praktikum 2 07
TRANSCRIPT
![Page 1: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/1.jpg)
Praktikum 2
Buněčný cyklus
Mitóza
![Page 2: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/2.jpg)
Referát
Konfokální mikroskopie
![Page 3: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/3.jpg)
Konfokální
mikroskop
![Page 4: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/4.jpg)
Test
• 6 minut
• Uveďte své jméno, kruh a verzi
• Nepište nic do zadání!
• 1 i více správných odpovědí, v případě
nejasností lze doplnit krátký komentář.
• Poslední otázka je zaměřena na krátkou
odpověď.
![Page 5: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/5.jpg)
Skripta – str.13 – 3.3Úkol 2: Změny koncentrace DNA během
buněčného cyklu• Graf dokumentuje početní
distribuci buněk kostní dřeně ve vztahu ke koncentraci jaderné DNA.
• Buňky byly obarveny fluorescenčním barvivem, které se váže na DNA, a s využitím průtokové cytometrie (FACS) rozděleny podle své koncentrace DNA.
![Page 6: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/6.jpg)
Úkol 2: zadání• Vysvětlete, proč se ve
vzorku vyskytují buňky o různé koncentraci DNA.
• Objasněte, proč není početní rozdělení buněk rovnoměrné a proč má křivka dva vrcholy.
• Lze z grafu vyčíst relativní dobu trvání jednotlivých fází buněčného cyklu ?
![Page 7: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/7.jpg)
Buněčný cyklus
interfáze
M
![Page 8: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/8.jpg)
Buněčný cyklus
G1G2
S
M
![Page 9: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/9.jpg)
Buněčný cyklus
syntéza DNA
S
G2
G1
M
![Page 10: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/10.jpg)
G0 - fáze
![Page 11: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/11.jpg)
Kontrolní body buněčného cyklu
![Page 12: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/12.jpg)
Skripta – str.13 – 3.3 Úkol 2 – zadání
• Vysvětlete, proč se ve vzorku vyskytují buňky o různé koncentraci DNA.
• Objasněte, proč je početní rozdělení buněk nerovnoměrné a proč má křivka dva vrcholy.
• Lze z grafu vyčíst relativní dobu trvání jednotlivých fází buněčného cyklu ?
![Page 13: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/13.jpg)
Úkol 2 – řešení
S
0
po
čet
bu
něk
G1
G2 + M
x xRelativní koncentrace DNA na buňku
1x 2x
![Page 14: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/14.jpg)
Úkol 2 - závěr• Vycházíme z předpokladu, že
kostní dřeň obsahuje buňky, které se nacházejí v různých fázích buněčného cyklu, nikoli však ve fázi G0.
• Vrchol A – buňky v G1 fázi – mají poloviční koncentraci oproti buňkám v G2 a M fázi – vrchol B.
• Oblast mezi dvěma vrcholy – buňky v S fázi (mají rozdílnou koncentraci DNA, proto nevytvářejí nápadný vrchol).
S
0
po
čet
bu
něk
G1
G2 + M
Relativní koncentrace DNA na buňku
1x 2x
![Page 15: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/15.jpg)
Ukázky vyšetření „DNA-ploidie“
![Page 16: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/16.jpg)
Aneuploidie u Barrettova jícnu
Barrettův jícen - prekanceróza
![Page 17: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/17.jpg)
Aneuploidie v Barrettově jícnu
Aneuploidní buňky
![Page 18: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/18.jpg)
Jiný výsledek – linie nádorových buněk
Zvýšený podíl buněk v S-fázi
svědčí o intenzivní proliferaci
![Page 19: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/19.jpg)
Mitóza
• Jaderné dělení
– Profáze
– (Prometafáze)
– Metafáze
– Anafáze
– Telofáze
• Buněčné dělení
– cytokineze
![Page 20: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/20.jpg)
Str. 14 – 3.5 Úkol 3: Pozorování fází mitózy v buňkách kořínků cibule
• Preparáty byly připraveny z vrcholů kořínků cibule kuchyňské (Allium cepa).
• Kořínky byly po fixaci ve směsi ethanol – kyselina octová (3 : 1) přeneseny na krátkou dobu do roztoku kyseliny chlorovodíkové o koncentraci 1 mol.dm-3 (ohřátého na 60ºC) a pak na 30 – 90 minut do Schiffova reagens (roztok fuchsinu odbarvený oxidem siřičitým).
• Struktury obsahující DNA se vyloučeným fuchsinem zbarvily fialově.
![Page 21: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/21.jpg)
Princip Feulgenovy nukleární reakce.
• Kyselou hydrolýzou
DNA dochází
k odštěpení bází
• Volné aldehydické
skupiny deoxyribózy
oxidují redukovaný
fuchsin na původní
fialovou formu.
![Page 22: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/22.jpg)
Pozorování fází mitózy v buňkách kořínků cibule
• Prohlédněte pod mikroskopem roztlakový preparát kořínků cibule barvený Feulgenovou reakcí a najděte v něm dělící se buňky.
• K vyhledání buněk použijte objektiv o zvětšení 5-10x, k pozorování mitózy je nevhodnější objektiv 40x – 45x. Najděte a podle předložených fotografií určete jednotlivé fáze mitózy.
![Page 23: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/23.jpg)
Mitóza v koříncích cibule
![Page 24: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/24.jpg)
Pozorování fází mitózy v buňkách kořínků cibule
• Spočítejte cca 20-30 dělících se buněk a stanovte tzv. mitotický diferenciál, tj. zastoupení buněk v jednotlivých fázích mitózy (tj. v profázi, metafázi, anafázi a telofázi). Podíly buněk v jednotlivých fázích zapište do tabulky.
• Po vyplnění tabulky srovnejte údaje a zjistěte, zda jsou počty buněk v jednotlivých fázích přibližně stejné anebo buňky v určité fázi popř. fázích převažují. Vysvětlete své výsledky.
![Page 25: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/25.jpg)
Mitotický diferenciál
Fáze mitózy Průběžný počet Celkový počet
ProfázeMetafáz
eAnafázeTelofáz
e
12
4
6
3
![Page 26: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/26.jpg)
Str. 11 – 2.7 Úkol 4: Pozorování metafázních chromozomů z buněk
kostní dřeně myši• Pro získání preparátů byly čerstvě
usmrceným myším odpreparovány femury a z nich výplachem získána kostní dřeň. Ta byla přenesena do hypotonického roztoku a dále zpracována stejně jako buňky periferní krve (viz předchozí praktika).
• Skla s chromozomy byla obarvena roztokem Giemsa-Romanowski.
![Page 27: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/27.jpg)
Pozorování chromozomů z buněk kostní dřeně myši
• Pozorujte chromozomy kostní dřeně myši na trvalém preparátu. K vyhledání buněk použijte objektiv o zvětšení 5-10x, k pozorování chromozomů nejlépe objektiv 40 – 45x.
• Obraz v mikroskopu srovnejte s přiloženou fotografií (zobrazuje chromozomy při zvětšení cca 1000x).
• Spočítejte, kolik chromozomů obsahuje somatická buňka myši. Použijte fotografii nebo spočtěte chromozomy přímo v zorném poli mikroskopu.
• Určete, který typ (popř. které typy) chromozomů je přítomen (popř. jsou přítomny) v buňkách myši
![Page 28: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/28.jpg)
Myší chromozomy
![Page 29: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/29.jpg)
Výsledky úkolů
![Page 30: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/30.jpg)
Úkol 3 - mitóza
• Mitotický diferenciál
– Buňky v různých fázích mitózy mají rozdílné
zastoupení.
– Nejvíce buněk lze nalézt v profázi – tato fáze
trvá nejdéle.
![Page 31: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/31.jpg)
Mitóza u nádorových buněkPorucha regulace buněčného cyklu vede ke vzniku
nádorových buněk. Ty se zpravidla vyznačují vysokou mitotickou aktivitou, která může mít za následek poruchy
rozchodu (nondisjunkce) chromozomů.
![Page 32: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/32.jpg)
Chromozomy myši
telocentrické chromozomy
![Page 33: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/33.jpg)
Myší chromozomy
10
10
11
9
celkem 40 chromozomů
![Page 34: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/34.jpg)
Karyotyp myši - samice
![Page 35: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/35.jpg)
Význam studia myších chromozomů
– testování mutagenity (genotoxicity)
![Page 36: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/36.jpg)
Laboratorním myším byla aplikována látka s předpokládanými mutagenními účinky. Na každém obrázku jsou chromozomy z jedné myší somatické buňky. Zjistěte a popište chromozomové aberace,
které lze na nich pozorovat.
tetraploidie zlom
![Page 37: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/37.jpg)
Příští praktika
• Praktická cvičení – kapitola 4: Meióza,
gametogeneze – str. 16 – 19
• Klinická cytogenetika I. – kapitola 6 – str. 38 – 43
• Referát: Etické otázky asistované reprodukce
• Test – mikroskopy, buněčný cyklus, mitóza,
základní poznatky o struktuře DNA a její replikaci
![Page 38: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/38.jpg)
Na shledanou!
![Page 39: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/39.jpg)
Fluorescence Activated Cell Sorter
• přístroj, jenž měří koncentraci DNA v každé buňce podle intenzity fluorescence – tzv. průtoková cytometrie
• Tento postup se mimo jiné používá také k měření koncentrace DNA v buňkách pacientů s hematologickými malignitami, popř. s nádory prsu, močového měchýře a střeva.
zpět k úkolu 1
![Page 40: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/40.jpg)
Profáze
zpět
![Page 41: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/41.jpg)
Metafáze
zpět
![Page 42: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/42.jpg)
Anafáze
zpět
![Page 43: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/43.jpg)
Telofáze
zpět
![Page 44: Praktikum 2 07](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022062319/5560e141d8b42a086e8b4ad0/html5/thumbnails/44.jpg)
Cytokineze
zpět