middot物理middot生物middot技术middot

奥拉帕尼对 ＣＮＥ２ 细胞不同剂量率照射的生物效应影响

赵岗　 黄秀　 郑泰浩　 石学军　 李萌　 李明

４０２１６０ 重庆重庆医科大学附属永川医院肿瘤科（李萌现单位四川医科大学附属第一

医院肿瘤科）通信作者李明Ｅｍａｉｌ１８３２３８５５７３４ １６３ｃｏｍＤＯＩ１０３７６０ ｃｍａｊｉｓｓｎ１００４４２２１２０１６０７０２２

　 　 【摘要】 　 目的　 研究人鼻咽癌细胞 ＣＮＥ２ 在不同剂量率照射下给予 ＰＡＲＰ 抑制剂奥拉帕尼后

的生物效应变化 方法　 采用奥拉帕尼 ＩＣ１０为实验用药浓度 分 ４ 个照射组（均 ０１２３５７１０ Ｇｙ剂量）急速照射组（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射组（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉

帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组 克隆分析法测得各剂量点存活分数多靶单击模型拟合细胞存活曲

线 蛋白印迹法检测 ０１２ Ｇｙ 点 ＲＴＦＲＴ 组细胞 ＰＡＲＰ１ 和各组细胞 γＨ２ＡＸ 的表达水平免疫荧光

验证各组细胞 γＨ２ＡＸ 焦点数 ４ 个组间比较使用单因素方差分析两两比较采用 ＳＮＫｑ 检验 结果

　 奥拉帕尼对 ＣＮＥ２ 细胞 ＩＣ１０值为 ４1049008 ０ μｍｏｌ Ｌ １２ Ｇｙ 点 ＦＲＴ 组细胞 ＰＡＲＰ１ 表达均高于 ＲＴ 组

（Ｐ＝ ０1049008 ０２９０1049008 ０２２）ＦＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 蛋白和焦点均低于其余 ３ 个组（Ｐ 均＜０1049008 ０５） ＦＲＴ 组较 ＲＴ 组 Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值分别增加了 １１1049008 ６７１５1049008 ７８２３1049008 ６１奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组较 ＦＲＴ 组 Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值分别降低

了 １１1049008 １９６1049008 ４４１３1049008 ２６ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组间相近 结论　 同一剂量分

次照射剂量率降低生物效应下降低剂量奥拉帕尼可在分次照射下降低剂量率下降引起的亚致死性

修复增加致死性损伤进而提高了生物效应【关键词】 　 奥拉帕尼　 剂量率效应　 放射损伤修复　 细胞系鼻咽癌

基金项目重庆市卫生局医学科研项目资助（２０１２２１７１）

Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ｐｌｕｓ ｏｌａｐａｒｉｂ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅ ｒａｔｅｓ ｏｎ ＣＮＥ２ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ 　 ＺｈａｏＧａｎｇＨｕａｎｇ ＸｉｕＺｈｅｎｇ ＴａｉｈａｏＳｈｉ ＸｕｅｊｕｎＬｉ ＭｅｎｇＬｉ Ｍｉｎｇ

Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ＯｎｃｏｌｏｇｙＹｏｎｇｃｈｕａｎ ＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０２１６０ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒＬｉ ＭｉｎｇＥｍａｉｌ１８３２３８５５７３４ １６３ｃｏｍ

　 　 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅ ｒａｔｅｓｏｎ ｈｕｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＮＥ２ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｐｏｌｙ ＡＤＰｒｉｂｏｓｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＰＡＲＰ） ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｌａｐａｒｉｂ Ｍｅｔｈｏｄｓ 　 Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌａｐａｒｉｂ ｕｓｅｄ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｃｅｌｌｓ ｅｑｕａｌｅｄ ｔｏ ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ＩＣ１０ ｏｆ ｏｌａｐａｒｉｂ ｔｏ ＣＮＥ２ ｃｅｌｌｓ Ｔｈｅ ＣＮＥ２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ａｃｕｔｅ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ（ＲＴ） ｇｒｏｕｐ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ （ ＦＲＴ） ｇｒｏｕｐｏｌａｐａｒｉｂ ＋ ＲＴ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｏｌａｐａｒｉｂ ＋ ＦＲＴ ｇｒｏｕｐ Ａｌｌｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ０１２３５７ａｎｄ １０ Ｇｙ ａｔ ａ ｄｏｓｅ ｒａｔｅ ｏｆ ３ Ｇｙ ｍｉｎＴｈｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｉｍｅ ｆｏｒｅａｃｈ ｄｏｓｅ ｐｏｉｎｔ ｗａｓ ４ ｍｉｎ ｉｎ ＲＴ ａｎｄ ３０ ｍｉｎ ｉｎ ＦＲＴ Ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ＣＮＥ２ ｃｅｌｌｓ ａｔ ｅａｃｈ ｄｏｓｅ ｐｏｉｎｔ Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｔａｒｇｅｔｓｉｎｇｌｅｈｉｔ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｆｉｔ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌｃｕｒｖｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓＤ０Ｄｑａｎｄ ＳＦ２ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ Ａｔ ｄｏｓｅ ｐｏｉｎｔｓ ｏｆ ０１ａｎｄ ２ Ｇｙｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＡＲＰ１ ｉｎ ｔｈｅ ＲＴ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ＦＲＴ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ γＨ２ＡＸ ｉｎ ｅａｃｈｇｒｏｕｐ Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ γＨ２ＡＸ ｆｏｃｕｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｖａｒｉａｎｃｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ４ ｇｒｏｕｐｓａｎｄ ｔｗｏ ｔｗｏ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＳＮＫｑ ｔｅｓｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ　 Ｔｈｅ ＩＣ１０ ｖａｌｕｅｏｆ ｏｌａｐａｒｉｂ ｔｏ ＣＮＥ２ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ４ ０ μｍｏｌ Ｌ Ａｔ ｄｏｓｅ ｐｏｉｎｔｓ ｏｆ １ ａｎｄ ２ Ｇｙ ｔｈｅ ＰＡＲＰ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ＦＲＴ ｇｒｏｕｐ ｔｈａｎ ｉｎ ｔｈｅ ＲＴ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＝ ０1049008 ０２９０1049008 ０２２）ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ γＨ２ＡＸ ｆｏｃｕｓｎｕｍｂｅｒ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｓｍａｌｌｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ＦＲＴ ｇｒｏｕｐ ｔｈａｎ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ （ ａｌｌ Ｐ＜０1049008 ０５）ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ ｔｈｅ ＲＴ ｇｒｏｕｐｔｈｅ Ｄ０Ｄｑａｎｄ ＳＦ２ ｖａｌｕｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＦＲＴ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ １１1049008 ６７１５1049008 ７８ａｎｄ２３1049008 ６１ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＦＲＴ ｇｒｏｕｐｔｈｅ Ｄ０Ｄｑａｎｄ ＳＦ２ ｖａｌｕｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｏｌａｐａｒｉｂ＋ＦＲＴ ｇｒｏｕｐ

middot４６７middot 中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ １１1049008 １９６1049008 ４４ ａｎｄ １３1049008 ２６ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ａｂｏｖｅｉｎｄｉｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＲＴ ｇｒｏｕｐｔｈｅ Ｏｌａｐａｒｉｂ＋ＲＴ ｇｒｏｕｐａｎｄ ｔｈｅ Ｏｌａｐａｒｉｂ＋ＦＲＴ ｇｒｏｕｐ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　 Ｆｏｒ ｔｈｅｓａｍｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｄｏｓｅｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｄｏｓｅ ｒａｔｅ ａｎｄ ｗｅａｋｅｎｓ ｔｈｅ ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｌｏｗｄｏｓｅ ｏｌａｐａｒｉｂ ｃａｎ ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｅｃｌｉｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｄｏｓｅ ｒａｔｅｉｎ ａ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ｍｏｄｅｗｈｉｃｈ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ　 　 【 Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ 】 　 Ｏｌａｐａｒｉｂ 　 Ｄｏｓｅ ｒａｔｅ ｅｆｆｅｃｔ 　 Ｒｅｐａｉｒ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｄａｍａｇｅ 　 Ｃｅｌｌ ｌｉｎｅＮａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ

　 　 照射按照剂量率效应的不同可分为急速照射

（＞２ Ｇｙ ｍｉｎ照射）慢性照射（ ＜ ２ times １０－３ Ｇｙ ｍｉｎ照射）和迁延性照射［１］而受照细胞的放射性损伤可

理解为亚致死损伤潜在致死损伤和致死损伤［１］给予一定剂量 （如 ２ Ｇｙ） 照射对临床上通常 ２Ｇｙ ｍｉｎ以上剂量率而言普通照射时间不会超过几

分钟这对 ＤＮＡ 损伤修复的发生是不够的即导致

受照细胞的致死损伤 若一定剂量改为分步给予照射时间延长至 ２５～３０ ｍｉｎ此时剂量率改变有学

者称之为ldquo相对剂量率降低rdquo并证实可导致生物效

应降低［１２］ 受照射细胞由于电离辐射的单击导致

大量 ＤＮＡ ＳＳＢ其中 ＤＳＢ 是 ＳＳＢ 的 ０1049008 ０４ 倍［１］ＤＮＡ损伤修复成为影响受照细胞存活或死亡的重要原

因［３］ 研究表明ＰＡＲＰ 是修复 ＳＳＢ 所必须的其中

ＰＡＲＰ１ 的作用占 ＰＡＲＰ 家族活性的 ８０以上当ＰＡＲＰ 被抑制后大量外源性 ＳＳＢ 聚集在细胞内可转变成为 ＤＳＢ［４５］ 在细胞发生 ＤＳＢ 后产生的一系

列 应 激 反 应 中 Ｈ２ＡＸ 能 被 ＡＴＭ 磷 酸 化 为

γＨ２ＡＸ［６］ 研究表明γＨ２ＡＸ 的出现与 ＤＳＢ 的量存

在一一对应关系其被广泛用于 ＤＮＡ 损伤修复等研

究中［７８］ 靶向抑制 ＤＮＡ 修复途径相关蛋白的新药

奥拉帕尼（ＰＡＲＰ１２３ 抑制剂）于 ２０１４ 年１２ 月美

国 ＦＤＡ 批准上市其单药治疗或联合卡铂吉西他

滨的研究取得令人鼓舞的结果［９］ 那么在一定剂

量分步照射（相对剂量率降低）时联合 ＰＡＲＰ 抑制

剂可否影响放射生物效应 目前尚未可知 本研

究验证在急速照射与分步照射下（不同相对剂量

率）对人鼻咽低分化鳞癌细胞 ＣＮＥ２ 生物效应差

别并应用低剂量奥拉帕尼后观察两种不同照射模

式下生物效应变化

材料与方法

　 　 １细胞培养及主要试剂ＣＮＥ２ 细胞由泸州医

学院附属医院肿瘤科实验室惠赠培养基 ＲＰＭＩ１６４０（含 １０胎牛血清＋１００ Ｕ ｍｌ青链霉素）购于美

国 Ｇｉｂｃｏ 公司于 ３７５ＣＯ２９０湿度孵箱中培

养细胞贴壁生长 奥拉帕尼（ＯｌａｐａｒｉｂＡＺＤ２２８１）

购于 Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ 公司ＭＴＴ 试剂盒购于北京

康为世纪生物科技公司ＢＣＡ 蛋白浓度测定ＢｅｙｏＥＣＬ Ｐｌｕｓ 发光试剂购于上海碧云天生物技术公司兔抗 ＰＡＲＰ 购于美国 ＧｅｎｅＴｅｘ 公司ＡｎｔｉＰｈｏｓｐｈｏＨｉｓｔｏｎｅ Ｈ２ＡＸ （Ｓｅｒ１３９）购于 Ｕｐｓｔａｔｅ 公司

２ＭＴＴ 检测奥拉帕尼 ＩＣ１０ＩＣ５０值ＣＮＥ２ 细胞

以 ８０times１０３ 孔的密度接种至 ９６ 孔板中每孔 ２００μＬ 终体积 待细胞贴壁后分别加入奥拉帕尼 ０３1049008 １２５６1049008 ２５０１２1049008 ５００２５1049008 ０００５０1049008 ０００ μｍｏｌ Ｌ每个

浓度设 ３ 个复孔 加药后于 ３７５ＣＯ２ 孵箱中培

养 ４８ ｈ再向各孔中加入 ２０ μＬ ＭＴＴ （５ ｍｇ ｍｌ）避光 ３７孵育 ４ ｈ弃上清加入 １５０ μＬ ＤＭＳＯ避光振

荡 ５ ｍｉｎ 自动酶标仪于 ５７０ ｎｍ 波长处读取每孔的

吸光度值（Ａ） 细胞存活率 ＝实验组各孔 Ａ 值 空白组 Ａ 值times１００以此得出各浓度点细胞存活率通过 ＢＬＩＳＳ 法计算 ＩＣ１０与 ＩＣ５０值 ＩＣ１０作为后续奥

拉帕尼用药浓度３实验分组与照射分 ４ 个组（均 ０１２３５７

１０ Ｇｙ）急速照射组（ＲＴ 组各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完

成）分步照射组（ＦＲＴ 组３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕

尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组（各剂量点分步照射模

式如图 １ 所示） 于不同照射剂量点取相应数量

指数生长期细胞（１００～ １８ ０００ 个）分别接种到 ６ 孔

板每剂量点设 ３ 个复孔 待 １２～ ２４ ｈ 观察细胞贴

壁后（用药组照射前 ２ ｈ 加入 ＩＣ１０浓度奥拉帕尼）采用 Ｓｙｎｅｒｇｙ 直线加速器 ６ ＭＶ Ｘ 射线等中心照射

（机架旋转 １８０deg射野 １０ ｃｍtimes１５ ｃｍ瓶面放置 １1049008 ５ｃｍ 厚等效有机玻璃源皮距 １００ ｃｍ）

４克隆形成实验照射后的细胞继续孵箱中培养

１０ ｄ９５酒精固定细胞台盼蓝染色 ２０ ｍｉｎ 后冲洗

晾干光镜下计数集落数（＞５０ 个细胞为 １ 个集落）计算各剂量点存活分数（剂量点集落数 （该点接种

细胞数times接种效率）以 ０ Ｇｙ 点（空白组）计算接种效

率 多靶单击模型 Ｓ ＝ １ － （１ － ｅ－Ｄｋ）Ｎ 拟合曲线５蛋白印迹法检测 ＰＡＲＰ１γＨ２ＡＸ 表达细胞

以 １times１０６个 孔密度接种于 ６ 孔板上培养 ２４ ｈ 后于０１２ Ｇｙ 剂量点相应照射 照射后 ２ ｈ 收集细胞

middot５６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

采用 ＲＩＰＡ 裂解液裂解目的细胞ＢＣＡ 法计算样品 蛋白浓度 选择 ８ＳＤＳＰＡＧＥ 分离样品蛋白 ６０ μｇ　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　

图 １　 ＣＮＥ２ 细胞系各剂量点分次照射模式（１Ａ 为 １ Ｇｙ１Ｂ 为 ２ Ｇｙ１Ｃ 为 ３ Ｇｙ１Ｄ 为 ５ Ｇｙ１Ｅ 为 ７ Ｇｙ１Ｆ 为 １０ Ｇｙ）

　 　

转膜至硝酸纤维滤膜于室温摇床封闭 ２ ｈ 然后置

于含兔抗人 ＰＡＲＰ１ 单抗（浓度 １ ∶ ３００）鼠抗人

γＨ２ＡＸ 单抗（浓度 １ ∶ ５００）鼠抗人 ＧＡＰＤＨ 单抗

（浓度 １ ∶ １ ０００）封闭液中４孵育过夜 将膜置

于含辣根过氧化物酶偶联的羊抗鼠 ＩｇＧ 二抗中（浓度 １ ∶ ５ ０００）室温孵育 ２ ｈ 后采用 ＥＣＬ Ｐｌｕｓ 显色Ｉｍａｇｅ Ｌａｂ 软件分析蛋白条带灰度值 每组实验重

复 ３ 次６免疫荧光检测 γＨ２ＡＸ 焦点数各实验组细胞

照射 １ ｈ 后采用 ４多聚甲醛 ４固定 １５ ｍｉｎ２ 倍

ＳＳＣ＋０1049008 １ＮＰ４０ 洗涤 ３ 次０1049008 ２ＴｒｉｔｏｎＸ１００ 破膜

１５ ｍｉｎ同前洗涤 ２００ μＬ 山羊血清工作液封闭 １ｈ洗涤冰乙醇溶液梯度脱水自然干燥 １０ μＬ 鼠

抗 γＨ２ＡＸ 抗体（浓度 １ ∶ １ ０００）密封湿盒内 ３７孵

育过夜 再次洗涤脱水干燥２０ μＬ ＦＩＴＣ 羊抗鼠

ＩｇＧ 抗体 ３７孵育 ４５ ｍｉｎ ＤＡＰＩ２０ μＬ 复染 ５ ｍｉｎ洗涤后 ９０甘油封片荧光显微镜观察 γＨ２ＡＸ 焦

点 随机选择 ４ 个不同视野计数焦点 细胞比７统计方法使用 ＳＰＳＳ １９1049008 ０ 软件对 ４ 个组间

比较行使用单因素方差分析两两比较采用 ＳＮＫｑ检验 Ｐ＜０1049008 ０５ 为差异有统计学意义

结　 　 果

　 　 １奥拉帕尼对鼻咽癌细胞 ＣＮＥ２ 抑制作用０３1049008 １２５６1049008 ２５０１２1049008 ５００２５1049008 ０００５０1049008 ０００ μｍｏｌ Ｌ 浓度

时 ＣＮＥ２ 细胞存活百分比依次为 １００９６1049008 ５４８３1049008 ２２５９1049008 ８８４０1049008 ３４２７1049008 ４４可见随药物浓

度增加抑制率上升 ＩＣ１０ ＩＣ５０ 值分别为 ４1049008 ０２０1049008 ３

μｍｏｌ Ｌ 故选用 ＩＣ１０值 ４ μｍｏｌ Ｌ 作为后续奥拉帕

尼给药浓度２ＲＴ 与 ＦＲＴ 组照射后 ＣＮＥ２ 细胞 ＰＡＲＰ１ 表

达水平比较ＲＴ 及 ＦＲＴ 组照射后细胞 ＰＡＲＰ１ 相对

表达量较空白组明显升高而相同剂量点 ＦＲＴ 组均

高于 ＲＴ 组详见图 ２

图 ２　 ＣＮＥ２ 细胞系急速照射（各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）和分次照射（各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）后蛋白印迹法检测的 ＰＡＲＰ１ 表达水平比较（２Ａ 为电泳图上下依次为 １２ Ｇｙ 和内参照１２ 为 ０ Ｇｙ３４为急速照射５６ 为分次照射 ２Ｂ 为定量分析）

　 　 ３不同模式照射后 ＣＮＥ２ 细胞 γＨ２ＡＸ 蛋白表

达和焦点数同剂量点 ＦＲＴ 组较 ＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 蛋白

表达降低奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组较 ＦＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 蛋白

表达增加ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ

middot６６７middot 中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

组间无差异详见图 ３ １ Ｇｙ 点 ＲＴＦＲＴ奥拉帕尼

＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组焦点 细胞比分别为 ０1049008 ４９（ ２４ ４９ ） ０1049008 ２１ （ １３ ６１ ） ０1049008 ４８ （ ２８ ５８ ） ０1049008 ４７（１６ ３４ ） ２ Ｇｙ 点 分 别 为 ０1049008 ５９ （ １９ ３２ ） ０1049008 ４０（８ ２０） ０1049008 ６２ （ １３ ２１ ） ０1049008 ５７ （ １６ ２８ ） 图 ４ 为

γＨ２ＡＸ 焦点数图示 可见各处理组 γＨ２ＡＸ 表达量

在蛋白印迹法及免疫荧光检测中获得一致结果

图 ３　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后蛋白印迹法检测的 γＨ２ＡＸ 表达水平比较［３Ａ 为电泳图上下依次为 ０１２ Ｇｙ 和内参照１２３４ 分别为图题顺序的 ４个模式照射组 ３Ｂ 为定量分析］

　 　 ４各剂量点细胞存活分数根据急速照射 ＲＴ组分步照射 ＦＲＴ 组奥拉帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组克隆形成实验得出各组各剂量点细胞存活曲

线见图 ５相关生物学参数见表 １ 可见ＦＲＴ 组较

ＲＴ 组Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值分别增加了 １１1049008 ６７１５1049008 ７８２３1049008 ６１奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组较 ＦＲＴ 组 Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值

分别降低了 １１1049008 １９６1049008 ４４１３1049008 ２６ＲＴ 组奥拉

帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组间无差异

表 １　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合各组细胞存活曲线参数

　 　 组别 Ｄ０（Ｇｙ） Ｄｑ（Ｇｙ） Ｎ ＳＦ２

急速照射（ＲＴ） ０９６８ １１５３ ３２９０ ０３６０分次照射（ＦＲＴ） １０８１ １３３５ ３４３７ ０４４５奥拉帕尼＋ＲＴ ０９５８ １１４４ ３３０１ ０３５４奥拉帕尼＋ＦＲＴ ０９６０ １２４９ ３６７４ ０３８６

讨　 　 论

　 　 电离辐射所致的 ＤＮＡ ＳＳＢ 是 ＤＳＢ 的 １０～ ２０

倍［１１０］ 通常情况下 ＳＳＢ 能进行较完整修复ＤＳＢ的修复则要困难许多 研究发现 ＰＡＲＰ 是修复 ＳＳＢ所必须的当 ＰＡＲＰ 被抑制后大量外源性 ＳＳＢ 聚集

在细胞内如果进入复制叉可转变成为 ＤＳＢ［１１］ 因

此有理由相信 ＰＡＲＰ 抑制剂对 ＤＮＡ 损伤修复的干

预可影响受照细胞生物效应本研究首先证实了 ＣＮＥ２ 细胞在 ＲＴ 与 ＦＲＴ 的

ＰＡＲＰ１ 表达差异这是由于相对剂量率降低使

ＦＲＴ 组受照细胞出现 ＳＳＢ 修复的增强为进一步比

较在相同剂量点 ＲＴＦＲＴ奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼

＋ＦＲＴ 组 ＤＳＢ 情况选择了能反映 ＤＳＢ 数量的敏感

指标mdashγＨ２ＡＸ［１２１３］ 利用荧光显微镜对 γＨ２ＡＸ 的

特异性荧光抗原抗体反应可观察到在 ＤＳＢ 上分散

在细胞核上的焦点 研究表明其与 ＤＮＡ 双链断裂

的数量一一对应并被认为是检测 ＤＮＡ ＤＳＢldquo金标

准rdquo ［１２］ 本研究发现同一剂量 ＦＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 焦

点 细胞比相较 ＲＴ 照射组明显减少而 ＦＲＴ＋奥拉

帕尼能显著提高焦点 细胞比 本实验考虑 γＨ２ＡＸ焦点大小和荧光强度在不同条件下可发生变化同时也采用了蛋白质免疫印迹技术半定量检测了

γＨ２ＡＸ 蛋白表达情况获得了同免疫荧光检测焦

点 细胞比相一致结果 可见ＦＲＴ 组较 ＲＴ 组细胞

ＰＡＲＰ１ 表达升高即 ＤＮＡ ＳＳＢ 修复增强进而减少

了 ＤＳＢ 形成ＦＲＴ＋奥拉帕尼后抑制了 ＳＳＢ 修复增加了 ＤＳＢ 形成进而影响受照细胞的存活［３１４］ 本

研究进一步克隆形成实验分析也显示 ＦＲＴ 组较 ＲＴ组Ｄ０Ｄｑ ＳＦ２ 值均升高 １０ 以上 这与钱立庭

等［２］在人大肠癌细胞系 ＨＴ２９ 中一定剂量分步照

射 １５ ｍｉｎ 引起生物学参数改变一致 Ｐａｇａｎｅｔｔｉ［１５］

研究发现鼠肿瘤细胞（ＥＭＴ６ＳＣＣⅦ）在接受＞２ ｍｉｎ分次照射时就已经发生 ＤＮＡ 损伤修复王雯珺［１６］

通过对鼻咽癌细胞系亚致死损伤修复速度的测定认为其半数修复时间（Ｔ１ ２）在１５～３０ ｓ 间当分次照

射被延长 １５～４５ ｓ 就有可能导致生物效应下降 本

研究再次证实了单次剂量照射时间延长即相对剂

量率的降低可致生物效应下降 本实验中 ＲＴ＋奥拉帕尼组的生物效应较 ＲＴ 组未见提高这可能与

急速照射时相对剂量率较高相关在照射过程中极

少发生或不发生 ＤＮＡ ＳＳＢ 修复也观察不到剂量率

效应［１］综上所述ＰＡＲＰ 抑制剂奥拉帕尼对人鼻咽癌

ＣＮＥ２ 细胞在常规照射与分次照射（即模拟相对剂

量率降低）模式下生物学参数变化证实了同一剂量

随分次照射时间延长生物效应下降低剂量奥拉帕

middot７６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

图 ４　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后免疫荧光显微镜下 γＨ２ＡＸ 焦点数（４Ａ 为对照４Ｂmdash４Ｅ 为 ４ 个组 １ Ｇｙ４Ｆmdash４Ｉ 为 ４ 个组 ２ Ｇｙ　 　 times４００）

图 ５　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合的各组细胞存活曲线

尼可在分次照射模式下降低相对剂量率下降引起的

ＳＳＢ 修复增加 ＤＳＢ 形成提高生物效应 丰富了

ＰＡＲＰ 抑制剂在联合放疗及剂量率效应方面的认

识为 ＰＡＲＰ 抑制剂在放疗方面应用可能提供实验

依据 当然体内肿瘤受体液血供氧合状态凋亡

等更多方面因素影响ＰＡＲＰ 抑制剂对分次照射剂

量率效应的影响还需进一步体内外研究

参　 考　 文　 献

［１］ 杨伟志电离辐射的细胞效应［Ａ］ 殷蔚伯余子豪徐国镇等肿瘤放射治疗学［Ｍ］４ 版北京中国协和医科大学出版社２００８２３１２３９Ｙａｎｇ ＷＺＨ Ｃｅｌｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｙｉｎ ＷＢ ＹｕＺＨＸｕ ＧＺＨｅｔ ａｌ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ［Ｍ］４ ｅｄ ＢｅｉｊｉｎｇＰｅｋｉｎｇｕｎｉｏｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｌｌｅｇｅ ｐｒｅｓｓ２００８２３１２３９

［２］ 钱立庭杨伟志刘新帆模拟 ＩＭＲＴ 模式的生物效应研究初探［Ｊ］ 中华放射肿瘤学杂志 ２００５ １４ （ ５） ４３１４３３ ＤＯＩ １０３７６０ ｊｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４Ｑｉａｎ ＬＴＹａｎｇ ＷＺＬｉｕ ＸＦ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｍｏｄｅｌ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ ＪＲａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ２００５１４（５）４３１４３３ＤＯＩ１０３７６０ ｊ ｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４

［３］ Ｓｈｒｉｖａｓｔａｖ Ｍ Ｄｅ Ｈａｒｏ ＬＰ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ ＪＡ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙ ｃｈｏｉｃｅ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ２００８１８（１）１３４１４７ＤＯＩ１０１０３８ ｃｒ２００７1049008 １１１

［４］ Ａｍeacute ＪＣＲｏｌｌｉ ＶＳｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｖｅｔ ａｌ Ｐａｒｐ２ａ Ｎｏｖｅｌ ＭａｍｍａｌｉａｎＤＮＡ ｄａｍａｇｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ［Ｊ］ ＪＢｉｏｌ Ｃｈｅｍ１９９９２７４（２５）１７８６０１７８６８ＤＯＩ１０１０７４ ｊｂｃ２７４２５１７８６０

middot８６７middot 中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

［５］ Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＭＡ ｈｕｍａｎ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ（ＡＤＰＲＴＬ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ［Ｊ］ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９９９ ５７ （ ３ ） ４４２４４５ＤＯＩ１０１００６ ｇｅｎｏ１９９９1049008 ５７９９

［６］ Ｗａｎｇ ＨＹ Ｗａｎｇ ＭＬ Ｗａｎｇ ＨＣ ｅｔ ａｌ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｈ２ＡＸｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＴＭ ａｎｄＤＮＡＰＫ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ［Ｊ］ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ２００５２０２（２）４９２５０２ＤＯＩ１０１００２ ｊｃｐ２０１４１

［７］ Ｇｉｕｎｔａ Ｓ Ｊａｃｋｓｏｎ ＳＰ Ｇｉｖｅ ｍｅ ａ ｂｒｅａｋ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎ ｍｉｔｏｓｉｓ ｔｈｅｍｉｔｏｔｉｃ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍａｒｋｓ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓｗｉｔｈ ｅａｒｌｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｅｖｅｎｔｓ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ２０１１１０ （ ８）１２１５１２２１ＤＯＩ１０４１６１ ｃｃ１０1049008 ８１５３３４

［８］ Ｒｏｔｈｋａｍｍ ＫＬoumlｂｒｉｃｈ ＭＥｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｌａｃｋ ｏｆ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｘｒａｙ ｄｏｓｅｓ ［Ｊ］ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ２００３１００（ ９）５０５７５０６２ ＤＯＩ１０１０７３ ｐｎａｓ０８３０９１８１００

［９］ Ｆｏｎｇ ＰＣＢｏｓｓ ＤＳＹａｐ ＴＡｅｔ ａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ）ＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ ｆｒｏｍ ＢＲＣＡ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｃａｒｒｉｅｒｓ ［Ｊ］ ＮＥｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９ ３６１ （ ２ ） １２３１３４ ＤＯＩ １０ １０５６ ＮＥＪＭｏａ０９００２１２

［１０］ 糜福顺电离辐射 ＤＮＡ 及染色体的作用［Ａ］ 沈瑜糜福顺肿瘤放射生物学［Ｍ］北京中国医药科技出版社２００２２９４７Ｍｉ ＦＳＨＲｏｌｅ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｉｎ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｓｈｅｎ Ｙ Ｍｉ ＦＳＨ Ｔｕｍｏｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ［Ｍ］ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈｉｎａｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｈｏｕｓｅ２００２２９４７

［１１］ 王东基于 ＤＮＡ 损伤修复的分子靶向治疗肿瘤靶向治疗的新

篇章［Ｊ］ 第三军医大学学报２０１４３６（２２）２２４３２２４８Ｗａｎｇ ＤＴａｒｇｅｔｉｎｇ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙｓａ ｎｅｗ ｅｐｉｓｏｄｅ ｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ［Ｊ］Ｊ Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１４３６（２２）２２４３２２４８

［１２］ Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｃａｐｅｔｉｌｌｏ ＯＬｅｅ ＡＮｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ Ｍ ｅｔ ａｌ Ｈ２ＡＸ ｔｈｅｈｉｓｔｏｎｅ ｇｕａｒｄｉａｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ［Ｊ］ ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ２００４３（８９）９５９９６７ＤＯＩ１０１０１６ ｊｄｎａｒｅｐ２００４０３０２４

［１３］ 刘敏赵苒γＨ２ＡＸ 检测在 ＤＮＡ 双链断裂研究中应用［Ｊ］ 中国公共卫生２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４Ｌｉｕ ＭＺｈａｏ Ｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ γＨ２ＡＸ ａｓｓａｙ ｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐｕｂｌ Ｈｅａｌｔｈ２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４

［１４］ Ｋｕｏ ＬＪ Ｙａｎｇ ＬＸ ＧａｍｍａＨ２ＡＸａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｉｎ Ｖｉｖｏ２００８２２（３）３０５３０９

［１５］ Ｐａｇａｎｅｔｔｉ ＨＣｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｄｕｅ ｔｏ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｄｏｓｅｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｉｍｅｓ ｉｎ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ［Ｊ］ Ｉｎｔ Ｊ ＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ２００５６３（ ３）８９２９００ ＤＯＩ１０ １０１６ ｊ ｉｊｒｏｂｐ２００５０７９５３

［１６］ 王雯珺郑小康刘佳宾等鼻咽癌细胞株 ＣＮＥ１ＨＯＮＥ１Ｃ６６６１ 和 ＣＮＥ２ 的亚致死性损伤修复速度测定［Ｊ］ 南方医科大学学报２０１０３０（４）７７７７７８Ｗａｎｇ ＷＪＺｈｅｎｇ ＸＫＬｉｕ ＪＢ ｅｔ ａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐａｉｒｈａｌｆｔｉｍｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＣＮＥ１ＣＮＥ２ＨＯＮＥ１ ａｎｄ Ｃ６６６１ ［Ｊ］ Ｊ Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１０３０（４）７７７７７８

（收稿日期２０１５０６０１）

中国抗癌协会第四届鼻咽癌专业委员会

　 （按姓氏汉语拼音字母表排序）

　 顾问 徐国镇

　 名誉主任委员 潘建基

　 名誉副主任委员 卢泰祥

　 主任委员 胡超苏

　 侯任主任委员 郎锦义

　 副主任委员 陈晓钟　 马　 骏　 郎锦义　 林少俊　 朱小东

　 常务委员 陈韵彬　 高　 黎　 何　 侠　 胡德胜　 胡国清　 金　 风　 李金高　 石　 梅　 王佩国　席许平　 夏云飞　 易俊林

　 秘书长 林少俊　 王孝深

　 委员 敖　 帆　 蔡　 晶　 陈传本　 陈　 凡　 高力英　 高　 劲　 高太虎　 郭　 良　 郭　 翔　 郭　 晔　管一国　 韩　 非　 郝俊芳　 黄生富　 季明芳　 姜　 锋　 李国庆　 李　 龄　 李　 平　 李晓江　林少民　 林志雄　 刘秋芳　 刘士新　 马　 林　 麦海强　 秦继勇　 邱元正　 申良方　 沈文斌　石永刚　 孙　 艳　 王仁生　 王若峥　 王胜资　 王孝深　 王　 颖　 温凤云　 吴　 慧　 吴伟莉　徐向英　 应红梅　 于　 洪　 郁志龙　 赵　 充　 张石川　 折　 虹　 宗井凤

　 秘书 区晓敏　 宗井凤

middot９６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ １１1049008 １９６1049008 ４４ ａｎｄ １３1049008 ２６ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ａｂｏｖｅｉｎｄｉｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＲＴ ｇｒｏｕｐｔｈｅ Ｏｌａｐａｒｉｂ＋ＲＴ ｇｒｏｕｐａｎｄ ｔｈｅ Ｏｌａｐａｒｉｂ＋ＦＲＴ ｇｒｏｕｐ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　 Ｆｏｒ ｔｈｅｓａｍｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｄｏｓｅｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｄｏｓｅ ｒａｔｅ ａｎｄ ｗｅａｋｅｎｓ ｔｈｅ ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｌｏｗｄｏｓｅ ｏｌａｐａｒｉｂ ｃａｎ ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｅｃｌｉｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｄｏｓｅ ｒａｔｅｉｎ ａ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ｍｏｄｅｗｈｉｃｈ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ　 　 【 Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ 】 　 Ｏｌａｐａｒｉｂ 　 Ｄｏｓｅ ｒａｔｅ ｅｆｆｅｃｔ 　 Ｒｅｐａｉｒ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｄａｍａｇｅ 　 Ｃｅｌｌ ｌｉｎｅＮａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ

　 　 照射按照剂量率效应的不同可分为急速照射

（＞２ Ｇｙ ｍｉｎ照射）慢性照射（ ＜ ２ times １０－３ Ｇｙ ｍｉｎ照射）和迁延性照射［１］而受照细胞的放射性损伤可

理解为亚致死损伤潜在致死损伤和致死损伤［１］给予一定剂量 （如 ２ Ｇｙ） 照射对临床上通常 ２Ｇｙ ｍｉｎ以上剂量率而言普通照射时间不会超过几

分钟这对 ＤＮＡ 损伤修复的发生是不够的即导致

受照细胞的致死损伤 若一定剂量改为分步给予照射时间延长至 ２５～３０ ｍｉｎ此时剂量率改变有学

者称之为ldquo相对剂量率降低rdquo并证实可导致生物效

应降低［１２］ 受照射细胞由于电离辐射的单击导致

大量 ＤＮＡ ＳＳＢ其中 ＤＳＢ 是 ＳＳＢ 的 ０1049008 ０４ 倍［１］ＤＮＡ损伤修复成为影响受照细胞存活或死亡的重要原

因［３］ 研究表明ＰＡＲＰ 是修复 ＳＳＢ 所必须的其中

ＰＡＲＰ１ 的作用占 ＰＡＲＰ 家族活性的 ８０以上当ＰＡＲＰ 被抑制后大量外源性 ＳＳＢ 聚集在细胞内可转变成为 ＤＳＢ［４５］ 在细胞发生 ＤＳＢ 后产生的一系

列 应 激 反 应 中 Ｈ２ＡＸ 能 被 ＡＴＭ 磷 酸 化 为

γＨ２ＡＸ［６］ 研究表明γＨ２ＡＸ 的出现与 ＤＳＢ 的量存

在一一对应关系其被广泛用于 ＤＮＡ 损伤修复等研

究中［７８］ 靶向抑制 ＤＮＡ 修复途径相关蛋白的新药

奥拉帕尼（ＰＡＲＰ１２３ 抑制剂）于 ２０１４ 年１２ 月美

国 ＦＤＡ 批准上市其单药治疗或联合卡铂吉西他

滨的研究取得令人鼓舞的结果［９］ 那么在一定剂

量分步照射（相对剂量率降低）时联合 ＰＡＲＰ 抑制

剂可否影响放射生物效应 目前尚未可知 本研

究验证在急速照射与分步照射下（不同相对剂量

率）对人鼻咽低分化鳞癌细胞 ＣＮＥ２ 生物效应差

别并应用低剂量奥拉帕尼后观察两种不同照射模

式下生物效应变化

材料与方法

　 　 １细胞培养及主要试剂ＣＮＥ２ 细胞由泸州医

学院附属医院肿瘤科实验室惠赠培养基 ＲＰＭＩ１６４０（含 １０胎牛血清＋１００ Ｕ ｍｌ青链霉素）购于美

国 Ｇｉｂｃｏ 公司于 ３７５ＣＯ２９０湿度孵箱中培

养细胞贴壁生长 奥拉帕尼（ＯｌａｐａｒｉｂＡＺＤ２２８１）

购于 Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ 公司ＭＴＴ 试剂盒购于北京

康为世纪生物科技公司ＢＣＡ 蛋白浓度测定ＢｅｙｏＥＣＬ Ｐｌｕｓ 发光试剂购于上海碧云天生物技术公司兔抗 ＰＡＲＰ 购于美国 ＧｅｎｅＴｅｘ 公司ＡｎｔｉＰｈｏｓｐｈｏＨｉｓｔｏｎｅ Ｈ２ＡＸ （Ｓｅｒ１３９）购于 Ｕｐｓｔａｔｅ 公司

２ＭＴＴ 检测奥拉帕尼 ＩＣ１０ＩＣ５０值ＣＮＥ２ 细胞

以 ８０times１０３ 孔的密度接种至 ９６ 孔板中每孔 ２００μＬ 终体积 待细胞贴壁后分别加入奥拉帕尼 ０３1049008 １２５６1049008 ２５０１２1049008 ５００２５1049008 ０００５０1049008 ０００ μｍｏｌ Ｌ每个

浓度设 ３ 个复孔 加药后于 ３７５ＣＯ２ 孵箱中培

养 ４８ ｈ再向各孔中加入 ２０ μＬ ＭＴＴ （５ ｍｇ ｍｌ）避光 ３７孵育 ４ ｈ弃上清加入 １５０ μＬ ＤＭＳＯ避光振

荡 ５ ｍｉｎ 自动酶标仪于 ５７０ ｎｍ 波长处读取每孔的

吸光度值（Ａ） 细胞存活率 ＝实验组各孔 Ａ 值 空白组 Ａ 值times１００以此得出各浓度点细胞存活率通过 ＢＬＩＳＳ 法计算 ＩＣ１０与 ＩＣ５０值 ＩＣ１０作为后续奥

拉帕尼用药浓度３实验分组与照射分 ４ 个组（均 ０１２３５７

１０ Ｇｙ）急速照射组（ＲＴ 组各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完

成）分步照射组（ＦＲＴ 组３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕

尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组（各剂量点分步照射模

式如图 １ 所示） 于不同照射剂量点取相应数量

指数生长期细胞（１００～ １８ ０００ 个）分别接种到 ６ 孔

板每剂量点设 ３ 个复孔 待 １２～ ２４ ｈ 观察细胞贴

壁后（用药组照射前 ２ ｈ 加入 ＩＣ１０浓度奥拉帕尼）采用 Ｓｙｎｅｒｇｙ 直线加速器 ６ ＭＶ Ｘ 射线等中心照射

（机架旋转 １８０deg射野 １０ ｃｍtimes１５ ｃｍ瓶面放置 １1049008 ５ｃｍ 厚等效有机玻璃源皮距 １００ ｃｍ）

４克隆形成实验照射后的细胞继续孵箱中培养

１０ ｄ９５酒精固定细胞台盼蓝染色 ２０ ｍｉｎ 后冲洗

晾干光镜下计数集落数（＞５０ 个细胞为 １ 个集落）计算各剂量点存活分数（剂量点集落数 （该点接种

细胞数times接种效率）以 ０ Ｇｙ 点（空白组）计算接种效

率 多靶单击模型 Ｓ ＝ １ － （１ － ｅ－Ｄｋ）Ｎ 拟合曲线５蛋白印迹法检测 ＰＡＲＰ１γＨ２ＡＸ 表达细胞

以 １times１０６个 孔密度接种于 ６ 孔板上培养 ２４ ｈ 后于０１２ Ｇｙ 剂量点相应照射 照射后 ２ ｈ 收集细胞

middot５６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

采用 ＲＩＰＡ 裂解液裂解目的细胞ＢＣＡ 法计算样品 蛋白浓度 选择 ８ＳＤＳＰＡＧＥ 分离样品蛋白 ６０ μｇ　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　

图 １　 ＣＮＥ２ 细胞系各剂量点分次照射模式（１Ａ 为 １ Ｇｙ１Ｂ 为 ２ Ｇｙ１Ｃ 为 ３ Ｇｙ１Ｄ 为 ５ Ｇｙ１Ｅ 为 ７ Ｇｙ１Ｆ 为 １０ Ｇｙ）

　 　

转膜至硝酸纤维滤膜于室温摇床封闭 ２ ｈ 然后置

于含兔抗人 ＰＡＲＰ１ 单抗（浓度 １ ∶ ３００）鼠抗人

γＨ２ＡＸ 单抗（浓度 １ ∶ ５００）鼠抗人 ＧＡＰＤＨ 单抗

（浓度 １ ∶ １ ０００）封闭液中４孵育过夜 将膜置

于含辣根过氧化物酶偶联的羊抗鼠 ＩｇＧ 二抗中（浓度 １ ∶ ５ ０００）室温孵育 ２ ｈ 后采用 ＥＣＬ Ｐｌｕｓ 显色Ｉｍａｇｅ Ｌａｂ 软件分析蛋白条带灰度值 每组实验重

复 ３ 次６免疫荧光检测 γＨ２ＡＸ 焦点数各实验组细胞

照射 １ ｈ 后采用 ４多聚甲醛 ４固定 １５ ｍｉｎ２ 倍

ＳＳＣ＋０1049008 １ＮＰ４０ 洗涤 ３ 次０1049008 ２ＴｒｉｔｏｎＸ１００ 破膜

１５ ｍｉｎ同前洗涤 ２００ μＬ 山羊血清工作液封闭 １ｈ洗涤冰乙醇溶液梯度脱水自然干燥 １０ μＬ 鼠

抗 γＨ２ＡＸ 抗体（浓度 １ ∶ １ ０００）密封湿盒内 ３７孵

育过夜 再次洗涤脱水干燥２０ μＬ ＦＩＴＣ 羊抗鼠

ＩｇＧ 抗体 ３７孵育 ４５ ｍｉｎ ＤＡＰＩ２０ μＬ 复染 ５ ｍｉｎ洗涤后 ９０甘油封片荧光显微镜观察 γＨ２ＡＸ 焦

点 随机选择 ４ 个不同视野计数焦点 细胞比７统计方法使用 ＳＰＳＳ １９1049008 ０ 软件对 ４ 个组间

比较行使用单因素方差分析两两比较采用 ＳＮＫｑ检验 Ｐ＜０1049008 ０５ 为差异有统计学意义

结　 　 果

　 　 １奥拉帕尼对鼻咽癌细胞 ＣＮＥ２ 抑制作用０３1049008 １２５６1049008 ２５０１２1049008 ５００２５1049008 ０００５０1049008 ０００ μｍｏｌ Ｌ 浓度

时 ＣＮＥ２ 细胞存活百分比依次为 １００９６1049008 ５４８３1049008 ２２５９1049008 ８８４０1049008 ３４２７1049008 ４４可见随药物浓

度增加抑制率上升 ＩＣ１０ ＩＣ５０ 值分别为 ４1049008 ０２０1049008 ３

μｍｏｌ Ｌ 故选用 ＩＣ１０值 ４ μｍｏｌ Ｌ 作为后续奥拉帕

尼给药浓度２ＲＴ 与 ＦＲＴ 组照射后 ＣＮＥ２ 细胞 ＰＡＲＰ１ 表

达水平比较ＲＴ 及 ＦＲＴ 组照射后细胞 ＰＡＲＰ１ 相对

表达量较空白组明显升高而相同剂量点 ＦＲＴ 组均

高于 ＲＴ 组详见图 ２

图 ２　 ＣＮＥ２ 细胞系急速照射（各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）和分次照射（各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）后蛋白印迹法检测的 ＰＡＲＰ１ 表达水平比较（２Ａ 为电泳图上下依次为 １２ Ｇｙ 和内参照１２ 为 ０ Ｇｙ３４为急速照射５６ 为分次照射 ２Ｂ 为定量分析）

　 　 ３不同模式照射后 ＣＮＥ２ 细胞 γＨ２ＡＸ 蛋白表

达和焦点数同剂量点 ＦＲＴ 组较 ＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 蛋白

表达降低奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组较 ＦＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 蛋白

表达增加ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ

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组间无差异详见图 ３ １ Ｇｙ 点 ＲＴＦＲＴ奥拉帕尼

＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组焦点 细胞比分别为 ０1049008 ４９（ ２４ ４９ ） ０1049008 ２１ （ １３ ６１ ） ０1049008 ４８ （ ２８ ５８ ） ０1049008 ４７（１６ ３４ ） ２ Ｇｙ 点 分 别 为 ０1049008 ５９ （ １９ ３２ ） ０1049008 ４０（８ ２０） ０1049008 ６２ （ １３ ２１ ） ０1049008 ５７ （ １６ ２８ ） 图 ４ 为

γＨ２ＡＸ 焦点数图示 可见各处理组 γＨ２ＡＸ 表达量

在蛋白印迹法及免疫荧光检测中获得一致结果

图 ３　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后蛋白印迹法检测的 γＨ２ＡＸ 表达水平比较［３Ａ 为电泳图上下依次为 ０１２ Ｇｙ 和内参照１２３４ 分别为图题顺序的 ４个模式照射组 ３Ｂ 为定量分析］

　 　 ４各剂量点细胞存活分数根据急速照射 ＲＴ组分步照射 ＦＲＴ 组奥拉帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组克隆形成实验得出各组各剂量点细胞存活曲

线见图 ５相关生物学参数见表 １ 可见ＦＲＴ 组较

ＲＴ 组Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值分别增加了 １１1049008 ６７１５1049008 ７８２３1049008 ６１奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组较 ＦＲＴ 组 Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值

分别降低了 １１1049008 １９６1049008 ４４１３1049008 ２６ＲＴ 组奥拉

帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组间无差异

表 １　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合各组细胞存活曲线参数

　 　 组别 Ｄ０（Ｇｙ） Ｄｑ（Ｇｙ） Ｎ ＳＦ２

急速照射（ＲＴ） ０９６８ １１５３ ３２９０ ０３６０分次照射（ＦＲＴ） １０８１ １３３５ ３４３７ ０４４５奥拉帕尼＋ＲＴ ０９５８ １１４４ ３３０１ ０３５４奥拉帕尼＋ＦＲＴ ０９６０ １２４９ ３６７４ ０３８６

讨　 　 论

　 　 电离辐射所致的 ＤＮＡ ＳＳＢ 是 ＤＳＢ 的 １０～ ２０

倍［１１０］ 通常情况下 ＳＳＢ 能进行较完整修复ＤＳＢ的修复则要困难许多 研究发现 ＰＡＲＰ 是修复 ＳＳＢ所必须的当 ＰＡＲＰ 被抑制后大量外源性 ＳＳＢ 聚集

在细胞内如果进入复制叉可转变成为 ＤＳＢ［１１］ 因

此有理由相信 ＰＡＲＰ 抑制剂对 ＤＮＡ 损伤修复的干

预可影响受照细胞生物效应本研究首先证实了 ＣＮＥ２ 细胞在 ＲＴ 与 ＦＲＴ 的

ＰＡＲＰ１ 表达差异这是由于相对剂量率降低使

ＦＲＴ 组受照细胞出现 ＳＳＢ 修复的增强为进一步比

较在相同剂量点 ＲＴＦＲＴ奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼

＋ＦＲＴ 组 ＤＳＢ 情况选择了能反映 ＤＳＢ 数量的敏感

指标mdashγＨ２ＡＸ［１２１３］ 利用荧光显微镜对 γＨ２ＡＸ 的

特异性荧光抗原抗体反应可观察到在 ＤＳＢ 上分散

在细胞核上的焦点 研究表明其与 ＤＮＡ 双链断裂

的数量一一对应并被认为是检测 ＤＮＡ ＤＳＢldquo金标

准rdquo ［１２］ 本研究发现同一剂量 ＦＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 焦

点 细胞比相较 ＲＴ 照射组明显减少而 ＦＲＴ＋奥拉

帕尼能显著提高焦点 细胞比 本实验考虑 γＨ２ＡＸ焦点大小和荧光强度在不同条件下可发生变化同时也采用了蛋白质免疫印迹技术半定量检测了

γＨ２ＡＸ 蛋白表达情况获得了同免疫荧光检测焦

点 细胞比相一致结果 可见ＦＲＴ 组较 ＲＴ 组细胞

ＰＡＲＰ１ 表达升高即 ＤＮＡ ＳＳＢ 修复增强进而减少

了 ＤＳＢ 形成ＦＲＴ＋奥拉帕尼后抑制了 ＳＳＢ 修复增加了 ＤＳＢ 形成进而影响受照细胞的存活［３１４］ 本

研究进一步克隆形成实验分析也显示 ＦＲＴ 组较 ＲＴ组Ｄ０Ｄｑ ＳＦ２ 值均升高 １０ 以上 这与钱立庭

等［２］在人大肠癌细胞系 ＨＴ２９ 中一定剂量分步照

射 １５ ｍｉｎ 引起生物学参数改变一致 Ｐａｇａｎｅｔｔｉ［１５］

研究发现鼠肿瘤细胞（ＥＭＴ６ＳＣＣⅦ）在接受＞２ ｍｉｎ分次照射时就已经发生 ＤＮＡ 损伤修复王雯珺［１６］

通过对鼻咽癌细胞系亚致死损伤修复速度的测定认为其半数修复时间（Ｔ１ ２）在１５～３０ ｓ 间当分次照

射被延长 １５～４５ ｓ 就有可能导致生物效应下降 本

研究再次证实了单次剂量照射时间延长即相对剂

量率的降低可致生物效应下降 本实验中 ＲＴ＋奥拉帕尼组的生物效应较 ＲＴ 组未见提高这可能与

急速照射时相对剂量率较高相关在照射过程中极

少发生或不发生 ＤＮＡ ＳＳＢ 修复也观察不到剂量率

效应［１］综上所述ＰＡＲＰ 抑制剂奥拉帕尼对人鼻咽癌

ＣＮＥ２ 细胞在常规照射与分次照射（即模拟相对剂

量率降低）模式下生物学参数变化证实了同一剂量

随分次照射时间延长生物效应下降低剂量奥拉帕

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图 ４　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后免疫荧光显微镜下 γＨ２ＡＸ 焦点数（４Ａ 为对照４Ｂmdash４Ｅ 为 ４ 个组 １ Ｇｙ４Ｆmdash４Ｉ 为 ４ 个组 ２ Ｇｙ　 　 times４００）

图 ５　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合的各组细胞存活曲线

尼可在分次照射模式下降低相对剂量率下降引起的

ＳＳＢ 修复增加 ＤＳＢ 形成提高生物效应 丰富了

ＰＡＲＰ 抑制剂在联合放疗及剂量率效应方面的认

识为 ＰＡＲＰ 抑制剂在放疗方面应用可能提供实验

依据 当然体内肿瘤受体液血供氧合状态凋亡

等更多方面因素影响ＰＡＲＰ 抑制剂对分次照射剂

量率效应的影响还需进一步体内外研究

参　 考　 文　 献

［１］ 杨伟志电离辐射的细胞效应［Ａ］ 殷蔚伯余子豪徐国镇等肿瘤放射治疗学［Ｍ］４ 版北京中国协和医科大学出版社２００８２３１２３９Ｙａｎｇ ＷＺＨ Ｃｅｌｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｙｉｎ ＷＢ ＹｕＺＨＸｕ ＧＺＨｅｔ ａｌ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ［Ｍ］４ ｅｄ ＢｅｉｊｉｎｇＰｅｋｉｎｇｕｎｉｏｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｌｌｅｇｅ ｐｒｅｓｓ２００８２３１２３９

［２］ 钱立庭杨伟志刘新帆模拟 ＩＭＲＴ 模式的生物效应研究初探［Ｊ］ 中华放射肿瘤学杂志 ２００５ １４ （ ５） ４３１４３３ ＤＯＩ １０３７６０ ｊｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４Ｑｉａｎ ＬＴＹａｎｇ ＷＺＬｉｕ ＸＦ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｍｏｄｅｌ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ ＪＲａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ２００５１４（５）４３１４３３ＤＯＩ１０３７６０ ｊ ｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４

［３］ Ｓｈｒｉｖａｓｔａｖ Ｍ Ｄｅ Ｈａｒｏ ＬＰ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ ＪＡ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙ ｃｈｏｉｃｅ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ２００８１８（１）１３４１４７ＤＯＩ１０１０３８ ｃｒ２００７1049008 １１１

［４］ Ａｍeacute ＪＣＲｏｌｌｉ ＶＳｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｖｅｔ ａｌ Ｐａｒｐ２ａ Ｎｏｖｅｌ ＭａｍｍａｌｉａｎＤＮＡ ｄａｍａｇｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ［Ｊ］ ＪＢｉｏｌ Ｃｈｅｍ１９９９２７４（２５）１７８６０１７８６８ＤＯＩ１０１０７４ ｊｂｃ２７４２５１７８６０

middot８６７middot 中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

［５］ Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＭＡ ｈｕｍａｎ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ（ＡＤＰＲＴＬ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ［Ｊ］ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９９９ ５７ （ ３ ） ４４２４４５ＤＯＩ１０１００６ ｇｅｎｏ１９９９1049008 ５７９９

［６］ Ｗａｎｇ ＨＹ Ｗａｎｇ ＭＬ Ｗａｎｇ ＨＣ ｅｔ ａｌ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｈ２ＡＸｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＴＭ ａｎｄＤＮＡＰＫ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ［Ｊ］ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ２００５２０２（２）４９２５０２ＤＯＩ１０１００２ ｊｃｐ２０１４１

［７］ Ｇｉｕｎｔａ Ｓ Ｊａｃｋｓｏｎ ＳＰ Ｇｉｖｅ ｍｅ ａ ｂｒｅａｋ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎ ｍｉｔｏｓｉｓ ｔｈｅｍｉｔｏｔｉｃ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍａｒｋｓ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓｗｉｔｈ ｅａｒｌｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｅｖｅｎｔｓ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ２０１１１０ （ ８）１２１５１２２１ＤＯＩ１０４１６１ ｃｃ１０1049008 ８１５３３４

［８］ Ｒｏｔｈｋａｍｍ ＫＬoumlｂｒｉｃｈ ＭＥｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｌａｃｋ ｏｆ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｘｒａｙ ｄｏｓｅｓ ［Ｊ］ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ２００３１００（ ９）５０５７５０６２ ＤＯＩ１０１０７３ ｐｎａｓ０８３０９１８１００

［９］ Ｆｏｎｇ ＰＣＢｏｓｓ ＤＳＹａｐ ＴＡｅｔ ａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ）ＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ ｆｒｏｍ ＢＲＣＡ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｃａｒｒｉｅｒｓ ［Ｊ］ ＮＥｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９ ３６１ （ ２ ） １２３１３４ ＤＯＩ １０ １０５６ ＮＥＪＭｏａ０９００２１２

［１０］ 糜福顺电离辐射 ＤＮＡ 及染色体的作用［Ａ］ 沈瑜糜福顺肿瘤放射生物学［Ｍ］北京中国医药科技出版社２００２２９４７Ｍｉ ＦＳＨＲｏｌｅ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｉｎ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｓｈｅｎ Ｙ Ｍｉ ＦＳＨ Ｔｕｍｏｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ［Ｍ］ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈｉｎａｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｈｏｕｓｅ２００２２９４７

［１１］ 王东基于 ＤＮＡ 损伤修复的分子靶向治疗肿瘤靶向治疗的新

篇章［Ｊ］ 第三军医大学学报２０１４３６（２２）２２４３２２４８Ｗａｎｇ ＤＴａｒｇｅｔｉｎｇ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙｓａ ｎｅｗ ｅｐｉｓｏｄｅ ｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ［Ｊ］Ｊ Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１４３６（２２）２２４３２２４８

［１２］ Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｃａｐｅｔｉｌｌｏ ＯＬｅｅ ＡＮｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ Ｍ ｅｔ ａｌ Ｈ２ＡＸ ｔｈｅｈｉｓｔｏｎｅ ｇｕａｒｄｉａｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ［Ｊ］ ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ２００４３（８９）９５９９６７ＤＯＩ１０１０１６ ｊｄｎａｒｅｐ２００４０３０２４

［１３］ 刘敏赵苒γＨ２ＡＸ 检测在 ＤＮＡ 双链断裂研究中应用［Ｊ］ 中国公共卫生２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４Ｌｉｕ ＭＺｈａｏ Ｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ γＨ２ＡＸ ａｓｓａｙ ｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐｕｂｌ Ｈｅａｌｔｈ２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４

［１４］ Ｋｕｏ ＬＪ Ｙａｎｇ ＬＸ ＧａｍｍａＨ２ＡＸａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｉｎ Ｖｉｖｏ２００８２２（３）３０５３０９

［１５］ Ｐａｇａｎｅｔｔｉ ＨＣｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｄｕｅ ｔｏ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｄｏｓｅｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｉｍｅｓ ｉｎ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ［Ｊ］ Ｉｎｔ Ｊ ＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ２００５６３（ ３）８９２９００ ＤＯＩ１０ １０１６ ｊ ｉｊｒｏｂｐ２００５０７９５３

［１６］ 王雯珺郑小康刘佳宾等鼻咽癌细胞株 ＣＮＥ１ＨＯＮＥ１Ｃ６６６１ 和 ＣＮＥ２ 的亚致死性损伤修复速度测定［Ｊ］ 南方医科大学学报２０１０３０（４）７７７７７８Ｗａｎｇ ＷＪＺｈｅｎｇ ＸＫＬｉｕ ＪＢ ｅｔ ａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐａｉｒｈａｌｆｔｉｍｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＣＮＥ１ＣＮＥ２ＨＯＮＥ１ ａｎｄ Ｃ６６６１ ［Ｊ］ Ｊ Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１０３０（４）７７７７７８

（收稿日期２０１５０６０１）

中国抗癌协会第四届鼻咽癌专业委员会

　 （按姓氏汉语拼音字母表排序）

　 顾问 徐国镇

　 名誉主任委员 潘建基

　 名誉副主任委员 卢泰祥

　 主任委员 胡超苏

　 侯任主任委员 郎锦义

　 副主任委员 陈晓钟　 马　 骏　 郎锦义　 林少俊　 朱小东

　 常务委员 陈韵彬　 高　 黎　 何　 侠　 胡德胜　 胡国清　 金　 风　 李金高　 石　 梅　 王佩国　席许平　 夏云飞　 易俊林

　 秘书长 林少俊　 王孝深

　 委员 敖　 帆　 蔡　 晶　 陈传本　 陈　 凡　 高力英　 高　 劲　 高太虎　 郭　 良　 郭　 翔　 郭　 晔　管一国　 韩　 非　 郝俊芳　 黄生富　 季明芳　 姜　 锋　 李国庆　 李　 龄　 李　 平　 李晓江　林少民　 林志雄　 刘秋芳　 刘士新　 马　 林　 麦海强　 秦继勇　 邱元正　 申良方　 沈文斌　石永刚　 孙　 艳　 王仁生　 王若峥　 王胜资　 王孝深　 王　 颖　 温凤云　 吴　 慧　 吴伟莉　徐向英　 应红梅　 于　 洪　 郁志龙　 赵　 充　 张石川　 折　 虹　 宗井凤

　 秘书 区晓敏　 宗井凤

middot９６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

采用 ＲＩＰＡ 裂解液裂解目的细胞ＢＣＡ 法计算样品 蛋白浓度 选择 ８ＳＤＳＰＡＧＥ 分离样品蛋白 ６０ μｇ　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　

图 １　 ＣＮＥ２ 细胞系各剂量点分次照射模式（１Ａ 为 １ Ｇｙ１Ｂ 为 ２ Ｇｙ１Ｃ 为 ３ Ｇｙ１Ｄ 为 ５ Ｇｙ１Ｅ 为 ７ Ｇｙ１Ｆ 为 １０ Ｇｙ）

　 　

转膜至硝酸纤维滤膜于室温摇床封闭 ２ ｈ 然后置

于含兔抗人 ＰＡＲＰ１ 单抗（浓度 １ ∶ ３００）鼠抗人

γＨ２ＡＸ 单抗（浓度 １ ∶ ５００）鼠抗人 ＧＡＰＤＨ 单抗

（浓度 １ ∶ １ ０００）封闭液中４孵育过夜 将膜置

于含辣根过氧化物酶偶联的羊抗鼠 ＩｇＧ 二抗中（浓度 １ ∶ ５ ０００）室温孵育 ２ ｈ 后采用 ＥＣＬ Ｐｌｕｓ 显色Ｉｍａｇｅ Ｌａｂ 软件分析蛋白条带灰度值 每组实验重

复 ３ 次６免疫荧光检测 γＨ２ＡＸ 焦点数各实验组细胞

照射 １ ｈ 后采用 ４多聚甲醛 ４固定 １５ ｍｉｎ２ 倍

ＳＳＣ＋０1049008 １ＮＰ４０ 洗涤 ３ 次０1049008 ２ＴｒｉｔｏｎＸ１００ 破膜

１５ ｍｉｎ同前洗涤 ２００ μＬ 山羊血清工作液封闭 １ｈ洗涤冰乙醇溶液梯度脱水自然干燥 １０ μＬ 鼠

抗 γＨ２ＡＸ 抗体（浓度 １ ∶ １ ０００）密封湿盒内 ３７孵

育过夜 再次洗涤脱水干燥２０ μＬ ＦＩＴＣ 羊抗鼠

ＩｇＧ 抗体 ３７孵育 ４５ ｍｉｎ ＤＡＰＩ２０ μＬ 复染 ５ ｍｉｎ洗涤后 ９０甘油封片荧光显微镜观察 γＨ２ＡＸ 焦

点 随机选择 ４ 个不同视野计数焦点 细胞比７统计方法使用 ＳＰＳＳ １９1049008 ０ 软件对 ４ 个组间

比较行使用单因素方差分析两两比较采用 ＳＮＫｑ检验 Ｐ＜０1049008 ０５ 为差异有统计学意义

结　 　 果

　 　 １奥拉帕尼对鼻咽癌细胞 ＣＮＥ２ 抑制作用０３1049008 １２５６1049008 ２５０１２1049008 ５００２５1049008 ０００５０1049008 ０００ μｍｏｌ Ｌ 浓度

时 ＣＮＥ２ 细胞存活百分比依次为 １００９６1049008 ５４８３1049008 ２２５９1049008 ８８４０1049008 ３４２７1049008 ４４可见随药物浓

度增加抑制率上升 ＩＣ１０ ＩＣ５０ 值分别为 ４1049008 ０２０1049008 ３

μｍｏｌ Ｌ 故选用 ＩＣ１０值 ４ μｍｏｌ Ｌ 作为后续奥拉帕

尼给药浓度２ＲＴ 与 ＦＲＴ 组照射后 ＣＮＥ２ 细胞 ＰＡＲＰ１ 表

达水平比较ＲＴ 及 ＦＲＴ 组照射后细胞 ＰＡＲＰ１ 相对

表达量较空白组明显升高而相同剂量点 ＦＲＴ 组均

高于 ＲＴ 组详见图 ２

图 ２　 ＣＮＥ２ 细胞系急速照射（各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）和分次照射（各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）后蛋白印迹法检测的 ＰＡＲＰ１ 表达水平比较（２Ａ 为电泳图上下依次为 １２ Ｇｙ 和内参照１２ 为 ０ Ｇｙ３４为急速照射５６ 为分次照射 ２Ｂ 为定量分析）

　 　 ３不同模式照射后 ＣＮＥ２ 细胞 γＨ２ＡＸ 蛋白表

达和焦点数同剂量点 ＦＲＴ 组较 ＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 蛋白

表达降低奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组较 ＦＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 蛋白

表达增加ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ

middot６６７middot 中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

组间无差异详见图 ３ １ Ｇｙ 点 ＲＴＦＲＴ奥拉帕尼

＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组焦点 细胞比分别为 ０1049008 ４９（ ２４ ４９ ） ０1049008 ２１ （ １３ ６１ ） ０1049008 ４８ （ ２８ ５８ ） ０1049008 ４７（１６ ３４ ） ２ Ｇｙ 点 分 别 为 ０1049008 ５９ （ １９ ３２ ） ０1049008 ４０（８ ２０） ０1049008 ６２ （ １３ ２１ ） ０1049008 ５７ （ １６ ２８ ） 图 ４ 为

γＨ２ＡＸ 焦点数图示 可见各处理组 γＨ２ＡＸ 表达量

在蛋白印迹法及免疫荧光检测中获得一致结果

图 ３　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后蛋白印迹法检测的 γＨ２ＡＸ 表达水平比较［３Ａ 为电泳图上下依次为 ０１２ Ｇｙ 和内参照１２３４ 分别为图题顺序的 ４个模式照射组 ３Ｂ 为定量分析］

　 　 ４各剂量点细胞存活分数根据急速照射 ＲＴ组分步照射 ＦＲＴ 组奥拉帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组克隆形成实验得出各组各剂量点细胞存活曲

线见图 ５相关生物学参数见表 １ 可见ＦＲＴ 组较

ＲＴ 组Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值分别增加了 １１1049008 ６７１５1049008 ７８２３1049008 ６１奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组较 ＦＲＴ 组 Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值

分别降低了 １１1049008 １９６1049008 ４４１３1049008 ２６ＲＴ 组奥拉

帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组间无差异

表 １　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合各组细胞存活曲线参数

　 　 组别 Ｄ０（Ｇｙ） Ｄｑ（Ｇｙ） Ｎ ＳＦ２

急速照射（ＲＴ） ０９６８ １１５３ ３２９０ ０３６０分次照射（ＦＲＴ） １０８１ １３３５ ３４３７ ０４４５奥拉帕尼＋ＲＴ ０９５８ １１４４ ３３０１ ０３５４奥拉帕尼＋ＦＲＴ ０９６０ １２４９ ３６７４ ０３８６

讨　 　 论

　 　 电离辐射所致的 ＤＮＡ ＳＳＢ 是 ＤＳＢ 的 １０～ ２０

倍［１１０］ 通常情况下 ＳＳＢ 能进行较完整修复ＤＳＢ的修复则要困难许多 研究发现 ＰＡＲＰ 是修复 ＳＳＢ所必须的当 ＰＡＲＰ 被抑制后大量外源性 ＳＳＢ 聚集

在细胞内如果进入复制叉可转变成为 ＤＳＢ［１１］ 因

此有理由相信 ＰＡＲＰ 抑制剂对 ＤＮＡ 损伤修复的干

预可影响受照细胞生物效应本研究首先证实了 ＣＮＥ２ 细胞在 ＲＴ 与 ＦＲＴ 的

ＰＡＲＰ１ 表达差异这是由于相对剂量率降低使

ＦＲＴ 组受照细胞出现 ＳＳＢ 修复的增强为进一步比

较在相同剂量点 ＲＴＦＲＴ奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼

＋ＦＲＴ 组 ＤＳＢ 情况选择了能反映 ＤＳＢ 数量的敏感

指标mdashγＨ２ＡＸ［１２１３］ 利用荧光显微镜对 γＨ２ＡＸ 的

特异性荧光抗原抗体反应可观察到在 ＤＳＢ 上分散

在细胞核上的焦点 研究表明其与 ＤＮＡ 双链断裂

的数量一一对应并被认为是检测 ＤＮＡ ＤＳＢldquo金标

准rdquo ［１２］ 本研究发现同一剂量 ＦＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 焦

点 细胞比相较 ＲＴ 照射组明显减少而 ＦＲＴ＋奥拉

帕尼能显著提高焦点 细胞比 本实验考虑 γＨ２ＡＸ焦点大小和荧光强度在不同条件下可发生变化同时也采用了蛋白质免疫印迹技术半定量检测了

γＨ２ＡＸ 蛋白表达情况获得了同免疫荧光检测焦

点 细胞比相一致结果 可见ＦＲＴ 组较 ＲＴ 组细胞

ＰＡＲＰ１ 表达升高即 ＤＮＡ ＳＳＢ 修复增强进而减少

了 ＤＳＢ 形成ＦＲＴ＋奥拉帕尼后抑制了 ＳＳＢ 修复增加了 ＤＳＢ 形成进而影响受照细胞的存活［３１４］ 本

研究进一步克隆形成实验分析也显示 ＦＲＴ 组较 ＲＴ组Ｄ０Ｄｑ ＳＦ２ 值均升高 １０ 以上 这与钱立庭

等［２］在人大肠癌细胞系 ＨＴ２９ 中一定剂量分步照

射 １５ ｍｉｎ 引起生物学参数改变一致 Ｐａｇａｎｅｔｔｉ［１５］

研究发现鼠肿瘤细胞（ＥＭＴ６ＳＣＣⅦ）在接受＞２ ｍｉｎ分次照射时就已经发生 ＤＮＡ 损伤修复王雯珺［１６］

通过对鼻咽癌细胞系亚致死损伤修复速度的测定认为其半数修复时间（Ｔ１ ２）在１５～３０ ｓ 间当分次照

射被延长 １５～４５ ｓ 就有可能导致生物效应下降 本

研究再次证实了单次剂量照射时间延长即相对剂

量率的降低可致生物效应下降 本实验中 ＲＴ＋奥拉帕尼组的生物效应较 ＲＴ 组未见提高这可能与

急速照射时相对剂量率较高相关在照射过程中极

少发生或不发生 ＤＮＡ ＳＳＢ 修复也观察不到剂量率

效应［１］综上所述ＰＡＲＰ 抑制剂奥拉帕尼对人鼻咽癌

ＣＮＥ２ 细胞在常规照射与分次照射（即模拟相对剂

量率降低）模式下生物学参数变化证实了同一剂量

随分次照射时间延长生物效应下降低剂量奥拉帕

middot７６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

图 ４　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后免疫荧光显微镜下 γＨ２ＡＸ 焦点数（４Ａ 为对照４Ｂmdash４Ｅ 为 ４ 个组 １ Ｇｙ４Ｆmdash４Ｉ 为 ４ 个组 ２ Ｇｙ　 　 times４００）

图 ５　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合的各组细胞存活曲线

尼可在分次照射模式下降低相对剂量率下降引起的

ＳＳＢ 修复增加 ＤＳＢ 形成提高生物效应 丰富了

ＰＡＲＰ 抑制剂在联合放疗及剂量率效应方面的认

识为 ＰＡＲＰ 抑制剂在放疗方面应用可能提供实验

依据 当然体内肿瘤受体液血供氧合状态凋亡

等更多方面因素影响ＰＡＲＰ 抑制剂对分次照射剂

量率效应的影响还需进一步体内外研究

参　 考　 文　 献

［１］ 杨伟志电离辐射的细胞效应［Ａ］ 殷蔚伯余子豪徐国镇等肿瘤放射治疗学［Ｍ］４ 版北京中国协和医科大学出版社２００８２３１２３９Ｙａｎｇ ＷＺＨ Ｃｅｌｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｙｉｎ ＷＢ ＹｕＺＨＸｕ ＧＺＨｅｔ ａｌ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ［Ｍ］４ ｅｄ ＢｅｉｊｉｎｇＰｅｋｉｎｇｕｎｉｏｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｌｌｅｇｅ ｐｒｅｓｓ２００８２３１２３９

［２］ 钱立庭杨伟志刘新帆模拟 ＩＭＲＴ 模式的生物效应研究初探［Ｊ］ 中华放射肿瘤学杂志 ２００５ １４ （ ５） ４３１４３３ ＤＯＩ １０３７６０ ｊｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４Ｑｉａｎ ＬＴＹａｎｇ ＷＺＬｉｕ ＸＦ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｍｏｄｅｌ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ ＪＲａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ２００５１４（５）４３１４３３ＤＯＩ１０３７６０ ｊ ｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４

［３］ Ｓｈｒｉｖａｓｔａｖ Ｍ Ｄｅ Ｈａｒｏ ＬＰ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ ＪＡ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙ ｃｈｏｉｃｅ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ２００８１８（１）１３４１４７ＤＯＩ１０１０３８ ｃｒ２００７1049008 １１１

［４］ Ａｍeacute ＪＣＲｏｌｌｉ ＶＳｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｖｅｔ ａｌ Ｐａｒｐ２ａ Ｎｏｖｅｌ ＭａｍｍａｌｉａｎＤＮＡ ｄａｍａｇｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ［Ｊ］ ＪＢｉｏｌ Ｃｈｅｍ１９９９２７４（２５）１７８６０１７８６８ＤＯＩ１０１０７４ ｊｂｃ２７４２５１７８６０

middot８６７middot 中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

［５］ Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＭＡ ｈｕｍａｎ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ（ＡＤＰＲＴＬ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ［Ｊ］ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９９９ ５７ （ ３ ） ４４２４４５ＤＯＩ１０１００６ ｇｅｎｏ１９９９1049008 ５７９９

［６］ Ｗａｎｇ ＨＹ Ｗａｎｇ ＭＬ Ｗａｎｇ ＨＣ ｅｔ ａｌ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｈ２ＡＸｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＴＭ ａｎｄＤＮＡＰＫ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ［Ｊ］ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ２００５２０２（２）４９２５０２ＤＯＩ１０１００２ ｊｃｐ２０１４１

［７］ Ｇｉｕｎｔａ Ｓ Ｊａｃｋｓｏｎ ＳＰ Ｇｉｖｅ ｍｅ ａ ｂｒｅａｋ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎ ｍｉｔｏｓｉｓ ｔｈｅｍｉｔｏｔｉｃ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍａｒｋｓ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓｗｉｔｈ ｅａｒｌｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｅｖｅｎｔｓ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ２０１１１０ （ ８）１２１５１２２１ＤＯＩ１０４１６１ ｃｃ１０1049008 ８１５３３４

［８］ Ｒｏｔｈｋａｍｍ ＫＬoumlｂｒｉｃｈ ＭＥｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｌａｃｋ ｏｆ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｘｒａｙ ｄｏｓｅｓ ［Ｊ］ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ２００３１００（ ９）５０５７５０６２ ＤＯＩ１０１０７３ ｐｎａｓ０８３０９１８１００

［９］ Ｆｏｎｇ ＰＣＢｏｓｓ ＤＳＹａｐ ＴＡｅｔ ａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ）ＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ ｆｒｏｍ ＢＲＣＡ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｃａｒｒｉｅｒｓ ［Ｊ］ ＮＥｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９ ３６１ （ ２ ） １２３１３４ ＤＯＩ １０ １０５６ ＮＥＪＭｏａ０９００２１２

［１０］ 糜福顺电离辐射 ＤＮＡ 及染色体的作用［Ａ］ 沈瑜糜福顺肿瘤放射生物学［Ｍ］北京中国医药科技出版社２００２２９４７Ｍｉ ＦＳＨＲｏｌｅ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｉｎ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｓｈｅｎ Ｙ Ｍｉ ＦＳＨ Ｔｕｍｏｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ［Ｍ］ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈｉｎａｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｈｏｕｓｅ２００２２９４７

［１１］ 王东基于 ＤＮＡ 损伤修复的分子靶向治疗肿瘤靶向治疗的新

篇章［Ｊ］ 第三军医大学学报２０１４３６（２２）２２４３２２４８Ｗａｎｇ ＤＴａｒｇｅｔｉｎｇ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙｓａ ｎｅｗ ｅｐｉｓｏｄｅ ｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ［Ｊ］Ｊ Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１４３６（２２）２２４３２２４８

［１２］ Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｃａｐｅｔｉｌｌｏ ＯＬｅｅ ＡＮｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ Ｍ ｅｔ ａｌ Ｈ２ＡＸ ｔｈｅｈｉｓｔｏｎｅ ｇｕａｒｄｉａｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ［Ｊ］ ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ２００４３（８９）９５９９６７ＤＯＩ１０１０１６ ｊｄｎａｒｅｐ２００４０３０２４

［１３］ 刘敏赵苒γＨ２ＡＸ 检测在 ＤＮＡ 双链断裂研究中应用［Ｊ］ 中国公共卫生２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４Ｌｉｕ ＭＺｈａｏ Ｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ γＨ２ＡＸ ａｓｓａｙ ｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐｕｂｌ Ｈｅａｌｔｈ２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４

［１４］ Ｋｕｏ ＬＪ Ｙａｎｇ ＬＸ ＧａｍｍａＨ２ＡＸａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｉｎ Ｖｉｖｏ２００８２２（３）３０５３０９

［１５］ Ｐａｇａｎｅｔｔｉ ＨＣｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｄｕｅ ｔｏ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｄｏｓｅｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｉｍｅｓ ｉｎ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ［Ｊ］ Ｉｎｔ Ｊ ＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ２００５６３（ ３）８９２９００ ＤＯＩ１０ １０１６ ｊ ｉｊｒｏｂｐ２００５０７９５３

［１６］ 王雯珺郑小康刘佳宾等鼻咽癌细胞株 ＣＮＥ１ＨＯＮＥ１Ｃ６６６１ 和 ＣＮＥ２ 的亚致死性损伤修复速度测定［Ｊ］ 南方医科大学学报２０１０３０（４）７７７７７８Ｗａｎｇ ＷＪＺｈｅｎｇ ＸＫＬｉｕ ＪＢ ｅｔ ａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐａｉｒｈａｌｆｔｉｍｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＣＮＥ１ＣＮＥ２ＨＯＮＥ１ ａｎｄ Ｃ６６６１ ［Ｊ］ Ｊ Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１０３０（４）７７７７７８

（收稿日期２０１５０６０１）

中国抗癌协会第四届鼻咽癌专业委员会

　 （按姓氏汉语拼音字母表排序）

　 顾问 徐国镇

　 名誉主任委员 潘建基

　 名誉副主任委员 卢泰祥

　 主任委员 胡超苏

　 侯任主任委员 郎锦义

　 副主任委员 陈晓钟　 马　 骏　 郎锦义　 林少俊　 朱小东

　 常务委员 陈韵彬　 高　 黎　 何　 侠　 胡德胜　 胡国清　 金　 风　 李金高　 石　 梅　 王佩国　席许平　 夏云飞　 易俊林

　 秘书长 林少俊　 王孝深

　 委员 敖　 帆　 蔡　 晶　 陈传本　 陈　 凡　 高力英　 高　 劲　 高太虎　 郭　 良　 郭　 翔　 郭　 晔　管一国　 韩　 非　 郝俊芳　 黄生富　 季明芳　 姜　 锋　 李国庆　 李　 龄　 李　 平　 李晓江　林少民　 林志雄　 刘秋芳　 刘士新　 马　 林　 麦海强　 秦继勇　 邱元正　 申良方　 沈文斌　石永刚　 孙　 艳　 王仁生　 王若峥　 王胜资　 王孝深　 王　 颖　 温凤云　 吴　 慧　 吴伟莉　徐向英　 应红梅　 于　 洪　 郁志龙　 赵　 充　 张石川　 折　 虹　 宗井凤

　 秘书 区晓敏　 宗井凤

middot９６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

组间无差异详见图 ３ １ Ｇｙ 点 ＲＴＦＲＴ奥拉帕尼

＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组焦点 细胞比分别为 ０1049008 ４９（ ２４ ４９ ） ０1049008 ２１ （ １３ ６１ ） ０1049008 ４８ （ ２８ ５８ ） ０1049008 ４７（１６ ３４ ） ２ Ｇｙ 点 分 别 为 ０1049008 ５９ （ １９ ３２ ） ０1049008 ４０（８ ２０） ０1049008 ６２ （ １３ ２１ ） ０1049008 ５７ （ １６ ２８ ） 图 ４ 为

γＨ２ＡＸ 焦点数图示 可见各处理组 γＨ２ＡＸ 表达量

在蛋白印迹法及免疫荧光检测中获得一致结果

图 ３　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后蛋白印迹法检测的 γＨ２ＡＸ 表达水平比较［３Ａ 为电泳图上下依次为 ０１２ Ｇｙ 和内参照１２３４ 分别为图题顺序的 ４个模式照射组 ３Ｂ 为定量分析］

　 　 ４各剂量点细胞存活分数根据急速照射 ＲＴ组分步照射 ＦＲＴ 组奥拉帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组克隆形成实验得出各组各剂量点细胞存活曲

线见图 ５相关生物学参数见表 １ 可见ＦＲＴ 组较

ＲＴ 组Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值分别增加了 １１1049008 ６７１５1049008 ７８２３1049008 ６１奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组较 ＦＲＴ 组 Ｄ０ＤｑＳＦ２ 值

分别降低了 １１1049008 １９６1049008 ４４１３1049008 ２６ＲＴ 组奥拉

帕尼＋ＲＴ 组奥拉帕尼＋ＦＲＴ 组间无差异

表 １　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合各组细胞存活曲线参数

　 　 组别 Ｄ０（Ｇｙ） Ｄｑ（Ｇｙ） Ｎ ＳＦ２

急速照射（ＲＴ） ０９６８ １１５３ ３２９０ ０３６０分次照射（ＦＲＴ） １０８１ １３３５ ３４３７ ０４４５奥拉帕尼＋ＲＴ ０９５８ １１４４ ３３０１ ０３５４奥拉帕尼＋ＦＲＴ ０９６０ １２４９ ３６７４ ０３８６

讨　 　 论

　 　 电离辐射所致的 ＤＮＡ ＳＳＢ 是 ＤＳＢ 的 １０～ ２０

倍［１１０］ 通常情况下 ＳＳＢ 能进行较完整修复ＤＳＢ的修复则要困难许多 研究发现 ＰＡＲＰ 是修复 ＳＳＢ所必须的当 ＰＡＲＰ 被抑制后大量外源性 ＳＳＢ 聚集

在细胞内如果进入复制叉可转变成为 ＤＳＢ［１１］ 因

此有理由相信 ＰＡＲＰ 抑制剂对 ＤＮＡ 损伤修复的干

预可影响受照细胞生物效应本研究首先证实了 ＣＮＥ２ 细胞在 ＲＴ 与 ＦＲＴ 的

ＰＡＲＰ１ 表达差异这是由于相对剂量率降低使

ＦＲＴ 组受照细胞出现 ＳＳＢ 修复的增强为进一步比

较在相同剂量点 ＲＴＦＲＴ奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼

＋ＦＲＴ 组 ＤＳＢ 情况选择了能反映 ＤＳＢ 数量的敏感

指标mdashγＨ２ＡＸ［１２１３］ 利用荧光显微镜对 γＨ２ＡＸ 的

特异性荧光抗原抗体反应可观察到在 ＤＳＢ 上分散

在细胞核上的焦点 研究表明其与 ＤＮＡ 双链断裂

的数量一一对应并被认为是检测 ＤＮＡ ＤＳＢldquo金标

准rdquo ［１２］ 本研究发现同一剂量 ＦＲＴ 组 γＨ２ＡＸ 焦

点 细胞比相较 ＲＴ 照射组明显减少而 ＦＲＴ＋奥拉

帕尼能显著提高焦点 细胞比 本实验考虑 γＨ２ＡＸ焦点大小和荧光强度在不同条件下可发生变化同时也采用了蛋白质免疫印迹技术半定量检测了

γＨ２ＡＸ 蛋白表达情况获得了同免疫荧光检测焦

点 细胞比相一致结果 可见ＦＲＴ 组较 ＲＴ 组细胞

ＰＡＲＰ１ 表达升高即 ＤＮＡ ＳＳＢ 修复增强进而减少

了 ＤＳＢ 形成ＦＲＴ＋奥拉帕尼后抑制了 ＳＳＢ 修复增加了 ＤＳＢ 形成进而影响受照细胞的存活［３１４］ 本

研究进一步克隆形成实验分析也显示 ＦＲＴ 组较 ＲＴ组Ｄ０Ｄｑ ＳＦ２ 值均升高 １０ 以上 这与钱立庭

等［２］在人大肠癌细胞系 ＨＴ２９ 中一定剂量分步照

射 １５ ｍｉｎ 引起生物学参数改变一致 Ｐａｇａｎｅｔｔｉ［１５］

研究发现鼠肿瘤细胞（ＥＭＴ６ＳＣＣⅦ）在接受＞２ ｍｉｎ分次照射时就已经发生 ＤＮＡ 损伤修复王雯珺［１６］

通过对鼻咽癌细胞系亚致死损伤修复速度的测定认为其半数修复时间（Ｔ１ ２）在１５～３０ ｓ 间当分次照

射被延长 １５～４５ ｓ 就有可能导致生物效应下降 本

研究再次证实了单次剂量照射时间延长即相对剂

量率的降低可致生物效应下降 本实验中 ＲＴ＋奥拉帕尼组的生物效应较 ＲＴ 组未见提高这可能与

急速照射时相对剂量率较高相关在照射过程中极

少发生或不发生 ＤＮＡ ＳＳＢ 修复也观察不到剂量率

效应［１］综上所述ＰＡＲＰ 抑制剂奥拉帕尼对人鼻咽癌

ＣＮＥ２ 细胞在常规照射与分次照射（即模拟相对剂

量率降低）模式下生物学参数变化证实了同一剂量

随分次照射时间延长生物效应下降低剂量奥拉帕

middot７６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

图 ４　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后免疫荧光显微镜下 γＨ２ＡＸ 焦点数（４Ａ 为对照４Ｂmdash４Ｅ 为 ４ 个组 １ Ｇｙ４Ｆmdash４Ｉ 为 ４ 个组 ２ Ｇｙ　 　 times４００）

图 ５　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合的各组细胞存活曲线

尼可在分次照射模式下降低相对剂量率下降引起的

ＳＳＢ 修复增加 ＤＳＢ 形成提高生物效应 丰富了

ＰＡＲＰ 抑制剂在联合放疗及剂量率效应方面的认

识为 ＰＡＲＰ 抑制剂在放疗方面应用可能提供实验

依据 当然体内肿瘤受体液血供氧合状态凋亡

等更多方面因素影响ＰＡＲＰ 抑制剂对分次照射剂

量率效应的影响还需进一步体内外研究

参　 考　 文　 献

［１］ 杨伟志电离辐射的细胞效应［Ａ］ 殷蔚伯余子豪徐国镇等肿瘤放射治疗学［Ｍ］４ 版北京中国协和医科大学出版社２００８２３１２３９Ｙａｎｇ ＷＺＨ Ｃｅｌｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｙｉｎ ＷＢ ＹｕＺＨＸｕ ＧＺＨｅｔ ａｌ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ［Ｍ］４ ｅｄ ＢｅｉｊｉｎｇＰｅｋｉｎｇｕｎｉｏｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｌｌｅｇｅ ｐｒｅｓｓ２００８２３１２３９

［２］ 钱立庭杨伟志刘新帆模拟 ＩＭＲＴ 模式的生物效应研究初探［Ｊ］ 中华放射肿瘤学杂志 ２００５ １４ （ ５） ４３１４３３ ＤＯＩ １０３７６０ ｊｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４Ｑｉａｎ ＬＴＹａｎｇ ＷＺＬｉｕ ＸＦ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｍｏｄｅｌ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ ＪＲａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ２００５１４（５）４３１４３３ＤＯＩ１０３７６０ ｊ ｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４

［３］ Ｓｈｒｉｖａｓｔａｖ Ｍ Ｄｅ Ｈａｒｏ ＬＰ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ ＪＡ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙ ｃｈｏｉｃｅ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ２００８１８（１）１３４１４７ＤＯＩ１０１０３８ ｃｒ２００７1049008 １１１

［４］ Ａｍeacute ＪＣＲｏｌｌｉ ＶＳｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｖｅｔ ａｌ Ｐａｒｐ２ａ Ｎｏｖｅｌ ＭａｍｍａｌｉａｎＤＮＡ ｄａｍａｇｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ［Ｊ］ ＪＢｉｏｌ Ｃｈｅｍ１９９９２７４（２５）１７８６０１７８６８ＤＯＩ１０１０７４ ｊｂｃ２７４２５１７８６０

middot８６７middot 中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

［５］ Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＭＡ ｈｕｍａｎ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ（ＡＤＰＲＴＬ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ［Ｊ］ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９９９ ５７ （ ３ ） ４４２４４５ＤＯＩ１０１００６ ｇｅｎｏ１９９９1049008 ５７９９

［６］ Ｗａｎｇ ＨＹ Ｗａｎｇ ＭＬ Ｗａｎｇ ＨＣ ｅｔ ａｌ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｈ２ＡＸｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＴＭ ａｎｄＤＮＡＰＫ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ［Ｊ］ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ２００５２０２（２）４９２５０２ＤＯＩ１０１００２ ｊｃｐ２０１４１

［７］ Ｇｉｕｎｔａ Ｓ Ｊａｃｋｓｏｎ ＳＰ Ｇｉｖｅ ｍｅ ａ ｂｒｅａｋ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎ ｍｉｔｏｓｉｓ ｔｈｅｍｉｔｏｔｉｃ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍａｒｋｓ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓｗｉｔｈ ｅａｒｌｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｅｖｅｎｔｓ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ２０１１１０ （ ８）１２１５１２２１ＤＯＩ１０４１６１ ｃｃ１０1049008 ８１５３３４

［８］ Ｒｏｔｈｋａｍｍ ＫＬoumlｂｒｉｃｈ ＭＥｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｌａｃｋ ｏｆ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｘｒａｙ ｄｏｓｅｓ ［Ｊ］ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ２００３１００（ ９）５０５７５０６２ ＤＯＩ１０１０７３ ｐｎａｓ０８３０９１８１００

［９］ Ｆｏｎｇ ＰＣＢｏｓｓ ＤＳＹａｐ ＴＡｅｔ ａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ）ＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ ｆｒｏｍ ＢＲＣＡ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｃａｒｒｉｅｒｓ ［Ｊ］ ＮＥｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９ ３６１ （ ２ ） １２３１３４ ＤＯＩ １０ １０５６ ＮＥＪＭｏａ０９００２１２

［１０］ 糜福顺电离辐射 ＤＮＡ 及染色体的作用［Ａ］ 沈瑜糜福顺肿瘤放射生物学［Ｍ］北京中国医药科技出版社２００２２９４７Ｍｉ ＦＳＨＲｏｌｅ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｉｎ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｓｈｅｎ Ｙ Ｍｉ ＦＳＨ Ｔｕｍｏｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ［Ｍ］ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈｉｎａｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｈｏｕｓｅ２００２２９４７

［１１］ 王东基于 ＤＮＡ 损伤修复的分子靶向治疗肿瘤靶向治疗的新

篇章［Ｊ］ 第三军医大学学报２０１４３６（２２）２２４３２２４８Ｗａｎｇ ＤＴａｒｇｅｔｉｎｇ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙｓａ ｎｅｗ ｅｐｉｓｏｄｅ ｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ［Ｊ］Ｊ Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１４３６（２２）２２４３２２４８

［１２］ Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｃａｐｅｔｉｌｌｏ ＯＬｅｅ ＡＮｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ Ｍ ｅｔ ａｌ Ｈ２ＡＸ ｔｈｅｈｉｓｔｏｎｅ ｇｕａｒｄｉａｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ［Ｊ］ ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ２００４３（８９）９５９９６７ＤＯＩ１０１０１６ ｊｄｎａｒｅｐ２００４０３０２４

［１３］ 刘敏赵苒γＨ２ＡＸ 检测在 ＤＮＡ 双链断裂研究中应用［Ｊ］ 中国公共卫生２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４Ｌｉｕ ＭＺｈａｏ Ｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ γＨ２ＡＸ ａｓｓａｙ ｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐｕｂｌ Ｈｅａｌｔｈ２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４

［１４］ Ｋｕｏ ＬＪ Ｙａｎｇ ＬＸ ＧａｍｍａＨ２ＡＸａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｉｎ Ｖｉｖｏ２００８２２（３）３０５３０９

［１５］ Ｐａｇａｎｅｔｔｉ ＨＣｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｄｕｅ ｔｏ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｄｏｓｅｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｉｍｅｓ ｉｎ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ［Ｊ］ Ｉｎｔ Ｊ ＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ２００５６３（ ３）８９２９００ ＤＯＩ１０ １０１６ ｊ ｉｊｒｏｂｐ２００５０７９５３

［１６］ 王雯珺郑小康刘佳宾等鼻咽癌细胞株 ＣＮＥ１ＨＯＮＥ１Ｃ６６６１ 和 ＣＮＥ２ 的亚致死性损伤修复速度测定［Ｊ］ 南方医科大学学报２０１０３０（４）７７７７７８Ｗａｎｇ ＷＪＺｈｅｎｇ ＸＫＬｉｕ ＪＢ ｅｔ ａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐａｉｒｈａｌｆｔｉｍｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＣＮＥ１ＣＮＥ２ＨＯＮＥ１ ａｎｄ Ｃ６６６１ ［Ｊ］ Ｊ Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１０３０（４）７７７７７８

（收稿日期２０１５０６０１）

中国抗癌协会第四届鼻咽癌专业委员会

　 （按姓氏汉语拼音字母表排序）

　 顾问 徐国镇

　 名誉主任委员 潘建基

　 名誉副主任委员 卢泰祥

　 主任委员 胡超苏

　 侯任主任委员 郎锦义

　 副主任委员 陈晓钟　 马　 骏　 郎锦义　 林少俊　 朱小东

　 常务委员 陈韵彬　 高　 黎　 何　 侠　 胡德胜　 胡国清　 金　 风　 李金高　 石　 梅　 王佩国　席许平　 夏云飞　 易俊林

　 秘书长 林少俊　 王孝深

　 委员 敖　 帆　 蔡　 晶　 陈传本　 陈　 凡　 高力英　 高　 劲　 高太虎　 郭　 良　 郭　 翔　 郭　 晔　管一国　 韩　 非　 郝俊芳　 黄生富　 季明芳　 姜　 锋　 李国庆　 李　 龄　 李　 平　 李晓江　林少民　 林志雄　 刘秋芳　 刘士新　 马　 林　 麦海强　 秦继勇　 邱元正　 申良方　 沈文斌　石永刚　 孙　 艳　 王仁生　 王若峥　 王胜资　 王孝深　 王　 颖　 温凤云　 吴　 慧　 吴伟莉　徐向英　 应红梅　 于　 洪　 郁志龙　 赵　 充　 张石川　 折　 虹　 宗井凤

　 秘书 区晓敏　 宗井凤

middot９６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

　　

图 ４　 ＣＮＥ２ 细胞急速照射（ＲＴ各剂量点 ４ ｍｉｎ 内完成）分次照射（ＦＲＴ各剂量点 ３０ ｍｉｎ 内完成）奥拉帕尼＋ＲＴ奥拉帕尼＋ＦＲＴ 后免疫荧光显微镜下 γＨ２ＡＸ 焦点数（４Ａ 为对照４Ｂmdash４Ｅ 为 ４ 个组 １ Ｇｙ４Ｆmdash４Ｉ 为 ４ 个组 ２ Ｇｙ　 　 times４００）

图 ５　 ＣＮＥ２ 细胞多靶单击模型拟合的各组细胞存活曲线

尼可在分次照射模式下降低相对剂量率下降引起的

ＳＳＢ 修复增加 ＤＳＢ 形成提高生物效应 丰富了

ＰＡＲＰ 抑制剂在联合放疗及剂量率效应方面的认

识为 ＰＡＲＰ 抑制剂在放疗方面应用可能提供实验

依据 当然体内肿瘤受体液血供氧合状态凋亡

等更多方面因素影响ＰＡＲＰ 抑制剂对分次照射剂

量率效应的影响还需进一步体内外研究

参　 考　 文　 献

［１］ 杨伟志电离辐射的细胞效应［Ａ］ 殷蔚伯余子豪徐国镇等肿瘤放射治疗学［Ｍ］４ 版北京中国协和医科大学出版社２００８２３１２３９Ｙａｎｇ ＷＺＨ Ｃｅｌｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｙｉｎ ＷＢ ＹｕＺＨＸｕ ＧＺＨｅｔ ａｌ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ［Ｍ］４ ｅｄ ＢｅｉｊｉｎｇＰｅｋｉｎｇｕｎｉｏｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｌｌｅｇｅ ｐｒｅｓｓ２００８２３１２３９

［２］ 钱立庭杨伟志刘新帆模拟 ＩＭＲＴ 模式的生物效应研究初探［Ｊ］ 中华放射肿瘤学杂志 ２００５ １４ （ ５） ４３１４３３ ＤＯＩ １０３７６０ ｊｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４Ｑｉａｎ ＬＴＹａｎｇ ＷＺＬｉｕ ＸＦ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｍｏｄｅｌ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ ＪＲａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ２００５１４（５）４３１４３３ＤＯＩ１０３７６０ ｊ ｉｓｓｎ１００４４２２１２００５０５０１４

［３］ Ｓｈｒｉｖａｓｔａｖ Ｍ Ｄｅ Ｈａｒｏ ＬＰ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ ＪＡ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙ ｃｈｏｉｃｅ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ２００８１８（１）１３４１４７ＤＯＩ１０１０３８ ｃｒ２００７1049008 １１１

［４］ Ａｍeacute ＪＣＲｏｌｌｉ ＶＳｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｖｅｔ ａｌ Ｐａｒｐ２ａ Ｎｏｖｅｌ ＭａｍｍａｌｉａｎＤＮＡ ｄａｍａｇｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ［Ｊ］ ＪＢｉｏｌ Ｃｈｅｍ１９９９２７４（２５）１７８６０１７８６８ＤＯＩ１０１０７４ ｊｂｃ２７４２５１７８６０

middot８６７middot 中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

［５］ Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＭＡ ｈｕｍａｎ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ（ＡＤＰＲＴＬ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ［Ｊ］ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９９９ ５７ （ ３ ） ４４２４４５ＤＯＩ１０１００６ ｇｅｎｏ１９９９1049008 ５７９９

［６］ Ｗａｎｇ ＨＹ Ｗａｎｇ ＭＬ Ｗａｎｇ ＨＣ ｅｔ ａｌ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｈ２ＡＸｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＴＭ ａｎｄＤＮＡＰＫ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ［Ｊ］ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ２００５２０２（２）４９２５０２ＤＯＩ１０１００２ ｊｃｐ２０１４１

［７］ Ｇｉｕｎｔａ Ｓ Ｊａｃｋｓｏｎ ＳＰ Ｇｉｖｅ ｍｅ ａ ｂｒｅａｋ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎ ｍｉｔｏｓｉｓ ｔｈｅｍｉｔｏｔｉｃ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍａｒｋｓ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓｗｉｔｈ ｅａｒｌｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｅｖｅｎｔｓ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ２０１１１０ （ ８）１２１５１２２１ＤＯＩ１０４１６１ ｃｃ１０1049008 ８１５３３４

［８］ Ｒｏｔｈｋａｍｍ ＫＬoumlｂｒｉｃｈ ＭＥｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｌａｃｋ ｏｆ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｘｒａｙ ｄｏｓｅｓ ［Ｊ］ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ２００３１００（ ９）５０５７５０６２ ＤＯＩ１０１０７３ ｐｎａｓ０８３０９１８１００

［９］ Ｆｏｎｇ ＰＣＢｏｓｓ ＤＳＹａｐ ＴＡｅｔ ａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ）ＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ ｆｒｏｍ ＢＲＣＡ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｃａｒｒｉｅｒｓ ［Ｊ］ ＮＥｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９ ３６１ （ ２ ） １２３１３４ ＤＯＩ １０ １０５６ ＮＥＪＭｏａ０９００２１２

［１０］ 糜福顺电离辐射 ＤＮＡ 及染色体的作用［Ａ］ 沈瑜糜福顺肿瘤放射生物学［Ｍ］北京中国医药科技出版社２００２２９４７Ｍｉ ＦＳＨＲｏｌｅ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｉｎ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｓｈｅｎ Ｙ Ｍｉ ＦＳＨ Ｔｕｍｏｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ［Ｍ］ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈｉｎａｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｈｏｕｓｅ２００２２９４７

［１１］ 王东基于 ＤＮＡ 损伤修复的分子靶向治疗肿瘤靶向治疗的新

篇章［Ｊ］ 第三军医大学学报２０１４３６（２２）２２４３２２４８Ｗａｎｇ ＤＴａｒｇｅｔｉｎｇ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙｓａ ｎｅｗ ｅｐｉｓｏｄｅ ｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ［Ｊ］Ｊ Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１４３６（２２）２２４３２２４８

［１２］ Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｃａｐｅｔｉｌｌｏ ＯＬｅｅ ＡＮｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ Ｍ ｅｔ ａｌ Ｈ２ＡＸ ｔｈｅｈｉｓｔｏｎｅ ｇｕａｒｄｉａｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ［Ｊ］ ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ２００４３（８９）９５９９６７ＤＯＩ１０１０１６ ｊｄｎａｒｅｐ２００４０３０２４

［１３］ 刘敏赵苒γＨ２ＡＸ 检测在 ＤＮＡ 双链断裂研究中应用［Ｊ］ 中国公共卫生２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４Ｌｉｕ ＭＺｈａｏ Ｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ γＨ２ＡＸ ａｓｓａｙ ｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐｕｂｌ Ｈｅａｌｔｈ２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４

［１４］ Ｋｕｏ ＬＪ Ｙａｎｇ ＬＸ ＧａｍｍａＨ２ＡＸａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｉｎ Ｖｉｖｏ２００８２２（３）３０５３０９

［１５］ Ｐａｇａｎｅｔｔｉ ＨＣｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｄｕｅ ｔｏ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｄｏｓｅｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｉｍｅｓ ｉｎ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ［Ｊ］ Ｉｎｔ Ｊ ＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ２００５６３（ ３）８９２９００ ＤＯＩ１０ １０１６ ｊ ｉｊｒｏｂｐ２００５０７９５３

［１６］ 王雯珺郑小康刘佳宾等鼻咽癌细胞株 ＣＮＥ１ＨＯＮＥ１Ｃ６６６１ 和 ＣＮＥ２ 的亚致死性损伤修复速度测定［Ｊ］ 南方医科大学学报２０１０３０（４）７７７７７８Ｗａｎｇ ＷＪＺｈｅｎｇ ＸＫＬｉｕ ＪＢ ｅｔ ａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐａｉｒｈａｌｆｔｉｍｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＣＮＥ１ＣＮＥ２ＨＯＮＥ１ ａｎｄ Ｃ６６６１ ［Ｊ］ Ｊ Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１０３０（４）７７７７７８

（收稿日期２０１５０６０１）

中国抗癌协会第四届鼻咽癌专业委员会

　 （按姓氏汉语拼音字母表排序）

　 顾问 徐国镇

　 名誉主任委员 潘建基

　 名誉副主任委员 卢泰祥

　 主任委员 胡超苏

　 侯任主任委员 郎锦义

　 副主任委员 陈晓钟　 马　 骏　 郎锦义　 林少俊　 朱小东

　 常务委员 陈韵彬　 高　 黎　 何　 侠　 胡德胜　 胡国清　 金　 风　 李金高　 石　 梅　 王佩国　席许平　 夏云飞　 易俊林

　 秘书长 林少俊　 王孝深

　 委员 敖　 帆　 蔡　 晶　 陈传本　 陈　 凡　 高力英　 高　 劲　 高太虎　 郭　 良　 郭　 翔　 郭　 晔　管一国　 韩　 非　 郝俊芳　 黄生富　 季明芳　 姜　 锋　 李国庆　 李　 龄　 李　 平　 李晓江　林少民　 林志雄　 刘秋芳　 刘士新　 马　 林　 麦海强　 秦继勇　 邱元正　 申良方　 沈文斌　石永刚　 孙　 艳　 王仁生　 王若峥　 王胜资　 王孝深　 王　 颖　 温凤云　 吴　 慧　 吴伟莉　徐向英　 应红梅　 于　 洪　 郁志龙　 赵　 充　 张石川　 折　 虹　 宗井凤

　 秘书 区晓敏　 宗井凤

middot９６７middot中华放射肿瘤学杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ２５ 卷第 ７ 期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ ＯｎｃｏｌＪｕｌｙ ２０１６Ｖｏｌ２５Ｎｏ７

［５］ Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＭＡ ｈｕｍａｎ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ（ＡＤＰＲＴＬ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｙ （ ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ［Ｊ］ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９９９ ５７ （ ３ ） ４４２４４５ＤＯＩ１０１００６ ｇｅｎｏ１９９９1049008 ５７９９

［６］ Ｗａｎｇ ＨＹ Ｗａｎｇ ＭＬ Ｗａｎｇ ＨＣ ｅｔ ａｌ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｈ２ＡＸｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＴＭ ａｎｄＤＮＡＰＫ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ［Ｊ］ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ２００５２０２（２）４９２５０２ＤＯＩ１０１００２ ｊｃｐ２０１４１

［７］ Ｇｉｕｎｔａ Ｓ Ｊａｃｋｓｏｎ ＳＰ Ｇｉｖｅ ｍｅ ａ ｂｒｅａｋ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎ ｍｉｔｏｓｉｓ ｔｈｅｍｉｔｏｔｉｃ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍａｒｋｓ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓｗｉｔｈ ｅａｒｌｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｅｖｅｎｔｓ ［Ｊ］ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ２０１１１０ （ ８）１２１５１２２１ＤＯＩ１０４１６１ ｃｃ１０1049008 ８１５３３４

［８］ Ｒｏｔｈｋａｍｍ ＫＬoumlｂｒｉｃｈ ＭＥｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｌａｃｋ ｏｆ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｘｒａｙ ｄｏｓｅｓ ［Ｊ］ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ２００３１００（ ９）５０５７５０６２ ＤＯＩ１０１０７３ ｐｎａｓ０８３０９１８１００

［９］ Ｆｏｎｇ ＰＣＢｏｓｓ ＤＳＹａｐ ＴＡｅｔ ａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ （ＡｄｐＲｉｂｏｓｅ）ＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ ｆｒｏｍ ＢＲＣＡ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｃａｒｒｉｅｒｓ ［Ｊ］ ＮＥｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９ ３６１ （ ２ ） １２３１３４ ＤＯＩ １０ １０５６ ＮＥＪＭｏａ０９００２１２

［１０］ 糜福顺电离辐射 ＤＮＡ 及染色体的作用［Ａ］ 沈瑜糜福顺肿瘤放射生物学［Ｍ］北京中国医药科技出版社２００２２９４７Ｍｉ ＦＳＨＲｏｌｅ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｉｎ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ［Ａ］ Ｓｈｅｎ Ｙ Ｍｉ ＦＳＨ Ｔｕｍｏｒ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ［Ｍ］ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈｉｎａｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｈｏｕｓｅ２００２２９４７

［１１］ 王东基于 ＤＮＡ 损伤修复的分子靶向治疗肿瘤靶向治疗的新

篇章［Ｊ］ 第三军医大学学报２０１４３６（２２）２２４３２２４８Ｗａｎｇ ＤＴａｒｇｅｔｉｎｇ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ ｐａｔｈｗａｙｓａ ｎｅｗ ｅｐｉｓｏｄｅ ｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ［Ｊ］Ｊ Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１４３６（２２）２２４３２２４８

［１２］ Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｃａｐｅｔｉｌｌｏ ＯＬｅｅ ＡＮｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ Ｍ ｅｔ ａｌ Ｈ２ＡＸ ｔｈｅｈｉｓｔｏｎｅ ｇｕａｒｄｉａｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ［Ｊ］ ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ２００４３（８９）９５９９６７ＤＯＩ１０１０１６ ｊｄｎａｒｅｐ２００４０３０２４

［１３］ 刘敏赵苒γＨ２ＡＸ 检测在 ＤＮＡ 双链断裂研究中应用［Ｊ］ 中国公共卫生２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４Ｌｉｕ ＭＺｈａｏ Ｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ γＨ２ＡＸ ａｓｓａｙ ｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐｕｂｌ Ｈｅａｌｔｈ２０１５３１（６）７４２７４６ＤＯＩ１０１１８４７ ｚｇｇｇｗｓ２０１５３１０６１４

［１４］ Ｋｕｏ ＬＪ Ｙａｎｇ ＬＸ ＧａｍｍａＨ２ＡＸａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ［Ｊ］ Ｉｎ Ｖｉｖｏ２００８２２（３）３０５３０９

［１５］ Ｐａｇａｎｅｔｔｉ ＨＣｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｄｕｅ ｔｏ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｄｏｓｅｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｉｍｅｓ ｉｎ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ［Ｊ］ Ｉｎｔ Ｊ ＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ２００５６３（ ３）８９２９００ ＤＯＩ１０ １０１６ ｊ ｉｊｒｏｂｐ２００５０７９５３

［１６］ 王雯珺郑小康刘佳宾等鼻咽癌细胞株 ＣＮＥ１ＨＯＮＥ１Ｃ６６６１ 和 ＣＮＥ２ 的亚致死性损伤修复速度测定［Ｊ］ 南方医科大学学报２０１０３０（４）７７７７７８Ｗａｎｇ ＷＪＺｈｅｎｇ ＸＫＬｉｕ ＪＢ ｅｔ ａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐａｉｒｈａｌｆｔｉｍｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＣＮＥ１ＣＮＥ２ＨＯＮＥ１ ａｎｄ Ｃ６６６１ ［Ｊ］ Ｊ Ｓｏｕｔｈ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ２０１０３０（４）７７７７７８

（收稿日期２０１５０６０１）

中国抗癌协会第四届鼻咽癌专业委员会

　 （按姓氏汉语拼音字母表排序）

　 顾问 徐国镇

　 名誉主任委员 潘建基

　 名誉副主任委员 卢泰祥

　 主任委员 胡超苏

　 侯任主任委员 郎锦义

　 副主任委员 陈晓钟　 马　 骏　 郎锦义　 林少俊　 朱小东

　 常务委员 陈韵彬　 高　 黎　 何　 侠　 胡德胜　 胡国清　 金　 风　 李金高　 石　 梅　 王佩国　席许平　 夏云飞　 易俊林

　 秘书长 林少俊　 王孝深

　 委员 敖　 帆　 蔡　 晶　 陈传本　 陈　 凡　 高力英　 高　 劲　 高太虎　 郭　 良　 郭　 翔　 郭　 晔　管一国　 韩　 非　 郝俊芳　 黄生富　 季明芳　 姜　 锋　 李国庆　 李　 龄　 李　 平　 李晓江　林少民　 林志雄　 刘秋芳　 刘士新　 马　 林　 麦海强　 秦继勇　 邱元正　 申良方　 沈文斌　石永刚　 孙　 艳　 王仁生　 王若峥　 王胜资　 王孝深　 王　 颖　 温凤云　 吴　 慧　 吴伟莉　徐向英　 应红梅　 于　 洪　 郁志龙　 赵　 充　 张石川　 折　 虹　 宗井凤

　 秘书 区晓敏　 宗井凤

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