hemoglobinopatias

HEMOGLOBINOPATIAS

Química Biológica Patológica

Dra. Silvia [email protected]

I-Alteraciones Estructurales

Tema:3 (3)

Esquema de la Molécula de Hemoglobina

Ontogenia cadenas de globina

, , , ,

Síntesis de cadenas de globina % en embrión, feto y lactante

El hierro se une la Hys F8 ( histidina proximal)

Al otro lado se encuentra la Hys E7 (histidina distal) donde se une el O2, CO2

y CO

UNION DEL HEM A LA GLOBINA Y AL OXÍGENO

Cada subunidad esta constituida por 8 hélices rotuladas AH conectadas por uniones polipeptídicas cortas

RESIDUOS EN CONTACTO CON EL HEM

Los residuos no polares en los segmentos C, CD, E, F y FG protegen la abertura al impedir que el agua penetre.

BOLSILLO DEL HEM

La jaula hidrofóbica donde se encuentra el hem es la fuerza estabilizadora principal para la unión del hem a la proteína

El medio no polar dificulta la oxidación de Fe2+ a Fe3+.

DesoxihemoglobinaLa oxigenación pone a las cadenas mas

juntas

Oxihemoglobina

Estado Oxihb o Relajado (R)

Estado R: hay cerca 40 contactos (19 puentes de hidrogeno)

Estado Desoxihb o Tenso (T)

Estado (T): hay cerca 22 contactos (12 puentes de hidrogeno)

La mayoría de los movimientos de oxigenación/deoxigenación toma lugar en las interfaces 12 (21)

Las interfaces 11 (22) permanecen inmóviles

Desoxigenación: Oxigenación: ------

HEMOGLOBINOPATÍASHEMOGLOBINOPATÍAS

ALTERACIONES CUALITATIVASALTERACIONES CUALITATIVAS Hemoglobinopatías estructuralesHemoglobinopatías estructurales

ALTERACIONES ALTERACIONES CUANTITATIVASCUANTITATIVAS Síndromes TalasémicosSíndromes Talasémicos

Clasificación:

ESTRUCTURALES

Cadenas Cadenas Cadenas Cadenas Fusión de

Cadenas:

TALASEMIAS

- talasemia - talasemia - talasemia - talasemia - talasemia

PERSISTENCIA HEREDITARIA DE HEMOGLOBINA F

Con deleción

Sin deleciónLigado al cluster No Ligado al cluster

Clasificación según FenotipoI-Propiedades físico-químicas alteradasA-HbS (polimerización deoxihb S): síndromes drepanocíticosB-HbC (cristalización): anemia hemolítica, microcitosis

II-Variantes de Hemoglobina InestablesA-Anemia hemolítica de cuerpos de Heinz Congénita

III- Variantes con afinidad al O2 alteradaA-Variantes con alta afinidad: eritrocitosisB-Variantes con baja afinidad: anemia, cianosis

IV-Hemoglobina M A-Metahemoglobinemia, cianosis.

V- Variantes que causan un fenotipo talasémico

VARIANTES ESTRUCTURALES DE HEMOGLOBINAS

NOMENCLATURA PATOLOGIA MOLECULAR: a-Sustituciones de una única base. HbS b-Variantes de cadena de hemoglobina

elongadas (cadenas alargadas). Hb CS c-Cadenas de globinas truncadas (deleción

de fragmentos). Hb Leiden, Gun Hill d- Hemoglobinas de fusión (hibridización

anómala). Hb Lepore

a-Sustituciones de una única base.b-Variantes de cadena de Hb elongadas.

Mutantes de Terminación: Cadenas Alargadas

Los mutantes de terminación son todos variantes de la cadena alfa globina donde hay una única sustitución de base en el codón stop UAA .

Hb Constant Spring. 1 y 2 Adulto Normal; 3 y 4 heterocigota para HbCS y º-talasemia con HbH;5:Adulto Normal; y 6 componente heterocigota para º-talasemia y HbCS

c-Cadenas de globinas truncadasEn este caso, un o más aminoácidos adyacentes se pierden, pero se conserva el resto de la cadena normal. Estas variantes involucran la deleción de 1 o más codones intactos, no afectando el marco de lectura de la proteína restante.

Consisten en una perdida de uno o varios nucleótidos en la secuencia del DNA que codifica la síntesis de una cadena de globina. Son ejemplos de deleciones las Hb Freiburg (deleción de un aminoácido), Hb Lyon (deleción de dos aminoácidos) y Hb GunHill (deleción de cinco aminoácidos).

d- Hemoglobinas de fusiónHemoglobina Lepore Hemoglobina Kenya

Hb Lepore tiene los primeros 20 a 80 aminoácidos de las cadenas y los últimos 50 a 100 aminoácidos del extremo C-terminal de la cadena .

-El gen híbrido δβ se llama Lepore y - El gen híbrido βδ se llama anti-Lepore

Clasificación según FenotipoI-Propiedades físico-químicas alteradasA-HbS (polimerización deoxihb S): síndromes drepanocíticosB-HbC (cristalización): anemia hemolítica, microcitosis





Hemoglobina S Hemoglobina C Hemoglobina E Hemoglobina D

I-Hemoglobina con Propiedades Fco-Qco Alteradas

Anemia Falciforme, Drepanocítica, en Forma de Hoz (sickle), o HbS

6

Cadena

GTGGAG

WT: Ac.Glutámico

GTGGAG

S: Valina

Fisiopatología: POLIMERIZACION DE HEMOGLOBINA La presencia de HbS, permite a esta

polimerizar cuando se desoxigena (Estado T), ya que la valina (pero NO Ac.Glutámico) puede unirse a ésteres complementarios en cadenas de globina adyacentes

La valina (2) se une a un bolsillo hidrófobo sobre la subunidad 1 de una molécula vecina de oxihemoglobina.

1 2

Micrografía electrónica de fibras teñidas negativamente de HbS y la estructura deducida por reconstrucción de la imagen tridimensional. Las fibras reconstruidas esta presente como modelos de balones, (cada balón representa un tetrámero de HbS). Los modelos se presentan como la cubierta exterior (a), el núcleo interno (b) y una combinación de ambos filamentos el externo y el interno (c)

a

b

c

c/polímero= 14 haces longitudinales= cuerpo tactoide

Estructura cilíndrica, insoluble y rígida

Fibras de desoxihemoglobina S

Fisiopatología: POLIMERIZACION DE HEMOGLOBINA DESHIDRATACION CELULAR DISMINUCIÓN DEL NO Y DISFUNCIÓN DE

ENDOTELIO ADHESIVIDAD CELULAR ANORMAL INFLAMACION ISQUEMIA-REPERFUSIÓN LA ACTIVACIÓN DEL SISTEMA DECOAGULACIÓN VASCULOPATIA CRONICA

1º

2º

4º

3º

5º

6º

7º

VCAM (vascular cell adhesion

molecule )

SCAVENGING o BARRIDO DE OXIDO NITRICO (NO)

SCAVENGING de NO Y DISFUNCIÓN DE ENDOTELIO H

EM

OLIS

IS I

NTR

AV

AS

CU

LA

R

Diagnóstico Anemia con HbS:

Características clínicas 1. Fase estacionaria. Corresponde, generalmente, a los primeros años de vida (1-4 años), y

sus manifestaciones clínicas son las propias de un síndrome hemolítico crónico moderado o intenso (anemia, palidez cutáneo-mucosa, subictericia conjuntival y retraso del crecimiento óseo y gonadal).

2. Fase de expresividad aguda. Se inicia a partir de los 4 años de edad, con agravamiento del cuadro

anémico (Hb < 80 g/L) y aparición de diversas manifestaciones clínicas de carácter agudo debidas a las crisis vasooclusivas que afectan de forma importante a diversos órganos, aunque muy especialmente al pulmón, al riñón y al tejido óseo (drepanocitosis).

Las crisis vasooclusivas constituyen, de hecho, la manifestación clínica más característica y grave de la anemia falciforme y, muchas veces, el primer síntoma. Se trata de ataques, muy dolorosos y pasajeros, que pueden durar días o semanas.

3. Fase de expresividad crónica. Es propia de los pacientes que han logrado sobrevivir la primera infancia, por lo que es característica de la adolescencia y la edad adulta. El carácter evolutivo crónico de la anemia falciforme afecta de forma importante al crecimiento y desarrollo corporal, al sistema nervioso central, cardiovascular, pulmonar, hepatobiliar y gastrointestinal. Asimismo, condiciona lesiones graves de la función renal y trastornos visuales que pueden conducir a la ceguera

Otras variantes estructurales de Hb Hemoglobina C: fue la segunda variante a ser

identificada electroforeticamente. Resulta de la sustitución de Lisina por Ac.Glutámico en la posición 6 de la cadena de de globina. Existe un número de observaciones que sugieren que la Hemoglobina C es menos soluble que la Hemoglobina A y tiene tendencia a cristalizar en el eritrocito.

Hemoglobina D: este termino se usa par describir un numero de variantes de hemoglobinas que tienen una velocidad de migración idéntica a HbS en una electroforesis a pH alcalino. La mas común de estas hemoglobinas es la Hb DLOS ANGELES, sus eritrocitos son normales excepto por el elevado numero de células target.

Hemoglobina E: Es la variante más común en el mundo. Resulta de la sustitución de Acido Glutámico por Lisina en la posición 26 en la cadena de globina.

Frotis de sangre. Enfermedad Hb SS con sickle- cells.

Microscopia contraste de fase. Note 3 sickled cells con proyecciones (formación tactoide).

Frotis de sangre de Enfermedad Hb SC. Note frecuencia de target cells, característica de Hb C y las células son pequeñas y densas, irregular, refleja su contenido de Hb S.

Frotis de sangre de enfermedad con Hb CC. Numerosas target cells y una población de microesferocitos (hipercromática).De las células no

esferociticas, virtualmete todas son target cells.

FS de enfermedad Hb DD. Note target cells en una población de esferocitas pequeños, poikilocitos, y pequeños fragmentos de GR.

FS de enfermedad con Hb C postesplenectomia. Note las inclusiones semejantes a una barra en dos células como resultado de cristalización de Hb C. Estas células son virtualmente removidas en pac. con bazo.

Enfermedad de Hb CC postesplenectomia. Microscopia de contraste de Fase. Note la barra cristalina de Hb C in una célula.

FS de enfermedad Hb EE. Hipocromia, anisocitosis y target cells.

Clasificación según FenotipoI-Propiedades físico-químicas alteradasA-HbS (polimerización deoxiHb S): síndromes drepanocíticosB-HbC (cristalización): anemia hemolítica, microcitosis





II-Desordenes de Hemoglobinas Inestables

Anemia Hemolítica de Cuerpos de Heinz Congénitos, (CHBA) (Congenital Heinz body hemolitic anemia)

Tipo 1: Sustituciones en la vecindad del bolsillo del hem . La unión del hem a la globina involucra interacciones específicas con residuos de aminoácido no polares en las regiones CD, E, F, y FG

Desordenes de Hemoglobinas Inestables

Anemia Hemolítica de Cuerpos de Heinz Congénitos, (CHBA) (Congenital Heinz body hemolitic anemia) Tipo 2: Ruptura

Estructura Secundaria de -hélice. Prolina no puede participar excepto como parte de uno de los tres residuos iniciales. Hay sustituciones de Pro

Tipo 3: Mutaciones en la interfaz 11

Tipo 5: Cadenas Elongadas

Tipo 4 : Deleciones de aminoácidos

R

I

OxiHb (6HS)

Hemicromo 1 (Reversible)

Hemicromo 2 (Irreversible)

Precipita (4 HS)

LISIS

Hb sin hem

Cadenas precipitadas

NADH

NAD+

H2O2

H2O

Superóxido dismutasa

Glutation peroxidasa

GSH

GSSG

Formación Cuerpos Heinz

Cuerpos de Heinz (unido MP)

MetaHb (6HS) + O2

Catalasa

-

Mecanismo de formación de los Cuerpos de Heinz

Los hemicromos son moléculas de metahemoglobina en las que la quinta o sexta posición de coordinación con el hierro se une en otra posición de la normal, generando una distorsión de la molécula

ión superóxido

Autoxidación

Mecanismo de Hemólisis:

Una teoría propuesta como mecanismo de hemólisis seria la siguiente

(1º) un aumento de la oxidación y fosforilación de tirosina en la proteína AE1; unión de los hemicromos a la proteína Banda 3

(2º) reclutamiento progresivo de AE1 fosforilada en grandes complejos en membrana lo cuales contienen hemicromos y

(3º) paralela lisis de los eritrocitos y una masiva liberación de vesículas que contienen hemicromos.AE1, anion exchanger1 =Banda3.

II-Mecanismos de Remoción Fagocítica de Eritrocitos

La secuencia de eventos sería: a- Unión de los hemicromos a la proteína Banda 3, b- Oxidación de los dominios citoplasmático de Banda 3, c- Generación de agregados de alto peso molecular de Banda 3 (clustering de banda 3) que une IgG y complemento,d- Opsonización con Ac anti- Banda3e- Reconocimiento por parte del sistema mononuclear-fagocítico y fagocitosis por macrófagos.

Clasificación según FenotipoI-Propiedades físico-químicas alteradasA-HbS (polimerización deoxiHb S): síndromes drepanocíticosB-HbC (cristalización): anemia hemolítica, microcitosis





TALASEMIAS

- talasemia - talasemia - talasemia - talasemia - talasemia

PERSISTENCIA HEREDITARIA DE HEMOGLOBINA F

Con deleción

Sin deleciónLigado al cluster No Ligado al cluster

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