curs 6

5/24/2018 Curs 6

1/41

VIRUSURI HEPATOTROPE

CURS 6

5/24/2018 Curs 6

2/41

5/24/2018 Curs 6

3/41

5/24/2018 Curs 6

4/41

Hepatita virala = boala infectioasa

caracterizata prin febra, stare

generala modificata, icter, astenie,

inapetenta, somnolenta

5/24/2018 Curs 6

5/41

I. Clasificare:

1. virusuri cu tropism primar hepatic:

v. hepatitei A (VHA) - picornaviridae

v. hepatitei B (VHB) - hepadnaviridae v. hepatitei Delta (VHD) - virus defectiv asociat cu

VHB

v. hepatitei C (VHC) - flaviviridae

v. hepatitei E - caliciviridae2. virusuri cu localizari secundare hepatice:

v. citomegalic

v. herpetic

v. rubeolos

v. EpsteinBarr

v. hepatitei A

- fam. picornaviridaegen enterovirus (EV72 )

5/24/2018 Curs 6

6/41

II. Morfologiestructura

Dimensiuni: 27 nm, fara invelis

ARN monocatenar cu sens +

Capsidaicosaedrica compusa din 4 proteine (VP1, VP2 , VP3 ,VP4 )

III. Structura antigenica

1 tip cu 1situs pentru atc. neutralizanti pe VP1

IV. Rezistenta la agentii fizici si chimici

cel mai stabil enterovirus: rezista in fecale > 2 sapt.

distrus la: +370C (3 zile); +1000C (n. min.)

rezistent la: pH 3, solventi organici, detergenti neionici inactivat de: UV, formol (2-4% - 5 si 1o/oo 3 zile),

betapropiolactona 0,03 %

sensibil la: ribavirin si amantadina

se conserva (ani de zile) la : -200

C sau liofilizat

5/24/2018 Curs 6

7/41

V. Multiplicare

in citoplasma

adsorbtia pe receptori depinde: de pH si electroliti patrundere prin viropexie (endocitoza)

decapsidare, eliberare ARN viral care are functie deARNm la ribozomi

translatia informatieisinteza poliproteinei gigantscindare succesiva = P1 din care apar VPO,VP3, VP1(capsidare); P2 si P3 (replicaze si proteaze pentrusinteza ARN cu catenaapoi replicare catena +);

VPO este scindata in VP4 si VP2 ansamblarea se face in reticulul endoplasmatic

durata ciclu 5-10 ore

5/24/2018 Curs 6

8/41

VI. Relatii viruscelula gazda

1. Cultivare:

culturi de celule:

- crestere dificila: cultura ficat marmota, linii

fetale rinichi maimuta, Vero, diploide umane

- nu are efect citopatic

- uneori infectie persistenta

- identificare atg. v: IF, hibridizare ARN v.

animale: cimpanzei, marmote (hepatita medie

fara icter , cu virus in ficat, bila, ser, fecale)

5/24/2018 Curs 6

9/41

2. Patogeneza : cale: orala

incubatia: 15-50zile

replicare intiala: orof. apoi sanguin. Viremia prezenta cu 2 saptamaniinainte icter. Infectie intestinala +/- . Multiplicare hepatocit, excretie

bila, apoi fecale (complexe IgA cu atg VHA. Inoc. i.v. la primate Atg.VHA se detecteaza 2 sapt si in perioada acuta .

leziuni histologice: parenhim hepatic cu leziuni distructive/reparative(hepatocite cu citoplasma destinsa, fara structura, nuclei mari). In jurulzonelor de distrugere focare inflamatorii cu aglomerari de celule Kupfer(fagociteaza resturi cel.) limfocite, neutrofile si eosinofile.

eliminare v.: fecale cu n.zile inante si 7-10 zile dupa icter.

forme clinice: asimptomatice (90%); comuna: prodrom pseudogripal (1-3saptamini) cu febra, artralgii, astenie, st. gen modificata, greata,varsaturi, +/- diaree, apoi icter cu urini hipercrome si fecale decolorate

(2-3sapt). Teste biochimice: crestere bilirubina, aminotransferaze (ALTsi AST), fosfataza alcalina, GGT. Revenire dupa per de stare.

- boala este autolimitanta, fara sechele, fara cronicizare

- forma cholestatica

- foarte rar: hiperacuta fulminanta (1%)

- mortalitate: 1,5% (copii

5/24/2018 Curs 6

10/41

3. Imunitate :

umorala : atc IgM ,IgG si Ig A (neutralizanti anti capsidari ) apar la debutul bolii.Complexele AtcAtg det distrugeri celulare. IgM dispare dupa 2-12 sapt. , IgG

persista indelungat.

celulara: prezente celulule K si limfocitele T citotoxice (CD8) elimina resturihepatocite

4. Diagnosticul de laborator :

produse patologice: materii fecale ,sange

a. examen direct:

- M. E. pe materii fecale in prima sapt . a bolii. Diferentiaza de hepatitele non A non B- detectia v. in hepatocite (biopsie): IF, ELISA, M.E. doar in infectia experimentala

- ARN viral: hibridizare cu sonde ADN c su ARN ; RT-PCR

b. izolarea:culturi si infectia experimentala se folosesc rar

c. ex.serologic:

- dupa aparitia icter: detectie IgM (persista 10-12 sapt); IgG (persistenta indelungata)

prin ELISA si RIAd. teste biochimice :

- pigmenti biliari: ser (bilirubina > 5 mg o/oo); urina (urobilinogen >)

- citoliza hepatica: crestere transferaze serice (ALT, AST) si GGT chiar fara icter

- dezechilibrul proteinelor serice: crestere alfa, beta, gamma glob.; scaderea albumine:

inversare raport A/G

5/24/2018 Curs 6

11/41

5. Epidemiologie:

raspandire universala

evolutie endemo epidemica sursa: omul bolnav

transmisie: fecal orala (conditii igienice

deficitare); favorizata de rezistenta virusuluiin mediu exterior

contagiozitate: maxima in a doua jumatate aincubatiei (max . 2 saptamini de la debut)

susceptibilitate: generala

imunitate: indelungata (toata viata)

5/24/2018 Curs 6

12/41

6. Profilaxie:

a. pasiva:

imunoglobuline policlonale/specifice: 0,05 ml/Kg corp - protectie 3 luni (7580%)

b. activavaccinuri:

inactivate (formol): v. din culturi ficat marmota ;v. din culturi diploide umane (MRC5 - tulpinaHM 175), adsorbit pe hidroxid de Al: admin. 3doze a 720 u ELISA ( 04 saptamini6/12

luni; rapel 5 ani) vii atenuate: in curs de experimentare

sintetice (peptide obtinute prin inginerie

genetica)

5/24/2018 Curs 6

13/41

Virusul Hepatitei B (V.H.B)

- familia Hepadnaviridae (gen hepadnavirus) -

5/24/2018 Curs 6

14/41

5/24/2018 Curs 6

15/41

1. Caractere morfo-functionale

serul bolnavilor de hepatita are 3 tipuri de particule :

a.virionul complet (particula Dane): sferica, 42nm formata din:

nucleocapsida : aspect de centru dens cu contur hexagonal , 28nm

- genomul viral : mol. ADN circulara, 32 Kb, bicatenar/port. mono c.,catenele inegale (L =lunga ; S = scurta; catena L sens negativ cu intrerupere

langa catena S = origine replicare). 4 gene (gena S precedata de pre S1 si

preS2 = codifica prot de suprafata/majora HBs; gena C = codifica proteina

HBc; gena P = codifica sinteza ADN polimerazei ; gena X = sinteza

proteine initiatoare a replicarii ADN/Bx

- capsida (simetrie icosaedrica)proteine : HBc (core)/clivaj proteolitic =

proteina solubila Hbe si ADN polimeraza (reverstranscriptaza)

- invelisul viral = lipoproteic, contine proteina majora HBs si doua proteine

minore (PreS1rol in atasarede hepatocit si PreS2afinitate pentru

receptorul albuminic)

b.particule sferice (22nm ) formate din subunitati ale HBs

c.formatiuni filamentoase = agregate ale particulelor sferice

p. sferice si filamentoase nu-s infectioase

conc. virus si substructuri la bolnavi/purtatori = 10 9 /ml

5/24/2018 Curs 6

16/41

3. Rezistenta la agenti i f izici si chimici:

virus rezistent - in ser : 6 luni la + 300C , 10 ore la 600C , -200C = 15 ani(infectant)

distrus (infectivitate): autoclavare (30 la +1280C); pH =2,4 (6 ore);dezinfectante (permanganat K 1o/oo; formol 5%; glutaraldehida 2% la pH8,4)

4. Multipli care:

atasare de receptori hepatocit (de albumina serica)

patrundere prin endocitoza

replicare ADN viral (acumulare de atg HBc)etape:

patrundere in nc. celular:- suprarasucire ADNv, catena L (sens negativ)matrita replicare/polimeraza

cel II rezultind mol ARN cu rol: ARN m ( transportat in citoplasma laribozomi si sint.: prot.v. = HBs , HBc , HBx si polimeraza v.); ARN

pregenomic integrat in structurile virale proteice citoplasmatice

transcriere ARN v. pregenomic in ADNv. d.c.( ADN polimeraza v. cu rolde revers transcriptaza)

nucleocapsidele mature se invelesc la mem. cel., apoi v. complet se eliminaextra celular

uneori sinteze in exces: particule incomplete sferice/filamentoase fara ADN(proteine HBs)

5/24/2018 Curs 6

17/41

5. Relati i virusgazda

a. Cultivare:

crestere dificila: linii continui (carcinomhepatocelular) cu acumulare de atg HBs, fara

efect citopatic

animale: infectii la cimpanzei, giboni, gorile

5/24/2018 Curs 6

18/41

b. Patogeneza:

patrundere organism prin: solutii de continuitate tegumente/mucoase, manevre medicale invazive(injectii, transfuzii , tratamente stomatologice, interventii chirurgicale )

replicare in hepatocit (ciclu 10-12 zile)

propagare v.: contiguitate celula/celula si sanguin, se invadeaza intregul parenchim, apoi viremie masiva

incubatie: 6 sapt6 luni

prodrom: febra, anorexie, slabire debut: icter, urini hipercrome , scaune decolorate; detectie atg .: HBs si HBe, bilirubinemie >,

transaminaze > (hepatocitoliza)

evolutia bolii depinde de reactia gazdei (umorala si celulara):

- hepatita acuta: reactie intensa cu elim v. si a hepatocite infectate ; hepatita supraacuta fulminanta

(letala prin necroze hepatice intinse). Histologic: lez. parenchim (hepatocite balonizate cu contur

sters si nuclei mari), inflamatorii ( edem, infiltrate: neutrofile, eosinofile si activare cel. Kupfer) si

regenerari (mitoze). Distrugerile > 65 % = letale .- hepatita cronica (infectie persistenta): se asociaza cu r.i. slab , replicare continua a VHB si toleranta

imuna. Distrugeri limitate dar continui. Histologic:

hepatita cr. activa (necroze , inflamatie periportala) cu detectie de - atg.HBc si HBs (hepatocite) si ADNv. (sange); hepatita cr. persistenta: hepatocitoliza focala si hiperplazie limfoida cu Atg.HBs(intracitoplasmatic) si Atc. anti HBc (ser) . Vindecare in 2 ani .

mecanismele persistentei

- dupa vindecarea clinica Atg - HBs (sange) poate persista indelungat : 10-15% la adulti si 30-40% lacopii

- mod: dependent de gazda (varsta : sugarii90%, adultii10%); dependent de v. (ADN v. se

mentine in episomi sau integrat in ADN cromozomial gazda cu infectivitate redusa si episoade de reactivare)

cu prezenta de Atc anti HBc

purtatori asimptomatici (reactie gazda absenta): fara manifestari clinice, multplic. > si AtgHBs insange; cca 300 miloane in lume

c Imuni tate

5/24/2018 Curs 6

19/41

c. Imuni tate raspuns umoral la :Atg HB, HBc si Hbe

- atc anti HBc : de tip IgM ( multiplicare activa , in faza tardiva a incubatiei , max in per de stare,

dispar convalescenta ; de tip IgG : la sf. per. de stare , max conv., persista toata viata; apar la

exprimarea atg pe suprafata celulelor infect.

- atc anti HBs : apar in conv . bolii autolimitante dupa disparitia atg.HBs (per.= fereastra

serologica), se absorb pe supraf . celulelor impiedicind atasare de virioni, fac complexe cu atg ce eliminav., confera protectie la reinfectie

- atc anti Hbe : apar dupa disparitia atg. Hbe (fereastra serlogica) si se evid dupa aparitia IgM anti

HBc

raspuns celular:

- in hepatita experimentala (cimpanzei): acuta (limfocite T citotoxice active fata de atgHBc si HBs

asociate cu CMH I); cronica (purtatori): limfocite citotoxice reactioneaza (vitro ) cu atg HBc si

Hbe

atc. serici pot inhiba citotoxicitatea prin legare de atg HBs si pot in exces fav persistenta

d. Dignosticul de laborator: p.p. : sange , tesut hepatic (biopsie)

ex direct (rar):

- preparate de tesut hepatic: atg HBc in nc hepatocite si atg Hbs in citoplasma prin IF si ELISA

- ser: particule Dane sferice sau filamentoase la M.E. imunodiagnostic (evid. in ser a markerilor bolii):

- structuri antigenice sau componente virale in ordinea aparitiei: Atg HBs, ADN polimeraza v., AtgHBe ,

AtgHbc (foarte rar ser), ADN viral

- atc. serici: anti HBcIgM, HBc IgG, Hbe, HBs

- tehnici: ID, CIEF, RFC, LA, ELISA, RIA , hibridizare ADN, PCR, IEM,

detectie ADN polimeraza

- biochimie: ca la hepatita A

5/24/2018 Curs 6

20/41

e. Epidemiologie:

raspindire universala

evolutie endemica, rar epidemica, purtatori cr: 10-15%

grupe risc: consumatori droguri, hemodializati, homosexuali, personal

medical sursa de v.: omul (bolnav, purtator)

transmisie: Atg HBs se gaseste in toate secretiile si excretiile (c. minfectioase: sange, sperma, secretii vaginale); prezenta Atg Hbe cresteinfectiozitatea

cale:

- transfuzii: sange, derivate (plasma, ser, trombina, fibrinogen, hematiiconservate, imunoglobuline)

- seringi, instrumentar, materiale consumabile, aparatura hemodializa

- solutii continuitate: rani, zgarieturi (teg, muc)

- infectie perinatala

- contact homo si heterosexual incubatie: 45- 180 zile (60-90) dependenta de conc v. si gazda

transmisibilitatea: sangele infectant n sapt. inainte de debut, in timpulbolii, iar la purtatori ani (Atg HBs si Hbe)


rezistenta depinde prezenta atc anti HBssolida

5/24/2018 Curs 6

21/41

f . Prof il axie:

pasiva: imunoglobuline specifice (0,06 ml /kg corp sau 5mladulti) in primele 6-24 ore de la contact infectant; n.n. = 0,5ml(24 ore ) din mame cu Atg HBs /AtgHBe

activa - vaccinare:- preparate din plasma: conc mari Atg HBSnu se mai folosesc

(complexe imune)

- tehnologie ADN recombinant: izolarea genei care codifica HBs

(enzime de restrictie), transplantarea genei (recombinare) in cel gazda-vector (E. coli., Saccaromices cerevisiae, cel de mamifere).

multiplicare odata cu cel., izolare prin dezintegrare cel a atg HBs

urmata de purificare

transplantul poate contine si segm S si PreS 1 & PreS2 sivectorul poate fi cel de mamifere (CHOcelule ovar hamster)

- administrare: 3 doze a 0, 5ml in 2 scheme (1-2-3 luni, rapel I la 1

an, rapel II la 5 ani; 1-2-6 luni, rapel la 5 ani)

- contra indicatii: nu exista

- conversie: 93-95%

5/24/2018 Curs 6

22/41

5/24/2018 Curs 6

23/41

5/24/2018 Curs 6

24/41

5/24/2018 Curs 6

25/41

Virus Hepatita B

5/24/2018 Curs 6

26/41

Virus Hepatita

5/24/2018 Curs 6

27/41

5/24/2018 Curs 6

28/41

5/24/2018 Curs 6

29/41

V. HEPATITEI DELTA (VHD)

virus defectiv - coinfectii sau suprainfectii

in hepatitele B (VHB = helper)

5/24/2018 Curs 6

30/41

5/24/2018 Curs 6

31/41

5/24/2018 Curs 6

32/41

1. Morfologie structura:

particula sferica de 35 nm, centru dens, invelita:

- genom ARN monoc. circular (70% baze orientate pereche), nu

are secvente omoloage ADNVHB; proteina asoc si codificata +atg D (nc. hepatocite , 2 forme: atg HD (27000 - rol in

asamblare) si

Atg HD (24000 - rol in replicare)

- invelis: de la VHB = proteina HBs si Pre S1/Pre S2 structura antigenica = 1 serotip

2. Multiplicare:

transfectia cu ARN -VHD in culturi (carcinom hepatocelular

uman) sau rinichi maimuta: VHB are rol helper laansamblarea genom VHD in proteinele de invelis VHB

in hepatocit se detecteaza: ARNv si catene ARN matritepentru ARN progen

5/24/2018 Curs 6

33/41

3. Patogeneza:

patrundere ca VHB dar evol depinde de coinfectie sau suprainfectie :

- la cimpanzeii infectati cu VHB si VHD: replicare in ficat A VHB, apoi

replicare VHD (simptomatologie bifazica). Atc actioneaza pe ambelevirusuri.

- suprainfectia = expunerea unui purtator VHB la o infectie cu VHD. La

interval de 2-6 saptamini apare hepatita acuta (VHB favorizeaza

replicarea VHD). Uneori VHD suprima replicarea VHB (interferenta)

evolutie: cronicizare desi apar atc IgM si IgG evid. atg HD: nc., citoplasma prin IF; ARN-VHD (sange) prin

hibridizare

VHD creste severitatea hepatitei B: 10-20% forme fulminante, 50-90% cronicizare

4. Imunitate: umorala:

- coinfectie-IgM fata de atg. HBc si anti atg HD in cateva zile de la debut

- suprainfectie: suprapunere markeri VHB cu VHD

5/24/2018 Curs 6

34/41

5. Diagnosticul de laborator:

produse patologice = sange, tesut hepatic (biopsie)

a. examen direct:

Atg. HD in nc. si citoplasma prin IF sau ELISA

b. imunodignostic (markeri):

ser :- atg. HD prin RIA, ELISA, Western blot

- atc. IgM si IgG anti atg. HD: ELISA, RIA

- ARN-VHD: hibridizare (ADNc sau ARN-ARN)- IgG durata scurta in coinfectie, dar in suprainfectie

IgM persista indelungat

5/24/2018 Curs 6

35/41

5/24/2018 Curs 6

36/41

V. HEPATITELOR NON A, NON B

5/24/2018 Curs 6

37/41

agentul infectios transmis parenteral

asemanator hepatitei B

incidenta marre la toxicomani, hemofilici,transfuzati

evolutie spre ciroza

v. a fost identificat prin inginerie genetica: din

plasma infectata de la cimpanzei (infectati cu

produse patologice de la bolnavi) s-a extras

ARN v. Sinteza ADNc inserat pe bacteriofaglamda 11 al E. coli, apoi sinteza atg. v. identif.

cu ser convalescent sau ser cimpanzeu

5/24/2018 Curs 6

38/41

1. Morfologiestructura

dim. 50-60nm, invelit

genom: ARN monoc. sens +., codifica: proteinele C

(capsidare), M (membrana) si NS1 - NS5 (nestructurale) capsida icosaedrica

invelis: 2 glicoproteine (E1 si E2)

10 genotipuri si 52subtipuri

2. Patogeneza:

incubatie 4-6 sapt.

90% asimptomatice , doar crestere a transaminazelor

evidentierea tip C prin detectia atc anti VHC seroconversie in 2-12 luni

50% se cronicizeaza, 20% evolueazaspre ciroza saucarcinom hepatocelular

3 Di ti l d l b t

5/24/2018 Curs 6

39/41

3. Diagnosticul de laborator :

examen direct:

ser: evid genom v. prin PCR

imunodiagnostic:

evid. atc anti VHC (fata de atg. obtinute prin ingineriegenetica) prin ELISAconfirmare Western blot, PCRsi RIBA (recombinant imunolot)

transaminaze > si atc > mai mult de 6 luni =cronicizare

4. Tratament:

interferon alfa 2b: 50% scadere ARN si ameliorareafunctii hepatice

ribavirin

20% efecte bune de lunga durata

5/24/2018 Curs 6

40/41

V. HEPATITEI E (caliciviridae)

5/24/2018 Curs 6

41/41

- virus transmis fecal oral

- caractere morfofunctionale:

ARN sens, monoc.

dim: 27nm

neinvelit

- patogeneza:

poarta intrare: digestiva, asemanatoare hepatitei A

infectie severa la gravide (10 % decese)

mai frec la adulti tineri infectie experimentala la primate (virusuri in hepatocite - IF)

nu se cronicizeaza

- epidemiologie:

sporadic, epidemic

raspindire: India, Algeria sursa: om, cimpanzeu

cale: fecal orala


incubatie: 15-64 zile

curs 6

Documents