pseudomonas aeruginosa strains with lipopolysaccharide defects exhibit reduced intracellular...
TRANSCRIPT
���������� ������� ������� ��� ����� ���������� ������������� ������� ������� � �� ����� ��� ����� �������� �� ������
����� �� �� �
����� ������ ��� ��� ��� ����� ����� ��� ��� ������� ���������
������� �� ���� � ������ ��� ����� �� ������ ���� �������� ������ �� ���������� ��������� ���������� � ��������� ��������� �� !"#$� ������ �� �%�&�� ��������� �����'� �� ���������� ���������
��� (����� )���*�� �� !+ #� ������
�������� # ����� #$$# �� ������� �� ������ ���� ! ������ �� , �
���������� ������� �� � ������ ���� � �� ������ ���������� ���� ����� �������� � ���� �������������� ������ ���������� ���� �� ����� ��� �� ����� ��������� �������� ������ ���� ����� ���� � ���������� ���������������� �� �������� �� ��� ���������� �������� �� � �������� �� ���� ������ �� ���� ����� ������� ������� ���� �� ��� �� ����� ���������������� ��� ��� � ������ ��������� ��������������� � ��� ��������� ����� �� ������ ���������� ����� !���������� � ���������������� ��� ��� ������� ���������� �� �������������� ���� ��� ������� �"#$% �������� ������������ ���������� ������� ������� ���� � ������� ���������������� �������� ��� ��������� ������ ��� ����� &������ ����� ���� ���������������� �� �������� �� ��� ������������ �������� ���'�� ���������� � � �������� �������� �� ���������� �������� �� ���� ���� ��������� �������� ���� ������������ �� ��� ����������� � ������ �� ������ � ())( *������� $���� "���
��� ����� � �������� �����+ ��������+ ������������ ��������+ ����������+ "#$�
�� ����������
���������� ������� �� �� ������������ ,���-������� �������� ������� ���� ����� � ����-���������� ������ �� ����� ������� ������������� �������� ���� � �� � ����� ������ ./�� �� ����%001+ 2��� �� ���� %0003� ���� ������ �������� � � ������� �� ������ ��� �������� ������ ���������������� ���� .4���� � �� ���� %0053� ��� ������������� ������� ���� ���� ������������ �� ������������ � ������ �� ����� .4���� � �� ���� %0063�
"��������������� ."#$3� � ��7�� �������� � �������� �������� � ,���-������� �������� �� ��� � ��� �������� ����� ��������� �� � ������� �� ���������� ������� .#������ �� ���� %0053� �� ������� "#$�� ������ �� ���� �������� ������������ �� �������������� � �������� ����� �� � ������� .2�� �� ���� %016+ 8������ %00)+ !������� 9������� ���"��� %0003� �� �������� �� �������� ��:���������"#$ �� ������ ��� �������� ��� �� ��� ���� ������ ����� �� ��� ������������ ������������ ��� ����������� ��� ������������ �������� .;������ ���� %01<+ 8������ %00)+ !������� ��� ����� %0003�
� ����= �������� �� ������ �������� "#$ ��:�-���� �������� � � ������� �� ������ ���� �������� ���� ��������� .4������ �� ���� %00<+ ,������ ���� %00>3� "#$ �� ���� ������ �� �� �������� ��� ������� �������� � ������ ���������� ����
��������� ���� � �� ��� "#$ ��� ���� ���� ���� ������� ��� ������ � ������� ���� �� �� �������� ��� �� ���� ������ ���������� ���� .?���� �� ����%00@3� &���� ���� "#$ ��� ���� ��������� ����� ������ ��� ���� �� ��� ���� ��������� �� ��� ����������� � � ������� ������ �� ������ �� ������� ���������� �� ���� ���� ��� ���� ������ ���� �� �������� �� ���������� ����������� ��������� �� ����-�������� ���� ��� �� ������������ ��� �-���������������� ���� �� ��� ������� ����� ��������� �����
�� ��� ���� ������� ���� ��� ���� � "#$ ��� ������� �������� � ������ ���������� ������������ �������� ��� ����� ��������� ����� ������;������� ��� ��������� �������� ������ ����������� �������� �������� �� ��� ������� ����������������� ��� ������� � ��� ������� �� ����� ���� �������� ������� �� ������� ���'�� �������� ������ ��� ���� ��� ���� ���� �������� !������ ���� ����������� .!���� ��� !��������� %016+ ����� �� ����%0013� �������� ����� .9���� �� ���� %0003� ��������� ������������ .$������ �� ���� %0003 ��� ��������� ����� "#$ �� ���� � ���� �� ������������ ����������� ����� ������ ��� �������� ��������� �� ���� �������� ������ ��� ���������� ���� ��� ���� � "#$ �������� ���������� ��� �������� �� � �������������� ��������� ������ �������� ������ �� ��������������� ����������� � ��� ��������� ������ &������������� ��� ������ �� ������� ��� �������������������� � ����-���� �������� � ������� ���� ������� � ���� �������� �� "#$ ��������
��� ��� ��� .())(3 � � @<5A@6<���B%)�%))@'�����())(�()>(� ��������� ������ �� ����B''������������������ ��
))%6-61<5')('C<5�))') � ())( *������� $���� "���
� ������ �� ������������� *-����� :��� �D��������������������
�� ��������� ��� �������
�����
*���������� ���� ������� ���� ��� ��������� ������� ������� �805> .�������� �53 ���#�2%! .�������� �<3� ��� � ������ � "#$ �������������� ��� ����� ������� ���� ��� ������� �� ��&���� �� ������ ���� �������� ��� �������� .%1 ��3������� ���� �� ��������� ��� ��� .&$�3 ������ ��<>�2� #������-������ ������� ���� ���� ����� ������� ��������� �� &$� ������������ ���� �����-����� %)) � ���%� 9������ ���� ��������� ����������� ��������� ������ .�*�3 .2�����&�� 4�����$�����=� #��������� #�� E�$���3 �� � ����������� � ������������� % � %)1 � ���% ���������� ������������������ .�F@5)3� ���� ������� �� �*� �� �=��� ����������� � % � %)@ �� % � %)> � ���%�9������� ������������ ���� ��=���� �� �����������
���� �������
#������ ������� � ������ ������ ���������� �������� �������� ��� ���������� �� �������� ����������.4���� � �� ���� %0053� 2���� ���� ���� �� %) � ������.2������ G�� H���� GH� E�$���3� 4�� ��� �� �����-������� ���� ���� ������� ��� ���� (6-���� ������������ ������ ��� ���� �� (A< ���� ����� ��:�����
�������� ��!�!� "���
� ������� �������� � ������ ���������� ���� ������������� ������������ �������� ���� ������=��
���� ��� ������� ������� 9������ ��������� ��()) �� �*� ���� ����� �� ��� ���� � � (6-���������� ������ ����� �������� ��:���� ������������� ���������� ����� 4������� � < �� ������������� ( � %)5 � �������� �� � % �� �� <) ������������ ���� ( � %)@ � ������� �� <>�2� �������� ������� �� �������� .()) � ���%3 �� % �� ��<>�2 �� ���� ������������ ������� �� ������������������ .�������� �����3 .4���� � �� ���� %0053� &������ ������������ ��������� ���� ��� ������� ������������ �� �������� �� �� ���������� < �� .� ������ 6 �� �������� ���������3 �� ����� ��� ���������-��� ������� ���� ������ ��� ���� .������������ �������������3� ���������� � ������� ��� ����� �� ������������ ���������� ������� �� ��� ���� ���� �������� � ���������� � ������� �� ��� ������ &������� � �������� ������������ �������� ����������� �������� ���� ���� ������ ��� �����*� .5)) ��3� ��� ���� ����� ���� &����� I-%)).)�(5J �'�3 �� �*� .() ���3 �� ���������� ��������.4���� � �� ���� %0053� &�� ������ � ������ �����-������� ������� �� ��� ������� ��� ������=�� �� �������������� ��� ������ ������ ���� &$� �������2���������� � ��� �� ����� �� ������� � � ������� �������� � ��� % �� � ����������������� .�������� �����3 ��� 6 �� � ����������������� .������������ �������� �����3 ���� ���- ����� �� ����� ��� ��� � ��������� �� ��������
�� ����� ����� ������� ���� ���� �� ��� ���� ����� ����������� ��� ����������� ���� �������� ������� ����� 2������� ���� ��� ����� �� ������ ��������� ���� �� ����=��� �� ������ �� ��� ���������� � ����-���� ��� ������ ������� ������ % ���
&�9"* �
#� ��������� ����� �� #�� ������ ���� �� ���� �����
� ������� ������ "#$ ������������ !� ������'�������
�805> #����� ������+ ������� "#$ .�������� �53 2���� � #�)%.K������ ��� 8��������� %0>>+8��������� 2���� ��� ���� �� %0>03
�8%)%( F� ����� "#$ ���+ � ������ ��=����� F��������� � �805>.K������ ��� 8��������� %0>>+8�������� �� ���� %0>03
�8%)%( � �"#$% .���� ��&$� � ���������� %)) � ���%3
"#$ ��� � � ������ �������� .�������� �53 �"#$% ������� ��� ��� ���.,������ �� ���� %00<3
�8%)%( � �"�4!% .���� ��&$� � ���������� %)) � ���%3
F� ����� "#$ ���+ � ������ ��=���� ������� ������ �� �"#$%.,������ �� ���� %00<3
#�2%! #����� ������+ ������� "#$ .�������� �<3 .!��� ��� ������� %01<3#�255> 2������� "#$ ���+ G� � ������� F��������� � #�2%!
.!��� ��� ������� %01<3#�2@%% 2��� L � ������ �������� #�2%!�
��� M�����N "#$F��������� � #�2%!.!��� ��� ������� %01<3
#�2@)5 F� ����� "#$ ���+ � ������ ��=����� F��������� � #�2%!.!��� ��� ������� %01<3
#�2%!���B B��� F� ����� "#$ ���+ � ������ ��=���� �������� � ��� �� #�2%!.2���� �� ���� %0063
�� ������ ������� �� ������ ������� $F$A#�,* ���� ����� ������� � � ������ ������� ���� ��������-����= ��������� ��������.F������ �� ���� %0063
��� �� ����� � ���
< �� ��������� ������� �� �*� ����� �� ������������������ ��� ���� ��� ������� ���� ������� ������������ �������� .���� ��� �����3�
���������
F��� ��� ��������� �� ����� $�F� $��������� ������-���� � ��� �� ������ ������� ��� ����� ������ ����� ���� �G�O� �� $������N� �-������ ������ � )�)5 ���� ��������� ����=����
�������
��� ������� ���� �������� ��� $��� .$�� "�������� E�$���3 ������ ��������� �������
�� ������
$���%���� #� ��������� ��!�!�� �� ��������� ������� ��������� ������ #�� ����� &���� '��!��!��� ������ ����������
F� ��� �� ��� "#$ ��� ���� ���� �� ��������������� ��� ��������� �� ��� ���� ������������������� &��� ��� ����� �� ������� ����-����� ������� ������ �805> .� ���� � � ������������� #�)% P�������� �5Q3� ���� �8%)%( .� "#$-��� ��� � ������ �� ����� ������ � �805>3 ������� � < �� ��������� � ���� ���� ������� ��������� % �� � �������� ��������� �� ���� ������������������� .4�� %3� &���� ���� ����=����� ���������������� ������� ������ ���� ��������� �����805> .>5)�5@ �3 ���� ���� ��� "#$ �������8%)%( .0>�<% �3 .� � )�)))%� �-����3� � �������� ���� ����� � ��������� ���� ����������805> ��������� ������������� ������ ��� ���������� .������������� (5- ���3� &��� ���������� ���������� �� ���� �������� �� �*� ������� .���� ��������3� �� ����� �������� "#$ ������ ������� ������� ������� ���� ���� ��� ������ ���������������
&�� ��������� ������ ����� �� ����� ����������� ��������� �� ������ � ��� ��������� ���� � ������������ ������� ����� �� ��� =��� �������� ��������� .4�� (3� $����������� �� ��� ���� ���� ����������� ������� ����� ��� �� ����=��� �� ����� ���������� ������ ������� �805> ��� ��� "#$ �������8%)%(� &�� ���� �� ���� �� ������ �������������� �805> ��� �8%)%( =��� ����� ������������� ������� <) ��� ��� % �� ��������� � ������� ���� ����� &���� �� ��� ��������� � ���������� � % �� ��������� ������ ��� ���� �� ����� ������� � "#$ �� ������������ ���������
�� ������� � �� ���������� �� ���� ��� "#$������ ������� �� � =������ �� ����-���� �805> � ���% �� �������� ����� �� ��������� �� 4�� ( .� � )�%>(��-����3� � ��� ��������� ������ �805> �������� ������������ ���������� ����� ��� ������� �� �������� ������������� ���-��� ���- ��� .������ 4��� ( ��� <3� ����� ���������� ����� �� 4�� (� �805> ���������� ���
������� �������������� �� ��� ����� < �� �� ������-��� ��� �� ��� ��� ����������� ����=��� ���������������� ���� .� � )�(1@� �-����3� $����� �8%)%( ��������� �������������� �� ��� ������������
�������������� �( #�� '�(���� �� #� ���������������� �������� ��!�!�
&�� ������� �"#$% ��� ���� ����� �� ������� ���"#$ ��� ��� �-������ ���������� �� �8%)%(.,������ �� ���� %00<3� &��� ������� ������� � �������� �"�4!% �������� �� %1�( �� *�!% ��-���� � FG� ����� ��� � ������� ������ #��%��� ��� ������� ������ ��� �������� ��� �������������������� � ������ �8%)%( ����������� ���� ���������� �"#$% �� ��� ������ ������� �"�4!% .,���-��� �� ���� %00<3 ���� �������� 2��������������� ��� "#$ ������ �8%)%( ���� �"#$% �������� ���������� �� ������� ��������������� ��� ��������� ����������� ������� �� �������� ������ ��� ��� .4�� <.�3�� � )�)<<� �-����3� !���������� � ������������ �����-��� �� �"#$% ��� ��� �� ��� �������� � �������FG�� ���� �������������� ���� ��� ������ ��������"�4!% ��� ��� ������� ���� ������ .4�� <.933�
'�(���� �� ��� #�� ��� � "�������� ���� ������� �������� ��!�!�
&�� ����-���� ������ #�2%! ��� ������� ��#�2%!���B B��� � ���������-��=��� ��� ������ � #�2%! .2���� �� ���� %0063 ���� ��� �� ���������"#$ ���� ��� ���� ��� ������� � ������ .4�� 6.�33�&���� ��� �� ����=��� �� ����� �� ����� ������� �������� ���� �� � % �� ����� .� � )�>1� �-����3� � ������������ ��� ������ #�2%! �������� ������ ��������� ����+ ��� ������ �� ������������ ���������������� ������� ���- ��� ����- ��� �� �� ���������������� .������ 4�� 6.�3 ��� .933� �� ����������� "#$ ������ ����������� ���� ��������� ������ ������� ����� ��� < �� ����������� ������ .� � )�))%6��-����3� &���� ������� ���� � ���������-��=��������� �������� ����� �������� �� ������ �805>��� ��� ��������-������� "#$ ������� �8%)%(�
$��� ��� ���� ������� � ���� �� "#$ �� �����-������� ��������� �� ����� �� ��������� ��� ������������� � "#$ ��� ��� ��� � ������� ���� ��� ����������� �� �8%)%( ��� #�2%!���B B���� &� �� ���#�2%! ��� ������� �� � ������ � ����� "#$ ����������������� � ���� ������ .4�� 6.933� $����� #�255>���� ��� � ������� "#$ ���� ��� ���� ��� ������� �������� �������� ��� ��������� ������ ��� ���������������� ����� ��� �� � ������ ������ ���� ��� ������#�2%!� 4�� �������� �� ��� ���������� ����� ��4�� 6.93� #�2%! ��������� ������������� ����- ����������� #�255> ��������� ���� �� ������������� ���- ��� .� � )�)))0� �-����3� $����� #�2@%% ������� M�����N "#$ ���� ��������� ��������� ���� � #�2%! .!��� ��� ������� %01<+ F������ �� ����%0063 �������� ��������������� ��� ������� ���
-� �.��/(0��� ������� ����� ������ �������� ��
����=��� ���������� .� � )�@@1� �-����3� &����������� ���� � ���� �� ���� ��� "#$ ��� ��� ������� �� ������������ ��������� ������������� ��������������� � #�2@)5� � ���-�� ����� ������ �������� � ������� ��� ������������� �����- ��� ���������� ���� � #�2%! .� � )�)%6� �-����3� &���������� �������� ������ ��� ����������� ��������
�� ��� ����������� ��� ������ $������������ ��������������� ������� � #�2@)5 �������� ��������������� >5 J .� � )�)(6� �-����3� ���������� ������� �� ������� ������ �� ��������� ������� ������ ���������� ����� ���� "#$ ������ �� ������� ��� ������� ����� �� ���� ����� ��� �� ������ ���� ������-����� "#$ ������� ������ �� ���� ������
4�,� %� ������������ �������� � � ������� ������ �805> .�3 ��� ��� "#$ ������ �8%)%( .93 ������ ������ ���������� ����� ��� � < �� �������� ������� F� ������ ������� ��� % ��� 6 �� �������� ���������� � ��� ��� �������� ������ ��:�� ����������� ���'�� ���������� � ������������ ��������
��! �� ����� � ���
�� ��������
��� ���� ���� ������� ������������ ���� �� "#$-������ .����-����3 ��� "#$-���� ������� � � ������� ������ ������ ���������� ����� $���������� � ������� "#$ �������� .������� ��� ��� �������3 ������� ��� �������� ������ ������ ���������� ������� � ����� ������� ���� �� ��� ��"#$ �������� ���� � ������ ������ �� ���������������������
�8%)%(� #�2@)5� ��� #�2%!���B B��� ���� ��������� �� ������� ����� "#$ �� ���� � ������ �� ������������ �� ������ �������� ��� ���� ��� ���� ��� ����� "#$ ��� ���� ����� � ������� ��������������� �� $F$A#�,* ��� ���� ��� �������� ���������� ����-���� ��� .2���� �� ���� %006+ F������ �� ����%0063� ��� ����� � ����� ������� ���� ������������������ �� ����� ������� �� ������� ������ ���������������� ����� ������� ������� �8%)%( ���#�2@)5 ��� ��������� ����=���� ��� ���� � �����-������� ��������� � ��� ���������-��=��� ��� ���������� ������� "#$ �������� �� ��� ������� ������ ������ �� "#$ �� ��� �� ����� ������� ���� ��� ����������� ��������������� �� ������������ ������� 4������������������������� � ��� "#$ �� ��� �� �������8%)%( �� ��� ������� �"#$%� ���� �������� �������� "#$ ��� ��� � ������ ���������� .,������
�� ���� %00<3� �������� ������������ ��������� ��� ��������� �� �������� ������ ������ ���������� �����
"#$ � ,���-������� ������� �� ���� �� � �������7�� ��������� &�� ��������� ������� �� ����� ����������� ����� �� ���������� ���� �� �������� ����� ����� �������� ��������� "���� � �� ������� �� ������� ��� ������ ���� �� ������ �������� ����������� ����� �-������ ���� ����� ������� ������������ ���� ��� ������������ ����������� � ����������� &�� ������������ � ������� � #�2%! ������� ������ � ������� ��� �� �-������� �� ������������ �� ����������� � ��� �������� ����� � �������� �������� � "#$� 9��� ��� ������� � � �������"#$ ��� ��� ��� ������� � �-������ ���� ���� ����������� �� ��� ������� � ������� �� ����� ����� ������������ ���������� ���� � ��� ������ &�� ���� ������������������ ������ ��� #�2@)5� ���� �� �� ������� ���� ��� ��� ��� �-������� &��� ������ ������� ������������� ������ ����� 9��� #�255> .�-��������=����� ����� ���3 ��� #�2@%% .����������-������� ��� ��� M�����N "#$3 ���� �������� ������������ ������ ����� ��� ������� ������ ��������� ��� =������ �� #�2%! ���� ��� ������ "#$� &�� ����������� �������� ���� �-���� ����� ��� �� � ��������������� ���� "#$ ���� ���� �� � ������ ����������.4�� 63� #�2%! ��������� ������������� ����- ����
4�,� (� ������������ �������� � � ������� ������� �805> ��� ��� "#$ ������ �8%)%( ������ ������ ���������� ���� � ���� ����� �������� ������ .% ��3� F� ������ ������� ��� % ��� 6 �� �������� ���������� � ��� ��� �������� ������ ��:�� ����������� ���'�� ���������� � ������������ ��������
-� �.��/(0��� ������� ����� ������ �������� ��"
#�255> ��������� ������������� ���- ���� �����
#�2@%% ������ �� ����=��� ������� �� ��������&�� ������������ �������� ��� ���������� � ������
#�255> ��� ������� �� ���� �������� ���������� �� �
"#$ ������ � � ����� ����� ���� � ������� "#$
��� ��� ��=���� �� � ������� ������� ��� ���������
������ ;�"� ����� ��� ��� �� � =������ �� ��� ����-���������� .E���� �� ���� ()))3�
O��� ������ �� ����� � ��� ������ ���� ����� ����� �
� ������� ���� ��������� ����� &�� �� ����� ����
4�,� <� ������������ ��������'���������� � ��� �������������� � �8%)%( ���� �"#$%� ���� �������� � ������� "#$ ������ �������� �5 �������� �� ������� �� ��� ����-���� �805> ��� ��� "#$-���� ������ �8%)%( .�3 ��� �8%)%(����������� ���� ������� ����� ������ ."#$-����3 .93�
�#$ �� ����� � ���
� ����-���� ��� "#$ ������ ������� ��� ������ ������ ������� � �������� �������� �� ��� ��������� -
����� � ����� �������� �� ����� ��� �� � �����
������� � ��������� ����� ���� �������� ���������������� �� ������������ ������ �������� �� �����
������� ������������ ������ ���������� ���� ������������ "#$ ������� ���� ������� ���� "#$-������
������ �������� �������� ������� ��� �� ������� ��
������� ��� ������������ ����� ����� � ��� ��������� "#$ ������ ������� � ��� ��������� ������
4�,� 6� ������������ �������� ����� ������� ��� ����-���� ������ #�2%! ���� .�3 � ��������� ��=��� "#$ ��� ��� ������� �� ����� ������� #�2%!���B B���� ��� .93 ����� ����� "#$-�� ����� ����������� � ���� ������� #�255>� #�2@%%� ���#�2@)5� &���� ��� ����������� ���� ���������� ��� �������� ������������ ����� � #�2%! � ��� � % �� �������� ������
-� �.��/(0��� ������� ����� ������ �������� �#%
&�� ���� � "#$ �� ������� ������� �� ����������������� ������� �� �� �� ����� ��� ��� ���� � "#$ ���� ����� ����� ���������� #�255> ��� #�2@)5 ������ �����-��������� ���� ���� ��� ����=��� �������� �� ���� �������� � ������ �� ����������� �������� ������� ���� ���� ����� ���������� �� �� ����������� � �������� �< ����= ��������� ��������.F������ �� ���� %0063� ��� #�255> �������� ������������ �� ������ ���� ����� #�2@)5 �� ��������������������� &���� �-������ �� ��� ��� �� =������ ������ � ������� �����-���������� ����� �����-������� ������ ���� �������� � �� ����� ���� &����� ����� ������ ���� ����� ��� "#$ ������� ����� ��� ��������� ������ ������ ������������ ��������������� �� � ������ ������� �� � ������-�������� ����� ��������� .!������� ��� �����%0003� �� �� ������ ���� ��� ���� � ��� "#$ ��� �������������� �������� ��:��� ��� �������� � ��������� � ��� ������� �� ���������� ����� ���-����� �������� ��� ������� �� ��� ���� ����� ������ ��� �� ��� "#$ ��� ����� ����� �������� ��������� � � ������� .����� �� ���� ()))3� �� � ������� �������"#$ ��� �� ��� ��� ��������� � ��� ����� �������� � � ������� �� =������ �� ����� ������������� �������������� ��������� �������� �� ��������� !� ������� � �� ��������.�3 �������� ������� �� ��� ���� ����������� � �� ����� �������� �������.�3�
/��� ��� ������� ���� ���� < �� �� ������ ��������� ���� ����� �� ������� ������������ ������������� ���� ���� �� �������� ��� ���� � =������ �������� ���� ���� ���� ���� % �� �� ������ ����.4�� %3� &���� ���� �� ��� ������� �� ���� �������4������� ��� ������������ ������� ���� ���� ���� ������� �� ����� ����������� �� ��� ��� ��� �� ������� ��������� #������ ���� ���� ��� ������� ���� ������ ���� �� � ��������� ���� ������ �� �������������� ��� ���� ���� ���� ���� � �� ����� ��������������� �������� �� ����� ��������� �� �������������������� $������� � ����� �������� ������ ����� ����� ����� ��� ������������ �������� ������� � ������������ ����� ���� ���������� �� ���� ����������� ������������ �� � ����� ����� ������� ����������� ���� ���� �� ����� �� ��� ����������������������� �� ����������� �� ����������� ���������-��� ���������� ���� ������� ��7������� �� ����� ���;� ���������� �� ����� ������������� ������ ��� ������ ������ �� ������� ����� ��� ��� ������������� ������ ���� ���� � ������� ��� �������������� �� ����� �� ����� � ��� ����� .4���� � �� ����%0063�
#������� ������� ���� �������� ������� ����������� "#$ �� �������� �� ��� ��������� ����� � � ������� �� ������ ���������� ���� ���� ���������� ���� < �� �� ������ ���� .?���� �� ���� %00@3�������� �� ���� ���� "#$ �� �������� �� ��������������� �������� � ��� ��������� ����� �� ���� %��� < �� �������� ������� �� ���� ��� ���� �� =�� ���������� ���� �� "#$ �� � ������� ��������� ������� ��� % �� ������� "#$ ������ �������� ��� ����� ��
�� ������ ���� ��� �������� ������ ������ �� ����������� ������� ���� � ������� ��������� �������� ����������� � "#$ ����� ���� ������� ����������� ������� ���� ����� ������� ����� �������� ��������� ���� ���� �� �� �������� �� � ������� ����������� ��� =��� ���� � ��� �����+ �� �� �������� � ��� :������ �������� ��� )�" ��� ���� �� ���������������� ����� �� ������ ���������� ���� �������� ���� �������� �� ������������ ��������'������-���� .4���� � �� ���� ())%3� ������� "#$-����������������� ��������.�3 �� � ������� ��� �������� ��� ��� =��� ���� � ��������-��� ������ ��� ������������� �� ���� ����� ����� ���� �� ����� ��������������� ���� � ��� ���� � "#$ ���� ������� ��������������� �������� � ������� � ��� ��� �������������� ����� ������
�� ��������� ��� ���� ����� ������� ���������� ���� "#$ ���������� �� ��� �������� � � �������� &�� ����������� � "#$ �� �������������������� ��� �� ������� ������ �� ��� ��������� � "#$-��� �� ����� ������� � � ������� �� ������������ � �� ������ ��������� ��� ����� � ��������� ������ .,������ �� ���� %005+ #������ �� ����%0053� �������� ��� ������������ �������� ������������ ���������� ���� ���������� � ��������� ���������������� �� � ������� �� ������ �� �������&���� ��� �������� �� ���� "#$ ��� �� ��������������� ��������� ���� � ������� �������� ������ �������������
���������������
/� ����� ���� �� ������� ��� �������� �� F� ,����� 9� #����;������ ������ $����� 9������ ��� E�$���� ��� F� K�����9� ,������� E��������� � O������� 2��������������� O��E�$��� �� ��������� �������� ��� "#$ ������� ��� ����������� �� ���� ������ ��� �� ���� �� ������ &��� ������� ������������ �� � ������� ���� ��� ��� G������� ���������� � ;������ 9�������� �F� E�$��� .*H%)((%3� ��� � 4�����!������ ,���� ��� ��� E��������� � 2��� ������ 9��������2�� E�$��� �� $�K4� /� ���� ���� �� ������� ��� ������ ������ 2����� 9���� L "���� ��� 2�9�O����� �� ������������ ������� ��������
���������
������ 2� ��� ������ ,� "� ��� 4���� &� �� .%0013�&���������-������� ������ ����� ���� ���������� ���������� ��� ������� ������ ������������ �����-���� �(��� ���� ��� %))1A%@�
9����� $� K�� ,���� K� $� ��� ������� !� .%0003� &���������� ����� �������� ��������� ��� ���9 � ��������������� ����� �� #��-�� ���������� E0<> �������������� 9 ��������� ��� ����������������� &���%������� �� � <@>A>1�
2���� 8� ;�� "���� $� "�� ;������� ;� /�� 9�������� /� ;��������� #� ,� ;�� ,�������� �� K� �� ��� 8�7������ ��.%0003� ������� � �����-����-��������� ����������������� ��� ��� ������� ���������� #���� � �� %1%A5�
2����� �� K�� !������� 8� $�� 2����� 2� "� ��� ,������� K� 9�.%0063� &�� ���������� ������� ��� ��� ����������������������� �������� �� ��� ��������� � �
�#& �� ����� � ���
������� ���������������� ���� * ������� ����<5))A>�
2�� � $� K�� K��� #���� &� "�� 4�R ���� *� ��� ,��������� !� .%0163�!��� � ���������������� �� �������� � ������������������ �(��� ���� ��� 5)1A%<�
F������� &�� F�8������ &� !�� ������� ;�� ������� *��!������� K� 2�� $���������� ��� $������ F� #� ��� "���K� $� .%0063� 2�������� ����� � ����������������-��=���� ������� � ���������� ������� ������� ��� ��������� �<� �5� ��� �@� �(��� ���� ���1)0A%>�
4���� �� $� �� K�� ������ $� 8�� O��� !� ��� !������� !�.())%3� 4���� � �������� � ��� :������ ����������������� � ���������� �������� ����� � ���� ����������� ����� �� ������ ���������� ����� �(��� ���� � � 60<%A>�
4���� �� $� �� K�� ?����� &� $�� 4������� *� "�� #������� �� K� ���#���� ,� 9� .%0063� ���������� ������� ������������� ���������� ���� ����� ������������ �� ������ �(��� ���� ��� <615A0(�
4���� �� $� �� K�� ?����� &� $� ��� #���� ,� 9� .%0053����������� ������� �������� ��� ������������������� ������ ���������� ���� �� ������ �(��� ���� ��� 6)>(A>�
4������� *� "�� 4���� �� $� �� K� ��� 9������� G� �� .%00<3�"��������������� �� �������� � ���������� ��%����� �� ��� ����� ��� ����� ������� �!���+�������� ,�� ��� ��� %0<)A@�
,������� K� 9�� 2����� �� K�� G����� �� G� ��� ;������ �� ��.%0053� ��������� � � ���������� ������� ��������� �� � ������-����� ����� � �� ������ �(��� ���� ��� 6%@@A0�
,������� K� 9�� ;������ 8� ��� #���� ,� 9� .%00<3� $��������� ���������������� � ���� ����� �� ����������������� #�)% �������� ��� �� ��� ������������-������� * ������� �� � %@)5A%%�
,����� $� 8�� �������� $�� ,������ �� ��� ;� ����� "� F�.%00>3� ���������� ������� ��������������������� ������-< ��� ����� ����� ������ ������������������� �(��� ���� � � (>6>A5<�
;����� !� *� /�� ��������� "� ��� 2���� "�� F������� !� #��$������ F� #� ��� #���� ,� 9� .%01<3� ����������������� �������� ��� �������� ���� ���� =������B ����� � �����-���������� ���-������� ������� ��=���� ������������������ � ���� ������ �(��� ���� ���%>)A>�
K������� 8� 4� ��� 8��������� �� �� .%0>>3� &�� ���������������� � ��� ���������������� ��� ����������
������� ������ #�� ��� � ������������� ����������� ������� &������� � � %)<A%@�
8������ H� �� .%00)3� #����������� ������� � ��������%�� �������� ��� ��! &������� ��� (><A<)6�
8��������� �� ��� 2���� "� 2� ��� ���� �� 4� ;� .%0>03� &����������� ��� �������� � ���������������� ������������� ������� #�� ��� ����� ���� ���������� * &������� � � <0)A1�
������ ,�� 9���� ,�� ,������� K� 9� ��� "� ������� ��.()))3� ���������� � ��� ���������������� ��������� ��� ��� �������� � ��� I� �������� ������ ������������ �������� * ������� �!�� @0@A>)<�
#������� �� K�� 4���� �� $� �� K�� ?����� &� $�� ,������� K� 9��$��������� O� F�� O����� �� "� ��� #���� ,� 9� .%0053�!���� ��� ��������� ������ �� ��������� ����������������� �������� ����� ����� ������ �� ������ ������ �(��� ���� ��� <60>A5)%�
!�������� !� ��� ����� $� .%0003� 2���������-������������������ � �������� &���� �(��� �� >15A06�
!����� "� 8� ��� !��������� F� 2� .%0163� 9����������������� � ����� ��� ������ ������������������������ ������ ������� ������ ������ ��� ����������� � ������ ������ �(��� ���� ��� (<%A@�
!������� ;� "�� 9������� "� "� ��� "��� K� $� .%0003�,������ � �-������ ������������ �� ������������������ &������� &���� ���� ��! ��� 5(<A5<�
!���� #� $� ��� ������� #� �� .%01<3� $������� � ��� ��������������� ��� ��� ���������������� � ������%���� ������� #�2%! ��� ��� �� ����� �������� �� * ������� ���� <(0A<>�
$������� ��� O����� !�� 9�������� K� �� ��� �������� ��.%0003� &�� ���������������� ����� ��� � ������������������ �������� � B< �� �������� �� �������� �������� � ���� �� ����� �������� ��������� &���� &������� ��� %66<A@(�
E����� K� *�� 2 ������� 2�� 4������� �� 4� ��� E����� !� ��.()))3� ������=����� ��� �������� ����� � ��������� ����� ���������������� ���B ���� � ���������������� �� �������� ��� ������������ �����-��������� �(��� ���� �!� 5>%@A(<�
/��� �� ,�� /�� 2� 2� ��� "��� K� ;� .%0013� 9������������� ����B � ������������ ������ +���������������� %(@A<(�
?����� &� $�� 4���� �� $� �� K�� #������� �� K�� ,������� K� 9���� #���� ,� 9� .%00@3� "��������������� ����� ��� ��� ����� �� ������ ��� ������ ��� �������� � ���������� �������� �!��� +�������� ,�� ��� ���0>@A1@�
-� �.��/(0��� ������� ����� ������ �������� �#�