岡 山 医 誌(1991) 103, 889～898

剖検死体のアル コール脱水素酵素及び

アルデヒ ド脱水素酵素について

岡 山 大 学 医 学 部 法 医 学 教 室(指 導:何 川 凉 名 誉 教 授,石 津 日 出雄 教 授)

徐 揚

(平 成3年3月28日 受 稿)

Key words: Alcohol dehydrogenase, Aldehyde dehydrogenase, Isozymes,

Polymorphism, Isoelectric focusing

緒 言

アル コール は我 々の 日常 生活 と密接 に関係 し

て お り,現在 日本 にお け る飲 酒 人 口は約6,400万

人 に ものぼ る と言 われ て い る1).また, 1日 に5.5

合 以上毎 日飲 酒 して い る所 謂 アル コ-ル 依 存者

は, 220万 人 に達 す る とも言 われ て いる1).そ れ

ゆえ種 々の変 死体 を取 り扱 う法 医学実 務 にお い

て,死 者 の生 前 の飲酒 の有 無,飲 酒量,事 件発

生 時 の酩酊度 更 に飲 酒後死 亡 までの 時間 な どを

明 らかにす るこ とは,極 めて重 要 であ るこ とは

言 うまで もな い.我 々 は アル コー ル の法 医学2)の

立場 か ら,司 法解 剖 に あた り常 に血 液 その他複

数 の 試料 につ いてアル コー ル検査 を行 っている.

しか し死体 ア ル コー ル は,生 体 アル コー ル ある

い は他 の薬毒 物 と異 な り,胃 内か らの アル コー

ルの拡 散や,腐 敗 の進行 に伴 い アル コー ルの死

後産 生 な どとい った問題 が あ り,そ の測 定値 の

解 釈 は単純 な もの では ない2).

とこ ろで,生 体 内に吸収 された アル コール は,

主に肝 臓にお いてアル コール脱水 素酵素(ADH)

に よ リア セ トアル デ ヒ ドに代 謝 され,更 に アル

デ ヒ ド脱水 素酵 素(ALDH)に よ り酢酸 に代謝

され るが, ADHに はtypical型 とatypical型

が あ り3),ま たALDHに はALDH 2正 常型 と

欠損 型が あ り4),それ ぞれ アル コー ル とア セ トア

ルデ ヒ ドの酸化 速度 が 異 なる ご とが以前 よ り知

られ てい る.最 近我 々 は,死 者 の生 前 にお け る

飲 酒 習慣並 び に事故 や犯 罪発 生時 の酩 酊度 を よ

り客観 的 に判 断す る ため,ア ル コール検 査 に加

え,等 電 点電 気 泳動 法 に よ りADH型 及 び

ALDH型 を判 定 して いる.し か し,司 法解剖 の

対 象 とな る死体 に は,腐 敗 の進行 した ものや 焼

死体 も多 く, ADH型 及びALDH型 の判定 に

苦 慮す る場合 も少 な くない.

本研 究で は,腐 敗 や加熱 がADH活 性及 び

ALDH活 性 に及ぼす影響 を明らかにす る目的で,

invitro実 験 と司 法解 剖例 の両 面か ら詳細 に検

討 した.

実験材 料 と実験方 法

1) 司法解剖 時及 び病理解 剖 時に採取 した肝臓

につ き,等 電点 電気泳動 法 に よ りADH型 及

びALDH型 の判定 を行 った.一 部 の腐敗 死

体 と焼死体 に関 して は,腎 臓につ いて も泳 動

を行 った.尚,各 臓器 は,使 用す る まで-20℃

の冷 凍庫 に保存 した.

2) 腐 敗 実 験

死体1日 前後 で,殆 ど腐敗 の認 め られ ない剖

検死体 の肝 臓に 同重量 の水 を加 えて ホモジナ イ

ズ した もの を5℃, 15℃, 25℃, 37℃ の恒 温槽

に放 置 し,経 時 的に試 料 を採 取 した.

3) 加 熱 実 験

上 記 と同様 に して作 成 した肝臓 の ホモ ジネー

トを50℃, 70℃, 100℃ の恒 温槽 に放 置 し,経 時

的 に試料 を採取 した.

4) 泳動用 試料 の作成

肝 臓 には 同量 の水 を加 え,腎 臓 に は1/10量 の

水 を加 えて ホモ ジナ イズ後, 10,000rpmで5分

間遠 心分 離 し,得 られ た上 清 を泳動用 試料 とし

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890　 徐 揚

た.腐 敗 実 験 及 び 加 熱 実 験 で 採 取 した 試 料 は,

そ の ま ま10,000rpmで5分 間 遠 心 分 離 し,得 ら

れ た 上 清 を 泳 動 用 試 料 と し た.

5) 等 電 点 電 気 泳 動

a) ADH5)

ゲ ル は, 29.1%ア ク リル ア ミ ド溶 液5ml, 0.9

%N, N-メ チ レ ン ビ ス ア ク リル ア ミ ド(BIS)

溶 液5ml, 20%シ ョ糖 溶 液10ml,ア ン フ ォ ラ イ

ン(pH 9-11, LKB) 1.5mlを 混 合 し,脱 気 後

10%過 硫 酸 ア ン モ ニ ウ ム 溶 液0.1mlとN, N, N',

N'-テ トラ メ チ レ ン ジ ア ミン5μlを 加 え,直 ち に

24.5×11×0.05cmの 型 枠 中 で 重 合 さ せ る こ と に

よ り作 成 し た.電 極 液 は 陽 極 に0.5%リ ン 酸,陰

極 に0.5%エ チ レ ン ジ ア ミン を 用 い,そ れ ぞ れ 電

極 ス ト リ ップ(24.5×0.4×0.15cm)に 適 量 保 持

させ た.

LKB2117マ ル チ フ ォ ーIIシ ス テ ム(Bromma,

Sweden)を 用 い, 4℃ の 温 度 条 件 下 でVmax500

V, Imax25mAで20分 間, Vmax800V, Imax25mA

で20分 間,更 にVmax1200V, Imax25mAで1時

間 前 泳 動 後,泳 動 用 試 料10-20μlを 吸 着 さ せ た

ろ紙 を 陽 極 か ら約2cmの ゲ ル上 に お い た.本 泳

動 は, 4℃ の 温 度 条 件 下 でVmax1200V, Imax25

mAで3時 間 行 っ た.尚,ゲ ル 上 の ろ紙 は 本 泳

動 開 始 後1時 間 で取 り除 い た.泳 動 終 了 後, 0.05

MTris/HCl緩 衝 液(pH 8.6) 25mlにNAD20mg,

MTT10mg, PMS4mg及 び エ タ ノー ル0.3mlを 溶

解 させ た もの と2%ア ガ ロー ス 溶 液25m1を 混 合

し,速 や か に ゲ ル 表 面 に か け た. 37℃ で20-30

分 間 イ ン キ ュベ ー ト後 型 判 定 を 行 っ た.

b) ALDH6)

ゲ ル は, 29.1%ア ク リル ア ミ ド溶 液4.5ml, 0.9

% BIS溶 液4.5ml, 15%シ ョ糖 溶液9ml,ア ン フ

ォ ラ イ ン(pH 3.5-9.5とpH 4-6.5の も の を

4:1の 割 合 で 混 合 した もの)1.25mlを 混 合 し,

脱 気 後ADHの 場 合 と同 様 に して 作 成 し た.ま

た,泳 動 条 件 もADHの 場 合 と全 く同 様 で あ る.

染 色 は, NAD50mg, MTT 6mg, PMS 8mg,

KCl40mg,ピ ル ビ ン酸60μl及 び ア セ トア ル デ ヒ

ド0.2mlを 含 む0.2MTris/HCl緩 衝 液(pH 8.6)

25mlと2%ア ガ ロ-ス 溶 液25mlを 混 合 した も の

を ゲ ル 表 面 に か け, 37℃ で20-30分 間 イ ン キ ュ

ベ ー トす る こ とに よ り行 っ た.

6) 司法 解剖 死体 の体組 織 中 アル コール 濃度 の

定 量7)

内容15mlの バ イアルびんに各 試料 約0.5gを 正

確 に秤 取 し,次い で内部 標 準の0,015%t-プ タノ

ー ル0 .5mlを 加 え,二 重 シ リコンゴム栓 で密封 し

た.こ のバ イアル びん を56℃ の水 浴 中に15分 間

放 置後,気 相約1mlをGCに 注 入 した.

GCの 分析 条件 は次 の通 りであ る.装 置:島 津

GC-4CMPEカ ラム: 0.3×200cmガ ラス カラ

ム.充 填剤:液 相PEG 1000 (25%),固 相 シ

マ ライ ト(60～80メ ッシュ).カ ラム温度: 90℃ .

注入 口温度: 110℃.キ ャ リヤ ガス: N2(50ml).

結 果

1) 腐 敗 実 験

表1　 肝ADH活 性に及ぼす腐敗の影響

表2　 肝ALDH活 性に及ぼす腐敗の影響

保 存温度 とADH型 及 びALDH型 の判定 可

能期 間 との関係 を表一1, 2に 示 す.ま た,本

等電 点電気 泳動法 に よ るADHのtypical型 及

剖検 死体 のADH及 びALDH　 891

びatypical型, ALDH 2正 常 型及 び欠損 型の泳

動像 を図-1に 示 す.肝 臓 ホモ ジネー トを5-

37℃ に保 存 した場 合, ADH, ALDHと もに保

存 温度 が上昇 す るに したが って型判定 が可 能 な

期 間は短 くな り, 37℃ で はADHはtypical型

が12時 間, atypical型 が3時 間 で, ALDHも

ALDH 2正 常型 が15-24時 間,欠 損 型が12-21

時 間で あった. 5-25℃ に保 存 した場合,保 存

日数 と ともにADHのatypical型 はア イソザ

イムパ ター ンに変 化が み られ,型 判 定不可 能 と

なった(図-2).ま た, ALDHに 関 して も,

保 存 日数 とと もに非特 異的バ ン ドの出現す る も

の もあ ったが,誤 判 の危険性 は なか った. ADH

とALDHを 比較 す る と, ADHの 方が早 く失

活す る傾 向に あった.

図1　 ADHのtypical型 及 びatypical型 並 びに

ALDH 2の 正常 型 及び欠 損 型の等 電 点 電気 泳

動 像.

1, 3: ADH atypical型, 2: ADH typical

型, 4: ALDH 2型 正 常 型, 5: ALDH 2欠

損 型.

図2　 腐敗 に よ るADH atypical型 の ア イ ソザ イ ム

パ ター ンの変 化.

1: ADH atypical型 コン トロー ル, 2:

ADH typical型 コン トロー ル, 3～6: 5℃

で5日 間保 存 した 異 な る4例 のatypical型

ADH.

表3　 肝ADH活 性に及ぼす加熱の影響

表4　 肝ALDH活 性 に及ぼす加熱の影響

尚,-20℃ で はADH, ALDHと も1年 以上

経過 して も活性 は低 下せ ず,ア イ ソザ イムパ タ

ー ンに も変化 は見 られ なか った.

2) 加 熱 実 験

加熱 温度 とADH並 び にALDH活 性 との関

係 を表-3, 4に 示す. 50℃ におけ るADHは,

最 長6時 間 までその活性 は残 存 し,型 判 定 も可

能 であ った.同 温 度 におけ るALDH 1活 性 は,

最 長6時 間 まで活 性 が保 持 され てい た ものの,

ALDH 2活 性 は45-60分 でな くな り, ALDH 2

正 常 型 を欠損型 と誤判 す る危 険性 が あった(図

-3). 70℃ と100℃ にお いては,当 然ADH,

ALDHと もに速やかに失活 した.その場合ALDH

892　 徐 揚

1とALDH2の 失 活程 度 に差 異 は見 られ,なかっ

た.

3) 腐敗死 体 及び焼 死体 のADH及 びALDH

表6　 焼死体 におけ るADH活 性及びALDH活 性

表5　 腐敗死体 におけ るADH活 性及 びALDH活

性

図4　 冬 場 に 山間 の 谷川 で死 後3-4週 間 経過 した

死 体 のADH及 びALDH.

1: ADH atypica1型 コン トロー ル, 2:

ADH typical型 コン トロー ル, 3: ALDH 2

正 常 型 コン トロー ル, 4:肝 臓, 5:腎 臓.

図3　 50℃ に保 存 した肝 ホモ ジネ ー トのALDH.

死後 経過 時 間が3日 以上 の司法解剖4例 を示

す(表-5).症 例1及 び2は と もに溺死 で,死

亡 した季 節 も3月 と4月 で殆 ど同 じで あ るが,

症例1は 死 後 経過 時 間 が5日 でADH及 び

ALDHの 型判 定が 可能 で あっ たのに対 し,症 例

2は 死後1週 間経過 してお り, ALDH型 の判 定

剖 検死 体 のADH及 びALDH　 893

は可能 で あっ たが, ADH型 の判 定 は不 可能 であ

った.症 例3は 死 後経 過 時間 が3-4日 であ っ

たが,す で にADH, ALDHと もに失活 して い

た.症 例4は 冬 に山間 の谷 川 で死 後3-4週 間

経過 して発見 され た死体 で,肝 臓 におけ るADH

型及 びALDH型 の判定 は可 能 であ った.尚,

腎臓 ではADHは すで に失活 してい た.症 例4

のADH及 びALDHの 等電点 電気泳動 像 を図

-4に 示 す.

図5　 一 部肝 臓 の 炭化 が 見 られ た焼 死 体 のADH及 びALDH.

1-5:肝 臓, 6-8:腎 臓.

表7　 飲酒者のADH型 及 びALDH型

表8　 病理解剖例及び司法解剖例 におけるADH及

びALDH表 現型の分布

11例 の焼死体 につ きADH型 及 びALDH型

の判 定 を試み た ところ9例 で判定 可能 であ った

が, 2例 は肝臓 と腎臓 が全体 に熱凝 固 してお り,

いずれ の活性 も認め られ なか った(表-6) .症

例8と9は ともにALDH 2正 常 型 と判定 された

が,肝 臓 の一部 が炭化 してお り,そ の部分 に近

い とこ ろではALDH 1の 活性 は保 持 され ていた

が, ALDH 2の 失 活が 認め られ た. ADH型 は

いず れの部分 で もア イ ソザ イムパ ター ンに変化

は認め られなか った.症 例8のADH及 びALDH

の等電 点電気 泳動像 を図-5に 示す.

ADH型 及びALDH型 と もに判定 可能 であ

った司法 解剖 死体42例 中10例 に生前 の飲酒 に由

来 す る と考 え られ るアル コール が検 出 され,そ

の 血 中濃度は1.04-3.25‰ であった. ADH型 は

1例 を除 きすべ てatypical型 で, ALDHは す

べ てALDH 2正 常型 で あった(表-7) .

病 理 解 剖 死 体 及 び 司 法 解 剖 死 体 に お け る

ADH型 並 びにALDH型 の分 布 を表-8に 示

す. ADH型 に関 して は,両 解剖 例 とも90%以 上

atypical型 で あった. ALDH 2欠 損 者の割合 は,

病 理解剖 例 で約39%で あ ったの に対 し,司 法解

剖 例 では約21%で あ った.

考 察

ヒ トのADHに は至 適pH 10.8のtypical型

894　 徐 揚

と8.5のatypical型 の あ ることが, 1965年 にVon

Wartburgら3)に よ り発見 され, pH 7-9に お

け るatypical型 のin vitroで の代 謝活 性 は,

typical型 の数倍 で あ るこ と も分 か った.そ の後

Smithら8)は デンプン電気動 泳 法に よりADHの

typical型, atypical型 の別 はADH2座 位 に よ

り支 配 され てお り, ADH2 1がtypical型 で,

ADH2 2-1及 びADH2 2がatypical型 であ る

こ とを明 らか に した. ADHのatypical型 は欧

米 の 白人 は10%前 後 であ るが,日 本 人の場合 逆

に90%近 くがatypical型 であ る9)～12).したが っ

て,一 時期 日本 人の 多 くはエ タ ノー ルの酸化 速

度 が速 い ため アセ トアル デ ヒ ドが蓄積 し,ア ル

コー ル不耐症 状 を呈 す る と考 え られ てい た.し

か し, typical型 の者 とatypical型 の者 との間

でエ タ ノー ル代 謝速 度に一 定 の関係 は認め られ

な いこ と,ま たADHは 律 速酵素 で あ り,エ タ

ノー ルの酸化 速 度 はNADとNADHの 比 に よ

り決定 され るこ とか ら,現 在 ではア セ トアルデ

ヒ ドの蓄積 にADH型 は殆 ど関係 ない と言 われ

て いる13).尚,同 じ 日本 で もア ル コー ル消費 量の

多 い 地 域 で は,消 費 量 の 少 な い 地 域 に 比 し

atypical型ADHの 頻度 が高 い とい う報 告 もあ

り14), ADH型 とア ル コー ル感受性 に 関 しては今

後 更 に検討 す る必要 が あ ると も考 え られ る.

一方, 1977年 にGreenfieldら4)はALDHに

2つ のア イ ソザ イムALDH 1, ALDH 2が あ る

こ とを発 見 した.い ずれ もア セ トア ルデ ヒ ドの

代 謝に 重要 な役割 を果 た してい.るが,特 にALDH

2はKm値 が3.5μMと 低 くア セ トア ルデ ヒ ドが

低 濃度 で も分 解活 性が 強 いのに対 し, ALDH 1

のKm値 は94μMで あ り,充分 機能 す るためには

アセ トア ルデ ヒ ド濃度 がか な り高値 にな る必要

が ある.日 本 人 の約50%はALDH 2欠 損 型 であ

り,少 量飲酒 に よ って も血 中ア セ トア ルデ ヒ ド

濃度が上 昇 し,所 謂 ブ ラッシ ングsyndrome等

種 々の アル コー ル不 耐症 状 を呈す る9)～12).原田

ら6), 15)はALDHの 等 電点電 気泳動 を行 い,さ ら

に3つ のア イ ソザ イ ムが あ るこ と を報告 してい

るが,そ れ らのKm値 は1,000μM前 後 であ り,

実 際の アセ トアル デ ヒ ドの代謝 へ の寄与 は殆 ど

ない と考 え られ る. ALDH 2及 びALDH 1の 活

性 は肝臓 で最 も強 く,腎 臓,肺,胃,小 腸,毛

痕 鞘 で も活 性が 認め られ る16)～18).肝臓 にお いて

ALDH 2は ミ トコン ドリア分 画に存在 し, ALDH

1は サ イ トゾル分 画 に存在 して いる19).

さて,最 近 分 子遺伝 学 の急速 な発 達 に よ り,

ADH及 びALDH遺 伝子 の塩 基配 列が決 定 さ

れ,末 梢 血 の 白血球 か ら抽.出したDNAの 特定

領 域 をPCR法 に よ り増幅 し, ADH 2に 関 して

電気 泳動 法 と同様 にADH 21/ADH 21, ADH

21/ADH 22, ADH 22/ADH 22の 判定 が可能 と

な ってい る20).ま たALDH 2に 関 して も,従 来

の等電点 電気泳 動法 に よる正 常型 はALDH 21/

ALDH 21の ホモ接合 体 で,欠 損 型はALDH 21/

ALDH 22の ヘ テ ロ接合 体 あ るいはALDH 22/

ALDH 22の ホモ接合 体であるこ とが分 かった21).

ALDH 21/ALDH 22の 者の飲 酒後 の血 中ア セ

トア ルデ ヒ ド濃度 は7-24μMで,両 ホモ接合

体 の中間 的 な濃度 とな る21)ことも分か ってきてお

り, PCR法 は今 後 ます ます遺伝 的 多型 のあ る蛋

白質 の判 定 に応用 され るで あろ う.し か し,従

来 の等電 点電 気泳動 法 に よ り各 アイ ソザイムの

表 現型 を判 定す るこ との重要性 に変 わ りはない.

ところで 司法解剖 死体 に おけ るアル コー ル濃

度 測定 に加 えADH型 及 びALDH型 の決定は,

生 前 の飲 酒 習慣 や死 亡 時の酩 酊度 な どを推 定す

る上 で重 要 な根 拠 とな りうる.し か し,司 法解

剖 の対象 とな る死体 に は腐敗死 体や 焼死体 も多

く,当 然肝臓,そ の他 の臓器 のADH並 びに

ALDHは 種 々 の程 度 に影 響 を受 け ることが容易

に考 え られ る ところで あ る.し か し,未 だ腐 敗

や加 熱 がADH活 性並 び にALDH活 性 にお よ

ぼす影響 につ いて詳 細 に検 討 した報 告 は見 当た

らな い.本 研 究 では実務 法医学 の 立場か ら,腐

敗や 加熱 がADH並 びにALDHの 等電点 電気

泳動 像す なわちア イ ソザ イ ムパ ター ンに及 ぼす

影響 につ い て検 討 した.

ADH, ALDHと もに-20℃ に保 存 した場合

1年 後 で も活性 の低 下 は殆 ど見 られず,安 定 で

あ るこ とが判 明 した.し か し,凍 結 ・溶解 が頻

回に なる とADH, ALDHと も早 く失活す る傾

向が あった. ADHに 関 してSmithら8)は 凍 結'

溶解 を繰 り返す と活性 が低 下 す る とと もに時々

非特 異的 バ ン ドが 出現 し,電 気 泳動像 に多少変

化 が見 られ る と報告 してい るが,我 々が検討 し

剖 検死 体 のADH及 びALDH　 895

た ところ では その よ うな非特 異 的バ ン ドの出現

は見 られ なか った.

肝臓 の ホモ ジネー トを5-37℃ に保 存 した場

合, 5℃ の低 温 で はADH, ALDHと もにか な

りの期 間型 判定 可能 で, 25℃ に な る といず れ も

数 日以 内 に型 判定 不可 能 となった.し か し, ADH

の方がALDHよ りも早 く失 活 し,型 判 定不 可

能 とな る傾 向に あったこ とか ら, ADHはALDH

よ りも腐 敗 に弱い こ とが 示唆 された.ま た, ADH

では腐敗 の進 行 に伴 いatypical型 のアイ ソザイ

ムパ ター ンが変化 し, typical型 よ りも速 く型判

定 不可能 とな った こ とは,各 ア イ ソザ イムの失

活に よ るもの あ るいは構造 上 の変化 に よ るもの

と考 え られ る.と ころで実 際 の腐敗死体 の場 合,

冬 場 に山間 の谷 川 で溺死 し,死 後3-4週 間経

過 した もの はADH, ALDHと もに肝臓 か ら型

判 定可能 で あ ったが,腎 臓 で は両酵素 の絶 対量

が少 ない こ ともあ り殆 ど活性 は認め られ なか っ

た.ま た,春 先 に溺死(水 温10-15℃)し た死

体 では,死 後5日 の ものはADH, ALDHと も

に型判定 可能 で あっ たが,死 後1週 間の ものは

ALDH2正 常 型 と判定 され た ものの, ADH型

の判 定 は不 可 能で あ った.更 に5月 に 自宅 の布

団 の中 で死 亡 し, 3-4日 後 に発 見 された死体

(検屍時 の直腸 温 は26℃)で はADH, ALDH

と もにす でに失 活 してお り,腐 敗実 験の結 果 と

非常 に類似 した結果 が得 られ た.し たが って,

死 体 の置か れ た温度環 境 があ る程度 把握可 能 な

場 合, ADH型 及 びALDH型 判定 の可否 は,

死 後経過 時 間推定 の ため の一助 ともな るであ ろ

う.

次 に加 熱の 影響 を検討 した とこ ろ, 50℃ 程 度

の比較 的低 温が作 用 した場 合, ADHは5時 間前

後 まで型判 定可 能で あった. ALDHに 関 しては,

ALDH1の 活性 は5, 6時 間 まで残 存 して いた

が, ALDH2の 活性 は1時 間程 度 で な くな り,

原 田 ら6)の報告 と同様ALDH2の 熱 抵抗性 の弱

い結果 が得 られ た.尚, 70-100℃ の 熱が 直接作

用 すれ ば全酵 素 活性 が速や か に消失 す るため,

ALDH1とALDH2の 失 活程 度に差 異は見 られ

なか った.そ こで実 際に焼 死体11例 にっ きADH

とALDHを 検査 した ところ,高 度 に炭化 した死

体 で も胸壁 や腹 壁が 焼失 して肝臓 に直接 高熱 が

作用 してい ない限 り,両 酵 素 の型判定 に支 障 は

なか った.肝 臓 に直接 高熱 が作 用 し,全 体 に熱

凝 固 して しまった もので は,当 然両酵 素 とも全

く活性 は見 られ なか った.し か し,肝 臓が種 々

の程度 に熱作 用 を受 けて いた場合 , ADH型 の判

定 に は殆 ど支 障 はなか ったが, 50℃ で の加 熱実

験 の よ うにALDH2正 常 型 で も部 位 に よ り

ALDH2ア イ'ソザ イムが 失活 し,一 見ALDH2

欠 損型 と誤判 す る危 険性 が あった.し たが って,

その よ うな焼死体 では,肝 臓か ら一 カ所 だけ試

料 を採取 す るので はな く複数 採取 し,更 に 腎臓

につ いて も泳動 を行 い,総 合 的 にALDH型 を

判 断す る必要が あ る と考 え る.

生 前の飲 酒 に由来す るア ル コー ルが検 出 され

た もの10例 のADH型 は1例 を除 きすべ て

atypical型 であ った. ALDH2に 関 しては全例

正 常型 で あ り,い ずれ も酒の飲 め る タイプで あ

った.通 常 血中 アル コー ル濃度 と心 身機能 との

間に はほぼ平行 関係 が成 り立つ ことが知 られて

い るが,大 酒家 殆 ど酒 の飲め ないALDH2欠

損 者,少 数 の病 的酩 酊 を示 す者 には 当ては ま ら

ない2).そ こで,死 体 におけ る生前 の酩 酊度 を よ

り的確 に推 定す るため に は, ALDH2欠 損の有

無 に よ りアル コール感受 性 を判断 した上 でア ル

コー ル測定 値 を評 価す る必要 が あ ると考 え る.

尚,酩 酊度 推定 のため のADH型 判定 の有 用性

につ いて は今 後更 に検討 す る必要が あ る と考 え

る.

病理解 剖例 と司法解 剖例 に おけ るADH型 と

ALDH型 の分 布 を比較 した とこ ろ,病 理 解剖例

では両 酵素 とも 日本 人 におけ る分 布9)～12)にほぼ

類似 した結 果が 得 られ た.し か し,司 法 解剖例

ではその対 象が犯 罪 にかか わ る或 はその 疑い の

ある死体 であ り,ア ル コー ルが関与 してい る場

合 も多いせ いかALDH2欠 損者の割合 が約21%

とか な り少 な い結 果が得 られた.

結 論

等 電 点電 気 泳動 法 に よ り諸 種 の剖 検 死 体 の

ADH型 及 びALDH型 の判 定 を試 み る とと も

に,腐 敗 や加 熱が両 酵素 に及 ぼす影響 に つい て

肝 臓の ホモ ジネー トを用 いて検 討 した結果,次

の結論 を得 た.

896　 徐 揚

1) 肝臓 ホ モ ジネー トを-20℃ 保 存で はADH,

ALDHと もに1年 以 上型 判定 可能 であ った.

2) 5-37℃ 保 存 で は 温 度 の 上 昇 と と もに

ADH, ALDHの 失 活速度 は早 まったが,そ

の程度 はADHの 方 が強 く,そ れ もatypical

型の 方が早 く型判 定不可 能 となった. ADHは

ALDHに 比 し腐敗 に弱 い こ とが示 唆 され た.

同様 の結 果 は,実 際 の腐 敗死体 で も得 られ た.

3) 50℃ の比較 的低 温では, ADHは5時 間前後

ま で型 判 定 可 能 で あ った. ALDHの 場 合

ALDH 1の 活性 は5, 6時 間 まで認め られ た

が, ALDH 2は1時 間程 度 で失活 した. 70℃

あ るいは100℃ に加熱 した場合, ADH, ALDH

ともに速や か に失活 したが,そ の程度 に差 異

は見 られ なか っ た.

5) 実 際の 焼死体 では,高 度 に炭 化 して いて も

肝臓 が直接 高熱に さらされていない限 り, ADH

及 びALDHの 型判 定 に支障 は なかっ た.し

か し,肝 臓 が露 出 し種 々の程度 に熱 の影響 を

受 けて いた場合,加 熱実 験 の如 くALDH 2正

常 型で も部位 に よ りALDH 2ア イ ソザ イムが

失 活 し,欠 損型 と誤 判す る危険性 が あ るの で,

複数 の試 料 を採取 し総合 的 に判 断す る必要 が

あ る.

6) 司法 解剖42例 中ALDH 2欠 損型 は約21%

と日本 人の平 均頻 度 よ り低 く,ま た死 亡前 に

飲 酒 してい た10例 につ いては, ADHは1例 を

除 きすべ てatypical型 で, ALDHは 全例

ALDH 2正 常 型 であ った.

稿 を終え るにあた り,終 始御懇篤 なる御指導,御

校閲を賜わ りました何川涼名誉教授に謹んで感謝の

意 を表 します.ま た本実験 に際 し直接御指導,御 協

力頂 きました守屋文夫助手に深謝致 します。さらに

本実験の遂行 にあた り御協力頂 きました法医学教室

各位並 びに こころよく肝臓 を提供 して下 さい ました

岡山大学医学部第1病 理学教室及び第2病 理学教室

の各位 に厚 くお礼 申し上げ ます.

文 献

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898　 徐 揚

Detection of alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase

isozymes in liver of medico-legal autopsy cases

Yang Xu

Department of Legal Medicine,

Okayama University Medical School,

Okayama 700, Japan

(Director: Prof. H. Ishizu)

Examination of liver alcohol dehydrogenase (ADH) and aldehyde dehydrogenase (ALDH)

isozymes together with the estimation of alcohol in the body fluids of the deceased, may help

to estimate more accurately the grade of their drunkenness. However,in medico-legal cases

the body is sometimes putrefied or burnt. In the present study, the effects of putrefaction and

heat on the activities of human liver ADH and ALDH isozymes were investigated by thin layer

polyacrylamide gel isoelectric focusing.

When the liver homogenates were left at 5•Ž, identification of typical type and atypical type

of ADH became impossible within 10days and 6days, respectively.In some of the homogenates

left at the same terperature, the activity of normal type and deficient type of ALDH2 isozyme

was detected for 21days. When the homogenates were stored at 25•Ž, the activities of the

ADH and ALDH disappeared within 2days and 3days, respectively. Identification of ADH

typical type, ADH atypical type, ALDH2 normal type and ALDH2 deficient type of the

homogenates stored at 37°C became impossible within 12hours, 3hours, 24hours and 21hours,

respectively. These results indicate that the activity of the ADH disappears faster than that

of the ALDH at room temperature and that atypical type of ADH is more sensitive to

putrefaction than its typical type. The same phenomena were also observed in liver of

decomposed corpses.

When liver homogenates were stored at 50•Ž, it was possible to identify the type of ADH for

about 5 hours. In the homogenates stored at the same temperature, the activity of the ALDH2

isozyme disappeared within about 1hour though the ALDH1 isozyme was stable for 5-6hours.

The activities of ADH and ALDH of the homogenates quickly disappeared when heated at 70

•Ž and 100•Ž.

In burnt bodies whose liver almost remained intact, the activities of the ADH and ALDH

enzymes did not decrease though they were badly charred. However, only the ALDH2 band

disappeared in some parts of the liver burnt slightly though the ALDH1 band was visible. In

such a burnt body, therefore, it is necessary to examine the ALDH isozymes of the liver and

kidney not to misjudge ALDH2 normal type as ALDH2 deficient type.

Ten human corpses, which were of alcohol-consumers, all showed normal type of ALDH2

isozymes. The frequency of ALDH2 deficiency was about 21% in our medico-legal autopsy

cases though it is about 50% among the Japnese.