Cromosoma 16: PCR PV92

Bio323LaboratorioCromosoma 16: PCR PV92

Genes y ADN humanoEstimado 30,000-50,000 genes5% ADN cromosomal 95% no codificadorExn e intrnAmbos se transcriben, intrn no se traduceRNA splicingIntrones varan en los individuos; exones los mismos

Genes y ADN humanoDiferencias en intrones permiten determinar diversidad gentica en los humanos

Base para identificacin humana y de la gentica poblacional

Evolucin y secuencia AluAtravs de la evolucin intrones son target de inserciones SINEs secuencias cortas repetitivas que se insertan en los intronesAlu una secuencia que se inserta 300 pares de bases 500,000 veces en genoma humanoAlu l enzima de restriccin reconoce lugar de secuencia

AluRepeticiones de Alu se utilizan para establecer relaciones entre individuos y estn relacionados con alguna patologa

Se utilizar para determinar la frecuencia en la poblacin

Alu y locus PV92 en cromosoma 16Alu localizado en locus PV92Cromosoma 16Presentes en algunos individuos pero no en otros+/+, -/-, +/-Se identifica por PCR, seguido por electroforesis en agarosa

PCR y electroforesis en agarosaAislar ADN estudiantesSe utilizan primer que acomodan en el lugar de insercin de Alu para amplificarSe amplifica locus PV 92 641 pares de bases si Alu est ausente 941 pares de bases si Alu est presente

Genotipo y tamao de productos de PCR

PCR Polymerase Chain Reaction

Es una tcnica de biologa molecular

Reaccin en cadena de la polimerasaLa reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es una tcnica de la biologa molecular donde se extrae una pequea muestra de cido nuclico ( ADN) y se replica o amplifica para poder detectarse.Este mtodo permite que sea posible la sntesis de grandes cantidades de un fragmento de ADN

Polimerasa Chain Reaction: Reaccin en Cadena de la Polimerasa

Fue diseada por el Dr. Kary Mullis en 1987.

Gan el premio Nbel de Qumica en 1993 por su invento.

Utiliz el PCR para amplificacin del gen de -hemoglobina humana, y el diagnstico prenatal de anemia falciforme.

Kary Mullis

PCRPolymerase Chain ReactionEs la amplificacin de DNA in vitro por medio de la polimerizacin en cadena de DNA utilizando un termociclador.

El propsito del PCR es hacer muchas copias de un fragmento de DNA.

Se realiza la amplificacin de un segmento especfico de DNA, teniendo poco material disponible.

Mtodo PCR

Termociclador

La PCR se realiza en un Thermo Cycler Termociclador.

Es una mquina que calienta y enfra la reaccin en periodos cortos de tiempo.

En el PCR hay una amplificacin exponencial

Anlisis de la MuestraLa deteccin del producto de la PCR se realiza normalmente mediante corrido electrofortico.

Dependiendo del tamao de la amplificacin y la resolucin que deseemos utilizaremos diferentes medios (agarosa, poliacrilamida) a distintas concentraciones.

Anlisis de la Muestra

La posterior visualizacin se puede realizar con bromuro de etidio (lmpara de luz UV), tincin de plata, fluorescencia, radioactividad

Ladder: pesos conocidos1: Fragmento a 1857 pb2 y 4: Fragmento a 800 pb3: No hay producto 5: Multiples bandas (primers inespecficos se pegan a varios sitios)

Ciclos de amplificacin de Alu

Componentes esenciales para el PCRADNForward and reverse primersPCR Master mix dNTPs Taq DNA pollimerasa bufferDNA estandar

Interpretacin de los productos de PCR

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