progetto amicididuccio agg2016
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Progetto Amici di Duccio 2016: la terapia genica
alla sconfitta della leucemiaC.F. Magnani, A. Biondi, E. Biagi
Centro M.Tettamanti, Clinica Pediatrica Università Milano-BicoccaOspedale S. Gerardo, ASST Monza, Italy
La leucemia è un tumore delle cellule del sangue.
8/10 bambini che si ammalano di leucemia o linfoma oggi guariscono
Quando la leucemia è resistente
Tuttavia, il 10-15% dei bambini ha una forma resistente di malattia e recidiva. La recidiva è la ripresa, il ritorno della malattia: le cellule malate ricompaiono. Le chances di cura dopo recidiva sono inferiori al 30%.
Il trattamento standard consiste in circa 2 anni di chemioterapia.
La terapia a cellule T è un tipo di immunoterapia che utilizza le cellule del sistema immunitario per riconoscere e distruggere le cellule leucemiche.
I linfociti CAR sono cellule del sistema immunitario (i linfociti T), ingegnerizzati in laboratorio in modo da avere “montate” molecole CAR che funzionando come un RADAR sono in grado di riconoscere la cellula leucemica come un bersaglio e di uccidere il tumore.
T-cell therapy:I linfociti killer CAR (recettori chimerici artificiali)
Linfocita T
CAR
Un’opzione possibile quando la cura standard fallisce
Emily è il primo paziente pediatrico arruolato nello studio CTL019 ed è diventato il primo bambino al mondo ad avere il suo sistema immunitario addestrato per combattere il cancro.
Quando i linfociti CAR sono stati infusi dentro Emily è diventata molto malata e ha trascorso diverse settimane nel reparto di terapia intensiva.
Emily è riuscita a sopravvivere, ed è stata dichiarata libera dal cancro poche settimane dopo - la terapia delle cellule T aveva funzionato!
Come vengono costruiti i linfociti CAR
Il processo di trattamento comporta tre fasi:1.I linfociti T vengono rimossi dal sangue del paziente.2.In laboratorio, i linfociti T sono geneticamente "addestrati" a riconoscere e uccidere le cellule tumorali.3.Le cellule T killer vengono infuse nel paziente.4.Le cellule T killer eliminano la leucemia.
CARLinfocita
T
Cellula leucemica
Linfocita T CAR+ riconosce la cellula leucemica
Uccisione ed eliminazione della cellula leucemica
Linfocita T CAR+ Cellula leucemica
Flusso sanguigno
“Una terapia viva”
I nostri linfociti CAR speciali: le cellule CIK
Le cellule CIK, linfociti T, potenti ma sicuri
Insieme al gruppo di ematologia di Bergamo abbiamo trattato più di 70 pazienti utilizzando cellule CIK da donatore, dimostrandone la loro sicurezza post-infusione
modified from Koseki H. (2008), Riken Research, 3, 7
Per ogni malattia il suo RADAR/CAR!
Quali RADAR/CAR abbiamo sviluppato in questi anni:•Il CAR19 riconosce la leucemia linfoblastica acuta.•I CAR33 e CAR123 riconoscono la leucemia mieloide acuta.•Il CAR23 riconosce la leucemia linfatica cronica.•Nuovi CAR in sviluppo affronteranno malattie più aggressive.
modified from Koseki H. (2008), Riken Research, 3, 7
I metodi attualmente utilizzati sfruttano virus che inseriscono nel DNA delle cellule T il gene che codifica per il CAR rendendole killer
La piattaforma tecnologica che abbiamo sviluppato, protetta da un brevetto, sfrutta efficientemente una metodica non-virale, più pratica ed economicamente vantaggiosa.
In laboratorio montiamo il CAR con un metodo non-virale
La stanza di manipolazione genica funziona!
Gli avanzamenti di quest’anno!
STARTING MATERIALDRUG PRODUCT
DRUG SUBSTANCE
DAY GMP MANUFACTURING
Day 0
Plasmids:CD19.CAR/pTMNDU3 and pCMV-SB11
Collection donor PB
Donor-derived PBMC
Ficoll centrifugation
Irradiated Donor-derived PBMC
Irradiationat 60 Gy
Non-viral modification:Electroporation of PBMC with plasmids by 4D-NucleofectorTM
Stimulation:Electroporated PBMC stimulated with irradiatedPBMC + IFN-Y
Day 1
Drug Substance: Donor-derived CIK-CAR.CD19
cells
Addition OKT3 and IL-2Day 4-18/28
CIK cell expansionin fresh medium + IL-2
Day 18/28
Drug Product: Donor-derived CIK-CAR.CD19
cells
Sampling for QC testing
Freezing
Day 18/28
Harvesting and centrifugation
Resunspension in freezing medium
Il nostro cocktail CAR + CIK + metodo non virale è stato pubblicato su un’autorevole rivista scientifica
Cellule CIK potenti ma
sicure
Il metodo non virale
Meno complicato dei vettori virali
CARil bazooka rapido, potente e diretto contro il tumore
Fase preclinica
Nell’ambito dello sviluppo di un prodotto medicinale quale i nostri linfociti killer è essenziale verificare:•l’efficacia, •la dose, •la sicurezza.
Obbiettivi Progetto Amici di Duccio
Breve termine
Medio termine
Sempre più vicini al letto del paziente!
Sottomissione della documentazione all’Istituto Superiore della Sanità
Pre-submission meeting all’Istituto Superiore della Sanità