8/9/2019 Medio Ogawa

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  MEDIO OGAWA-KUDOH - cat.01014  Medios y Reactivos  INTRODUCCIÓN: Medio selectivo para aislamiento y cultivo demicroorganismos del género Mycobacterium Elmedio de Ogawa Kudoh preparado porBIOBACTER LTDA en tubo es una preparaciónbasada en la recomendación de Kudoh, siguiendorigurosamente la estandarización que para estemedio ha hecho el instituto Nacional de Salud deColombia. El medio se presenta en tubo tapa rosca de 16x

150 mm en una superficie inclinada que se inicia a1 cm del fondo y termina a 2 cm de la boca del tubo.Este medio permite el cultivo de microorganismosdel género Mycobacterium y es uno de los mediosrecomendados pa ra a is lamien to deMycobacterium tuberculosis. 

COMPONENTES: 1. Caja por 20 tubos2. Inserto

MATERIALES REQUERIDOS NO

SUMINISTRADOS:

1. Hisopos estériles desechables.2. Solución estéril de Hidróxido de Na

al 4%.3. Guantes estériles.4. Tapabocas.5. Solución de Hipoclorito de Sodio al 2.5% paradescarte de material.6. Tubos de ensayo estériles.

METODOLOGÍA

PRINCIPIO DEL MÉTODO

El diagnóstico de las infecciones causadas poralgunas especies de microorganismos del géneroMycobacterium presupone el aislamiento eidentificación de dichas especies, dentro de lascuales la más importante es la causante de latuberculosis humana. El medio de Ogawa - Kudoh es uno de los mediosrecomendados como útiles a nivel clínico paraaislamiento de Mycobacterium tuberculosis y enColombia es el medio mas utilizado para estepropósito. 

El medio básicamente está constituido por unconjunto de sales tales como Citrato deMagnesio, Sulfato de Magnesio, Glutamato deSodio, Fosfato disódico, Fosfato monopotásícoanhidro, además incorpora glicerol, verde demalaquita y homogenizado de huevo; estámezcla debe tener un pH de 6.4, el medio sedispensa en tubos de 16 x 150 mm y se coagulainclinado a 78°+/-2°C. por 45-60 minutos.  

CRITERIOS DE DESEMPEÑO YLIMITACIONES DEL METODO 

El medio de Ogawa - Kudoh ha sido diseñadopara el cultivo selectivo de microorganismos delgénero Mycobacterium cuyo aislamiento estáligado a un proceso patológico como agenteetiológico, por tanto la identificación debe serhecha con todo rigor. El medio no es selectivo para Mycobacteríumtuberculosis y por tanto otras micobacteriasincluyendo algunas no patógenas pueden crecer. 

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS: 

El medio de Ogawa - Kudoh en tubo viene listopara ser utilizado. 

CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y

ESTABILIDAD DEL REACTIVO 

El medio de Ogawa - Kudoh debe conservarseherméticamente cerrado entre 4-8°C. El medioasí conservado es estable hasta la fechaseñalada en la etiqueta (cuatro meses contadosa partir de la fecha final de los reportes de control

de calidad). 

PROCEDIMIENTO: 

El medio básicamente es utilizado a nivel clínicopara investigar Mycobacterium tuberculosis encaso de sospecha de tuberculosis pulmonar, portanto, el procedimiento abajo descrito se aplicaexclusivamente a muestras de esputo. En casode otras muestras: pus, orina, LCR, heces, sedebe consultar el "Manual de ProcedimientosBacteriología del Mycobacterium tuberculosis yde micobacterias no tuberculosas" del Instituto

Nacional de Salud Bogotá D.C Mayo del 2001.

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1. Muestra de esputo adecuadamente obtenida en el recipiente adecuado. 2. Si no trabaja en cámara estéril tipo II cubra el

área de trabajo con papel impregnado de unasolución de hipoclorito de sodio al 2.5%. 

3. Identifique correctamente los tubos de medioque va a utilizar y coloque la fecha de siembra. 

4. Trabajando a la llama de un mechero y usandoen todo momento guantes estériles ytapaboca, impregne un escobillón estéril conuna capa delgada de la partícula útil de lamuestra.

5. Introduzca el escobillón en un tubo quecontenga 3 cc de NaOH al 4% deje en reposodurante 2 minutos para asegurar ladescontaminación de la muestra.

6. Saque sin escurrir el escobillón y siembre sobrela superficie del medio mediante unmovimiento de rotación y presión, use unescobillón para cada tubo, 2 tubos por muestra.

7. Incube los tubos en posición horizontal a 37°Cy con las tapas sin ajustar.

8. Revise los cultivos a la primera semana paradeterminar si hay ó no contaminación; cierretotalmente las tapas.

9. Continúe la incubación revisando a las 4 y 8semanas.

10. En caso de crecimiento realice coloración deZN y realice las pruebas pertinentes deidentificación. 

11. Si al término de la semana 8 no haycrecimiento informe como negativo el cultivo.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

ANALÍTICOS

Al término del periodo de incubación la ausenciade crecimiento bacteriano indica que la muestraprocesada no contiene micobacterias. Por elcontrario la presencia de colonias circularesamarillentas debe estudiarse con coloración ZN ypruebas complementarias para confirmar elgénero y la especie, dato de gran importancia parael clínico.

CONTROL DE CALIDAD

El medio de Ogawa - Kudoh esta sujeto a unriguroso de control de calidad a lo largo delproceso de producción y al producto final paragarantizar esterilidad, consistencia, pH, tersura, 

color, e inclinación guardando la relación 1-2,igualmente su comportamiento parcialmenteinhibitorio para contaminantes usuales del tipo demuestra procesada. Cada lote se controla además por parte delInstituto Nacional de Salud para determinar elporcentaje de recuperación de cepa H37RV deMycobacterium tuberculosis, con lo cual sedetermina la sensibilidad, una copia del informecompleto se entrega al usuario con laautorización del Instituto Nacional de Salud. 

VALOR DE REFERENCIA: 

La presencia ó ausencia de crecimiento deMycobacterium tuberculosis debe valorarsecorrelacionando estos hallazgos con el procesoclínico. 

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS: 

Este medio de cultivo debe usarse dentro de lasfechas claramente señaladas en el rótulo. Elprocesamiento debe hacerse siguiendorigurosamente las normas descritas, el materialde desecho, debe descartarse en recipientes quecontengan una solución de Hipoclorito de Sodioal 2.5%. Todos los cultivos positivos deberán seresterilizados por calor húmedo antes de serdescartados. 

BIBLIOGRAFÍA 

1. Bacteriología del Mycobacterium tuberculosisy de Micobacterias no tuberculosas. Manualde procedimientos. Instituto Nacional de SaludBogotá D.C, Mayo del 2001.

2. Kudoh S, Kudoh T. A Simple techniquefor culturing tubercle bacili. Bull WHO 1974;51:71-82.

3. Orozco LC.  El cultivo de esputo para eldiagnóstico de tuberculosis pulmonar.Biomédica 1985;5:24

4. Orozco LC. Una modificación al método deKudoh para el cultivo de M. tuberculosis.Biomédica 1985; 5:86-89.

REVISIÓN SEGÚN NORMAS DEL INVIMAABRIL 2007