Download - Isolasi dna gyshaa
![Page 1: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/1.jpg)
Isolasi DNA
Uswatunnisa (105040200111114)Senin, 11.00 (Ass. Gita)
![Page 2: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/2.jpg)
Pengertian Isolasi DNA
Pemisahan materi DNA dari komponen-komponen sel lainnya
![Page 3: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/3.jpg)
Tujuan Isolasi DNA
Visualisasi DNA dengan elektroforesis gel, Peninjauan pola fragmen DNA hasil
pemotongan secara enzimatik melalui teknik Hibridisasi Southern,
Isolasi DNA genomik dalam rangka pembuatan pustaka genomik,
Isolasi DNA yang diperlukan sebagai cetakan (template) dalam prosedur perbanyakan DNA secara in vitro melalui teknik PCR
![Page 4: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/4.jpg)
Alat dan Bahan Isolasi DNA AlatMortar dan pestleGelas ukur Oven Pipet tetes Tube Sentrifuse Kulkas
Bahan
Daun KakaoNitrogen cair dan PVPCTAB dan β
mercaptoetanol CIA/CHISAM IsopropanolBuffer pencuciTERNA se Ethanol
![Page 5: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/5.jpg)
Cara Kerja Isolasi DNA
Siapkan alat dan bahan
Timbang bahan (daun cacao) 0,3 gr. Tambahkan N2 cair (suhu -168ᵒC), tumbuk hingga halus menggunakan mortar & pestle
![Page 6: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/6.jpg)
Masukkan CTAB 1ml terlebih dahulu ke dalam tipTambahan bahan yang sudah ditumbuk halusTambahkan β mercaptoetanol
vortex bahan agar semua bahan larut dan menjadi homogen
![Page 7: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/7.jpg)
Inkubasi dengan suhu ± 65ᵒC selama 30 menit
Balik tabung tiap 15 menit agar bahan tercampur rata.
![Page 8: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/8.jpg)
Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroLiter lalu kembali di VortexSentrifugasi pertama dengan 6000 rpm selama 10 menit
Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroliter pada supernatan DNA
![Page 9: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/9.jpg)
Supernatan ditambahkan isopropanol dingin 300 mikroliter
Inkubasi freezer selama 30 menit
![Page 10: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/10.jpg)
DNA pellet ditambahi buffer pencuci 2x. Masing-masing 300 mikroliter
![Page 11: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/11.jpg)
Inkubasi kurang lebih 37ºC selama 30 menit
![Page 12: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/12.jpg)
Tambahkan ethanol dingin 300 mikroliter
Elektroforensis
![Page 13: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/13.jpg)
Uji Kualitas DNA
ElektroforesisPrinsip Dasar: memisahkan molekul
berdasarkan berat molekulnya menggunakan aliran listrik (lewat pori-pori gel Elektroforesis)
Kualitas DNA 1. Berat Molekul2. Kemurnian Molekul
![Page 14: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/14.jpg)
SpektrofotometerMenggunakan serapan gelombangKomponen akan mengendap sesuai
beratnya.
![Page 15: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/15.jpg)
Proses PCR (Polymerase Chain Reaction)
Denaturasi. Dilakukan pada suhu 92-95ºC. Proses ini merupakan perombakan ikatan hidrogen (double-single)
Annealing. Dilakukan pada suhu 50-55ºC. Proses ini merupakan penempelan primer
Elongation. Dilakukan pada suhu 72ºC. Proses ini merupakan pemanjangan rantai DNA sesuai urutan basa primernya
![Page 16: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/16.jpg)
Komponen Proses PCR
DNA template Enzim Tag dNTP Primer NFW (Nuclease Free
Water) Buffer PCR MgCL2
![Page 17: Isolasi dna gyshaa](https://reader033.vdocuments.pub/reader033/viewer/2022061211/5491f429b47959b9538b4b53/html5/thumbnails/17.jpg)
Uswatunnisa (105040200111114)Senin, 11.00 (Ass. Gita)
Isolasi DNA