kísérletes módszerek a gyakorlatban 4. a...
TRANSCRIPT
Kísérletes módszerek a gyakorlatban 4.
A gasztroinesztinális traktus
http://web.szote.u-szeged.hu/expsur/index_e.htmAnimal experiments in Medicine
A GI traktus fő feladata:a víz, electrolit és a tápanyag ellátás
folyamatos biztosítása a szervezet számára
I. GI propulzió, bélmotilitásII. Emésztés
Emésztőnedv szekrécióLebontott tápanyagok, víz, elektrolit abszorpciója
III. Neuronális és hormonális reguláció
IV. GI vérkeringés, a felszívott tápanyagok szállítása
A bélfal rétegei:a/ Mucosa b/ Muscularis mucosa c/ Submucosad/ Tunica muscularis
cirkuláris (belső) izomréteglongitudinális (külső) izomréteg
e- Tunica serosa
I. GASZTROINTESTINÁLIS PROPULZIÓ, MOTILITÁS
A bél motorikus funkciója a bélfal izomrétegei által valósul meg.
A GI simaizom rétegek syncytiumfunkciója
1. A tunica muscularis izomrostjai gap junction kapcsolaton keresztül egymással összekötetésben állnak, közvetlen ionáramés elektromos vezetés valósul meg a rétegek között.
2. A kiváltott akciós potenciál így minden irányban tovaterjed.
Két alapvető típus :
A/ Lassú hullám (Slow wave)
B/ Spikes
A GI simaizomzat intrinsic elektromosaktivitása
1. A GI kontrakciók ritmusát a simaizommembránban képződő potenciál változás, a lassúhullámok (slow waves) frekvenciája határozza meg.
2. Nem tekinthetők akciós potenciálnak.
3. A nyugalmi membrán potenciál lassú, hullámzóváltozása, amelyet a mesenchymális eredetűpacemaker sejtek (Cajal féle intersticiális sejtek, ICC) generálnak.
A GI lassú hullámok
Membrán depolarizáló factorok:1. Izom feszülés (stretching);2. Parasympatikus ideg stimuláció, acetylcholine
felszabadulással az idegvégződésekből;3. Stimuláció GI hormonok által.
Membrán hyperpolarizáló factorok:1. Norepinephrin / epinephrin2. Sympathetic ideg stimuláció, norepinephrine
felszabadulással az idegvégződésekből;
A GI SIMAIZOM MOTOROS AKTIVITÁSA1. Izomkontrakció csak az AP megjelenésekor történik
2. Az AP (sorozat) gyakoriságát a lassú hullámok frekvenciája szabja meg
3. A kontrakciók ereje az AP sorozat frekvenciájától függ
GI motilitás monitorozás I.Elektro-Miográfia (EMG)
A bélizomzat elektromos aktivitásának mérése extracellularis szenzorral
Extracellularsensor
Computer
V. jugularis
Infúzió
Ag/AgCl extracellularis szenzor
GI motilitás monitorozás II.A bélizomzat kontrakciók mérése nyúlásmérő
bélyeg (strain gauge) szenzorral
Strain gaugeszenzor
Computer
V. jugularis
Infúzió
FSG-02 Force/displacement transducer for implantable
GI motilitás monitorozás II.A bélizomzat kontrakciók mérése nyúlásmérő
bélyeg (strain gauge) szenzorral
sec
0 200 400 600 800 1000 1200 1400
V
-6
-4
-2
0
2
4
6
Original recording of colon motility in rat
A A bbéélmotilitlmotilitááss regisztrregisztráálláása sa éés s éértrtéékelkeléésese
0 2 0 0 4 0 0 6 0 0 8 0 0
-4
-2
0
2
4
6
8
1 0
0 2 0 0 4 0 0 6 0 0 8 0 0
-4
-2
0
2
4
6
8
1 0
Számított paraméterekKontrakciók frekvenciája →
Propulzió
Minimum pontok → Izomtónus
Kontrakciók amplitúdója →Intenzitás
Görbe integrál = Motilitási Index
TTööbb mint 10 billibb mint 10 billióó neuron neuron →→ „„BBééll--agyagy””
MotilitMotilitááss & & szekrszekréécicióó kkomplexomplex,, autonautonóóm neuronm neuronáálislisregulreguláácicióójaja;;
SSzzenenzzororosos, inter, inter--, , excitatorexcitatorikusikus ééss ggáátltlóó tipustipusúúneuronneuron elemekbelemekbőől l áállllóó hháállóózat;zat;
KKolinergolinerg transtranszzmissmisszziióó, amely , amely NonNon--CholinergCholinerg NonNon--AdrenergAdrenerg, , nitrergnitrerg éés s glutamglutamáátergterg neuronneuronáálislisfolyamatok befolyfolyamatok befolyáása alatt sa alatt ááll;ll;
III. A GI funkciIII. A GI funkcióó neuronneuronáálislis kontrollja:kontrollja:EnterEnteráálislis Idegrendszer (ENS)Idegrendszer (ENS)
Az enterális idegrendszera/ A bélfalban lokalizálódikb/ Két plexus alkotja
1. Myenterikus plexus, vagy Aurebach plexus, a tunica muscularis rétegében.
Stimulációja fokozza :a/ A bélfal tonusát, b/ A ritmikus kontrakciók intenzitását,c/ A kontrakiók frekvenciáját,d/ Az áramvezetés sebességét.
Gátolja: a pyloric sphincter működését.
III. A GI funkció neuronális kontrollja
2. Submucosal vagy Meissner plexus
A submucosában lokalizálódik.
Az inner bélfal funkcióját, a GI epitheliumból eredőszenzoros szignálokat kontrollálja;
Szabályozza:a/ az intesztinalis szekréciót,b/ abszorpciót,c/ Muscularis mucosa kontrakcióit
A GI TRACTUS FUNKCIONÁLIS MOZGÁS TÍPUSAI
A/ Propulsive B/ Keverő (Mixing)
Perisztalzis alapja a propulsive mozgás.
1) Intestinálisl distensio kontraktilis gyűrűt hoz létre, amely disztálisan halad. 2) a bél relaxál az anus irányában3) receptive relaxation, a myenteric reflex, vagy peristaltikus reflex révén.
Peristaltic reflex + az anus irányában haladó mozgás =Law of The Gut.
PERISZTALTIKA
Perisztaltikus propulzió.
A cirkuláris és a longitudinális izom rétegek váltakozó kontrakciója kaudálisan mozgatja
a béltartalmat.
Mixing Contractions in the small Intestine. Rhythmic segmentation contractions to mix
the intestinal content.
SEGMENTATION MOVEMENT OF THE SMALL INTESTINE
A propulzió mértékének meghatározása
Rágcsálókban:
Táplálék jelőlése Szudán vörös festékkel
Faces mintagyűjtés az idő függvényében
A festék extrakciója a mintákból
A festék koncentráció meghatározása
IV. GI vérkeringés
1. Splanchnicus cirkulációa. Magába foglalja az alábbi szervek vérkeringését
vékony és vastagbélléppancreasmáj
b. Splanchnicus vénás keringés a v. portae-nkeresztül jut a májba
c. A vér a máj szinusoid rendszerén és a v. hepatica-nkeresztül jut a centrális vénás keringésbe
1-Portal vein 2-Splenic vein 3-Gastroduodenal vein 4-Cranial mesenteric vein 5-Caudal mesenteric vein 5’-Ileocolic vein 5’’-Middle colic vein 6-Left gastric vein 7-Right gastroepiploic vein 8-Cranial pancreaticoduodenal vein
Az intesztinális keringés szegmentális vizsgálata
Közvetett mikrokeringés: mucosa pH / CO2 gap (Tonomitor katéter)
Véráramlásmérő
szenzor
Vélonybél biopsziaTonomitor katéter
Vénás/artériás kanül
Hemodinamika:- szegment artériás nyomás;- szegment vénás nyomás;- a. mesenterica superior véráramlás
Lokális keringési zavartrombózisstrangulációobstruktív ileussebészeti beavatkozás
Generalizáltkeringési zavar
kardiogén shockhypovolaemiás shockvasoreguláció zavara Szepszis
Mesenteriális ischaemia
Vékonybél nyálkahártyakárosodása
Bakteriális transzlokáció
A A MesenteriMesenteriáálislis HipoperfHipoperfúúzizióó
Nyálkahártya károsodás
Keringési elégtelenségKeringés ‘redistributio’
Szepszis
Gasztrointesztinális traktus Szöveti hipoxia
Regionális mikrokeringés monitorozása
A diagnosztika problémája:Hogyan mutassuk ki?
GASZTROTONOMETRIABoda & Murányi (Lancet 1959)
Gasztrointesztinális nyálkahártya perfúzióindirekt monitorozása
Gastro-tonometria
Indirekt Tonometria: az alapok
Sigmoid Tonomitor(ballonos)
2,5 ml
Fiziológiás só oldat
Equilibrálási idő: min. 30 perc„Statikus” mérőeszköz
A gasztrotonometria eszközeiBikarbonát puffer
0,2-0,3 ml
Equilibrálási idő: 5-6 percDinamikus mérés
Kapilláris TonomitorBoda és mtsai 2006
Levegő CO2mérés
kapnográffal
pCO2 HCO3⎯
[ ]
pHi= pKD + lg ————————————
0,03 x
Intramucosalis pH (pHi) meghatározás
Tonomitor minta: nyálkahártya pCO2 meghatározás;
Artériás vérminta:a vér pH és pCO2 alapján HCO3⎯ meghatározás;
Intramucosal pH
Time (min)-30 0 30 60 90 120 150 180 210 240
pHi
6,8
7,0
7,2
7,4
IR IPC Ketotifen+IPC
Ischemia **
*
*
**
# ##
*
*#
Ketotifen
Mesenteriális ischaemia-reperfúziókövetkezménye
CO2-gap
CO2-gap = pgCO2 – pACO2
pACO2= szisztémás artériás pCO2 tenzió
pgCOpgCO22= lok= lokáális (lis (tonomitortonomitor ááltal jelzett) szltal jelzett) szööveti pCOveti pCO22
Vérnyomásszenzor
Sublingualiskapilláristonometer
SzublingualisSzublingualis éés s intesztinintesztináálislis pCOpCO22--gap gap öösszehasonlsszehasonlííttáás s
CAPNOGRAPH
Intestinalis kapilláris tonometer
COCO22 gapgap vvááltozltozáás a s a szublingualisszublingualis mucosamucosa--banban
Time (min)-30 0 30 60 90 120 150 180 210 240
mmHg
0
10
20
30 Sham-operatedHaemorrhagic shock
Haemorrhagic shock Volume resuscitation
**
x
x
**
*
COCO22 gapgap vvááltozltozáás az s az intestinalisintestinalis mucosamucosa--banban
Time (min)-30 0 30 60 90 120 150 180 210 240
mmHg
0
10
20
30
40
50
Sham-operatedHaemorrhagic shock
Haemorrhagic shock Volume resuscitation
xx *
Intestinalis és sublingualis mucosa CO2-gapösszehasonlítás vérzéses shockban
Idő (perc)-30 0 30 60 90 120 150 180 210 240
%
50
100
150
200
250
300
350
vékonybél mucosa co2 gap Nyelv alatti mucosa co2 gap
Hemorrhagic shock Colloid resuscitation
Time (min)
Intestinal mucosal CO2-gapSublingual mucosal CO2-gap
Az intesztinális permeábilitás vizsgálómódszerei
• Gravimetriás analízis• Kapilláris permeabilitás• Epitheliális permeabilitás
Gravimetriaszövet mintavétel;Nedves-súly méréseSzárítás súlyállandóságig, majd száraz-súly mérés
Nedves / Száraz súly = ödéma becslése
*
* P<0.05
*
Intact region ofthe esophagus
Treated region ofthe esophagus
*
0
0
0
0
0
1
1
1
HCl+bile
*Saline
Bile*x x
Vascular permeability index
Fig. 2
HCl
Vasculáris/kapilláris permeabilitás
Intravénás befecskendezésPermeábilitás fokozódás esetén, a festék-fehérje komplex a szövetekbe jut;A komplex kimosása az erekből;A festék extrahálása a szövetből, formamid-dal;Evans kék spektrofotometriás meghatározása a vérből és a szövetből;
Meghatározása:Evans kék (EB) festékkel, amely a plazma fehérjékhez
kötődik
Permeabilitási index = EB szövetEB plazma
Time (min)180 190 200 210 220 230 240
Plasma-Na fluorescein/lumen-Na fluorescein kg-1 x 104
0
2
4
6
8
10
HCl+bile
Saline
Bile
x
**
**
*
**
x xxx
xx
x
x
x* *
**x
x
Fig. 3
* ** *
x x
xxHCl
Epitheliális permeabilitás
• 5 mg/ml NaFL beadása a vizsgálandóGI lumenbe;• Vénás vérminta vétel 10 percenként (a minta tárolása sötétben);• A NaFL koncentráció meghatározása spektroflurométerrel (ex: 455 nm, em: 515 nm);
“lumen - plazma” irányú permeábilitás változás mérése Na-fluoreszcein (NaFL) clearence
módszerrel
“lumen - plazma” NaFl clearence =plazma NaFL / lumen NaFL
Thermodilúcióskatéter
artéria & véna femoralis katéter
Obstrukció
ColonV. portae katéter
Strain gauge
Hemodinamikai mérések:Artériás nyomás: Statham transducer;Percrérfogat: Thermodilúciós módszer;
Cardiostar CO-100
Bélmotilitás: Strain gauge technika; Hemosys adatgyűjtőszámítógép
Biokémiai mérésekXOR aktivitás: spektrofluorometriás mérés
(Beckmann 1989)Myeloperoxidáz aktivitás: Kübler 1996;
Plazma nitrit/nitrát: Griess reakció
BBéélobstrukcilobstrukcióó -- acutacut modell modell
Colon Colon MotilityMotility Index Index
Time (min)0 60 120 180 240 300 360 420
Motility index
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
ObstructionCompound
FR
*
*
x
##
#
Obstruction+Compound FR
Sham-operated+Compound FRSham-operated
Obstruction
**
*
x
x
• TNBS= 2-, 4-, 6-trinitro-benzol-szulfonsav
• Egyszeri intracolonalis alkalmazás után– 8 hétnél tovább fennálló vastagbél
fekélyek– Kiterjedt, transmuralis, granulomatosus
vastagbélgyulladás– A humán IBD számos tünetét jól modellezi(Morris 1988, Wallace 1994)
Krónikus bélgyulladás modelljea TNBS-modell
Álműtött Colitis
Colon Motility Index
Time(hr)16 17 18 19 20 21 22 23
Motility index
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
ControlColitis
Treatment
Tone of Colon
Time (hr)16 17 18 19 20 21 22 23
Tone (V)
-3
-2
-1
0
1
2
ControlColitis
Treatment
Köszönöm a figyelmet!