8/15/2019 Método Para Detecção de Salmonella

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Método para Detecção de Salmonella

A técnica tradicional de detecção de Salmonella em alimentos é ummétodo de presença/ausência, desenvolvido com a finalidade de garantir adetecção em situações extremamente desfavoráveis (células injuriadas,populações redu idas ou esteja competindo com outros microrganismos emmaior n!mero no alimento"

A metodologia sugerida pela #acterial Anal$tical %anual on line da &ood and'rug Administration #A%/&'A ()**+ , consta das seguintes etapas-

. Pré enriquecimento (não seletivo) utili ará caldo lactosado pararecuperar células injuriadas incu0adas a 1234 por )5 6s"

) Enriquecimento seletivo visa elevar o n!mero de Salmonellas eini0ir o crescimento da micro0iota acompan6ante num per7odo umper7odo de .8 )5 6s" 9ecomenda se o uso de dois meios diferentespor:ue a resistência de Salmonella aos agentes seletivos pode variar decepa para cepa" ;s meios recomendados são- 9< (9appaport

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Procedimento!

. Pré-enriquecimento transferir uma porção de )2g ou )2 mB daamostra para um frasco ou 0olsa de 6omogenei ação estéril, adicionar ))2 mB de caldo pré enri:uecimento (caldo lactosado e 6omegenei ar a amostra" &ec6ar 0em o frasco e deixar descansar por +* minutos atemperatura am0iente" Agitar 0em, retirar uma al7:uota de volumecon6ecido e verificar o p?" Ajustar para +,8C *,) com Da;? ou ?4l .D,verificando o volume de ácido ou 0ase para adicionar proporcionalmentea amostra" Encu0ar a 1234 por )5 6s"

) Enriquecimento seletivo agitar cuidadosamente o frasco com caldode pré enri:uecimento e transferir *,. mB para .* mB de caldo9appaport nias com centro preto grande e0ril6ante, ou mesmo inteiramente pretas" 4epas de salmonella ? ) S

negativas produ em col>nias cor de rosa com centro rosa mais escuro, masnão preto" 4epas de salmonella lactose positivas produ em col>niasamarelas com ou sem o centro preto"

&$ar col>nias castan6as, cin a ou pretas com ou sem 0ril6o metálico"; meio em redor da col>nia muda gradativamente para uma coloraçãocastan6a a preta, com o prolongamento do tempo de incu0ação" Algumascepas de salmonella podem apresentar col>nias at7picas, verdes, compouco ou nen6um escurecimento do meio em redor" Freparar as placas umdia antes, pois no dia poderá ser toxica as salmonellas " @stocar as placas atemperatura am0iente antes da inoculação"

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Metodologia para isolamento de leveduras

Meio de cultura (g/L):

Extrato de levedura 3,0

Extrato de malte 3,0

Citrato de sódio 5,16

e!to"a 5,0

#licose 10,0$%m!icili"a (1 &g/mL)

$'cido "alidixico (5&g/mL)

! *,0

re!aro:

esar os meios de cultura !ara !re!arar o meio de e"ri+uecime"to em erlem er (-0 mL). Corrigir o ! !ara *,0. %!ós autoclavagem colocar os a"ti ióticos +ua"do atem!eratura estiver em tor"o de *0 C. esar 10 gramas da amostra ( ruta) e macerar vagarosame"te. %cresce"tar ao meio de e"ri+uecime"to e i"cu ar a 2 C !or 2* 4s.

ara !re!aro do meio sólido, acresce"tar %gar acteriológico a 2 , autoclavar o meio,acresce"tar o a"ti iótico e a er o !la+ueame"to. 7"serir 100 &L do meio dee"ri+uecime"to "o ce"tro da !laca e e es!al4ar com al8a 9rigals e i"cu ar "ovame"tea 2 C !or 2*.

Com!e"dium o Met4ods or t4e Micro iological Exami"atio" o oods (% %,*; Edi8. et al. Ma"ual de M?todos de %"@lise Micro iológica de%lime"tos. 3; Ed. 200A, =

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Metodologia !ara olores Dotais

Material:

9ilue"te: @gua !e!to"ada ou @gua destilada est?ril

%mostra: 1:10 (25 g em 225 mL do dilue"te)

lacas co"te"do meio 9% (%gar atata 9extrose)

i!etadores autom@ticos (cali rado !ara 100 L e !ara 1 mL)

%l8a de es!al4ame"to 9rigals i.Du os de e"saio co"te"do -mL do dilue"te

Bortex

esar 25 g da amostra e !assar !ara o erlem er com 225 mL do dilue"te. =eguiras dilui8Fes "os tu os de e"saio at? 10G3 lem ra"doGse +ue os 25 em 225, H@ ormam adilui8