laboratory of cellular therapy g. lanzani scientific ... factories and... · laboratory of cellular...
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LABORATORY OF CELLULAR THERAPY “G. LANZANI”Scientific Director: Dr. M Introna
USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti BergamoDirector: Prof. A Rambaldi
DL 24/4/2006 n° 219 “Codice comunitario”(attua le 2001/83/CE, 2003/94/CE, 2003/63/CE)
Regola tutto il ciclo di vita dei prodotti farmaceuticidalla produzione alla commercializzazione.
Allegato I. Parte IV: medicinali per terapie avanzate (celluleper terapia somatica e/o terapia genica).
Contiene il discusso articolo 28 sulle eccezioni ospedaliereVedi legge 07/07/2009 n° 88, G.U. 161 del 14/07/2009
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AIFA
Area produzione e controllo
Ufficio autorizzazioni officine
Il Laboratorio di Terapia Cellulare “G.Lanzani” è autorizzato a produrre prodotti per terapia cellulare sottoforma di
preparazioni liquide di piccolo volume per uso parenterale preparate in asepsi.
Roma, 27.07.2007
N° aM-144/2007
Autorizzazione preliminare della Cell Factory da AIFA
2° Autorizzazione della Cell Factory n° aM 155/2010
LUGLIO 07
FEBBRAIO 08
NOVEMBRE 08
Ispezione di follow up delle azioni correttive APRILE 07
NOVEMBRE 09 Ispezione di follow up
1° ispezione generale AIFA DECEMBRE 2005
Time
GENNAIO 2004 Laboratorio Lanzani ready to go
2° ispezione generale AIFA
Idoneità del dott. Introna come Direttore Tecnico LUGLIO 2005
1° Autorizzazione della Cell Factory n° aM 189/2008
OTTOBRE 10
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Divisione di EmatologiaOspedali Riuniti di Bergamo
Data inizio lavori: luglio 2002Data prevista fine lavori: 31 luglio 2003Inaugurazione del Centro: settembre 2003
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Costi di realizzazione del CentroLavori di ristrutturazione immobili 1.211.000 €
Allestimento Clean rooms 231.000 €
Attrezzature scientifiche e sala criobiologia
684.000 €
Arredi per laboratori e uffici 114.000 €
Professionisti 138.000 €
Hardware e software per controllo qualità
120.000 €
TOTALE 2.498.000 €
Finanziamento del CentroOfferta Uova di Pasqua 780.000 €
Offerta Stelle di Natale 540.000 €
Offerta Mele della Solidarietà 90.000 €
Altre manifestazioni 360.000 €
Offerte varie 340.000 €
Contributo CREDITO BERGAMASCO
388.000 €
TOTALE 2.498.000 €
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TC4 TC3
Sterile storeroom
Cell Therapy 1
Cor
ridor
4
Corridor 3
Lab Quality Control
Changing room E
Changing room D
Filter E
Filter D
Cha
ngin
g ro
omIN
Cha
ngin
g ro
omO
UT
Corridor 2
Corridor 1 Cell Therapy 2
Lab standard
Lab CQII
Stoccaggio prodotti
Area di produzione dei prodotti per terapia cellulare in GMP Stoccaggio
materie prime
Area di congelamento e
stoccaggio prodotti cellulari
Laboratori per i Controlli di Qualità sui prodotti di Terapia Cellulare
Stoccaggio materiali
Locali adeguati
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Code Origin of material
hMSC Frozen (x 106)
Frozen bags (mean:80x106cells/bag)
Number of frozen vials at p1
(~2x106cells/vial)
BG-MSC2 washout 95.0 1 3
BG-MSC7 washout 375.2 4 10
BG-MSC11 washout 147.0 2 25
BG-MSC12 washout 200.0 3 13
Code n° vials used Frozen bags(mean 1x107cells/bags)
BG-MSC2 1 3
BG-MSC7 5 10
BG-MSC11 20 32
BG-MSC12 1 1
hMSC EXPANSIONS
…from “fresh material”
…from “frozen vials bank”
Capelli C. et al, BMT, 2007; Capelli C et al., Cytotherapy, 2009Capelli C. et al, Cytotherapy, 2011
24/11/2008 Submission of Phase I MSC/aGVHD IMPD to ISS
24/04/2009 Authorization by ISS
16/07/2009 Authorization by E.C. Monza
NOVEMBER 08
APRIL 09
JULY 09
Time scale of approval of Phase I clinical study with MSC in aGVHD
NOVEMBER 09 Authorisation by E.C. Bergamo
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MSC for the treatment of severe aGVHD
• Dossier n° Eudra CT: 2008/007869/23
• Usage of MSC for steroid resistant grade III-IV aGVHD
• Scientific project shared with Prof. A. Biondi and dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca.
• Clinical PI: Dott. E. Biagi
Authorization by ISS on 24/04/2009Authorization by E.C. Monza on 16/07/2009
Pts GVHD Grading at MSC Infusion
No. of MSC
Infusion
Infused MSC (Dose/kg)
Response After MSC Infusion Follow-up
1A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade III)
1 1 x 106/kg Partial response temporary Skin and mucosae grade I
Alive with chronic skin and mucosae GVHD grade II
2A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade II)
1 1 x 106/kg Complete response definitive No GVHD
Alive with skin chronic GVHD grade I
2B Chronic mucosae and liver grade III
1 1.4 x 106/kg Partial response temporary Chronic mucosae and liver grade II
3A Acute skin grade I 1 1 x 106/kg Complete response definitive No GVHD
Alive, no GVHD
4A Acute skin grade I 1 0.7 x 106/kg No response Skin GVHD grade I
Alive, no GVHD
4B Chronic skin and liver grade III 4 2.8 x 106/kg
Partial response temporary Skin and liver grade II
5A Acute skin grade II 1 1.2 x 106/kg Complete response definitive No GVHD
Alive, no GVHD
5B Chronic skin GVHD grade I 1 1.2 x 106/kg No response Skin GVHD grade I
6A Chronic overlap (skin and mucosae grade III)
1 1.2 x 106/kg Complete response definitive
Alive, no GVHD
7A Acute skin grade I 2 2.4 x 106/kg Complete response definitive No GVHD
Alive, no GVHD
8A Acute (skin II and gut grade IV) 2 3.2 x 106/kg Partial response temporary Skin and gut grade II
Death for progressive gut GVHD And pulmonary aspergillosis
9A Acute (skin and gut grade IV) 2 2 x 106/kg No response Skin and gut grade IV
Death for sepsis
10A Acute gut grade IV 2 2.4 x 106/kg Partial response temporary Grade III
Alive, no GVHD
11A Acute gut grade IV 1 3.7 x 106/kg No response Deah for gut GVHD and pneumonia
Lucchini G. et al, BBMC, 2010 Dander E. et al, Leukemia, 2012, Lucchini G. et al, Stem Cell Int, 2012
MSC infusions in pediatric patients
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P = 0.0021 Log RankOS at 1 year 0,54 with pentostatin and 0,00 without pentostatin
OS adult patients treated by MSC produced at Bergamo Cell Factory
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
0 200 400 600analysis time
pentostatina = 0 pentostatina = 1
Kaplan-Meier survival estimates, by pentostatina
N = 13
N = 12
Tumor cell
Target cell
Non MHC-restricted
killing
Restricted killing +TCR
MHC I
+?
CIK cell
Biological Background of Citokine Induced Killer (CIK) cells
Introna et al, BMT, 2006; Marin et al, Exp. Hematol, 2006; Franceschetti et al, Exp Hematol, 2009; Introna et al, BBMT, 2010; Pievani et al, Blood, 2011; Pievani et al, Blood, 2011.
CIK cells show non-specific anti-tumoral activity and home to tumors without significant GVHD in several animal models.
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• Dossier n° 64499-PRE.21-848
• Titolo: Impiego linfociti CIK: Fase I
• Approvazione in data 30/05/2005
• Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca.
Cellule CIK da donatore per le ricadute leucemiche
Results
Clinical responseNone 6Stable Disease 1Hematologic Improvement 1Complete response 3
Alive/dead 4/7
Days of Median Follow upfrom transplant 782 (188-1327)
Introna et al, 2007
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AIFA
•Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca, con il Prof. S. Cortelazzo, Ospedale Bolzano.
•PI clinico: Prof. A Rambaldi
Infusione sequenziale di linfociti non manipolati del donatore (DLI) e linfociti killer indotti da citochine (CIK) dopo il trapianto allogenico di cellule staminali
Protocollo CIK 2
Numero EudraCT: 2008-003185-26
Fase II autorizzata da AIFA il 14.04.09, Prot.n° AIFAII/37533/P
Autorizzazione da CE Bergamo: 30/07/2009
Toxicity
Number of patients Gradea GVHD 1 III (skin+gut)c GVHD 1 III
Hemolitic anemia 1 (maybe not correlated)
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Summary of results I
Clinical response (100 days from the last CIK administration)
Number %Total evaluable patients 21 100CR 10 48PR 4 19NR 3 14Early death 4 19
2 have not reached yet 100 days to clinical response evaluation (TE)
Dose excalation Phase
MTD not reached even at the highest dose used: 5+5+10x106/kg
So far 12/23 patients have been treated at the highest dose level
14 (67%)
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
Cum
ulat
ive
surv
ival
0 200 400 600 800 1000days
.
CIK-2: Overall survival, n=23 (0.55)
Overall Survival
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1° stadio di vestizione (spogliatoio D)
2° stadio di vestizione (ingresso nell’area
controllata, classe C)
3° stadio di vestizione (Laboratorio di
produzione, classe B)
Tuta sterile integrale a basso rilascio di
particelle
Tuta pulita, guanti, maschera e copricapo
Camice e sovrascarpe
Vestizione degli operatori di produzione
Piastre contatto Piastre sediment.LottoPTC
Dataprelievo Operat. Punto Testato Batt Funghi
Tot. CFU/piastra Medie Batt. funghi
Tot. CFU/piastra Medie
PTC1 11.09.07 CC Sotto cappa (A) 0 0 0 0 0 0 0 0
Sotto cappa (A) 0 0 0 0 0 0
Banco monitor (B) 1 0 1 1 0 0 0 0
Guanto dx (A) 0 0 0 0
Guanto sx(A) 0 0 0
PTC1 13.09.07 CC Sotto cappa (A) 0 0 0 0 0 0 0 0
Sotto cappa (A) 0 0 0 0 0 0
Banco monitor (B) 0 0 0 0 0 0 0 0
Guanto dx (A) 0 0 0 0
Gunato sx (A) 0 0 0
PTC1 18.09.07 CC Sotto cappa (A) 0 0 0 0 0 0 0 0
Sotto cappa (A) 0 0 0 0 0 0
Banco monitor (B) 0 0 0 0 0 0 0 0
Guanto dx (A) 0 0 0 0
Gunato sx (A) 0 0 0
Example of monitoring during work shifts
Limiti di CFU totali/ piastra da sedim.,contatto e per i guanti: Classe A: <1Classe B: 5
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Ambiente testato
N° totale di shifts di lavoro
analizzati
N° totale di piastre usate
N° tests risultati fuori specifica piastre FS
TC1 218 2165 6 0,28%
TC2 91 910 4 0,44%
Controlli microbiologici eseguiti durante i shift di lavoro nel 2009
• Microbiologiocal monitoring of environment and operator at each workshift (10 plates)
• Monthly microbiological monitoring of the whole production area (16 plates)
•Regular microbiological monitoring of cleaning procedures (eg floor pre- and post-cleaning) and of cleaning personel
• At least yearly reconvalidation of all rooms in controlled area
> 3500 microbiological plates used/ year
Microbiological monitoring
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Dal 2007: 165 CIK batches and 97 MSC batches : tutti sono risultati sterili vitali e con livelli di endotossina adeguati
Bergamo, 26/6/2012
• Numero e vitalità delle cellule• Caratteristiche biologiche delle cellule (marcatori di superficie,
attività biologica in vitro)• Sterilità per batteri e muffe (USC Microbiologia) • Assenza di micoplasma (ditta esterna)• Limite di endotossina
Controlli sul prodotto finale
Laboratorio di Terapia Cellulare “G. Lanzani”Responsabile: M. Introna
1. Processazione di cellule staminali
emopoieticheResponsabile: M.
Introna
Referente Qualità del Laboratorio (RQL):
J. Golay
OperatoriE. Gotti
C.CapelliO.Pedrini
2. Produzione di prodotti di Terapia Cellulare in GMPQualified person: M. Introna
Assicurazione di QualitàResponsabile: J. Golay
Operatori:C. CapelliO.PedriniA.D’amico
E.Gotti
3. Ricerca e SviluppoGroup leaders
M. IntronaJ. Golay
Personale AmministrativoE. Traini
Programma di Trapianto delle Cellule Staminali EmopoieticheDirettore: Alessandro Rambaldi
USC Ematologia
OrganigrammaCentro di Raccolta
SIMTResponsabile: Dott.essa A.
Falanga
Unità Clinica
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TC4 TC3
Sterile storeroom
Cell Therapy 1
Corridor 3
Lab Quality Control
Changing room E
Changing room D
Filter E
Filter D
Cha
ngin
g ro
omIN
Cha
ngin
g ro
omO
UT
Corridor 2
Corridor 1 Cell Therapy 2
Lab standard
Lab CQII
Stoccaggio sacche
Area di manipolazione delle cellule staminaliStoccaggio materie prime
Area di congelamento e
stoccaggio prodotti cellulari
Laboratori per i Controlli di Qualità
Stoccaggio materiali
Locali
Tutto il personale• Competenza (requisiti iniziali)
• Addestramento specifico• Formazione continua
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Formazione personale dal 2005
• Gestione degli impianti e della qualità: 4 persone • Manipolazione: 5 persone
• Corsi interni di qualità eseguiti dal 2005: 14
La formazione viene eseguita secondo piani annuali e documentata da check list / questionari ecc.
MONITORAGGIO CONTINUO DEGLI AMBIENTI E DELLE APPARECCHIATURE
Incubatori, frigoriferi, congelatori, cappe a flusso
Monitoraggio, registrazione, archiviazione,rappresentazione di:TemperaturaCO2Efficienza di flusso
Anti-incendio
UNITA’ TRATTAMENTO ARIA
Monitoraggio, registrazione, archiviazione,rappresentazione di:TemperaturaPressioneUmidita’Parametri meccanici UTA
SISTEMA METASYS ®JOHNSON CONTROLS
SERVER
Remotizzazione allarmi
Centralina presidiata 24h/24
Report dati
controllo accessi
Impianti e strumentazione
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Strumentazione di laboratorio:Istallazione,
Manutenzione ordinaria e
straordinaria, manuali, contratti
ecc
Qualità dell’aria
Documenti dell’impianto meccanico
Documentazione della struttura e degli impianti
1. Particellare• Eseguiti da una ditta esterna certificata • Convalida ambientale iniziale:Verifica estesa del numero di particelle in tutti i locali della zona protetta (spogliatoi, corridoi, magazzino, locali filtro, locali di manipolazione), analisi dei punti più critici
• Riconvalida semestrale dei locali
Controllo della qualità dell’aria nel locali di produzione
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Qualità dell’aria nei laboratori di produzione:Analisi delle particelle/m3
Limiti di accettabilità per le particelle(EU GMP Annex 1, rev. 2008)
Grado A: Sotto cappa dove il prodotto viene in contatto con l’ambiente (apertura fiasche) Grado C: Il laboratorio di processazione
Monitoraggio Microbiologico
•Convalida iniziale dei locali di processazione•Riconvalide mensili/ annuali•Convalida delle procedura di pulizia
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Procedure per il Programma Trapianto
1 Manuale della Qualità
1 Procedura specifica per la manipolazione delle cellule staminali
17 SOPs per la gestione della
struttura e della strumentazione
22 SOPs per la gestione dei processi
(manipolazione, congelamento e
controlli di qualità sul prodotto)
10 SOPs per la gestione della
Qualità (gestione procedure,
formazione, non conformità ecc)
+ SOP aziendali
SOPs Convalide Controlli ambientali Formazione del
personale
Autoispezioni
Eventi Avversi PulizieReclamiFogli di lavoro
Tutti gli aspetti del sistema di qualità sono documentati
Non conformità
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Attività
N° di processazioni 2007 2008 2009 2010 2011
CSE da pazienti autologhi 104 118 123 135 123
CSE allogeniche da donatore familiare 14 14 18 21 22
CSE allogeniche da donatore non familiare da sangue
periferico (MUD)18 25 16 30 17
Espianti midollo osseo 2 5 2 1 5
CSE allogeniche da cordone ombelic. 1 3 8 7 6
Linfocitoaferesi da donatore sano 7 48 47 12 7
Totali 146 213 214 206 180
Anno N°aferesi
N°positivi
% contaminazione
2007 74 1 1.4 %
2008 183 9 4.9 %
2009 169 3 1.8 %
2010 156 2 1.3 %
2011 190 2 1.1%
Totale 772 17 2.2 %
Test di sterilità eseguito su tutti i prodotti al termine della manipolazione
Bactalert eseguito dalla USC Microbiologia e Virologia
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3. Utilizzo di etichette secondo ISBT 128
Laboratorio di Terapia Cellulare“G.Lanzani”
USC Ematologia, Ospedali Riuniti di Bergamo
Associazione Italiana Contro le Leucemie
Linfomi e Mielomi – ONLUSsezione PAOLO BELLI
Alessandro Rambaldi Direttore USC EmatologiaMartino Introna Qualified Person DT e RRPJosée Golay Quality Control e RRCQGianmaria Borleri Operator Production Chiara Capelli Operator Production Alice Pievani Operator ProductionElisa Gotti Operator ProductionLuca Bologna Operator Quality ControlAriel Amaru PhD, Ricerca e sviluppoElisabetta Traini Operatore di supporto gestionale
Microbiologia OORRBG Ufficio Tecnico OORRBGUfficio Qualità OORRBG
Uffici Amministrativi OORRBGUfficio Ambientale OORRBG/Impresa pulizie
Ricerca donatori: E. OldaniGestione software: F. Delaini
Gestione GCP: ML Ferrari
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The Cell Therapy “G. Lanzani”J. Golay RAQG. BorleriC. CapelliA. PievaniE. GottiL. BolognaA. AmaruE. TrainiM. Introna QP and Scientific Director
Hematology-BMT unitA. GrassiA. AlgarottiC. MicòE. TodiscoPI: Prof A. Rambaldi
The nurses
The clinical trial unitE. OldaniF. DelainiM. L. FerrariM. MagriA. Carobbio
Hematology BolzanoProf S. CortelazzoI. CavattoniS. Deola
Hematology MonzaProf A. BiondiE. BiagiA. BalduzziG. Gaipa