar Viejo Abel Correo electrónico:ruizarguello@inia.es OBJETIVOS

1. caracterización de receptores solubles de citoquinas DE poxvirus 2.Estudio de mecanismos inmunomoduladores virales 3. Estudio de la patogenia del virus ectromelia PROYECTOS

Código y título: Modulación de la actividad de las citoquinas por los poxvirus (proyecto Ramón y Cajal RC04-0836) Entidad financiadora: M. Educación y Ciencia Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Alí Alejo Principales resultados: Se han caracterizado, in vitro, las proteínas virales CrmB y CrmD. Ambas contienen cuatro dominios ricos en cisteínas homólogos al dominio extracelular de los receptores de TNF y una región C-terminal de función desconocida que no se parece a ninguna proteína celular. Estudios previos del laboratorio del Dr. Alcamí demostraron, por primera vez, que estas proteínas no sólo bloquean la actividad biológica del TNF sino que además unen interleuquina-8. En colaboración con el Dr. A.Alcamí se ha realizado un screening completo (mediante SPR, BIAcore X) para determinar los posibles ligandos de estas proteínas y se ha demostrado que ambas unen e inhiben la actividad de algunas quimioquinas. Además, ambas pueden unir TNF y quimioquinas simultáneamente y por sitios independientes. Estos resultados identifican CrmB y CrmD como proteínas virales solubles de unión a quimioquinas y describen un nuevo dominio de interacción con quimioquinas (el dominio C-terminal). Se ha estudiado la contribución de estas proteínas a la patogénesis viral utilizando el modelo de ectromelia. Se ha demostrado que la proteína CrmD es un factor esedncial para la patogénesis de mousepox.

54

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI - A. Alejo, M.B. Ruiz-Argüello, Y.Ho, V.P. Smith, M. Saraiva y A. Alcami . 2006. A chemokine-binding domain in the tumor necrosis factor receptor from variola (smallpox) virus. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 103: 5995-6000. Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas - A. Alejo, B. Ruiz-Argüello, V. P. Smith, M. Saraiva, Y. Ho and A. Alcami. The ”SECRET” function of the tumour necrosis factor receptor CrmB from variola (smallpox) virus. FASEB summer research conferences Poxviruses. Indian Wells, California, EE.UU. 3-8 Junio 2006. (Comunicación oral). - A. Alejo, B. Ruiz-Argüello, M. Saraiva, and A. Alcami. Study of the role of ectromelia virus CD30 in mousepox pathogenesis. FASEB summer research conferences Poxviruses. Indian Wells, California, EE.UU. 3-8 Junio 2006. (Póster).

- A. Alejo, B. Ruiz-Argüello, M. Saraiva, and A. Alcami. The poxviral TNF receptor (CrmD) is a virulence factor with antiinflamatory activity in vivo. FASEB summer research conferences Poxviruses. Indian Wells, California, EE.UU. 3-8 Junio 2006. (Póster).

55

RESPUESTA INMUNE DE FIEBRE AFTOSA

Componentes

Sevilla Hidalgo, Noemí. Investigador principal Colaboración con CBM, CSIC.: Ojosnegros Martos, Samuel Sanz-Ramos Rojo, Marta Correo electrónico: sevilla@inia.es OBJETIVOS 1. Estudio de la respuesta inmune frente al virus de la fiebre aftosa (VFA)

2. Interacción de VFA con células dendríticas (DCs).

3. Estudio de la heterogeneidad de subpoblaciones virales en relación con sitios de replicación in vivo.

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I Respuesta inmune al virus de la fiebre aftosa en infecciones naturales Papel de las células presentadoras de antígeno en infecciones con el virus de la fiebre aftosa. PROYECTOS Código y título:AGL2004-00499. Estudio de la respuesta inmune innata en la infección con el virus de la fiebre aftosa (VFA): papel de las células dendríticas y natural killer (NK). Entidad financiadora: CSIC Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Sevilla Hidalgo, Noemí Código y título: (EPIZONE) FP6-2004-Food-3-A. Host responses to infections: FMDV immune response. Entidad financiadora: Network of Excellence for Epizootic Disease Diagnosis and Control

Duración: 2006-2009 Investigador responsable: Noemí Sevilla Investigadores participantes: 3 Principales resultados: Las poblaciones de virus RNA existen como distribuciones heterogéneas y dinámicas de genomas virales altamente relacionados entre sí pero no idénticos, denominadas cuasiespecies (Domingo et al., 2006, Curr Top Microbiol Immunol 299, 51-82). Esta alta variabilidad genética confiere a los virus RNA un enorme potencial de adaptación a nuevos ambientes y presiones selectivas. La heterogeneidad genética es debida a la baja fidelidad de copia de las RNA polimerasas virales durante la replicación de los virus, así como a la ausencia de actividad reparadora de errores. Recientemente, nuestro grupo ha puesto a punto un sistema para el estudio de infecciones por el VFA in vivo (Salguero et al., 2005, Virology

56

332, 384) en el que ratones C57BL/6 se infectan con VFA, mostrando síntomas microscópicos similares al hospedador natural y con altas tasas de mortalidad. Dados estos antecedentes, uno de los objetivos de este año ha sido el estudio de la evolución del VFA in vivo. Para ello estamos realizando una caracterización biológica y molecular de poblaciones del VFA resultantes de la replicación en ratón. Hemos centrado el estudio en las poblaciones del VFA presentes en páncreas, puesto que es uno de los órganos en los que se detecta mayor carga viral. Pases seriados de virus de páncreas en ratón lleva a una atenuación del fenotipo (no causa muerte o síntomas en ratón) en un solo pase. Por el contrario, el suero de dichos ratones muestra igual patogénesis que el virus parental C-S8c1. La secuenciación de virus de páncreas y virus de suero ha relevado que ambas secuencias son idénticas, lo que indica que el distinto comportamiento de ambas poblaciones virales se debe a la composición de genomas de la cuasiespecie. Estos datos demuestran el papel de la población viral como conjunto en el fenotipo y patogénesis de un virus RNA.

Otro de los objetivos, y principal de nuestro grupo de investigación es el estudio de la respuesta inmune frente a VFA en cerdos. En este trabajo se ha determinado la expansión y replicación del VFA en nódulos linfoides de cerdo, en otros órganos principales y piel mediante RT-PCR a tiempo real y plaqueo en células susceptibles a VFA durante los primeros 17 días de la infección. Los cerdos se infectaron en el rodete coronario con 105 PFUs de VFA C-S8c1. RNA viral se ha detectado a tiempos tempranos (día 1 post-inoculación (p.i.)) en el nódulo linfático eferente (preescapular) seguido de una expansión al bazo. En epitelio de aftas secundarias, el RNA viral se detecta 1 o 2 días más tarde que en nódulo linfático, lo que puede sugerir que el virus replica o se une a células linfoides, tipo células dendríticas, viaja de esta manera a nódulos linfáticos y de ahí se expande al resto de los tejidos. Asimismo, el virus se detecta a tiempos tardíos de la infección (17 días p.i.) en órganos linfoides sin viremia detectable, aunque con una infectividad específica baja. Esto puede suponer una forma de persistencia nunca descrita en cerdos para VFA, y que eventualmente puede suponer una fuente de virus para nuevos brotes de fiebre aftosa.

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI Díaz-San Segundo, F., Salguero, F.J., de Avila, A., Fernández de Marco, M., Sánchez-Martín, M.A. and Sevilla, N. (2006) Selective lymphocyte depletion by viral infection during the early stage of the immune response to Foot-and-Mouth disease virus (FMDV) infection in swine. J. Virol. 80: 2369.

N. Sevilla and J.C. de la Torre (2006) Arenavirus diversity and evolution: Quasispecies in vivo. Current topics Microbiol Immunol. 299: 315. Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas Díaz-San Segundo, F., Sanz-Ramos, M. and Sevilla, N. Replication of FMDV in swine: lymph nodes and spleen. Poster. Congreso 2006 Europic.Finnish Lapland. 26 Nov- 1 Dic. 2006 Autores: Sanz-Ramos, M.; Díaz-San Segundo, F., Escarmís, C.; Domingo, E. and Sevilla, N. Large Variations In Virulence Of Foot-And-Mouth Disease Virus (FMDV) Populations

57

Through Replication In Mice. Oral. Congreso 2006 Europic. Finnish Lapland. 26 Nov- 1 Dic. 2006 Tesis Doctorales, Diplomas de Estudios Avanzados, Tesinas, Proyectos y Trabajos de Fin de Carrera. Diplomas de estudios avanzados (DEA).: Nombre del doctorando: Marta Sanz-Ramos Rojo Título del DEA: Caracterización biológica y molecular del vfa en infecciones en ratón. Universidad: Universidad Autónoma de Madrid. Facultad de Ciencias.

58

RESPUESTA INMUNE DE PECES

Componentes González Torres, Lucia Sánchez Freire, Esther Tafalla Piñeiro, Carolina Investigador principal Correo electrónico: tafalla@inia.es OBJETIVOS 1. Determinación de los factores inmunes que se desatan frente a rabdovirus en peces, y que determinan la resistencia natural frente al virus.

2. Respuesta inmune frente a vacunas DNA en peces.

3. Uso de citoquinas como ayudantes en vacunas DNA

Principales líneas de I+D+I Uso de quimioquinas de trucha como adyuvantes en vacunas DNA frente a rabdovirus Estudio de los factores responsables de la protección natural, así como la conferida por la vacunación en peces

PROYECTOS Código y Título: AGL2004-07404-C02-02. Título del proyecto Mejora de las vacunas DNA frente a virus en acuicultura. Análisis de la respuesta inmune protectiva no-específica y específica en el modelo trucha / rabdovirus y modificación de las construcciones genéticas utilizadas hasta el momento. Entidad financiadora: Plan Nacional (MEC) Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Tafalla Piñeiro, Carolina Código y título:. EPIZONE. Adyuvants Entidad financiadora: UE (EPIZONE Network) Duración: 2006-2007 Coordinador: Piet Van Rijn Investigador responsable: Tafalla Piñeiro, Carolina CONVENIOS /CONTRATOS Código y título:. Programa de Vigilancia epidemiológica en animales acuáticos en aguas interiores de la Región de Murcia. Entidad financiadora:Consejería de Agricultura, Agua y Medio Ambiente de la Comunidad Autónoma de Murcia Duración: 2006-2007 Investigador responsable: Tafalla Piñeiro, Carolina Principales resultados: Se ha construido un plásmido de expresión eucariota que codifica para la interleuquina 8 (IL-8) de trucha arcoiris (pIL8+). Este plásmido, cuando se inyecta intramuscularmente, es capaz de hacer migrar mas células inmunes al sitio de inoculación y transcribe IL-8 en el músculo y en la sangre. Cuando este plásmido se co-administra con una

59

vacuna DNA frente al virus de la septicemia hemorrágica viral (VHSV) provoca una inmunomodulación, produciendo un aumento de la expresión de citoquinas pro-inflamatorias en el bazo. También se ha comprobado que la IL-8 activa la expresión de otras quimioquinas de tipo CC inducibles (CK5A, CK6, CK7A y CK7B), mientras que no tiene un efecto directo sobre la CK5B. Estas quimioquinas de tipo CC se inducen frente a una vacunación DNA, y el hecho de utilizar el plásmido pIL8+ como adyuvante hace que se module su expresión. Se ha estudiado la expresión diferencial de las distintas isoformas de la proteína Mx inducida por interferón que hay descritas en trucha. Para ello, se han puesto a punto RT-PCRs específicas para cada una de ellas. Se ha visto la expresión en la línea celular de trucha RTG2, en leucocitos totales, así como in vivo en respuesta a distintos estímulos (VHSV, Poly I:C, vacuna). Hemos comprobado que la expresión diferencial de las distintas isoformas está ligada principalmente al tipo celular y no al estímulo que se utilice, así las RTG2 o el músculo producen fundamentalmente Mx3 mientras que los leucocitos o los órganos hematopoiéticos producen las tres isoformas por igual.

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI

C. Tafalla, A. Estepa, J. Coll (2006) Fish transposons and its potential use in aquaculture. Journal of Biotechnology 123(4):397-412.

C. Tafalla, S. Rodríguez Saint-Jean, S. Pérez-Prieto (2006) Immunological consequences of the coinfection of brown trout (Salmo trutta) with infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). Aquaculture 256 (1-4): 15-22. N. Jimenez, J. Coll, J. Salguero, C. Tafalla (2006) Coinjection of a viral haemorrhagic septicemia virus (VHSV) DNA vaccine with interleukin 8 modulates the cytokine response in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Vaccine 24 (27-28): 5615-5626. C. Tafalla, V. Chico, L. Pérez, J. Coll , A. Estepa. In vitro and in vivo differential expression of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) Mx isoforms in response to viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) G gene, Poly I:C and VHSV. Fish & Shellfish Immunology. En prensa. E. Sánchez, J. Coll, C. Tafalla. Expression of inducible CC chemokines in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in response to a viral haemorrhagic septicemia virus (VHSV) DNA vaccine and interleukin 8. Developmental and Comparative Immunology. En prensa Otros artículos

Falco, A. Rocha, C. Tafalla, A. Estepa, J.M. Coll (2006) Posibles aplicaciones de los transposones de peces a la Acuicultura . Revista AquaTIC 24, Enero-Junio 2006. http://www.revistaaquatic.com/aquatic/art.asp?t=p&c=203]

60

Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas Coinjection of interleukin 8 with the glycoprotein gene from Viral Haemorrhagic Septicemia Virus (VHSV) modulates the immune response in rainbow trout Oncorhynchus mykiss. C. Tafalla, N. Jimenez, F.J. Salguero, J. Coll. 10th International Congress of the International Society of Developmental and Comparative Immunology. Charleston, SC, USA. Julio, 2006. Differential expression of mx isoforms in rainbow trout (oncorhynchus mykiss) in response to VHSV or other non-viral stimulants. C. Tafalla, V. Chico, J.M: Coll, A. Estepa. 10th International Congress of the International Society of Developmental and Comparative Immunology. Charleston, SC, USA. Julio, 2006. Two distinct groups of type I interferons are present in fish with one resembling mammalian interferon alpha. J. Zou, C. Tafalla, J. Truckle, C. Secombes. 10th International Congress of the International Society of Developmental and Comparative Immunology. Charleston, SC, USA. Julio, 2006. Otros: organización de congresos, etc. Se ha presentado al INIA una patente: Uso de la interleuquina 8 de trucha arcoiris como adyuvante o inmunoestimulante en peces.

61

BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE PRIONES

Componentes Alamillo Gordo, Elia Cano Benito, María Jesús Espinosa, Juan Carlos González Torres, Lucia Herva Moyano, Maria Eugenia Losa Román, Nuria de la Lorenzo Balboa, Patricia Padilla de Beer, Danielle Pozas Castañares, Jennifer Relaño Ginés, Aroa Torres Trillo, Juan María. Investigador principal Villa Diaz, Ana Correo electrónico: jmtorres@inia.es OBJETIVOS

1. El objetivo general del grupo es avanzar en el conocimiento de la biología de los priones mediante el desarrollo de modelos basados en ratones transgénicos y cultivos celulares que expresan diferentes secuencias de la PrP.

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Desarrollo de bioensayos de alta sensibilidad para la detección de priones y el diagnostico de las enfermedades producidas por estos agentes infecciosos.

• Estudio de los elementos moleculares que determinan la barrera de transmisión de las diferentes cepas de priones.

• Estudio de los elementos moleculares implicados en la replicación y en la patogénesis de los priones.Discriminación de las diferentes cepas de priones en especies ganaderas y su capacidad de transmisión a humanos. Diseño y evaluación de nuevas estrategias terapéuticas contra los priones.

PROYECTOS Código y título: QLRT-2001-01309 “European project to study BSE strain in sheep”. Financiación: UE. Duración: 2003- 2007 Investigador principal: Juan María Torres Código y título: EET2002-05140 “Estudio de la transmisibilidad de la EEB y del scrapie a la especie porcina”. Financiación: Plan Nacional de I+D+I Duración: 2003- 2006 Investigador principal: Juan María Torres Código y título: EET2002-05168-C04-02 “Estudio neuropatológico de un modelo experimental murino de encefalopatía espongiforme bovina”. Financiación: Plan Nacional de I+D+I Duración: 2003- 2006 Investigador principal: Alejandro Brun

62

Código y título: CT2004-506579 FOOD PRO Network of Excellence of the Prion diseases “Neuroprion” Financiación: UE Duración: 2003- 2008 Investigador principal: Juan María Torres Código y título: AGL2005-03066 “Desarrollo de nuevos bioensayos celulares susceptibles a la replicacion de los priones” Entidad Financiadora: Plan Nacional de I+D+I Duración: 2005 - 2008 Investigador principal: Juan María Torres Código y título: FP6-2004-FOOD3-023183 ”Understanding prion strains and species barriers and devising novel diagnostic approaches” Entidad Financiadora: UE Duración: 2006 - 2009 Investigador principal: Juan María Torres Código y título: RTA2006-00091 “Estudio de la infectividad de la EEB en humanos después de ser pasada por otras especies de interés ganadero utilizando bioensayos basados en ratones transgénicos. Implicaciones en seguridad alimentaria”. Entidad Financiadora: Plan Nacional de I+D+I Duración: 2006 - 2008 Investigador principal: Juan María Torres Código y título: FP6-2005-FOOD4B-036353 “Proposal for improvement of goat TSE discriminative diagnosis and susceptibility based assessment of BSE infectivity in goat milk and meat”. Entidad Financiadora: UE Duración: 2006 - 2010 Investigador principal: Juan María Torres

CONVENIOS Código y título: CC05-02 Preparación de un homegenado de cerebro de Hamster inoculado con la cepa de prion 263K Empresa/Administración financiadora: Instituto Grifols SA Duración: 2005 2007 Investigador responsable: Juan Maria Torres Código y título: CC05-036 Development of a blood test to identify animals that are carriers of the Q171 genotype in the bovine PrP gene based on the 2A11 monoclonal antibody Empresa/Administración financiadora: Bio-Rad Duración: 2005-2007 Investigador Responsable: Juan Maria Torres Principales resultados: Durante este año nuestro grupo ha obtenido una importante cantidad de resultados fruto del gran esfuerzo de sus componentes en el desarrollo de los múltiples proyectos en curso. Aunque la enumeración de todos y cada de estos resultados seria imposible en este espacio, a continuación se enumeran una pequeña muestra de estos:

• El hecho de que BSE infecte con gran eficiencia a ovejas y cabras y que la mayoría de las especies ganaderas hayan sido alimentadas durante mucho tiempo con piensos contaminados con el agente causal de la EEB hacen sospechar que estas especies

63

hayan podido ser infectadas por EEB de forma natural del modo semejante a como parece haber ocurrido en cabra (Eloit et al., 2005). De hecho, recientemente se han descrito “estirpes raras” de Scrapie que algunos investigadores sugerimos que podría corresponder a EEB en oveja. En este contexto nuestro proyecto europeo QLK3-2002-01309 tiene como objetivos estudiar la transmisibilidad de EEB a ovejas en condiciones naturales y caracterizar el prion generado tras la infección experimental de ovejas con EEB. Nuestros resultados demuestran que EEB infecta de forma muy eficiente a ovejas, tanto por vía intracerebral como oral, y que el nuevo prion generado mantiene ciertas características bioquímicas inherentes a EEB. La inoculación de EEB pasada por oveja en nuestros modelos transgénicos bovinos ha demostrado que este prion posee una mayor virulencia (mayor infectividad que la de la EEB original) y que esta infectividad se mantiene a lo largo de los pases, conservando propiedades características de EEB (ver articulo 11; Espinosa et al., J. Virol 2007). Paralelamente, hemos observado que la inoculación de nuestro modelo transgénico bovino con priones procedentes de la EEB en otras especies (como cerdo, ratón y humano) se produce sin barrera de transmisión gracias a la conservación de propiedades biológicas inherentes de la EEB. Así mismo, la PrPSc procedente de la EEB al pasar por diferentes especies (humano, ratón, cerdo, cabra) mantiene sus propiedades bioquímicas e histopatologicas (artículo en preparación).

• También hemos podido demostrar que BSE es capaz de mantener en su memoria

ciertas caracteristicas después de pasar en oveja, pero aumentando su virulencia en otras especies de interés ganadero (porcina, caprina, ovina y bovina). La sospecha de que este nuevo prion “BSE de oveja” pueda estar presente en la cabaña ovina tiene una gran implicación en Sanidad Animal y una importante repercusión en Salud Publica. En el caso del cerdo, nuestro grupo ha demostrado que es la especie más resístete a la infección con BSE de vaca y totalmente resistente al Scrapie clásico de oveja. Sin embargo, BSE de oveja muestra una gran infectividad en transgénico de cerdo (Articulo en preparación).

• Se considera que scrapie no se transmite a la especie humana, al menos de forma

natural. Sin embargo, la EEB se transmite a humanos produciendo la nueva variante de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (vCJD). Una cuestión de gran importancia socioeconómica y sanitaria surge inmediatamente: ¿Los priones generados por la infección de EEB en otras especies, como la oveja, la cabra o el cerdo, son capaces de infectar a humanos? o lo que es lo mismo ¿mantiene la EEB su capacidad de transmisión a humanos después de pasar por otras especies al igual que conserva características inherentes a EEB? ¿Puede aumentar la capacidad de la EEB de infectar a humanos al pasar por otras especies? El dar respuesta a estas cuestiones es el objetivo principal del presente proyecto. Para ello disponemos de los modelos ideales para este tipo de análisis. Nuestro resultados preliminares indican que la BSE de oveja parece tener una mayor infectividad en ratones transgénicos humanos que la BSE de vaca, lo que de confirmarse tendría una gran repercusión en Salud Pública.

Otros resultados de interés: Hemos demostrado que la PrPC puede tener un papel importante en la regulación del ciclo celular (ver articulo 6).

64

Hemos publicado varios artículos que aportan importante información sobre el mecanismo patho-biologico de los priones utilizando nuestros modelos de ratones transgenicos (ver articulos 5, 8, 9 y 10). Hemos avanzado en el conocimiento de la progresión de la infectividad en tejidos de vacas asintomáticas infectadas con BSE, demostrando que esta infectividad está básicamente restringida al sistema nervioso y por tanto mucho menos dispersa que scrapie en oveja. Este resultado es de gran importacia a la hora de valorar los tejidos de riesgo en vacas (ver articulo 12). Hemos desarrollado un test ELISA en sangre capaz de identificar ovejas portadoras del genotipo Q171 resistentes a scrapie (Articulo enviado a publicar). Este test ha sido patentando (Ver sección de patentes) y pronto será comercializado por Bio-Rad.

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI E Pericuesta, MA Ramirez, A Villa-Diaz, A Relano-Gines, JM Torres, M Nieto, B Pintado, A Gutierrez-Adan. The proximal promoter region of mTert is sufficient to regulate telomerase activity in ES cells and transgenic animals. Reproductive Biology and Endocrinology 4:5-17 (2006). Francisco J. Salguero, Fayna Dıaz-San Segundo, Alejandro Brun, Maria J. Cano, JM. Torres. Comparison of three monoclonal antibodies for use in immunohistochemical detection of bovine spongiform encephalopathy protease-resistant prion protein. J Vet Diagn Invest 18:105–108 (2006) O Andreoletti; N Morel; C Lacroux; V Rouillon; C Barc, G Tabouret, P Sarradin, P Berthon, P Bernardet, J Mathey, S Lugan, P Costes, F Corbiere, JC Espinosa, JM Torres, J Grassi, F Schelcher and F Lantier. Bovine spongiform encephalopathy agent in spleen from an ARR/ARR orally exposed sheep. J General Virology 87:1043-1046 (2006). JC Espinosa; M. Morales; ME Herva; JM Torres. Transmission of bovine spongiform encephalopathy (review). Future Virology 1(3): 393-402 (2006). Rodriguez A, Perez-Gracia E, Espinosa JC, Pumarola M, Torres JM, Ferrer I: Increased expression of water channel aquaporin 1 and aquaporin 4 in Creutzfeldt-Jakob disease and in bovine spongiform encephalopathy-infected bovine-PrP transgenic mice. Acta Neuropathol 112(5):573-85 (2006). 6.- SF. Martín, María E. Herva, Juan C. Espinosa, B Parra, J Castilla, A Brun and JM. Torres. Cell expression of a four extra octarepeat mutated PrPC modifies cell structure and cell cycle regulation. FEBS Letters 580 (17): 4097–4104 (2006). Fernandez-Borges N, Brun A, Whitton JL, Parra B, Diaz-San Segundo F, Salguero FJ, Torres JM, Rodriguez F. DNA vaccination can break immunological tolerance to PrP in wild-type mice and attenuates prion disease after intracerebral challenge. J Virol. 80(20):9970-9976 (2006). A. Rodriguez; M. Martin; JL Albasanz; M. Barrachina; JM. Torres; JC. Espinosa; I Ferrer. Adenosine A1 receptor expression and activity is increased in the cerebral cortex in

65

Creutzfeldt-Jakob disease and in bovine spongiform encephalopathy-infected bovine-PrP mice. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology 65(10):964-975 (2006). Diaz-San Segundo F, Salguero FJ, de Avila A, Espinosa JC, Torres JM, Brun A. Distribution of the cellular prion protein (PrP(C) in brains of livestock and domesticated species. Acta Neuropathol (Berl). 112(5):587-95 (2006). Agustin Rodríguez; Mairena Martin; Jose Luis Albasanz; Marta Barrachina; Juan Carlos Espinosa; Juan Maria Torres; Isidre Ferrer. Group I mGluR signaling in BSE-infected bovine-PrP transgenic mice. Neuroscience Letters 410 : 115–120 (2006). JC. Espinosa, O. Andréoletti, J. Castilla, ME. Herva, M. Morales, E. Alamillo, F. Díaz San-Segundo, C. Lacroux, S. Lugan, FJ. Salguero, J. Langeveld and JM. Torres. Sheep-passaged BSE agent exhibits altered patho-biological properties in bovine-PrP transgenic mice. J. Virol 81(2):835–843 (2007). Juan Carlos Espinosa, Mónica Morales, Joaquín Castilla, Mark Rogers and Juan María Torres. Progression of prion infectivity in asymptomatic cattle after oral BSE challenge. J.Gen. Virol. (In Press). Inventores (p.o. de firma): J.M. Torres, J. Grassi, J.M. Bilheude, A. Brun, N. Morel Titulo: Procédé d'identification du genotipe en position171 de la protéine prion d'ovin ainsi que trousses de mise en oeuvre de ce procédé. Nº de Solicitud: 05 11937 País de Prioridad: Francia Fecha de Prioridad: 25/11/2005 Entidad titular: INIA, Bio-Rad, CEA Países a los que se ha extendido: Europa (25/11/2006) Empresa/s que la están explotando: BIO-RAD Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas Autores: J.M. Torres, J.C. Espinosa, O. Andréoletti, M.E. Herva, E. Alamillo, C. Lacroux Título: BSE Agent shows an enhanced virulence after passage in sheep Tipo de Participación: Conferencia Congreso: PRION2006 Lugar de Celebración: Turin (Italia) Fecha: Oct 2006 Autores: M.E. Herva, J.C. Espinosa, E. Alamillo, O. Andréoletti and J.M. Torres Título: Discrimination between Scrapie and BSE in sheep using porcine PRP-transgenic mice Tipo de Participación: Comunicación Congreso: Prion 2006 Lugar de Celebración: Turin (Italia) Fecha: Oct 2006 Autores: J.C. Espinosa, O. Andréoletti, J. Castilla, M.E. Herva, M. Morales, E. Alamillo, C. Lacroux, S. Lugan, J. Langeveld and J.M. Torres1 Título: sheep-passaged bse analysed in BOPRP-TG110 mice exhibits bse strain features and accelerated disease course allowing their discrimination from scrapie Tipo de Participación: Comunicación Congreso: Prion 2006 Lugar de Celebración: Turin (Italia) Fecha: Oct 2006

66

Autores: J.M. Bilheude, A.Brun, N.Morel, S.Henaux , O.Andreoletti, J.Grassi and J.M.Torres Título: Characterization of the PRP Polymorphism in position 171 by an elisa test, Tipo de Participación: Comunicación Congreso: Prion 2006 Lugar de Celebración: Turin (Italia) Fecha: Oct 2006 Tesis Doctorales, Diplomas de Estudios Avanzados, Tesinas, Proyectos y Trabajos Fin de Carrera -Diploma de Estudios Avanzados: Aroa Relaño Ginés. “Utilización de células madre del Sistema Nervioso Central como terapia en enfermedades ocasionadas por priones”. Universidad Autónoma de Madrid (U.A.M), Facultad de Ciencias. Director de Tesis: Juan María Torres Trillo. -Diploma de Estudios Avanzados: María Eugenia Herva. “Desarrollo de bioensayos altamente sensibles para la detección de priones”. Universidad Autónoma de Madrid (U.A.M), Facultad de Ciencias. Director de Tesis: Juan María Torres Trillo.

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos -Juan María Torres: Profesor en el "XV Curso Internacional sobre Enfermedades Exóticas". Centro de Investigación en Sanidad Animal, CISA-INIA. Valdeolmos. -Juan María Torres :Profesor del:”Master de Salud Pública” Escuela Nacional de Sanidad. -Juan María Torres: Tutor Externo de la asignatura de “Estancias” tutelando 200 horas de practicas a alumnos de 2º ciclo de la Fac . Veterinaria de la Univ. Complutense. -Juan María Torres: Tutor Beca FINNOVA (Lucia González Torres) Informes -Juan María Torres. Evaluación de proyectos de investigación:

-Varias convocatorias del Plan Nacional de I+D+I

-Varias convocatorias de NoE neuroprion

-Convocatoria “TSE Research requirements” DEFRA (UK)

- ASSOCIATION FRANCAISE CONTRE LES MYOPATHIES (Francia). APPLICATION FOR RESEARCH GRANT

-Juan Maria Torres. Referee de varias revistas científicas:

• J. Neurochemestry • J. Gen. Virol. • FEBS letter

67

• FASEB • J. Neuroscience

Servicios

-Juan Maria Torres. Seguimiento y participación en el desarrollo del convenio CC03-034 (INIA-FEDENCA-FUNDACIÓN BIODIVERSIDAD-SYVA) Otros: organización de congresos, etc. -Juan Maria Torres. Member of the executive committee of NoE neuroprion

-Juan Maria Torres. Member of the scientific committee of the International Congress “Prion 2006” and “Prion 2007”

ESTANCIAS EN EL GRUPO DE PERSONAL DE OTRAS ENTIDADES: 1. -Dr. Olivier Andréoletti y Dra. Caroline Lacroux UMR959 INRA-ENVT Institut de

la Recherche Agronomique Toulouse-France. Dos estancias de una semana en Julio 2006 y en Septiembre 2006.

2. -Carlos Maluquer de Motes Porta. Dep. Microbiology, Faculty of Biology. University of Barcelona. Varias estancias cortas.

3. -Mónica Morales Camarzana. SYVA (Enero-Abril 2006). 4. -Juan Ignacio Imbaud. SYVA (Mayo-Julio 2006). 5. -Jorge Barrios. SYVA (Agosto-Noviembre 2006)

68

ANIMALARIO. PATOLOGÍA EXPERIMENTAL.

Animalario Benavente Pintor, Ángela. Díaz Gismera, Noemí. Montón Redondo Rosa María. Salguero Bodes, Francisco Javier. Jefe de Sección Sánchez Lobo, Iria. Auxiliar animalario Sánchez Martín, Miguel Ángel. Veterinario Sánchez Ramírez, Víctor Manuel. Veterinario Viva Álvarez, Francisco José. Auxiliar animalario Viva Barroso, Emilio. Auxiliar animalario Correo electrónico: animalario@inia.es Patología experimental Benito Peña, Alberto. Veterinario González Guirado, Antonia María. Medina Ramos, Alejandra. Técnico laboratorio ) Salguero Bodes, Francisco Javier. Investigador Principal Correo electrónico: salguero@inia.es OBJETIVOS

1. Mantenimieto del bienestar y de la salud de los animales estabulados en el animalario NCB3 del CISA

2. Estidio de la patogenia y patología de enfermedades de importancia en ganadería.

3. Colaboración Cientifica y Científico Técnica en Patología animal en experimentaciones IN VIVO de proyectos en ejecución o colaboración en el CISA.

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I 1.Estudio de la patogenia de la respuesta inmune en enfermedades víricas porcinas: Peste Porcina Africana, Peste Porcina Clásica, SRRP y enfermedades priónicas 2.Estudio de patogenicidad de cepas de Peste Porcina Clásica y aislados de Peste Porcina Africana. 3.Apoyo a grupos de investigación que precisen del reactivo biológico animal de experimentación para sus fines científicos.

PROYECTOS Código y título: PORCIVIR. Estudio de enfemedades víricas porcinas. Consolider Ingenio 2010 Entidad financiadora: MCyT Duración: 2006-2011 Investigador responsable: Mariano Domingo Álvarez

69

Código y título: Estudios de patogenia, inmunidad y control del virus de la fiebre del Valle del Rift Entidad financiadora: MCyT Duración: 2005-2008 Investigador responsable: Alejandro Brun Torres Código y título: Carazterización de nuevos inmunógenos del virus de la peste porcina africana. Estudio de la respuesta inmune inducida en el cerdo. Entidad financiadora: MCyT Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Esther Blanco Lavilla Código y título: Encefalopatía espongiforme bovina. Rutas de programación orgánica de priones patogénicos (PRPRES) y respuesta inmune. Entidad financiadora: MCyT Duración: 2003-2006 Investigador responsable: José Carlos Gómez-Villamandos Código y título: OT01-002. Desarrollo de metodologías para diagnóstico de la Peste Porcina Africana, diagnóstico de enfermedades exóticas y actuaciones ante emergencias sanitarias Entidad financiadora: INIA Duración: 2001-2006 Investigador responsable: Marisa Arias Neira Principales resultados: En el animalario NCB3 del CISA-INIA, durante el año 2006 se han llevado a cabo más de 30 ensayos de experimentación “in vivo”, procedentes de proyectos en ejecución en el CISA y/o colaboraciones con otras instituciones realizando la gestión necesaria para la realización de los mismos y realizando apoyo clínico y veterinario. Durante el 2006 se han realizado experimentos en un total de más de 4.000 ratones, 80 cerdos, 24 conejos, 8 ovinos, y aproximadamente 200 truchas arco iris, inoculados o inmunizados frente a diferentes enfermedades, siendo la Sección del Animalario del CISA, la encargada del mantenimiento y dela vigilancia de la salud y el bienestar animal así como las inoculaciones experimentales, tomas de muestras, etc. En estos experimentos se han utilizado diferentes agentes etiológicos como los productores de la Peste Porcina Africana, Peste Porcina Clásica, Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino, Fiebre del Valle del Rift, Influenza Porcina, Fiebre aftosa, Enfermedad vesicular porcina, Teschovirus porcinos, Virus de la septicemia hemorrágica en peces y Encefalopatías Espongiformes Transmisibles. Estos experimentos en animalario se han realizado dentro de proyectos en ejecuci´n en el CISA, el Departamento de Biotecnología del INIA, colaboracones científicas con el Cresa (Universidad Autónoma de Barcelona), el CMB-SO (CSIC-UAM), y el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación Asimismo es una parte de los proyectos y colaboraciones se han realizado estudios de colaboración científica y científico-técnica en patología animal. Se han realizado estudios histopatológicos de 468 animales inoculados con diferentes agentes, en colaboración con numerosos investigadores del CISA-INIA, de la Universidad de Córdoba, del CBM-SO (CSIC-UAM), de la Universidad de Skopje (F.Y.R.O.M.). Estos resultados han dado lugar a distintas publicaciones y se han presentado en diferentes reuniones y congresos de la especialidad.

70

Entre los resultados más relevantes:

• Se ha realizado un estudio de la presencia de la proteína prion celular (PrPc) en diferentes especies de mamíferos, observándose una distribución similar en casi todas las especies que sufren y que no sufren encefalopatías espongiformes transmisibles. Igualmente, se ha puesto a punto una técnica de detección de la PrPsc en bovinos afectados por la encefalopatía espongiforme bovina mediante la utilización del anticuerpo monoclonal 2A11 desarrollado en el CISA-INIA. Por último, en colaboración con la Universidad de Córdoba se ha estudiado la hiperfosforliación de la proteína tau en un modelo de Encefalopatía Espongiforme Bovina basado en ratones transgénicos que expresan la PrP bovina

• Se han realizado estudios de patogenia de la peste porcina clásica, en concreto en lo

referente a los cambios neuropatológicos y la respuesta inmunitaria, estudiando igualmente la patogenicidad de las cepas presentes en las últimas epizootías de esta enfermedad en nuestro país (1997 y 2001). También, en colaboración con el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación, se han realizado inoculaciones con cepas aisladas de Teschovirus porcinos para estudiar la patogenicidad y las interferencias en el diagnóstico de otras enfermedades porcinas.

• Se han realizado varios experimentos para valorara vacunas de nueva generación

frente a la peste porcina africana, dentro del proyecto coordinado en el que participa el CISA, el INIA-Biotecnología y el Cresa, observándose un retraso en la aparición de síntomas y lesiones típicas de la peste porcina africana en cerdos inmunizados experimentalmente; se han estudiado los cambios en las subpoblaciones linfocitarias en la infección por el virus de la fiebre aftosa, que sufren una depleción transitoria asociada a la infección; se ha realizado un estudio histopatológico y de secunciación de circovirus porcinos aislados en la antigua república yugoslava de Macedonia, siendo la primera descripción de esta enfermedad en este país.

• Se han realizado inmunizaciones experimentales con ADN frente a la fiebre del valle

del Rift en ovejas y se ha dado apoyo científico técnico en anatomía patológica de este y otros proyectos como las inoculaciones con virus salvajes de influenza porcina en cerdos para el estudio de la patogenia de la enfermedad; la valoración de la eficacia de inmunización con ADN en encefalopatías espongiformes transmisibles para romper la inmunotolerancia, en colaboración con el Cresa (UAB).

• Se han realizado numerosas inmunizaciones en conejos para obtención de sueros

policlonales frente a proteínas de los virus de la peste porcina africana, enfermedad vesicular porcina y fiebre del valle del Rift, para la obtención de reactivos biológicos necesarios para los Centros de Referencia de enfermedades del CISA-INIA

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI F. Díaz-San Segundo, F.J. Salguero, A. De Ávila, J.C. Espinosa, J.M. Torres, A. Brun. (2006). Distruibution of the celular prion protein (PRPC) in brains of Livestock ando domesticated species anta neurolathologia (BERL.), 112, 587-595.

71

N. Fernandez-Borges, A. Brun, J.L. Whitton. B- Parra, F. Díaz-San Segundo, F.J. Salguero, J.M. Torres, F. Rodríguez. (2006). DNA Vaccination can break Immunological Tolerance To PRP in Wild-Type Mice and atenuantes prion disiases after intracerebral challenge journal of Virology, 80, 9970-9976.

J.C. Gómez-Villamandos, I. García de Leaniz, A. Núñez, F.J. Salguero, J.L. Romero-Trevejo, P.J. Sánchez-Cordón. (2006). Neuropathological study of experimental classical swine fever. Veterinary Pathology, 43, 530-540.

N. Jimenez, J. Coll, F.J. Salguero, C. Tafalla (2006). CO-INJECTION OF INTERLEUKIN 8 With the glycoprotein gene from viral haemorrhagic septicemia virus (VHSV) modulates the cytokine response in rainbow trout (oncorhynchus mykiss). vaccine, 24, 5615-5626.

M.J. Bautista, J. Gutiérez, F.J. Salguero, M. Fernández de Marco, J.L. Romero-Trevejo, J.C. Gómez-Villamandos (2006). Hyperphosphorilated TAU protein in experimental BSE: immunohistochemical and Subcellular changes. veterinary Microbiology, 115, 293-301.

F.J. Salguero, F. Díaz-San Segundo, A. Brun, M.J. Cano, J.M. Torres. (2006). Comparison of Three Monoclonal Antibodies for use in immunohistochemical detection of bovine spongiform encephalopathy protease resistant prion protein journal of Veterinary diagnostic investigation, 18, 106-109

F. Díaz-San Segundo*, F.J. Salguero*, A. de Ávila, M. Fernández de Marco, M.A. Sánchez-Martín , N. Sevilla (2006). Selective Lymphocyte depletion by Viral infection during the early stage of immune response to Foot-and-Mouth Disease Virus (FMDV) infection in Swine journal of virology, 80, 2369-2379.

Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas F.J. Salguero, P. Fernández-Pacheco, J. Fernández, M.A. Sánchez-Martín, V. Sánchez, M. Fernández de Marco, M. Arias. Experimental Inoculation with Clasical Swine Fever Virus (ISOLATE SPAIN 2001) in pigs: a clinical, pathological and laboratory diagnostics study. 24TH Meeting of the European Society of Veterinary Pathology. Edinburgh, Scotland, 2006

T. Ristoski, M. Knezevic, L. Carrasco, F.J. Salguero, A. Nuñez, J. Tosevski. Immunohistochemical detection and distribution of the viral GP55 antigen in pigs naturally infected with classical swine fever virus. 24TH meeting of the european society of veterinary pathology. Edinburgh, Scotland, 2006

E. Pérez-Martín, J. Arguilaget, M. Pérez-Filgueira, C. Gallardo, J. Pujols, M. Nofrarias, I. Díaz, N- Fernández-Borges, F.J. Salguero, E. Blanco, J.M. Escribano, F. Rodríguez. Development of new DNA Vaccine Strategies Against African Swine Fever Virus. 7TH Internacional Congress of Veterinary Virology. Lisboa, Portugal, 2006.

OTRAS ACTIVIDADES

F.J. Salguero: • Realización de informes anuales de uso de animales de experimentación ara el

Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación y el ICLAS (International Council for Laboratory Animal Sciences)

72

• Profesor del XV Curso Internacional de Enfermedades Exóticas Animales. Noviembre 2006. CISA-INIA

• Tutor externo de alumnos de la Facultad de Veterinaria de la Universidad Complutense de Madrid (200 horas/alumno). Asignatura Estancias

• Profesor asociado de Enfermedades Infecciosas, Zoonosis y Salud Pública de la Facultad de Veterinaria de la Universidad Alfonso X el Sabio

• Miembro de la Comisión de Bioética del INIA M.A. Sánchez-Martín:

• Profesor del XV Curso Internacional de Enfermedades Exóticas Animales. Noviembre 2006. CISA-INIA

• Miembro de la Junta Directiva de la Sociedad Española de Ciencias del Animal de Laboratorio

73

SERVICIO DE SECUENCIACIÓN

Componentes Madueño Amor Encarnación Nuero Oscar Correo electrónico: amor@inia.es OBJETIVOS

1. El Servicio de Secuenciación del CISA ofrece sus servicios a investigadores del Centro, a los de todo el Instituto, OPIs y empresas privadas.

2. Durante el año 2006 se han realizado 188 registros que comprenden 5352 trabajos

(reacciones de secuenciación de ADN, determinación de la concentración y pureza del ADN, purificación de productos de PCR y análisis de fragmentos).

PRINCIPALES LINEAS DE I+D+I

• El servicio de secuenciación del CISA presenta dos tipos de actividades principalmente: Secuenciación automática de DNA y Análisis de fragmentos de DNA. Incluidas en ambas técnicas está la obtención de DNA, purificación y cuantificación para su posterior análisis.

• Para la secuenciación se pueden utilizar cebadores universales, aportados por el servicio o cebadores específicos aportados por el usuario. Los reactivos y kits para la secuenciación son aportados por el servicio.

• Se ofrece asistencia técnica para que el usuario pueda consultar cualquier duda sobre los procedimientos de secuenciación.

• El análisis de fragmentos se aplica entre otros en el descubrimiento y validación de SNPs, detección de mutaciones, detección de heterocigotos, identificación de allelos, etc.

• En todas estas actividades se aplican programas bioinformáticos para su análisis. • El servicio de secuenciación del CISA permite potenciar los estudios moleculares

dirigidos a la diagnosis y prevención de patógenos animales de alto riesgo, exóticos y con gran impacto económico; así como también los estudios moleculares derivados de la investigación básica llevada a cabo por todo el personal investigador del INIA.

• También presta su apoyo a laboratorios de Universidades, Organismos Públicos de Investigación, Hospitales y Empresas.

• Pretende facilitar las actividades del CISA en el campo de la biología molecular en todos sus aspectos: identificación de aislados y nuevas cepas virales en caso de nuevos brotes epidémicos, estudios de filogenia viral, estudios de mutaciones virales, etc.

• Así mismo, participa en el desarrollo diagnóstico en sanidad animal, publicaciones y establecimiento de nuevas colaboraciones con otros centros de investigación.

• Interviene directamente en los estudios de mejora genética de especies domésticas y la conservación de recursos genéticos animales ayudando a seleccionar los caracteres relacionados con la calidad de los productos, funcionalidad y resistencia a enfermedades.

74

• Finalmente, está participando en estudios de detección e identificación de virus, viroides y fitoplasmas de especies vegetales de interés económico.

75

PROYECTOS Estos son alguno de los proyectos en los que ha intervenido el servicio de

Secuenciación:

- QLK2-2002-01719 "Foot-and-Mouth Disease Virus: The molecular basis of tissue tropism and persistence".

- Investigador responsable: Dra. Margarita Sáiz - CAL01-018 “Determinación de la infectividad de diferentes tejidos de interés

alimentario procedentes de animales infectados con BSE utilizando un modelo basado en ratones transgénicos. Investigador responsable: Dr. Juan María Torres

- CT04-506579. Investigador responsable: Dr. Juan María Torres - CICYT-AGL2000-1229. Detección de QTLs y genes candidatos que afectan a

caracteres reproductivos de interés económico en el porcino. Investigador responsable: Carmen Rodríguez

- CC01-0045 Creación de nuevas estirpes de ganado porcino. Investigador responsable: Carmen Rodriguez

- Diseño óptimo de programas de conservación mediante el uso conjunto de estratégias clásicas y nuevas tecnologías: estudios teóricos y prácticos. Investigador responsable: José Luis Campo Chavarri*

- RTA 02-35: “Deteccion de enterovirus en muestras ambientales” Investigador responsable: Dr. Juan Carlos Sáiz

- 07M/0023/2002 (CAM): “Contaminacion ambiental por virus entericos animales, derivada de residuos de explotaciones ganaderas de la comunidad de Madrid” Investigador responsable: Dr. Juan Carlos Sáiz

- AGL04-7404 SE : “Vacunas DNA en acuicultura: estudio de la respuesta inmune celular en el modelo de trucha arco iris/ rebdovirus. Investigador responsable: Dra. Carolina Tafalla.

- AGL04-2132 SE: Epizootiología molecular de la Influenza. Investigador responsable: Dr. Gustavo del Real

- CC03-017 SE Investigador responsable: Dr. Gustavo del Real - B1002-4091 SE: Caracterización de la respuesta inmune. Investigador responsable:

Dr. J. Barcena. - B1004-6114 SE : Caracterización de las señales de RNA. Investigador responsable:

J. Gomez - CT02-1309 SE: European project to study BSE strain .. Investigador responsable:

Dr. J.M.Torres - OTO1-002 SE : Desarrollo de metodologías para el diagnóstico de la peste porcina

africana, diagnóstico de enfermedades exóticas y actuaciones ante emergencias sanitarias. Investigador responsable: Dra. Mª Luisa Arias.

- UE-LR-PPA03 SE : Laboratorio de referencia de la Unión Europea para la peste porcina africana. Investigador responsable: Dra. Mª Luisa Arias

- CTO2-1719 SE: FMD tropism. Foot and mouth disease virus... Investigador responsable: Dra. M. Saiz

- RTAO3-201 SE: Estudios de patogenia,inmunidad y control. Investigador responsable: Dra. M. Saiz

76

SERVICIO DE SEGURIDAD BIOLÓGICA Y MANTENIMIENTO

Componentes Gómez Perochera, Elena Pascual Álvarez Gonzalo. Jefe del Servicio Subcontratas: Dalkia Indulisa Serygur Flor de la Torre Correo electronico: gpascual@inia.es INGENIERÍA Y MANTENIMIENTO TÉCNICO Diseño y mejora de instalaciones, Control de la presión negativa y de cajas de filtración de aire, Control del sistema de descontaminación de efluentes, sistemas de doble frontera e incineración, Asesoramiento nacional e internacional en bioseguridad y biocontención, Chequeos sobre Cabinas de Seguridad Biológica, Campanas de Extracción de Gases e Incubadores, Chequeos de Grupos Electrógenos, Transformadores, UPS´s, líneas de fluidos, calderas de vapor, agua caliente sanitaria, compresores de aire, desagües, líneas de CO2, propano, Red de agua desionizada, aire comprimido, vacío, nitrógeno, gasoil, etc., Control de equipos MiliQ y MiliRo, Control del funcionamiento de duchas de descontaminación, etc MANTENIMIENTO MEDIOAMBIENTAL Y GESTIÓN TÉCNICA Chequeos de emisiones en calderas, vertidos de efluentes y torres de refrigeración, Recogida, almacenamiento y gestión de residuos biosanitarios, tóxicos, peligrosos y radiactivos, Incineración y tratamiento químico, Supervisón de la Instalación radiactiva, Validación técnica de autoclaves de vapor y OxEt, etc. PREVENCIÓN DE RIESGOS Gestión de equipos de protección individual, Control y supervisión de riesgos en calderas, recipientes a presión, incinerador, elevadores, electricidad, gases y fluidos e incendios, Seguimiento y control de riesgos en tareas biopeligrosas, Investigación de incidentes y accidentes, Elaboración e Implantación de evaluaciones de riesgos, manuales, procedimientos y fichas de seguridad, Formación e información sobre riesgos y medidas preventivas, etc. EQUIPO DE SEGURIDAD BIOLÓGICA Recepción y envío nacional e internacional de muestras biológicas, Empaquetado y etiquetado de muestras, Controles biológicos en autoclaves de vapor y OxEt, Descontaminaciones químicas, Test de integridad de filtros absolutos, Cambios de prefiltros y filtros HEPA, Controles de estanqueidad de sistemas electro-neumáticos,

77

Descontaminaciones de vehículos de riesgo, Desinsectaciones y desratizaciones, Controles de entradas y salidas, Formación en Seguridad Biológica, Elaboración de protocolos de Seguridad Biológica, etc.. ACTUACIONES TÉCNICAS ESPECIFICAS (2006) AREA DE ALTA CONTENCIÓN BIOLÓGICA Instalación de nuevos filtros HEPA H14 en salida de aire, Elaboración del nuevo Reglamento de la Instalación Radiactiva y de protocolos de trabajo y seguridad para trabajos con Clamidea, Salmonella y New Castle, Revisión de la instalación contraincendios, Validaciones físicas y microbiológicas, Notificación a la autoridad laboral vigente de nuevos agentes biológicos, Construcción de tomas para inyección de peróxido de hidrógeno en boxes y Air Locks, Adquisición de un sistema de descontaminación por peróxido de hidrógeno, Adecuación de caldera de vapor a legislación vigente, Adquisición y montaje de una ultracentrífuga, y de tres cabinas de seguridad biológica, Diseño y adquisición de un sistema de esterilización de efluentes biocontaminados NCB3, Instalación de líneas de CO2 para laboratorios. AREA DE LABORATORIOS DE NIVEL 2 Proyecto de climatización de área NCB2, Sistema de aspiración para equipo gases-masa, Nueva línea de suministro de argón y acetileno, Suministro e instalación de una campana de aspiración de gases, Remodelación eléctrica de gases y fontanería de laboratorios NCB2 PUBLICACIONES 1.- Pascual,G (2006) Manipulación segura de ántrax. Un caso real. 4º International conference about occupational risk prevention (ISBN 84-933328-9-5). 2.- Pascual, G (2006). Agentes biológicos patógenos de nivel 3. Revista Biólogos (Noviembre 2006). Colegio de Biólogos de la Comunidad de Madrid. CONGRESOS Y FOROS 1.- 4º Congreso Internacional de Prevención de Riesgos Laborales ORP´2006 (SEVILLA Mayo 2006). 2.- 11th INTERNATIONAL VETERINARY BIOSAFETY WORKSHOP (SINGAPUR Noviembre 2006). CURSOS IMPARTIDOS 1.- PREVENCIÓN DE RIESGOS EN LABORATORIOS (22-26 MAYO 2006) (Escuela central de capacitación agraria Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación) 2.- XV CURSO INTERNACIONAL SOBRE ENFERMEDADES EXÓTICAS ANIMALES (1-30 NOVIEMBRE 2006) (Centro de Investigación en Sanidad Animal) 3.- IV CURSO DE ESPECIALIZACIÓN EN INCIDENTES N.B.Q. Dirección General de la Policía. División de formación y perfeccionamiento.

78

4.- CURSO DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES EN EL SECTOR AGROPECUARIO. Finca “El Encín”. IMIA .CAM (9 de Mayo 2006). 5.- CURSO DE ESPECILISTAS – EUROPEAN COMMISION –TAIEX ref nº IND/EXP 20999- EXPERT MOBILISATION ON LABORATORY BIOSAFETY (Enero 2006) Institute of Microbiology and Parasitology. Veterinary faculty of Ljubljana; Slovenia. 6.- INFLUENZA AVIAR. BIOSEGURIDAD Y BIOCONTENCION. Facultad de Ciencias Biológicas UCM. (17 Febrero 2006) 7.- ACTUALIZACIÓN EN HIGIENE INDUSTRIAL (Mayo 2006) Centro de Seguridad y Salud Laboral de León. Dirección General de Trabajo y Prevención de Riesgos Laborales. Consejería de Economía y Empleo. Junta de Castilla y León. 8.- CURSO RIESGO BIOLÓGICO EN ACTIVIDADES VETERINARIAS. Servcio de Prevención de Zaragoza. Departamento de Economía, Hacienda y Empleo. Gobierno de Aragón (Junio 2006). 9.- CURSO BASICO DE PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES EN AGRICULTURA. Finca “El Encín”. IMIA .CAM (13 de Noviembre 2006). 10.- 4º CURSO BASICO DE INCENDIOS. Centro de Investigación en Sanidad Animal. (6 Junio 2006) 11.- V CURSO DE ESPECIALIZACIÓN EN INCIDENTES N.B.Q. Dirección General de la Policía. División de formación y perfeccionamiento.