PowerPoint Presentation

PENJERNIHAN ( CLEARING )SITOHISTOTEKNOLOGI PRAKTEKAK II A

KELOMPOK 3Dede AgustyaniDevy Arianti LestariIzba Aprilia NurmaMega Surya Sukma JayaWulan Kurniasih MikroteknikMikroteknik atau teknik histologi merupakan ilmu atau seni mempersiapkan organ, jaringan atau bagian jaringan untuk dapat diamati dan ditelaah. Penelaahan umumnya dilakukan dengan bantuan mikroskop, karena struktur jaringan secara terperinci sehingga terlalu kecil untuk dapat dilihat dengan mata telanjang. Metode MikroteknikSediaan Utuh (Whole Mouth)Sediaan Irisan (Sectioning)Sediaan Uraian (Teasing)Sediaan Rentang (Spread)Sediaan Gosok Remasan (Squash)Sediaan SupravitalSediaan Olesan (Smear)Tahapan Pembuatan Preparat Metode ParafinSamplingPengambilan organ/jaringan yang dibutuhkan untuk pemeriksaan.

FiksasiMemberikan perlakuan tertentu terhadap jaringan, terutama inti sel, sehingga dapat diawetkan dalam kondisi yang sedikit banyak mendekati keadaan aslinya.DehidrasiProses mengeluarkan air dari dalam jaringan tisu dengan menggunakan bahan kimia tertentu.

ClearingMenggantikan tempat alkohol dalam tisu yang telah mengalami proses dehidrasi, untuk membuat jaringan menjadi jernih dan transparan. InfiltrationMenyusupkan media penanaman kedalam tisu dengan jalan menggantikan kedudukan dehidran dan bahan penjernih.

EmbeddingMemasukkan atau menanam tisu kedalam blok-blok parafin (cetakan) sehingga memudahkan pada proses penyayatan dengan bantuan mikrotom.

SectionProses penyayatan atau pemotongan tisu sehingga menghasilkan sayatan tipis tisu baik yang telah mengalami proses penanaman maupun tidak.

AfixingProses perlekatan atau penetapan sayatan tisu pada kaca preparat dengan bantuan media perekat tertentu.DeparafinisasiProses penghilangan parafin menggunakan xylol.

StainingPewarnaan bertujuan agar dapat mempertajam atau memperjelas berbagai elemen tisu, terutama sel-selnya, sehingga dapat dibedakan dan ditelaah dengan mikroskop.MountingMerupakan proses akhir dari pembuatan preparat metoda parafin. Sebelum ditutup secara permanen maka sebaiknya jaringan dilihat pada mikroskop apakah jaringan tersebut sudah dapat diamati dengan baik atau tidak. Pada mounting tutup dengan canada balsem dan gelas penutup. Penjernihan (Clearing)Penjernihan atau clearing adalah suatu proses yang dilakukan setelah tahapan dehidrasi yang berfungsi untuk membuat jaringan menjadi jernih dan transparan . Medium penjernih ini akan menjernihkan atau mentransparankan jaringan agar dapat terwarnai dengan baik dan memperlihatkan warna sesuai dengan warna pewarnanya.

Tujuan ClearingProses clearing tujuannya adalah untuk menggantikan tempat alcohol sementara dalam jaringan yang telah mengalami proses dehidrasi dengan suatu solven atau medium penjernih sebelum proses penanaman dalam paraffin.Lamanya ClearingLamanya jaringan dalam medium penjernihan tergantung pada :

Ketebalan dan tingkat kepadatan jaringanJenis reagen yang dipakai Seperti : Benzene, Xylol, Cadar, Kloroform dll.Bila dehidrasi telah sempurna, Maka lamanya xilol atau benzene adalah setengah hingga tiga jam. Bila dibiarkan cukup lama dalam penjernih, maka jaringan akan mengeras dan rapuh yang tentunya sulit untuk di sayat.Jenis jaringan, Seperti syaraf atau kelenjar limfa sebaiknya penjernih dalam menggunakan minyak cadar atau kloroform, karena jaringan tersebut cenderung menjadi keras atau getas bila dijernihkan dengan xilol atau benzene.

Bahan yang dapat digunakan dalam proses Clearing1. Minyak Anilin2. Benzene3. Karbon Tetraklorida4. Karbon Bisulfida

5. Minyak Kayu Cadar6. Kloroform7. Minyak Cengkeh8. Xylol

Tahap Pembeningan/ Clearing

Rendam Jaringan yang sudah melalui tahap dehidrasi ke dalam cairan Xylol yang diletakkan dalam wadah kaca (karena wadah plastik bisa larut bila terkena Xylol)Dilakukan 2 kali (Xylol I dan Xylol II) masing-masing selama 15 menit.Tujuan dilakukan clearing adalah untuk menarik sisa alkohol dari jaringan sebagai persiapan jaringan memasuki tahap pembenaman.Xylol menyebabkan sitoplasma menjadi kosong (menjadi jaringan murni)

Contoh Jaringan yang Telah di Clearing

Gambar 1. Clearing dengan reagen yang membuat jaringan menjadi transparan.(sumber : http://www.biotechniques.com/news/Making-Tissue-Transparent-with-Urea/biotechniques-325032.html)

Gambar 2. Jaringan embrio sebelum dan sesudah proses Clearing(sumber : http://dev.biologists.org/content/140/6/1364/F1.expansion.html)Terima kasih