p1_uvod_mikrobiol dijagnostičke metode

Uvod. Primjena mikrobioloških Uvod. Primjena mikrobioloških dijagnostičkih metodadijagnostičkih metoda

Dijagnostička medicinska struka koja se bavi etiološkom dijagnostikom infekcija i laboratorijskim praćenjem antimikrobnog liječenja

Predmet klin. mikrobilogije je patogeneza infektivnih bolesti te značajke mikroorganizama koje su bitne za izazvianje bolesti kao i za mogućnost njihova dokaza u uzorku bolesničkog maerijala.

Uvid u potpunu povijest bolesti (anamneza)

Fizikalni pregled bolesnika

Pažljiva ocjena/procjena bolesnikovih znakova i simptoma

Uvođenje laboratorijske dijagnostike: pravilni odabir, uzorkovanje, transport i obrada odgovarajućih kliničkih uzoraka

Obrada različitih kliničkih uzoraka dostavljenih u laboratorij

Izolacija patogena iz kliničkih uzoraka

Identifikacija (specifikacija) patogena (do razine vrste)

Određivanje antimikrobne osjetljivosti/rezistencije

KLINIČKI

MIKROBIOLOŠKI

LABORATORIJ

KLINIČKI

MIKROBIOLOŠKI

LABORATORIJ

Praćenje pojavnosti i učestalosti pojedinih patogena

Utvrđivanje i praćenje stanja rezistencije prema antibioticima (odjeli-ustanova-država-Europa-svijet)

Sudjelovanje u kontroli bolničkih infekcija

BAKTERIOLOGIJA

(MIKOBAKTERIOLOGIJA)

MIKOLOGIJA

VIROLOGIJA

PARAZITOLOGIJA

SEROLOGIJA/IMUNOLOGIJA

KLINIČKI

MIKROBIOLOŠKI

LABORATORIJ

Kvaliteta laboratorijskih rezultata izravno ovisi o

kvaliteti kliničkog uzorka i dobivenim informacijama.

KLINIČKI UZORCI

Što su KLINIČKI UZORCI ?

Uzorci oduzeti od bolesnika radi postavljanja etiološke dijagnoze i/ili praćenja progresije infekcije

Vrsta kliničkog uzorka Mikrobiološka obrada

KRV, LIKVOR, TKIVO(biopsija/autopsija) B, V, G, P

URIN,SPUTUM B, V, P (G)

FECES (obrisak rektuma) B, V, P

OBRISAK ŽDRIJELA B, V

GNOJ (iz rane ili apscesa) B

B = bakterije; V = virusi

G = gljive;¸ P = paraziti

METODA POTREBNO VRIJEME

DIJAGNOSTIČKO ZNAČANJE

Mikroskopski preparat iz uzorka

Prelimnarna dijagnoza za većinu uzročnika

1. Bojan po Gramu2. Bojan specijalnim

bojama

15-30 min (60)4-6 h

Definitivna dijagnoza za neke uzročnike

Kultura bakterija, gljiva i virusa

2 dana do 8 tjedana Definitivna dijagnoza uzročnika i određivanje osjetjivosti na antimikrobne lijekove

Brze dijagnostičke metode iz uzoraka:

10 min do 6 sati Definitivna dijagnoza osjetljivih i teško uzgojivih uzročnika

1. Dokaz antigena2. Produkata

metabolizma3. Sekvence DNA ILI

RNA

MIKROORGANIZAM VRIJEME

Anaerobne bakterije 2-14 dana

Mikobakterije 8 tjedana

Beucele 21 dan

Leptospire 30 dana

Klamidije 2-3 dana

Mikoplazme 30 dana

Druge bakterije (većina klinički značajnih bakterija)

2-7 dana

Gljive (kvasci, plijesni) (3 dana) 1 – 6 tjedana

3 osnovne komponente koje određuju kvalitetu (vrijednost) kliničkog uzorka!

1. Ispravan ODABIR uzorka

2. Ispravno UZORKOVANJE

(način/tehnika uzorkovanja)

3. Ispravan TRANSPORT uzorka

uzimanje pravog tj. adekvatnog uzorka u pravo vrijeme - uzorak u kojem se u određenom stadiju neke bolesti nalaze uzročnici iste ili odgovarajuća protutijela

tehnički pravilno uzimanje i transportiranje uzorka - uzorak mora biti oduzet tako da u njemu ostane sačuvan uzročnik bolesti ili odgovarajuća protutijela, te da se ne kontaminira drugim patogenim, uvjetno patogenim ili nepatogenim mikroorganizmima

UZIMANJE KLINIČKIH UZORAKA ZA MIKROBIOLOŠKE PRETRAGE

vrstu kliničkog uzorka određuje klinička dijagnoza, patogeneza i stadij bolesti

klinički uzorak mora biti oduzet s onog mjesta gdje će se suspektni patogen najvjerojatnije naći (i gdje je kontaminacija najmanje moguća)

akutni stadij bolesti je najpovoljnije vrijeme uzorkovanja (neki se virusi lakše izoliraju za vrijeme prodromalnog stadija bolesti)


Uvijek kad je moguće uzoke treba prikupiti prije početka antimikrobne terapije. Ako to nije moguće laboratorij treba biti obaviješten o vrsti antimikrobnog sredstva i načinu aplikacije.

Količina materijala mora biti dostatna za predviđene pretrage .

Svaki se uzorak zasebno prikuplja u sterilne posude (koje ne smiju sadržavati ni traga dezinfekcijski sredstava ili antibiotika)


Ukoliko je moguće uzorak treba odmah nasaditi na odgovarajuće podloge

Svaki uzorak treba u najkraćem mogućem vremenu transportirati u laboratoriji

Uzorci moraju biti zaštićeni od topline i hladnoće (moraju biti na odgovarajućoj temperaturi)

Ukoliko je neophodan duži transport, uzorak treba prikladno konzervirati (ovisno o vrsti uzorka i vjerojatno uzročniku )


Kod uzorkovanja treba voditi računa o zaštiti osoblja

Ako bolesnik uzorkovanje obavlja sam, mora biti dobro, detaljno upućen

Za neke uzorke potreban je povećani oprez pri uzorkovanju i transportu (čvrsto zatvorene plastične vrećice)


Svaki uzorak (posuda) mora biti propisno označen:

ime i prezime bolesnika

ustanova (odjel, ..)

vrsta uzorka

datum i točno vrijeme uzorkovanja

ime i prezime liječnika

KRV

Krv je sterilni klinički uzorak

(bakterijemija - septikemija)

preporučeno uzimanje 3 hemokulture kroz 24h

Spriječiti kontaminaciju

(sterilne rukavice, pravilna dezinfekcija)

Krv se skuplja u 2 pripremljene podloge (komercijalne ili iz laboratorija) za hemokulturu - aerobno/anaerobno

uvijek dezinficirati površinu čepa kroz koji se injicira krv u podlogu

nasađene podloge za hemokulturu se odmah inkubiraju na 370C

NE SMIJU se držati u hladnjaku

Krv = uzorak za serologiju (3-4ml)

KRV

kralješci keđna moždina

LIKVOR

Prioritetni/hitni uzorak

obrađuje se odmah

Mikroskopski preparat sedimenta (Gram) - izvješće (usmeno)

Daljnja rutinska bakteriološka, mikološka (ev. parazitološka) obrada

uzorak može biti i serološki obrađen

URIN

U mokraćnom mjehuru = STERILNA TEKUĆINA

Način uzorkovanja:

srednji mlaz (detaljne upute bolesnicima)

kateterizacija

suprapubična punkcija

debelo crijevo

mokraćni mjehur

higijena (pranje spolovila, ruku)

prvi mlaz urina se odbacuje da bi se spriječila kontaminacija normalnom mikrobnom florom distalnog dijela uretre

srednji mlaz - sterilna posuda

URIN

Uzorci urina se moraju obraditi unutar 30 min. ili se moraju pohraniti u hladnjaku (+4o C)

- obrada treba uslijediti unutar 24h

URIN

mikroskopski preparat

(10l urina = kap - mogu se uočiti bakterije i leukociti)

Mikrobiološka obrada:

broj (> 105 CFU/ml)

identifikacija uzročnika

antibiogram

URIN

ISKAŠLJAJ (SPUTUM)

Detaljne upute su neophodne!

Iskašljaj sadržaja iz donjeg dijela respiratornog sustava

NE SLINA!

Bronhoskopska ascpiracija sadržaja

biopsija - Pneumocystis pneumonija

OBRISAK ŽDRIJELA

Rutinska obrada - kvalitativna (semikvantitativna)

traže se uobičajene patogene bakterije

Sumnja na specifične patogene MORA biti naglašena i zatražena određena mikrobiološka obrada (Corynebacterium diphteriae, Neisseria gonorrhoeae)

Uzorkovanje mora biti pravilno izvedeno, da se uzorak ne kontaminira normalnom mikrobnom florom usne šupljine

UZORCI IZ RANA

Aspirat, tkivo = uzorci veće vrijednosti od obrisaka

Naglasiti točno mjesto s kojega potječe uzorak

također treba navesti vrstu rane (postop., ugriz, opekotina, prostrijelna…)

FECESTreba prevenirati pad temperature, koja dovodi do snižavanja pH i baktericidnog djelovanja na određene patogene

(Uzorak stolice treba biti konzerviran u mediju koji održava neutralni pH)

Anaerobna kultivacija - samo kod sumnje na Clostridium difficile

Uzorak stolice može poslužiti za detekciju parazita, virusa te imunološke/serološke testove

I nfekcija Nemainfekcije

Pozitivanrezultattesta

Stvarnopozitivan

Lažnopozitivan

Negativanrezultattesta

Lažnonegativan

Stvarnonegativan

Lažno pozitivni/negativni rezultati su posljedica nepravilno uzorkovanja, transporta i pohranjivanja uzorka, ili nepravilno izvedenog testa.

- jest sposobnost testa da detektira prisustvo infekcije kad je infekcija stvarno prisutna (da je što manje lažno negativnih rezultata)



Stvarnopozitivan

Lažnopozitivan


Lažnonegativan

Stvarnonegativan

Osjetljivost = stvarno poz. / stvarno poz. + lažno neg. x 100

OSJETLJIVOST TESTA

- jest sposobnost testa da dokaže odsutnost infekcije kada je stvarno nema (da je što manje lažno pozitivnih rezultata)

Specifičnost = stvarno neg. / stvarno neg. + lažno poz. x 100



Stvarnopozitivan

Lažnopozitivan


Lažnonegativan

Stvarnonegativan

SPECIFIČNOST TESTA

Prirodnitijek bolesti

Kultivacija

PCR

Serologija

Histologija

KolonizacijaKliničkimanifestnainfekcija

Terapija(eventualno)

Izlječenje(ili smrt)

Asimptomatskokliconoštvo(eventualno)

BAKTERIJE

DNA

PROTUTIJELA

PATOHISTOLOŠKE

PROMIJENE

kultivacija dokaz antigena dokaz protutijela dokaz nukleinskih kiselina

p1_uvod_mikrobiol dijagnostičke metode

Documents