Dra. Regina Maura Bueno Franco Laboratório de Protozoologia

Universidade Estadual de Campinas Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal

Instituto de Biologia

Mini-Curso Teórico e Prático: Detecção de Ovos de Helmintos em Hortaliças

Controle de Qualidade:

Metodologia de Detecção de Ovos de Helmintos em

Hortaliças

(Parte 3)

Programa de Controle de Qualidade: Atitudes Principais - Laboratório/Unicamp

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Objetivo: minimizar erros e aumentar o nível de confiança dos resultados laboratoriais.

3 atitudes principais: Implementar estrutura organizacional que garanta

qualidade – escolha de um líder;

Foco no requerimento/objetivo analítico:

Adotar métodos para solução de problemas.

Contínuo treinamento dos recursos humanos :

Envolvimento e motivação

Proposta da Estrutura do Programa de Controle de Qualidade: Etapas

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1. Escolha da Metodologia a ser utilizada

2. Avaliação da Sensibilidade Alcançada pelo Laboratório

3. Escolha de Critério de Aceitação

4. Resolução de Problemas

5. Aprovação para iniciar o processamento de amostras dos “clientes”

1. Escolha da Metodologia a ser utilizada

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1.1. Métodos padronizados são requeridos para isolar, concentrar e identificar parasitos em hortaliças. Fonte: Smith & Cook, 2009. In: Global Issues in Food Science and Technology.

1.2. Metodologia Escolhida deve: Fácil execução; poucos passos. Baixos Custos Validado no laboratório Apresentar Reprodutibilidade Detectar um baixo número de formas parasitárias.

Metodologia padronizada na FUNED, MG:

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2.Avaliação da Sensibilidade alcançada pelo Laboratório

“Matriz”: Vegetais: alface, rúcula e coentro

(50g)

“Spike”: Padronização de uma suspensão contendo número conhecido de ovos

“Seeding”: Contaminação dos Vegetais no Laboratório

Processamento laboratorial e Eficiência de Recuperação Alcançada

6

Spike: 18

horas antes!

“Spike”: Padronização de uma Suspensão contendo número conhecido de ovos

7

Preparo da suspensão purificada de ovos de Ascaris suum.

8

• Dissecação do Verme Fêmea, adulto:

1 2

3 4

Enumeração dos Ovos na Suspensão produzida no laboratório

Contagem Nº de Ovos

1 307

2 367

3 364

4 327

5 385

6 339

7 343

8 360

9 344

10 371

Média: 350,7

DP: 23,1

Determinação da Viabilidade dos Ovos:

Suspensão “estoque” de ovos

Ácido sulfúrico

0,05M 10L

(0,694 mL H2S04/250 mL de H20)

8 mL

Incubação Temp. Amb. 4 semanas

1L liquido da placa + 19 L de solução de Tween 80 (0,01%)

Contagem dos ovos

Determinação da Viabilidade dos Ovos: Contagem dos ovos

Ovos com camada mamelonada: 257

Ovos sem camada mamelonada: 62 Total: 319 ovos Então: 319 100% 257 X X= 80,5% com camada mamelonada

319 100%

62 X X= 19,5% sem camada mamelonada

Azul de

Metileno 0,05%

Aspecto dos ovos da suspensão purificada

012

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Teste de Viabilidade: Ovos viáveis e Não viáveis

Contaminação dos Vegetais no Laboratório

Contaminação dos Vegetais no Laboratório: 3 réplicas + 1 “branco”

Amostras contaminadas são examinadas com a Metodologia Escolhida

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Registro/inspeção de rede

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Eficiência de Recuperação: Dados de 9 Laboratórios

Escolha do Critério de Aceitação

Eficiência de Recuperação para Alface: Média de 59,6 ± 26,1 (%)

Eficiência de Recuperação para Rúcula: Média de 49,4 ± 22,8 (%)

Que valor estipular como critério de aceitação???

Critério de Aceitação: Busca na Literatura

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Unicamp Unicamp

Utaaker K S; Huang Q; Robertson L J. A reduced-cost approach for analyzing fresh produce for contamination with Cryptosporidium oocysts and/or Giardia cysts. Food Research International, v.77, p.326-332, 2015.

30% Recuperação Aceitável:

Resolução de Problemas

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Unicamp Unicamp

Lab. D e Lab. H: • não atingiram a Eficiência de 30%

Lab. H: recuperação baixa para ambas as matrizes analisadas!

- Busca de problemas de forma retrospectiva! - Causa: Centrífuga!

Lab. B e Lab. H: • não atingiram a Eficiência de 30%

Comentários finais

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Unicamp Unicamp

Atingida a Eficiência de 30% (no mínimo)

Pode ser interessante realizar experimentos de precisão na rotina:

Carta-controle.

Laboratório está apto para processar amostras dos “clientes”

Obrigada por sua atenção!

Agradecimentos: • A Doutoranda Carolina Cortiz Pineda, ao Dr. Diego Leal (UFParaná) pelo preparo da suspensão purificada de ovos de Ascaris suum e Flaviane Matozinhos (FUNED-MG) pelo auxilio durante a realização do Projeto “Parasitos em Alimentos: Um estudo interlaboratorial”. • Contato Profa. Regina Maura:

E-mail: mfranco@unicamp.br