FAKULTET ZDRAVSTVENIH STUDIJASTUDIJ: LABORATORIJSKE TEHNOLOGIJEUNIVERZITET U SARAJEVUPREDMET: KLINIKI KURS ITEMA: Metode odreivanja kreatin kinaze i laktat dehidrogenaze Profesor: Student:doc. dr.Jozo ori Lejla SkopljakSarajevo, april 2012. godine

Uvod Kreatin kinaza(CK) ili kreatin fosfokinaza(CPK) jeenzimkoji katalizira reakcijukreatiniadenozin trifosfata(ATP) pri emu nastajekreatin-fosfatiadenozin difosfat(ADP).

Utkivimakoja brzo troe energiju kao to supopreno-prugasti miii, ali imozak, teglatki miii, fosfokreatin slui kao brzi izvor za regeneraciju ATPa, pa je kreatin kinaza vrlo vaan enzim za to tkivo.

Dijagnostiki je vaan pokazatelj infarkta miokarda kao i njegove prognoze, kao i kod miinih bolesti, naroito distrofije.

Laktat dehidrogenaza(LDH) jeenzimprisutan u mnogim organima, biljkama i ivotinjama, te i u ovjeku. Enzim koji se uglavnom nalazi unutar stanica. NajvieLDHsadre stanice:

jetre, srca, bubrega, skeletnih miia i eritrocita.

Poviene vrijednosti LDH-a: kod virusnog hepatitisa, cirozi, opstruktivnoj utici, infarktu miokarda u megaloblastinoj i pernicioznoj anemiji, oku, hipoksiji, bubrenim bolestima, metastatskom karcinomu.

Metode odreivanja kreatin kinazeAktivnost CK-a moe se odreivati postupkom kontinuiranoga mjerenja. CK katalizira reverzibilnu reakciju:Pod uvjetom da postoji dovoljan viak supstrata, optimalni pH za reakciju smjera od lijeva na desno iznosi oko 7, dok je za reakcija u obratnom smjeru optimalan PH 9.

Budui da je CK zbog svojih reaktivnih SH-skupina koje se lako oksidiraju vrlo nestabilan,aktivnost je potrebno odrediti odmah nakon uzimanja krvi.

Na CK djeluje inhibitorno Ca2+, a taj se uinak uklanja dodatkom EDTA-e koja vee kalcij u helat.Aktivnost CK-a, osim spektrofotometrijskim, moe se odrediti i fuorometrijskim i luminometrijskim metodama.

Fluorometrijska metoda temelji se, kao i spektrofotometrijska, na mjerenju prelaska NADP-a u NADPH.

Preporuena metoda odreivanjaIFCC-metoda, 37 C, sastav reagensa: kreatin-fosfat, imidazol-pufer, ADP, EDTA, Mg-acetat; N-acetil-cistein, AMP, di-adenozin-pentafosfat, glukoza, NADP, pH 6,5.Princip

Kreatin-kinaza katalizira reverzibilni prijenos fosfata s kreatin-fosfata na ADP. Kod pH 6,5 i uz dovoljan viak kreatin-fosfata i ADP-a reakcija se potpuno usmjeruje prema nastanku kreatina i ATP-a.

Na ovu, glavnu reakciju nastavlja se pomona u kojoj nastali ATP u prisutnosti HK-a fosforilira glukozu. Stvoreni glukoza-6-fosfat reagira u indikatorskoj reakciji s NADP-om uz G-6-PD te se stvaraju 6-fosfoglukonolakton i reducirani NADPH2.

Nastali NADPH2, razmjeran je aktivnosti CK-a, a njegovo se stvaranje mjeri optikim testom.

Metode odreivanje laktat dehidrogenazeLaktat dehidrogenaza je enzim koji sudjeluje u krajnjoj reakciji glikolize, tj. anaerobne razgradnje glukoze.

Krajnji produkt glikolize jest L - laktat nastao iz piruvata.

U miima se tijekom njihova rada nakuplja laktat nastao glikolitikim putem to se oituje osjeajem umora. LD kataIizira reverzibilnu reakciju prelaska piruvata u laktat.

U toj, reverzibilnoj reakciji ravnotea reakcije pomaknuta je u smjeru stvaranja laktata. Reakcija u smjeru, tee optimalno kod pH 8,8 do 9,8, dok reakcija u smjeru tee optimalno kod pH 7 ,2 do 7,8.

Postojalo je vie metoda za odreivanje aktivnosti LD-a.

U nekima se primjenjivao princip reakcije oksidacije laktata u piruvat, a u drugima obratna reakcija redukcije piruvata u laktat.

Aktivnost LD-a moe se odrediti i spektrofotometrijskim metodama. laktat piruvatpiruvat laktat

Preporuena metoda odreivanjaIFCC-metoda, 37 C, sastav reagensa: laktat, N-metil-glukamin pufer, -NAD+, pH 9,4.

Princip

LD u prisutnosti NAD+ katalizira prelazak laktata u piruvat. Pri tome nastaje NADH2, a poveanje apsorpcije odgovara prelasku oksidiranog u reducirani oblik koenzima i mjera je aktivnosti enzima.

ZAKLJUAKCK (kreatin kinaza) je enzim koji sudjeluje u hemijskim reakcijama kojim se dobiva energija potrebna za funkcioniranje staninog metabolizma.Dakle, njegove poviene vrijednosti mogu biti, uz ostale nalaze i kliniku slikuvaan dijagnostiki pokazatelj infarkta miokarda i miinih bolesti, naroito distrofije.Creatin kinase

LDH (laktat-dehidrogenaza) je enzim koji sa nalazi u jetri, srcu, bubrezima, skeletnim miiima i eritrocitima i katalizuje meusobno pretvaranje laktata i piruvata. LDH je protein koji se moe nai u cijelom tijelu. Enzim koji se uglavnom nalazi unutar elija.

LDH je povien u megaloblastnoj i pernicioznoj anemiji, virusnom hepatitisu, oku, hipoksiji, infarktu miokarda, cirozi, opstruktivnoj utici, bubrenim bolestima, metastatskom karcinomu, kod svih stanja praenih propadanjem skeletnih miia, jetre, plua, koe. LD

Hvala na panji !