kaken - ùðø ¡ ê^ í~#6iúÃ y)ýß c%ãl; · È w ¤ ï ¬ Æ @ @ ¤ ¬ Ê ñ l @ ® @ b | p x...

5
科学研究費助成事業 研究成果報告書 C-19、F-19、Z-19 (共通) 機関番号: 研究種目: 課題番号: 研究課題名(和文) 研究代表者 研究課題名(英文) 交付決定額(研究期間全体):(直接経費) 82401 若手研究(B) 2014 2013 実時間mRNA発現動態解析による左右軸非対称性形成のシグナル制御機序の解析 Developmentofreal-timedetectionmethodofmRNAdynamicsforthestudyofsignal regulationsystemduringleft-rightasymmetryformation 60637205 研究者番号: 高井 啓(TAKAI,Akira) 独立行政法人理化学研究所・生命システム研究センター・特別研究員 研究期間: 25871128 平成 日現在 27 3,400,000 研究成果の概要(和文):本研究では、生体内イメージングに適したプローブとして近年開発された、超高輝度発光タ ンパク質Nano-lantern(ナノ・ランタン)の更に高輝度なシアン色・オレンジ色の色調変異体を開発した。これにより 細胞内微細構造や遺伝子発現、細胞内カルシウムイオン濃度の動態など、複数の生命現象を高感度かつ同時に解析する ことが可能となった。さらにこのナノ・ランタンをRNA結合タンパク質と応用することで、標的とするmRNAを特異的に 検出する方法を開発した。今後、このmRNA検出法をさらに改良してシグナル標的遺伝子のmRNA動態解析に応用すること で、左右軸非対称性形成のシグナル制御機構の解析に取り組む。 研究成果の概要(英文):Inthisresearch,wedevelopedbrighter,cyanandorangevariantsof Nano-lantern,arecentlydevelopedsuper-brilliantyellowish-greenluminescentproteinwhichissuitable forinvivoimaging.ThesemulticolorNano-lanternsenablemonitoringofmultiplebiologicalevents, includingdynamicsofintracellularmicrostructures,geneexpressions,andcalciumionconcentrations. Furthermore,wedevelopedreal-timemRNAdetectionmethodbycombiningNano-lanternwithRNAbinding proteins.AfterfurtherimprovementofthismRNAdetectionmethod,wewillapplyitinastudyofsignal regulationmechanismsduringleft-rightasymmetryformation. 研究分野: 発生生物学、細胞生物学 キーワード: シグナル伝達 発光イメージング RNAイメージング 2版

Upload: others

Post on 29-Aug-2020

6 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: KAKEN - ùðø ¡ ê^ í~#6iúÃ Y)ýß C%ãL; · È w ¤ ï ¬ Æ @ @ ¤ ¬ Ê ñ l @ ® @ b | P X A e | P X A y | P X i ¤ Ê j @ Ö Ô F ¤ í Ú F Û è Ô F ¤ Û è ¼ i a ¶

科学研究費助成事業  研究成果報告書

様 式 C-19、F-19、Z-19 (共通)

機関番号:

研究種目:

課題番号:

研究課題名(和文)

研究代表者

研究課題名(英文)

交付決定額(研究期間全体):(直接経費)

82401

若手研究(B)

2014~2013

実時間mRNA発現動態解析による左右軸非対称性形成のシグナル制御機序の解析

Development of real-time detection method of mRNA dynamics for the study of signal regulation system during left-right asymmetry formation

60637205研究者番号:

高井 啓(TAKAI, Akira)

独立行政法人理化学研究所・生命システム研究センター・特別研究員

研究期間:

25871128

平成 年 月 日現在27 6 2

円 3,400,000

研究成果の概要(和文):本研究では、生体内イメージングに適したプローブとして近年開発された、超高輝度発光タンパク質Nano-lantern(ナノ・ランタン)の更に高輝度なシアン色・オレンジ色の色調変異体を開発した。これにより細胞内微細構造や遺伝子発現、細胞内カルシウムイオン濃度の動態など、複数の生命現象を高感度かつ同時に解析することが可能となった。さらにこのナノ・ランタンをRNA結合タンパク質と応用することで、標的とするmRNAを特異的に検出する方法を開発した。今後、このmRNA検出法をさらに改良してシグナル標的遺伝子のmRNA動態解析に応用することで、左右軸非対称性形成のシグナル制御機構の解析に取り組む。

研究成果の概要(英文):In this research, we developed brighter, cyan and orange variants of Nano-lantern, a recently developed super-brilliant yellowish-green luminescent protein which is suitable for in vivo imaging. These multicolor Nano-lanterns enable monitoring of multiple biological events, including dynamics of intracellular microstructures, gene expressions, and calcium ion concentrations. Furthermore, we developed real-time mRNA detection method by combining Nano-lantern with RNA binding proteins. After further improvement of this mRNA detection method, we will apply it in a study of signal regulation mechanisms during left-right asymmetry formation.

研究分野: 発生生物学、細胞生物学

キーワード: シグナル伝達 発光イメージング RNAイメージング

2版

Page 2: KAKEN - ùðø ¡ ê^ í~#6iúÃ Y)ýß C%ãL; · È w ¤ ï ¬ Æ @ @ ¤ ¬ Ê ñ l @ ® @ b | P X A e | P X A y | P X i ¤ Ê j @ Ö Ô F ¤ í Ú F Û è Ô F ¤ Û è ¼ i a ¶

ś� Ē� ȞȒȕȜ�ȟȒȕȜ�ȠȒȕȜȐ´Ǩȑ�

ȕȓƉƔǹôė¼=Ʈł (1) ƲŗÆŲƯ=ĉÑǢĘĪ=ń¼=Sw�j>�ĉ×%=o�kŨ<H57o�kǥƧ8Ɲư¶X�_T}SW�ŭď=�ľ9Nodal _[l�=ŧĤÈ$ĉ¬ųƁƃ<ē%Ǡ)*LK)939ƫ!IL7�K�)=o�kÙǥ8=ĉ¬ųƁƃ_[l�$ńƟƃ<¬Ő�Ưƹ<"'Kĉ¬Ĥ={ae�DZ�ö Pitx2 =ƂŶNǖĀ-KȐHirokawa, Tanaka & Okada, Curr. Opin. Cell Biol. 2012; ãȕȑ�+#+�X�_T}_[l�9 Nodal_[l�=ŁǺƃ�ƕǺƃǻ§G�o�kǥƧ#I¬Ő�ƯƹB8=_[l��Ǯ=ǔƝ>ŋ3�Ŀ=BB8�K�B2��Ƶ<�ƂŸǬƑ8>Nodal�ð<F�Wnt, BMP, FGF;:ś�;_[l�ƚ$ǵLJ;ęÁNŒ2+7�K$�)LI=_[l�$ĉÑǢĘĪ<:=H <ǻ�+7�K#<6�7>ƇLj$ùB57�;��

(2) ŽǚƬI>)LB8<�ƲŗÆŲ¼ʼnƯ=ƠƩqe��ĘĪ<"'K_[l�¿ĞŝŚNnjő+7%2ȐOnai, Takai et al., Evol. Dev. 2012; Takai et al., Development 2010; Arakawa, Matsuo-Takasaki, Takai et al., Dev. Biol. 2007ȑ�Ĝŏ=_[l�njő8>�<GFP ;:=�z�e�e�qZǟNź�2�z�e�_ah}$ź�IL7�2$�¼ʼnƯ=qe��ĘĪ>ƈŁǺ<ǫǀ-K2E��z�e�$ƪǐ�ĪŰ*LKB8=eS}�[9��z�e�$�ǜ�ºnj*LKB8=eS}�[= 2ƒȉ=eS}�[$Ý

Ȉ9;57�2ȐãȖȑ� ȖȓƉƔ=Ƅƃ (1) ōŽǚƉƔ8>�ĉÑǢĘĪ<"'K_[l��ǮŝŚ=njĿ=2E�_[l��ǮÆĨNúŁǺ8ÐNJÈ-KļťNĻ2<ǹƂ-K�0=ļť9+7ƪǐ��ǜ=ÝȈ$ĩģ*LK�z�e�e�qZǟ8>;&�_[l��Ǯ�Ũ=_[l�ŜƃDZ�ö=mRNA 0=F=NùǷƃ<ÐNJÈ-Kļť=ǹƂ<Ļ2<ÎJƠD�ļť9+7> RNAƢÔe�qZǟ8�KMS29 PP7NĢź+�ºÁç�_tU��d9ƠCÔM/K)98�úŁǺ#6ùǷƃ< mRNANǍŬ-Kļť=ǹƂNƄij-ȐƉƔ=ļť(2)Ìůȑ��Ǐ=ļťNź�7ƲŗÆŲ¼ʼnƯ=ĉÑǢĘĪ<"'K_[l��ǮÆĨ=ǔƝNnjő-K)98�ĉÑǢĘĪŝŚ=njĿNƄij-� (2) �_tU��d;:=Ƃ¯e�qZǟNź�2Ƃ¯S~�`�[8>�ƾ¯S~�`�[9>Ɓ;JÄǠ¯NĠLJ9+;��)=2Eƴüƾ¯$A9O:;&�_[l�/oSbŢ=ƶ�Ȍħď;S~�`�[$ÐƱ8�J�ƴüƾ¯=Ȅċ<Ė�ƲŗÆŲ¼ʼnƯ8=S~�`�[<ǰ+7�K�*I<¼ʼnƯ=Ɲư>ÄǠ¯<HK¯šĤ<ĕ�)9F�J�ÄǠ¯NĠLJ9+;�Ƃ¯e�qZǟNź�2Ƃ¯S~�`�[$ņ¾8�K�+#+;$I)LB8=Ƃ¯e�qZǟ>Ǥď$ �2Eħď$ĥ&�B2Ʒ=p�V�_��$Ă;�2ES~�`�[ť=ñf��n�È$âȂ8�J�úźĤ<�+#52�0)8ōŽǚƉƔ8>¼ʼnƯ<ǰ+2S~�`�[v��u8�J�#6�Ǐ=mRNA ùǷÈť<FĢźÐƱ;Ƃ¯e�qZǟ<6�7�Ƃ¯ĖďNķß+�ƷǙNïÈ*/2Ļ2;Ƃ¯e�qZǟNǹƂ-K� ȗȓƉƔ=ļť (1) Ȍħď�ñf��n�njő=2E=Ƃ¯e�qZǟ=ȌǤďÈ�ñƷÈ òǼòø=ţ�«ŤƉƔû<"�7ńǧ�ȏƥƷ=ǡȌǤďƂ¯e�qZǟ Nano-lanternȐlo���e�, Saito et al., Nat. Commun. 2012ȑ$ǹƂ*L2�lo���e�>ƾ¯e�qZǟ Venus9ķƶçT|_Se\�_tU��d=pSu�gke�qZǟ8�J��_tU��d#I Venus@=ŸŲƂ¯´ȎVn�Y�ƐÆȐBRETȑN�Ĉƃ<ē%Ǡ)-)98Ƃ¯Ėď=ķß�ƷǙ=ïÈNúŶ+7�K�ŽǚƬI>�lo���e�NǹƂ+2ţ�ƉƔû9=´ÕƉƔ<HJ�lo���e�=ƾ¯e�qZǟ Venus9�_tU��d=ƠCÔM/N�=ś�;ƾ¯e�qZǟG�_tU��d<ïŃ-K)98�lo���e�=*I;KȌǤďÈ�Ƃ¯ƷǙ=ïÈNã52�ş<ǹƂ+2lo���e�ƷǙïƁ¡Nź�2Ƃ¯S

������������

Okada%&%Hirokawa,%Methods%Cell%Biol%2009�

(A)

(F) (G)(G)(G)

(D)(D)(D) (E)(E)(E)

(B)(B)(B) (C)(C)(C)

R L

A

P

(H)(H)(H)

(I)(I)(I)

Fig. 1 (A) Left–right asymmetric arrangements of internal organs in the human body. Normalarrangement (situs solitus) (left). Most humans (>99%) have the heart on the left side and the liver on theright side. Mirrored arrangement (situs inversus) (right). Half of patients with Kartagener’s syndrome havethis arrangement, whereas the remaining patients are normal. Therefore, the left–right bilateral symmetry israndomly broken in this disease. (B–E) Scanning electron micrographs of wild-type (B, D) and Kif3b!/! (C,E) mouse embryos. (B, C) Full-length images. Wild-type embryos at this stage have already turned with aright-sided tail (B), whereas Kif3b!/! embryos remain unturned (C). In panel (C), the dilated pericardial sachas been removed, and the heart loop is inverted (arrow). (D, E) Higher magnification images and schematicrepresentations of the heart loops showing a normal loop in the wild-type embryo (D) and an inverted loop inthe mutant embryo (E). (F–I) Scanning electron micrographs of a mouse node. (F) Low-magnification viewof a mouse embryo at 7.5 days post coitum. Reichert’s membrane is removed, and the embryo is observedfrom the ventral side. The node is indicated by a black rectangle. The orientation is indicated in the panel asanterior (A), posterior (P), left (L), and right (R). Scale bar= 100 µm. (G) Higher magnification view of themouse node. The orientation is the same as in panel (A). Scale bar= 20µm. (H) Higher magnification viewof the nodal cilia (arrows) and nodal pit cells. Scale bar= 5 µm. (I) Nodal pit cells of Kif3b–/– embryos.Nodal cilia are absent in these genetically manipulated embryos. Panels A was reproduced with permissionfrom JT Biohistory Research Hall/TokyoCinema, (B–I) were modified from Nonaka et al. (1998), Okadaet al. (2005), and Hirokawa et al. (2006).

14. Measuring Nodal Flow 267

� �

����

Ca2+��

Nodal������

����

��

��

����

��������������

Pitx2↑�

�M ����3./6<:@G��

���! $)��� ����

�����

mRNA�

*%-"-�

(�+#�

����

���

��,����"�&' �

��,����"�&' �

実時間のシグナル伝達活性!�

*%-"-�

�N HDL>L<=?E3./6>8EF:

Page 3: KAKEN - ùðø ¡ ê^ í~#6iúÃ Y)ýß C%ãL; · È w ¤ ï ¬ Æ @ @ ¤ ¬ Ê ñ l @ ® @ b | P X A e | P X A y | P X i ¤ Ê j @ Ö Ô F ¤ í Ú F Û è Ô F ¤ Û è ¼ i a ¶

~�`�[=Ģź9+7�Džĸ=Ɲư¶ğƝŚǩGDZ�öƂŶ=ÆĨnjőNǀ52� (2) ºÁçlo���e�Nź�2úŁǺS~�`�[ť=ǹƂ ºÁç�_tU��d>�_tU��dN NŌƖ¬9 CŌƖ¬<ºÁ+2F=8�J�)LIȖ6=NŌƖ¬9CŌƖ¬=ĺű$ǧ­<ŏ7·ŚĪ-K)98�ōŏ=Ƃ¯ŧĤNÎJĬ-)9$8%K�)=ºÁç�_tU��d=įǁNlo���e�<Ģź-K)98�Ļ2<ºÁçlo���e�N£DŽ+2�*I<X�_T}SW�¥÷ƃ<ŚǩNïÈ*/KX�_T}c�^�xvfkCaM-M13 NºÁçlo���e�=Ǻ<ƠCǦD)98�X�_T}ŭď¥÷ƃ<Ƃ¯ĖďNîÃ*/KƂ¯çX�_T}ŭďijƊƺNǹƂ+2�)=X�_T}ŭďijƊƺNƝư¶X�_T}SW�ŭď=ñf��n�ÆĨnjő<Ģź-K)98�ºÁçlo���e�<HKúŁǺS~�`�[ť=ņÅĤNǒ¦+2� (3) RNAƢÔe�qZǟ9ºÁç�_tU��dN¾ź+2Ļlj mRNAùǷÈť=ǹƂ mRNA =�SuS~�`�[8>�MS2 GPP7;:= RNAƢÔe�qZǟ9 GFP=ƿÔe�qZǟNź�2ƚ$úźÈ*L7�KȐLionnet et al., Nat. Methods 2011ȑ�)=Įť>�mRNA=ăå=�SuS~�`�[8úƨ$�K$�ƂŶǷ=ǍŬ<>ùǷĤ�_[l�/oSbŢ=Ů8�˺8�K�ōŽǚƉƔ8>)=ŞŮN°ň-K2E�ºÁçlo���e�9ƠCÔM/2Ļ2; mRNA=úŁǺùǷÈť=ǹƂNǓC2�B.�ŜƃDZ�ö= 3’UTRȇè< MS2G PP7$ƢÔ-Kah}��vNe�i}<Ā±+2�ş<ºÁçlo���e�9ƿÔ+2 MS29 PP7N��Ǐ=ŜƃDZ�ö= mRNA9ÕŁ<ƂŶ*/K)98�ºÁlo���e�=·ŚĪ<HKƂ¯_[l�$ųƁƃ<ĝILK#: #NŘǎ+2Ȑãȗȑ�

�ȘȓƉƔĪŒ�

(1) lo���e�=Ń;KȌǤďÈ9ƷǙ=ïÈ=2E�50��=ƾ¯e�qZǟ��_tU��d=ƠCÔM/NŘǎ+2ƢŒ�

Ļ2<lo���e�=0L1Lƛ2.3ª9ƛ1.5ª=Ƃ¯ĖďNIJ6_Q�Ʒ9W��`Ʒ=lo���e�=ǹƂ<ĪÂ+2ȐãȘȑ�

*I<)LI3Ʒ=lo���e�=ĢźÐƱĤ=úǑúȋ9+7��DžĸNjþÿǞ=Ȍħď�ÕŁS~�`�[��¼ʼnƯżŏƝư8=¯šĤ�ƴüƾ¯t��=DžĸDZ�öƂŶÆĨnjő��ÄǠ¯t��=ñƷX�_T}SW�ŭďǍŬť=ǹƂNǀ52� �8>lo���e�Nź�7ğāƙ;:Džĸ=Ɲư¶ğƝŚǩNÕŁƂ¯S~�`�[-K)98�Ĝŏ=ƾ¯S~�`�[9ǯƷ;�ſ®N1ƎƑď=ȃ¯8Ȍħď<ĝK)9<ĪÂ+2��8>¼ʼnƯżŏ=Ɲư9+7ESƝưNź��3Ʒ=lo���e�NĢź-K)98Sox2�Oct4�Nanog=3ƒȉ=DZ�öƂŶNȌħď#6ÕŁ<njő-K)9<ĪÂ+2Ȑãșȑ�¼ʼnƯ=Ɲư8>ƾ¯S~

RNA��3:71�MS2/PP70�%)mRNA�����

�?#3�-46;8:3:-��,A:,���-���295<+3�-46;8:3:0��&()� ,B:,�"��*��'.3�-46;8:3:=��3:71�>�

�: Sox2!!: Oct4!�: Nanog�

,$/(�

�Q @BKFJ>J7�-1������

��Luc� ��mRNA�����

C�N�

AAAAAA�Cap�MS2�������

��mRNA� 3’UTR �

PP7�������

���

C�N�

�����������

N�

MS2� PP7�

C�N�

��������������

�O '+! 2 ))# 7�-1 ,*(% ����

RNA��,30*�MS2/PP7)� $mRNA�����

�8�3�'-/413,3'��,A:,���'���+2.5&3�'-/413,3)��!#$� ,B:,����%��"(3�'-/413,36��,30*�7�

A�

B�

�P " �4@BKFJ>J4�� %$ " �4@BKFJ>J7��01���;IAL

&$ ��01 " �4@BKFJ>J>JC9�4��

Page 4: KAKEN - ùðø ¡ ê^ í~#6iúÃ Y)ýß C%ãL; · È w ¤ ï ¬ Æ @ @ ¤ ¬ Ê ñ l @ ® @ b | P X A e | P X A y | P X i ¤ Ê j @ Ö Ô F ¤ í Ú F Û è Ô F ¤ Û è ¼ i a ¶

�`�[<ĠȆ;ÄǠ¯<HK¯šĤGƴüƾ¯$ÝȈ9;JG-&�ÄǠ¯$�LJ;lo���e�Nź�2Ƃ¯S~�`�[<HJ�¯šĤ�ƴüƾ¯t��=DžĸDZ�öƂŶ=Ȍħď�ÕŁnjőť$úŶ+2��8>ºÁçlo���e�įǁ9X�_T}c�^�xvfkCaM-M13NƠCÔM/K)98�lo���e�ƷǙïƁ¡Nź�2X�_T}SW�ijƊƺ=ǹƂ<ĪÂ+�Ļ2<ÄǠ¯t��=X�_T}SW�ŭď=ñf��n�Ŭùť$úŶ+2�ōť>�ě�¯DZ�ø;:=¯Ķ£įǁNó(;�X�_T}SW�ŭďǍŬť9+7�ƳƍøƉƔ;:@=Ģź$ʼnĚ*LK� ��=ĪŒ>ä¶ð=ǻǪø��øǁǛĹ<"�7Ƃǂ+ȐTakai et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2015ȑ�²äƜ=ÓĻƭõ¡GNHK;:=ÓƒëǭŝǻNǨ,7�ƵƋ�@9Ƃǂ+2� ����MS2�PP79ºÁçlo���e�Nź�2mRNAÐNJÈť=ǹƂ>ş=H <ǀ52�B.��MS2ah}��v"H?PP7ah}��vN3’UTR<Ā±+2ŜƃmRNA=ƂŶv�a|k��ºÁç�_tU��d=NŌ�CŌ9MS2�PP79=ƿÔe�qZǟ=ƂŶv�a|kN0L1L£DŽ+�ŜƃmRNAųƁƃ;ºÁç�_tU��d=Ƃ¯$ĝILKH �9�=Ŏ�NŘǎ+2��<ǻ+7>MS 2ah}��v9PP7ah}��vǺ=RNAíé=Ǹ*N16nt9+�*I<�MS2ah}��v-16nt-PP7ah}��v�=cgjN8áe�i}<-K)98�ŜƃmRNANųƁƃ<Ř¹-K)9$8%2�B2�<ǻ+7>ºÁç�_tU��d=NŌ�CŌ9MS2�PP79=ƠCÔM/�ƿÔ-Kļ×�"H?ƿÔ-KǾ=��X�xvfk=ƒȉNńǰÈ+2ƢŒ�ĝILK_[l�Ėď"H?_[l�/oSbŢ=ķß<ĪÂ+2ȐãȚȑ�+#+;$Iōť>Ÿ¡¶8mRNANùǷƃ<Ř¹-K<>B3_[l�Ėď�_[l�/oSbŢ<ǻ+7ķß=¢æ$�K2E�)LI=ǘȈN°ň+2úŁǺmRNAùǷÈť=ǹƂ<ŶåÎJƠO8�K��ě>�Ǐ=úŁǺmRNAŘ¹ťN3Ʒ=lo���e�9ƠCÔM/�ƲŗÆŲ©¡8=DžĸmRNAùǷ

Èť<Ģź-K�*I<X�_T}ŭďǍŬť9¤ź+7Ÿ¡¶<"'KÓƒ_[l��ǮÆĨNnjő-K)98�ĉÑǢȄÿƏĤĘĪ=_[l�¿Ğŝč=njő<ÎJƠD�ù8�K� �șȓ�;ƂǂǛĹƘ�ȐƉƔ�ǂƬ�ƉƔºİƬÍ?ǪĵƉƔƬ<>�Ʀȑ� �ȁǕǛĹ�ȐǍȕ�ȑ �� Takai, A., Nakano, M., Saito, K., Haruno, R.,

Watanabe, T. M., Ohyanagi, T., Jin, T., Okada, Y. and Nagai, T. Expanded palette of Nano-lanterns for real-time multicolor luminescence imaging. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 112, 4352-4356 (2015)�ŔǗņ DOI:10.1073/pnas.1418468112

��ø�Ƃǂ�ȐǍț�ȑ �� Takai, A., Nakano, M., Nagai, T. and Okada,

Y. Development of three color variants of super-brilliant luminescent proteins for multicolor, real-time bioluminescent imaging. Ɨ 120 áĽōnjÀø�Ƥ��²äøǁȀ� / Ɨ 92áĽōŸŷø�ò� ÔÕò��ƌīäǾ�ǝì�ąƊìȐµĐƅ�ƌīĊȑ�2015Č 3Ņ 21�23Ľ

��ȍ� Þ��Ƕ ǿǃ�ŀǶ ŵĔ�ūDz Ҩ�òœ Ǯ��ƌ ǽ�ĆŻ đġ�ţ� «Ť�Ȍħď�{�fX��Ƃ¯S~�`�[=2E=ȌǤďƂ¯e�qZǟNano-lantern=ƷǙïƁ¡=ǹƂ�ŸÚÆĨ=ºö~Xmb}9ĸŷȡŸÚÆĨ_ah}ƍøàıŮ�CREST�PRESTO ÔÕ_�z`T}ȡ��ǴòøƸƼ�ȊƓŖy��Ȑ�ǴĎ��ǴĊȑ�2015 Č 3Ņ 16�17Ľ

��ȍ� Þ�����������������������ǹƂ90=Ģź�4DƝưǍŬ²¡�ǝ�ŷÈøƉƔĭÛ¯ōĭȐêŴƅÛ¯Ċȑ�2015 Č 1 Ņ 22Ľ

�� Takai A., Haruno, R., Nagai, T. and Okada,

Y. Development of three color variants of super-brilliant luciferase for multi-color, real time imaging of gene expression and dynamics of organelles and the cytoskeleton without external illumination. |m_�z`T}Ȑ�Ƶ³Çȑ�The 2014 American Society for Cell Biology/International Federation for Cell Biology Meeting�tR�i�tRQȐx�_�pmQć�Q~�Xȑ�2014Č 12Ņ 6�10Ľ

RNA���"���MS2/PP7����mRNA����

0,

200,

400,

600,

800,

1000,

1200,

Control,mRNA�

Target,mRNA�

Luminescent,intensity

,(a.u.)�

�!#�� ����,MDCK2,(lysate)�

0, 200, 400, 600, 800, 1000, 1200,

0,

200,

400,

600,

800,

1000,

1200,

�"�!# mRNA� �mRNA�

��� ����(a

.u.)�

�R @BKFJ>J356 � ,*(% ���

Page 5: KAKEN - ùðø ¡ ê^ í~#6iúÃ Y)ýß C%ãL; · È w ¤ ï ¬ Æ @ @ ¤ ¬ Ê ñ l @ ® @ b | P X A e | P X A y | P X i ¤ Ê j @ Ö Ô F ¤ í Ú F Û è Ô F ¤ Û è ¼ i a ¶

�� Takai, A., Haruno,R., Okada, Y. and Nagai, T. Multicolor imaging of cellular structure with wavelength variants of super-duper luminescent proteins. Ɨ 37 á¶ƻ]�tP��a�r�j�mc]s�g`ȐÉũǭ�ƽŻdzmc]žȑ�2014 Č 7 Ņ 15�18Ľ

��Ȍ� Þ�ŀǶ ŵĔ�ţ� «Ť�ĆŻ đġ�ǡȌǤďƂ¯e�qZǟ=ŦǸïƁ¡<HKŸ¡¶Śǩ�ŝƱ={�fX��S~�`�[�Ɨ 119 áĽōnjÀø�Ƥ�²äøǁȀ��ƴŤÊƍòøȐŕŊƅ��ǶĊȑ�2014Č 3Ņ 27�29Ľ

��Ȍ� Þ�ŀǶ ŵĔ�ţ� «Ť�ĆŻ đġ�ǡȌǤďƂ¯e�qZǟ=ŦǸïƁ¡<HKƝư¶Śǩ�ŝƱ={�fX��S~�`�[�Ɨ 65áĽōƝưŸŲø�ò��TS�Z��4ȐĦƇƅ�ÖÏĄĊȑ�2013Č 6Ņ 19�21Ľ

��0=�����ȖȔȕșČȗŅȖȘĽ�'ŠĽĻƭ�ŹƣĻƭ�ĽōơŪĻƭ�Ľ»ĈřĻƭƘ=Ɯȅ�ȖȔȕșČȗŅȖțĽ�'ƍøĻƭ=Ɯȅ�"H?ȖȔȕșČȗŅȖȘĽ NHKm��aȐǻdžȑƘ<7�ōƉƔĪŒNØDƉƔ¶ý$ƞ�*L2���

��ȖȔȕȘČȕȔŅ= Nature Methods ȕȔÙČǏģÒ=ǂƜ<�ōƉƔĪŒNØD¸Ɔ$Ĵǣ*L2��

���ȖȔȕșČȚŅ= Nature Methods ¶=�Tools in Brief�<"�7�ōƉƔĪŒNØDƉƔ¶ý$ƞ�*L2��

�ȚȓƉƔƠƩ����ƉƔ�ǂƬ�� Ȍ�� ÞȐ������ ���ȑ�ŷÈøƉƔĭ�ŸÚ_ah}ƉƔc�e��ų½ƉƔÜ�

� ƉƔƬƀÒȝȚȔȚȗțȖȔș���