(Inmunohistoquímica )

Universidad de la Salle ColombiaFacultad de ciencias agropecuarias

Medicina VeterinariaBogotá-Colombia

Luis G. PérezYeili Álvarez Niño

Andrés Ricardo Avellaneda

IHQ

¿QUÉ ES? se refiere al proceso de detección de antígenos en las células de una sección de tejido mediante la explotación del principio de anticuerpos que se unen específicamente a los antígenos en los tejidos biológicos. IHC toma su nombre de las raíces "inmuno", en referencia a los anticuerpos utilizados en el procedimiento, y "his", que significa tejido.

Inmunohistoquímica directa (método de un solo paso)

En Primer lugar se provoca la reacción entre un anticuerpo primario conjugado con un fluorocromo o una enzima y un antígeno tisular o celular, La visualización de la reacción es posible con la ayuda de un cromógeno y los resultados se aprecian por microscopio. Es el menos sensible: la coloración fuerte especifica del complejo antígeno-anticuerpo por lo general se acompaña de grandes cantidades de actividad inespecífica.

http://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe18/espe18.htm

Inmunohistoquímica indirecta (método de dos pasos o tres pasos)

• En el método de dos pasos se provoca la reacción entre un anticuerpo primario no conjugado y un antígeno tisular o celular. A continuación se permite la reacción de un anticuerpo secundario conjugado con un fluoruro o una enzima. Luego de colorearlo cromógeno, se observan los resultados por microscopio.

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• La elaboración posterior del procedimiento indirecto es el método de tres pasos. Se liga un anticuerpo terciario conjugado al anticuerpo. Con el uso de un anticuerpo secundario o terciario, el número de enzimas disponibles para reaccionar con el cromógeno es mayor y en ultima instancia produce una reacción inmunohistoquímica más intensa.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Durante el uso de los anticuerpos adecuados para apuntar a los antígenos correctos y amplificar la señal es importante para la visualización, la preparación completa de la muestra es crítica para mantener la morfología celular, la arquitectura del tejido y la antigenicidad de los epítopos diana. Esto requiere la recogida de tejidos adecuada, la fijación y seccionamiento

El paraformaldehído se utiliza por lo general con la fijación. Dependiendo de la finalidad y el espesor de la muestra experimental, ya sea en secciones delgadas se cortan a partir del tejido de interés, o si el tejido no es muy grueso y es penetrable que es usado en su totalidad. El corte se lleva a cabo por lo general mediante el uso de un micrótomo, y las rodajas se montan en portaobjetos. "IHC de flotación libre" utiliza rebanadas que no están montados; estas rodajas se producen normalmente usando un microtomo de vibración.

no necesita el tejido que se permeabilizaron porque esto ya ha sido realizado por la cuchilla de micrótomo durante la preparación de la muestra. Los detergentes como Triton X-100 se utilizan generalmente en inmunohistoquímica para reducir la tensión superficial, lo que permite menos reactivo que se utiliza para lograr una mejor y una cobertura más uniforme de la muestra.

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Utilización

La tinción inmunohistoquímica se utiliza ampliamente en el diagnóstico de células anormales, tales como las que se encuentran en los tumores cancerosos.IHC también es ampliamente utilizado en la investigación básica para entender la distribución y localización de marcadores biológicos y las proteínas expresadas diferencialmente en diferentes partes de un tejido biológico.

Importancia de la inmunohistoquímicaEs de vital importancia para el marcaje selectivo de proteínas y otros elementos que pueden estar presentes, tanto en las membranas celulares, citoplasma, y demás compartimientos citoplásmicos, así como también en la matriz extracelular.Requiere de un entrenamiento especializado sobre todo en el procesamiento de los tejidos, la selección de todos y cada uno de los reactivos necesarios apropiados, la interpretación de los inmunomarcajes en las preparaciones histológicas.

Identificación de fimbrias de Escherichia coli enteropatógeno mediante inmunohistoquímica en cerdos lactantes con diarrea

La colibacilosis es una enfermedad digestiva o sistemática que en los cerdos lactantes y otros animales jóvenes es responsable de cuantiosas pérdidas económicas. Las fimbrias son de 0.2μm de longitud y entre 2 y 7 mm de ancho, que permiten la adherencia bacteriana a las células epiteliales intestinales. Cepas de E. coli con F4 con capaces de adherirse y promover la colonización principalmente en intestino delgado anterior en cerdos neonatos.

Caso Clínico

MetodologíaAnimales de experimentación ,el material estuvo constituido por duodeno, yeyuno e íleon de 50 cerdos lactantes que cursaban con diarrea y procedían de 6 explotaciones porcinas de la zona central y 3 del área sur de Chile. Los animales se obtuvieron durante los meses de febrero a abril de 1997.

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: Posterior a la necropsia de los cerdos, se recolectaron contenidos de duodeno, yeyuno e íleon de cada cerdo, remitiéndose refrigerados al Laboratorio de Microbiología 1 dentro de las 8 -12 horas. Las muestras fueron sembradas en Agar Eosina Azul de Metileno; cuando se observó desarrollo de un 80 % o más de colonias típicas de E. coli, se efectuó la prueba de Aglutinación (Fimbrex®)2 para determinar el tipo de fimbria presente.

Resultados

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO E IDENTIFICACIÓN DE FIMBRIAS. De los 50 cerdos lactantes con cuadro diarreico, se identificaron antígenos fimbriales en intestino delgado mediante IHQ en 16 (32%) de ellos. De éstos, en 10 casos se observó aislamiento de E. coli solo o asociado a otros agentes biológicos; en los 6 restantes, 5 no presentaron desarrollo bacteriano en medio de cultivo y en un caso se aisló Salmonella sp.

Bibliografía

• Benedicto Chuaqui J. 1999. Manual de patología general Textos Universitarios Facultad de Medicina. Chile, Eds. Univ. Católica de Chile.

• Microscopia de inmunofluorescencia. Disponible en: http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/minmuflures.htm

• 1Lynch, J., Raphael, S., Mellor, D., Spare, P. y Inwod, M. 1977. Métodos de laboratorio. México Nueva Editorial Interamericana.

• Inmunofluorescencia inmunoperoxidasa. 2014. disponible en: http://164.73.28.51/drupal-6.16/sites/default/files/2014-ifd.ihq__0.pdf

• Elena Vecino. TECNICA INMUNOHISTOQUIMICA. Disponible en: http://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe18/espe18.htm

• CANAL, A.M.; V. CUBILLOS; J. ZAMORA; G. REINHARDT; E.PAREDES; R. ILDEFONSO; A. ALBERDI; P. MACÍAS. 1998. Identificación de fimbrias de Escherichia coli enteropatógeno mediante inmunohistoquímica en cerdos lactantes con diarrea. Patología Básica. Facultad de Agron. y Veterinaria de Esperanza, Universidad Nacional del Litoral, Argentina