examenbactériologiedesselles - copie
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EXAMEN BACTERIOLOGIQUE DES SELLES (COPROCULTURE CLASSIQUE)
Elaboré par : ALIMOU Sofia
BEKAR Oumaima
BOUSSAADANE Sara
DIDAH Fayza
Encadré par: Mme.HSAINE Samira
PLAN INTRODUCTION QUAND PRESCRIRE EBS? DIHAREES INFECTIEUX PRELEVEMENT & TRANSPORT QUE RECHERCHER DANS EBS? COPROCULTURE CLASSIQUE:
-EXAMEN MACRO ET MICROSCOPIQUE
-MILIEU DE CULTURE
-IDENTIFICATION & INTERPRETATION CONCLUSION
INTRODUCTION
L'examen bactériologique des selles se fait par coproculture, c'est-à-dire par ensemencement des selles sur des milieux de culture appropriés. Le but est de rechercher et d’identifier parmi une flore commensale très abondante soit des bactéries habituellement absentes et réputées pour leur pouvoir pathogène, soit une espèce bactérienne anormalement prédominante
Quand prescrire EBS?
Diagnostic diarrhée: Diarrhée infectieuse bactérienne ?
• Diarrhée aiguë• Diarrhée chronique si patient immunodéprimé
TIAC Toxi-Infection Alimentaire Collective Prévention risque infectieux:
Sujets à risque ( immunodéprimé, en réanimation, oncohématologie )
Contexte réglementaire (cuisiniers p.ex) Intérêt épidémiologique:
Entourage patient Réanimation néonatale
DIARRHEES INFECTIEUSES
Selon L’O.M.S, Une diarrhée : émission d’au moins 3 selles/j de consistance
anormale
• Aiguë < 14 j
• Persistante > 14j
• Chronique > 4 semaines TIAC Toxi-Infection Alimentaire Collective
définie par l'apparition d'au moins deux cas groupés similaires d'une symptomatologie, en général gastro-intestinale, dont on peut rapporter la cause à une même origine alimentaire
Prélèvement et transport
Recueil dès l’émission
Volume noix dans conteneur hermétique
propre à usage unique
Choisir échantillon mucopurulent ou sanglant
Acheminement rapide au laboratoire (<2h)
Conservation: maximum une nuit à +4°C, au-
delà milieu transport
Ecouvillonnage rectal: nouveau-né, petit enfant
Biopsies rectales = coproculture
Que rechercher dans EBS? (3)
Coproculture classique:Salmonella Shigella Campylobacter Yersinia enterocolitica
Coproculture classique Examen macroscopique
Noter consistance: Selles moulées refusées Présence de glaires, de pus et de sang: choix de ces zones
Examen microscopique Etat frais:
• Mobilité caractéristique / levures/ hématies/Parasites• Peu informatif (manque de sensibilité)
Colorations • Bleu de méthylène: leucocytes
• Présence leucocytes diarrhée à germes invasifs ex: Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter
• Absence leucocytes diarrhée à germes entérotoxinogènes ex: V. cholerae, C. difficile
• Gram
COPROCULTURE CLASSIQUE Examen microscopique
Coloration de Gram :
1) Flore normale: majorité BGN Présence qqs BGP Apprécier déséquilibre flore
2) Morphologie caractéristique
Mise en culture Milieu sélectif pour les entérobactéries BCP/ Mac Conkey Milieux pour recherche Salmonella , Shigella .
• Hektoen
• ASAP
• SS, XLD, DCL
• Milieu d’enrichissement pour Salmonella .
• Bouillon sélénite (12-24h d’incubation)
• Incubation à 35°C pendant 24-48H
Milieu Hektoen
Milieu sélectif par sels biliaires (taux élevé de peptone pour Shigella)
Étude de 3 sucres ( lactose, saccharose, salicine) et H2S
Couleur Germes
Jaune saumon E. coli, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, S. arizonae, Vibrio cholerae (ox+), Aeromonas (ox+), Yersinia
Jaune saumon
à centre gris-noir
Proteus vulgaris
Bleues à centre noir
Proteus mirabilis
Salmonella
vertes Shigella, S.Typhi, Pseudomonas (ox+)
Milieu ASAP
sensibilité améliorée par enrichissement préalable
Incubation à 37°C; lecture à 24H
rose pourpres
Salmonella
Bleu vert Klebsiella, Enterobacter
Bleu violet Serratia
COPROCULTURE CLASSIQUE
Mise en culture Recherche Yersinia enterocolitica
(gélose spécifique)
• Milieu CIN peu sélectif à 48-72h, lire à 24 h
• Milieu Wauters
• Incubation 48h à 30°C Identification:
Yersinia: +++ galerie
Yersinia sur CIN
COPROCULTURE CLASSIQUE
Mise en culture Recherche Campylobacter (gélose sélective)
• Milieu Karmali • En microaérophilie (5 % O2, 10% CO2, 85% N2) • Incubation à 37°C • Lecture à partir J2J5
Campylobacter sur karmali
Identification
COPROCULTURE CLASSIQUE
Compylobacter.jejuni Campylobacter.jejuni Doylei
Campylobacter.Coli
Campulobacter.fetus
Croissance à 25°C - - + +
Croissance à 42°C + - + -
Hippurate + + ou - - -
Céfalotine R S R S
Acide nalidixique S S S R
indoxylacétate + + ou - + -
COPROCULTURE CLASSIQUE
Identification Salmonella :
• Galerie: identification espèce
• Sérotypage :
• Mélange agglutinines anti-O / sérum monovalent/ anti-H 1 et 2/ anti-Vi ( selon labo) puis envoyé CNR
• Test Sven Gard ( CBPE) Antibiogramme
Salmonella , Shigella ., Campylobacter, Yersinia .
COPROCULTURE CLASSIQUE
Interprétation:Mise en évidence de Salmonella , Campylobacter .,
Yersinia enterocolitica, Shigella . pathologiqueCulture pure ou majoritaire sur PBC/Hektoen:
• Identifier et rendre P. aeruginosa, S. aureus et levures
Antibiogramme sur bactéries en situation de pathogénicité
Salmonella . déclaré à la TIAC
CONCLUSION Les résultats d'une coproculture doivent être
interprétés et confrontés aux données cliniques. La présence d'une bactérie ne témoigne pas forcément de son caractère pathogène. Par ailleurs il faut savoir que l'émission dans les selles, de certaines bactéries agents de diarrhées, peut être très brève et que souvent les coprocultures sont réalisées trop tard. En effet, il peut être difficile de recueillir des selles en cas d'épidémie. Il ne faut pas oublier également que de nombreuses diarrhées ont une origine virale, expliquant alors la négativité des cultures bactériennes