7/26/2019 ED 2-Métodos de Determinação de Açúcares%281%29

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ED 2 – MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DE AÇÚCARES

MÉTODO DE SOMOGYI-NELSONHistóricoEste método foi desenvolvido pelos bioquímicos Michael Somogyi e Norton Nelson nas

décadas de 4 e !" inicialmente para detectar a#$cares no sangue %&E'MEN(E)"*+*,- .

método original foi modificado" principalmente o colorimétrica de forma que os compostos

coloridos pudessem ser quantificados por espectrofotometria-

!"#$%&"tosEsta técnica fa/ a determina#0o de a#$cares com base na propriedade redutora através da

rea#0o de hidro1ila hemiacetálica dos monossacarídeos" ou se2a" há uma liga#0o

intramolecular entre o grupo carbonila livre %carbono anomérico, que se condensa com um

grupo hidro1ila e1istente ao longo da cadeia formando hemiacetais cíclicos- Este método é

considerado mais sensível que outros" pois a fai1a de determina#0o é entre *! e !mg3m"

entretanto n0o é considerado específico por sofrer interfer5ncias de outros compostos

redutores- 6#$cares redutores cont5m um grupo aldeído ou cet7nico que" em solu#8es

alcalinas" redu/em íons de cobre" prata" bismuto e merc$rio a compostos de val5ncia menor-

. princípio deste método se dá pela redu#0o de íons c$pricos em íons cuprosos em fun#0o

do a#$car redutor que formam 91ido de cobre e redu/em o arsenomolibdato produ/indo uma

colora#0o a/ul" a leitura é feita em espectrofot7metro em filtro de !4nm %M6:.N6:E"

*+;,-

'roc&#i%&"tos

6, Preparo de Solu#8es+- Solu#0o de glicose ou frutose< %!mg3,< :issolver "!g de glicose em *m de água

destilada e transferir para bal0o volumétrico de +m completando o volume-*- 'eagente de Somogyi=Nelson >< :issolver em ?m de água 4g de sulfato de cobre anidro"

*4g de carbonato de s9dio anidro" +?g de bicarconato de s9dio" +*g de tartarato duplo de

 potássio e +@g de sulfato de s9dio anidro" completando + em bal0o volumétrico- 'epousar 

 por um dia e filtrar em papel filtro em frasco escuro-;- 'eagente de Somogyi=Nelson >>< Solu#0o 6 %adicionar !g de molibdato de am7nio anidro

em Am de água destilada e depois lentamente adicionar 4*m de ácido sulf$rico,B

Solu#0o C %:issolver ?g de arseniato dibásico de s9dio anidro em !m de água destilada,-

4- Misturar as solu#8es 6 e C em frasco Dmbar" dei1ar em estufa a ;F) por *4 horas-

Professor< Samuel :ias 6ra$2o G$nior H )urso< Ciomedicina H :isciplina< 6nálises de 6limentos %+3*+?,

Disci()i"$* A"+)is&s #& A)i%&"tos ,12.1/0'ro&ssor* S$%!&) Di$s Ar$3o 4"ior

Est!#$"t&s* G!st$5o6 7&))8sso"6 Li9$"#r$ & Mic:&)&;

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C, )urva Padr0o de a#$car redutor +- :iluir solu#0o padr0o de glicose em tubos e retirar alíquota de +m para o teste de SN-

)onstruir a curva padr0o e calcular concentra#0o de a#$cares redutores-), Preparo da amostra+- +g da amostra" homogeini/ada em mi1er por ; minutos- 'etirar +g da amostra e

adicionar ! ou +m em bal0o volumétrico" na qual a concentra#0o ficará em ! e!mg3- )entrifugar a amostra a +! rpm por +! minutos e retirar +m do sobrenadante

 para o teste de SN-*- (este de SN< 6dicionar +m da amostra em *m do reagente SN=> e agitarB aquecer em

 banho maria por ? minutos e depois resfriar por ! minutos em geloB adicionar *m de

reagente SN=>> e dei1ar em repouso por ! minutos em temperatura ambiente- 6crescentar 

*!m de água destilada e fa/er a leitura em espectrofot7metro a !4nm-

R&s!)t$#os

(ra#a=se a curva padr0o de .: a !4 nm contra a concentra#0o de glicose %mg 3 m, dos

 padr8es- )alcula=se a concentra#0o de glicose da amostra a partir da equa#0o da linha reta< y

I a1 J b- 6 absorbDncia corresponde a "+ m de teste I K mg de glicose + ml contém I 1 3

"+ L + mg de glicose I de a#$cares redutores

<i=)io>r$i$

  M6:.N6N:E" >' et al- 'rotoco)o ($r$ #&t&r%i"$?@o #& $?c$r&s r&#!tor&s (&)o%to#o #& So%o>8i-N&)so"; )omunicado (écnico @?" EMC'6P6" *+;-

N>OE'S>:6:E :E S. P6.- <ioB!%ic$ – LC< 2.; Rot&iro #& $!)$s (r+tic$s;ES).6 SPE'>.' :E 6Q'>)('6 R> :E TE>'.U :epartamento de)i5ncias Ciol9gicas- Piracicaba" *+!-:isponível em< V  docentes-esalq-usp-br3luagallo3apostila*pratica**+!-docW Xltimoacesso em< +343*+? Ys *<;

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